miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的探索miR-660-5p调控P53对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响。方法首先将肾小球系膜细胞SV40-MES-13细胞分为2组:对照组和高糖组,用于分析高糖对SV40-MES-13细胞活性及miR-660-5p/P53表达的影响。然后将高糖处理过后的SV40-MES-13细胞分为4组:miR NC组、miR-660-5p mimic组、si NC组与si P53组。实时荧光定量PCR实验检测SV40-MES-13细胞中miR-660-5p和P53的表达水平;噻唑蓝试剂法(MTT)分析SV40-MES-13细胞的生长能力;原位末端标记法(TUNEL)以及流式细胞术分析SV40-MES-13细胞的凋亡率;Targetscan检索以及荧光素酶报告基因实验分析SV40-MES-13细胞中miR-660-5p与P53的靶向作用关系;蛋白质印迹分析P53蛋白的表达。结果与对照组比较,高糖处理后导致SV40-MES-13细胞增殖活性降低,凋亡率增加,miR-660-5p表达降低而P53表达增加。与miR-660-5p NC组比较,miR-660-5p mimic处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。与si NC组比较,si P53处理后的SV40-MES-13细胞增殖活性增加,凋亡率降低。miR-660-5p与P53存在结合域,且能抑制P53表达。结论高糖处理肾小球系膜细胞后,miR-660-5p表达水平降低,P53表达水平增加,上调肾小球系膜细胞的miR-660-5p的表达后,高糖处理后的肾小球系膜细胞增殖活性增加,凋亡率下降,并且miR-660-5p的这一作用与抑制P53的表达相关。

过表达lncRNA ASMTL-AS1吸附miR-660抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的分析lncRNA ASMTL-AS1在肝癌组织中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖的影响及可能的机制。方法利用GEPIA网站分析lncRNA ASMTL-AS1在肝癌及癌旁组织中的表达情况。在lncRNA ASMTL-AS1低表达的肝癌细胞中转染lncRNA ASMTL-AS1过表达载体。CCK-8检测细胞增殖情况;双荧光素酶检测ASMTL-AS1与miR-660的结合;Real-time PCR检测miR-660以及FOXO1的表达。结果公共数据库分析结果显示lncRNA ASMTL-AS1在肝癌组织中的表达水平显著降低。CCK-8检测结果显示,过表达lncRNA ASMTL-AS1显著抑制了肝癌细胞的增殖(P<0.05);双荧光素酶结果显示,lncRNA ASMTL-AS1能够与miR-660结合。上调lncRNA ASMTL-AS1能够降低肝癌细胞中miR-660的水平,同时促进FOXO1的表达。结论lncRNA ASMTL-AS1能够抑制肝癌细胞的增殖,并且这种作用与其吸附miR-660的能力有关。

miR-660-3p下调REG4对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究miR-660-3p对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测134例胃癌组织和癌旁组织中miR-660-3p的表达,MTT法和Transwell实验测定过表达miR-660-3p和REG4后MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测REG4、Cyclin D1、p21、E-cadherin和MPP-2蛋白的表达,双荧光素酶报告系统验证miR-660-3p与REG4的调控关系。结果与正常癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-660-3p表达量显著降低(P<0.05);抑制miR-660-3p可抑制MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MGC-803中REG4、Cyclin D1和MPP-2表达(P<0.05),促进p21和E-cadherin表达(P<0.05);miR-660-3p靶向负调控REG4的表达;过表达REG4可逆转过表达miR-660-3p对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-660-3p通过靶向REG4抑制MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-660-3p是胃癌的潜在分子靶点。

SERPINE1介导miR-660信号影响肝癌细胞增殖的实验研究

目的分析SERPINE1在肝癌组织中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖的影响及其调控机制。方法利用GEPIA网站分析SERPINE1在肝癌及癌旁组织中的表达情况。荧光定量PCR检测五株肝癌细胞中SERPINE1的表达,选择SERPINE1低表达的细胞转染SERPINE1过表达载体,SERPINE1高表达的细胞转染SERPINE1干扰片段,细胞转染48 h后,CCK-8检测细胞增殖情况;双荧光素酶以及荧光定量PCR检测miR-660对SERPINE1的调控作用,CCK-8进一步验证SERPINE1是否介导了miR-660对肝癌细胞增殖的调控。结果TCGA数据库分析结果显示,SERPINE1在肝癌组织中的表达水平显著降低(P<0.05)。CCK-8结果显示,与空载体组相比,过表达SERPINE1显著抑制了肝癌细胞的增殖(P<0.05);双荧光素酶结果显示,miR-660能够结合SERPINE1,并且上调miR-660抑制了SERPINE1的表达(P<0.05)。此外,与NC mimic组相比,过表达miR-660显著促进了细胞增殖(P<0.05),而与miR-660-mimic+Vector组相比,上调miR-660-mimic+SERPINE1显著抑制了细胞增殖(P<0.05)。结论SERPINE1能够抑制肝癌细胞的增殖,并介导miR-660对肝癌细胞增殖的调控。

