中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

miR-671-3p对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的探讨miR-671-3p表达对神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法体外培养胶质瘤细胞系U87、U251、U118、A172及正常人星形胶质细胞HA,实时荧光定量PCR(QPCR)法检测细胞中miR-671-3p的表达;miR-671-3p siRNA转染U87细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。双荧光素酶报告实验验证RHOU与miR-671-3p的关系。结果miR-671-3p在胶质瘤细胞U87、U251、U118、A172中的表达量分别为4.21±0.18、3.78±0.16、2.31±0.16、2.46±0.17,明显高于HA细胞的1.00±0.14,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-671-3p siRNA组miR-671-3p相对表达量为0.43±0.11,明显低于对照组、阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。培养24、48、72和96 h后,miR-671-3p siRNA组A值分别为0.461±0.085、0.524±0.098、0.658±0.109、0.825±0.117,明显低于对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-671-3p siRNA组U87细胞集落形成数量为(378±98),少于对照组(792±92)和阴性对照组(750±93),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-671-3p siRNA组U87细胞凋亡率为(27.13±5.78)%,高于对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-671-3p mimics可抑制野生型RHOU 3’-UTR的荧光素酶活性,而不影响突变型(P<0.05)。结论miR-671-3p在神经胶质瘤细胞中呈高表达,下调其表达可抑制神经胶质瘤细胞的增殖能力,增加细胞周期阻滞,诱导凋亡,可能与RHOU有关。

miR-671-5p通过靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8调控胰腺癌细胞增殖和凋亡

目的:探讨miR-671-5p靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹检测20例胰腺癌组织和与其配对的癌旁正常组织miR-617-5p、TNFAIP8 mRNA和TNFAIP8表达水平,验证miR-671-5p和TNFAIP8的靶向调控关系。将体外培养胰腺癌细胞capan-1分为miR-NC组、miR-671-5p组、si-NC组、si-TNFAIP8组、miR-671-5p+pcDNA组和miR-671-5p+pcDNATNFAIP8组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织miR-617-5p表达量显著降低,TNFAIP8的表达量显著升高。miR-671-5p靶向负向调控TNFAIP8表达。与miR-NC组比较,miR-671-5p组capan-1细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2的表达量显著降低,p21和Bax的表达量显著升高;与si-NC组比较,si-TNFAIP8组capan-1细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2表达量显著降低,p21和Bax表达量显著升高;与miR-671-5p+pcDNA组比较,miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8组capan-1细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,cyclin D1和Bcl-2的表达量显著升高,p21和Bax的表达量显著降低。结论:miR-671-5p通过靶向下调TNFAIP8抑制胰腺癌细胞增殖并促进其凋亡。上调miR-671-5p是胰腺癌潜在治疗靶点。

血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的相关性

目的分析血清微小核糖核酸(miR)-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年2月在该院接受化疗且化疗结束后产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为耐药组,同期选取在该院接受化疗且化疗结束后未产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为敏感组,全部患者均接受6个周期新辅助化疗方案化疗,其患者资料完整,包括一般资料、实验室指标检测结果资料,重点分析化疗前血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。结果耐药组血清miR-671-3p mRNA相对表达量低于敏感组,miR-135b mRNA相对表达量高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他实验室指标比较差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析结果显示,老年乳腺癌患者血清miR-671-3p mRNA相对表达量与miR-135b mRNA相对表达量呈负相关(r<0,P<0.05);回归分析结果显示,血清miR-671-3p mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的保护因素(OR<1,P<0.05);miR-135b mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),化疗前血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量预测老年乳腺癌患者化疗耐药性风险的曲线下面积均>0.70,预测价值较理想,且联合预测的价值最好。结论血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量与老年乳腺癌患者化疗耐药性有关。

利多卡因通过LncRNA H19/miR-671-5p分子轴调控胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨利多卡因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对LncRNA H19/miR-671-5p的调控机制。方法:体外培养胃癌细胞AGS,使用不同浓度的利多卡因处理细胞;MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;qRT-PCR检测H19及miR-671-5p的表达量;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-671-5p的靶向关系;将pcDNA-H19及其阴性对照pcDNA转染至AGS细胞,使用利多卡因处理细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;Western blot检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果:与Con组相比,利多卡因不同剂量可明显降低细胞活力和Ki-67、PCNA、N-cadherin蛋白水平及H19的表达量(P<0.05),并可减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05),提高E-cadherin蛋白水平及miR-671-5p的表达量(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可靶向结合miR-671-5p;H19过表达可明显逆转利多卡因对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:利多卡因可能通过抑制H19表达及促进miR-671-5p表达从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测与功能富集性分析

为进行布鲁氏菌介导的mmu-miR-671-5p的靶基因预测,本试验利用布鲁氏菌(Brucella)感染RAW264.7细胞后,分别运用miRanda和TargetScan软件进行差异表达的mmu-miR-671-5p靶基因的预测,预测的靶基因分别有11 953和9 252个,将预测结果取交集进行韦恩(Venn)分析,重叠部分的靶基因有3 681个;利用GO与KEGG进行功能富集性分析,再利用PicTar软件进一步对mmu-miR-671-5p的靶基因进行预测,将预测结果与Venn分析结果进一步取交集,结果显示,mmu-miR-671-5p的预测靶基因有7个;实时荧光定量PCR分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip 1基因相对表达量极显著降低(P<0.01);在RAW264.7细胞中转染mmu-miR-671-5p inhibitors,分别验证7个预测靶基因的相对表达量发现,Tnfrsf1b与Tnip 1基因的相对表达量极显著升高(P<0.01);对mmu-miR-671-5p与Tnfrsf1b和Tnip1的3′非翻译区(3′UTR)结合靶位点分别进行预测,结果初步表明,mmu-miR-671-5p的靶基因为Tnfrsf1b与Tnip 1,其预测结合靶位点均只有1个,分别位于Tnfrsf1b和Tnip1 3′UTR全长位置的91和305 bp。本研究结果为进一步揭示mmu-miR-671-5p在布鲁氏菌感染RAW264.7细胞过程中的功能提供科学依据。

CircCDR1as调节miR-671-5p/CBX4轴对NSCLC细胞生物学行为的影响

目的探讨环状RNA(CircRNA)反义小脑变性相关蛋白1转录本(CircCDR1as)通过调节miR-671-5p/染色盒同源物4(CBX4)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人NSCLC细胞株(NCI-H524、NCI-H1734、Calu-3和A549)和人支气管上皮样细胞(HBE)。A549细胞分成Control组、si-NC组、si-CircCDR1as组、si-CircCDR1as+anti-miR-NC组、si-CircCDR1as+anti-miR-671-5p组、pcDNA组、CircCDR1as组、miR-NC组、miR-671-5p组、miR-671-5p+pcDNA组、miR-671-5p+CBX4组、anti-miR-NC组和anti-miR-671-5p组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CircCDR1as、miR-671-5p和CBX4 mRNA表达。Western blot检测CBX4蛋白表达。分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)、克隆形成实验、流式细胞术和Transwell检测细胞活力、增殖、凋亡、迁移和侵袭。通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-671-5p与CircCDR1as或CBX4之间的靶向关系。结果与HBE细胞相比,CircCDR1as和CBX4在4种NSCLC细胞中表达升高,miR-671-5p表达降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CircCDR1as组A549细胞活力和克隆形成数显著降低,细胞迁移和侵袭数目减少,凋亡率增高(P<0.05)。miR-671-5p作为CircCDR1as的靶点,其下调减弱了CircCDR1as沉默对NSCLC进展的调控作用(P<0.05)。miR-671-5p靶向CBX4在体外抑制NSCLC的恶性进展(P<0.05)。沉默CircCDR1as可通过上调miR-671-5p水平降低CBX4的表达(P<0.05)。结论CircCDR1as沉默可通过上调miR-671-5p和下调CBX4表达来抑制细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。