miR-660-5p通过靶向调控ING3影响肝癌细胞迁移和侵袭

目的探究ING3在肝癌细胞迁移和侵袭中的作用及其与miR-660-5p的关系。方法评估3种肝癌细胞Huh-7、MHCC97H和HepG2中ING3的表达,根据Real-time PCR结果选择ING3表达适中的Huh-7细胞进行后续实验。使用ING3过表达载体和siRNA转染Huh-7细胞,通过MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估ING3在Huh-7细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。通过Western blot实验检测PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT的表达,验证在Huh-7细胞中干扰或过表达ING3对PI3K/AKT信号通路的影响;随后采用双荧光素酶报告实验验证miR-660-5p和ING3的靶向作用;最后通过挽救实验,即设置miR-660-5p inhibitor和ING3 siRNA共转染,验证miR-660-5p在肝癌中对ING3的调控作用。结果与空载体对照组相比,ING3过表达组肝癌Huh-7细胞增殖、迁移和侵袭能力均下调(P均<0.05);与Inhibitor NC组相比,siRNA ING3组细胞增殖、迁移和侵袭能力均上调(P均<0.05)。双荧光素酶报告实验证明miR-660-5p与ING3存在靶向调控关系(P<0.01),且挽救实验进一步证明,肝癌细胞共转染miR-660-5p inhibitor与siRNA ING3后能部分逆转miR-660-5p的作用。结论在肝癌细胞中抑制miR-660-5p可促进ING3的表达,从而减弱肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-660-5p靶向TET2促进乳腺癌的增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-660-5p/TET2通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调节乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制。方法收集2021年1月-2022年6月荆门市人民医院65例乳腺癌患者的乳腺癌组织和邻近正常组织样品,qPCR实验检测miR-660-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验分析miR-660-5p与患者临床病理特征的相关性;CCK8、流式细胞术和Transwell方法检测miR-660-5p对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况;双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹实验明确miR-660-5p与TET2的关系;Western blot、CCK8和Transwell实验明确miR-660-5p通过靶向TET2调节乳腺癌的进程;Western blot实验检测miR-660-5p/TET2是否激活PI3K/AKT/mTOR信号通路;动物成瘤实验证明敲低miR-660-5p在乳腺癌中的作用。结果miR-660-5p在乳腺癌组织中表达上调,且miR-660-5p的高表达与乳腺癌的淋巴结转移(P=0.003),晚期TNM分期(P=0.009)和血管浸润(P=0.018)密切相关;敲低miR-660-5p可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,诱导乳腺癌细胞凋亡;TET2是miR-660-5p的直接靶标,干扰TET2可以部分逆转敲低miR-660-5p对乳腺癌细胞恶性潜能的抑制作用;miR-660-5p下调TET2并激活PI3K/AKT/mTOR信号通路;敲低miR-660-5p可抑制体内肿瘤生长。结论miR-660-5p通过靶向TET2和PI3K/AKT/mTOR信号通路来促进乳腺癌的进程,可能是治疗乳腺癌的潜在靶标。

大规模平行测序技术筛选人肾细胞癌组织中差异表达microRNAs及其验证

目的:以大规模平行测序技术(massively parallel signature sequencing,MPSS)筛选人肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)和癌旁组织中差异表达的microRNAs(miRNAs),并验证差异表达miRNAs之一的miR-660在人RCC中的表达。方法:MPSS检测10例RCC组织及相应癌旁组织中miRNAs的表达,筛选RCC组织中差异表达miRNAs。RT-PCR检测5例RCC与癌旁组织中miR-660的表达,qPCR检测40例RCC与癌旁组织中miR-660的表达。结果:MPSS结果显示,RCC组织中283个miRNAs表达下调,187个表达上调,其中miR-660在RCC组织中表达量是癌旁组织的17.5%。RT-PCR初步验证了此结果;qPCR验证结果显示,40例RCC组织中33例miR-660表达显著低于癌旁组织,RCC组织中miR-660平均表达量是癌旁的19.5%。结论:人RCC组织中283个miRNAs表达下调、187个上调。miR-660在RCC组织中低表达,有可能成为RCC诊断及治疗的新靶点。