circFARSA与 miR-671-5p在胃癌组织中的表达 及其对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探讨circFARSA与miR-671-5p在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学功能的影响。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁组织中circFARSA、miR-671-5p的表达量;采用Pearson法分析胃癌组织中circFARSA与miR-671-5p表达量的相关性;体外培养人胃癌细胞AGS,随机分为si-NC组、si-circFARSA组、si-circFARSA+anti-miR-NC组、si-circFARSA+anti-miR-671-5p组;采用MTT实验检测细胞活力;用流式细胞仪检测细胞周期;采用划痕实验检测细胞迁移距离;采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circFARSA与miR-671-5p的靶向关系。结果circFARSA在胃癌组织中呈高表达,且明显高于癌旁组织(P<0.05),癌组织中的miR-671-5p呈低表达,且明显低于癌旁组织(P<0.05);circFARSA与miR-671-5p表达呈负相关(r=-0.6374,P<0.01);与si-NC组比较,si-circFARSA组细胞活力与S期细胞比例降低(均P<0.05),迁移距离减小(P<0.05),侵袭细胞数减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例升高(P<0.05);circFARSA可靶向调控miR-671-5p;转染si-circFARSA对细胞产生的生物学作用在anti-miR-671-5p、si-circFARSA共转染后被逆转。结论干扰circFARSA可通过调节miR-671-5p对胃癌的细胞增殖、迁移、侵袭过程发挥一定的抑制作用,同时诱导细胞周期阻滞。

MiR-671-5p通过负向调控SMAD抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-671-5p影响骨肉瘤的迁移侵袭的相关机制。方法通过NCBI在线数据库筛选骨肉瘤中差异表达的微小RNA(miRNA)、预测miRNA的靶蛋白并进行功能分析;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)用于检测转染过表达miR-671-5p质粒后con组和miR-671-5p组骨肉瘤细胞中miR-671-5p的表达情况;通过Transwell实验检测转染质粒后骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力;Western blot实验检测相关蛋白在骨肉瘤细胞中的表达情况;荧光素酶报告基因检测重组人SMAD家族成员3(SMAD3)的3’UTR中是否含有miR-671-5p的结合位点。结果MiR-671-5p在骨肉瘤组织和细胞中表达下调(P<0.05)。qRT-PCR证明转染过表达miR-671-5p质粒后,细胞转染成功(P<0.05)。过表达骨肉瘤细胞中的miR-671-5p后细胞的迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05),并且miR-671-5p能够抑制骨肉瘤细胞的上皮间质转化(EMT)(P<0.05);Western blot结果显示SMAD3在骨肉瘤细胞中表达上调(P<0.05);荧光素酶报告基因检测证实miR-671-5p与SMAD3的3’UTR之间存在结合位点(P<0.05);Western blot结果显示转染过表达SMAD3质粒后,SMAD3表达明显升高(P<0.05),而miR-671-5p能明显抑制SMAD3的表达(P<0.05);Transwell实验证明SMAD3能够促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),而miR-671-5p则能够逆转这种促进作用(P<0.05)。结论MiR-671-5p能够通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力。

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3)中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶结果显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。

circ_DONSON靶向miR-671-5p影响肺癌细胞放射敏感性的实验研究

目的:探讨circ_DONSON对肺癌细胞放射敏感性的影响及可能机制。方法:收集43例肺癌组织和癌旁组织,实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTqPCR)法检测组织中circ_DONSON和微小RNA-671-5p(microRNA-671-5p,miR-671-5p)表达。体外培养肺癌细胞A549,经不同剂量(2 Gy、4 Gy)X-ray照射后,RT-qPCR法检测细胞中circ_DONSON和miR-671-5p表达。分别转染si-NC、si-circ_DONSON、miR-NC、miR-671-5p mimic,或共转染sicirc_DONSON与miR-671-5p inhibitor至A549细胞,再用4 Gy X-ray照射后,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和流式细胞术分别检测细胞增殖活性和细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞集落形成数,蛋白质印迹法检测细胞中活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_DONSON与miR-671-5p调控关系。结果:肺癌组织中circ_DONSON的表达量为4.27±0.38,高于癌旁组织中circ_DONSON的表达量(0.80±0.13,P<0.05),而miR-671-5p的表达量为0.37±0.07,低于癌旁组织中miR-671-5p的表达量(0.37±0.07,P<0.05)。与对照组比较,肺癌细胞A549经不同剂量(2 Gy、4 Gy)X-ray照射后,细胞中circ_DONSON表达升高(3.07±0.142 Gy/3.69±0.124 Gy比1.00±0.00,P<0.05),而miR-671-5p表达降低(0.23±0.022 Gy/0.45±0.034 Gy比1.00±0.00,P<0.05)。与对照组或转染si-NC的A549细胞比较,转染si-circ_DONSON的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.48±0.04比1.04±0.11、1.01±0.09;(41.33±1.70)个比(85.67±2.05)个、(86.33±1.25)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[(31.18±1.39)%比(14.24±0.80)%、(14.30±0.84)%;0.90±0.06比0.41±0.04、0.40±0.05;P<0.05]。与对照组或转染miR-NC的A549细胞比较,转染miR-671-5p mimic的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数降低[0.63±0.05比1.01±0.11、1.00±0.11;(52.67±2.05)个比(85.00±2.45)个、(84.00±1.63)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均升高[(28.22±1.47)%比(14.42±0.88)%、(14.61±1.02)%;0.77±0.04比0.40±0.03、0.41±0.05;P<0.05]。circ_DONSON可靶向结合miR-671-5p,且转染si-circ_DONSON的A549细胞中miR-671-5p表达明显高于转染si-NC的细胞(4.66±0.21比1.00±0.02,P<0.05)。与转染si-circ_DONSON的A549细胞比较,共转染si-circ_DONSON与miR-671-5p inhibitor的A549细胞经4 Gy X-ray照射后,细胞增殖活性和集落形成数升高[0.91±0.06比0.50±0.04;(71.00±2.83)个比(40.67±2.49)个;P<0.05],而细胞凋亡率和细胞中Cleaved-caspase3蛋白表达均降低[(20.66±0.96)%比(31.13±1.57)%;0.57±0.03比0.90±0.07;P<0.05]。结论:沉默circ_DONSON可能通过靶向上调miR-671-5p增强肺癌细胞A549的放射敏感性。

miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。方法 收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。结果 人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor组低于miR-671-3p NC组(P<0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P<0.05)。结论 miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。

miR-671-5p调控TIPE2对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨miR-671-5p调控肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2(TIPE2)对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞(HPAEpiC)凋亡的影响。方法将HPAEpiC细胞分为Ctrl组、SP组、inhibitor NC组、miR-671-5p inhibitor组、miR-671-5p inhibitor+si-NC组、miR-671-5p inhibitor+si-TIPE2组,Ctrl组为未经任何处理的HPAEpiC细胞,SP组为未转染只用SP处理24 h的HPAEpiC细胞,其他组均转染对应物48 h后,再加入SP处理24 h。qRT-PCR检测miR-671-5p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA试剂盒检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;western blot检测细胞中TIPE2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-671-5p与TIPE2的关系。结果与Ctrl组比较,SP组细胞中miR-671-5p表达、细胞凋亡率、IL-6、TNF-α、IL-1β水平、Bax、caspase-3蛋白表达升高,OD450值、TIPE2、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与inhibitor NC组比较,miR-671-5p inhibitor组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);沉默TIPE2减弱了下调miR-671-5p对SP诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性反应的抑制作用。结论下调miR-671-5p可通过靶向上调TIPE2抑制SP诱导的肺泡上皮细胞凋亡。

MiR-671-3p通过CKAP4抑制结肠癌细胞的增殖和迁移

目的探讨miR-671-3p对结肠癌体外生物学特性的影响及其机制。方法体外培养结肠癌RKO和SW620细胞株,转染miR-671-3p的过表达片段和抑制剂,qRT-PCR检测细胞的过表达效率和干扰效率。CCK-8实验检测体外培养细胞的增殖能力,Transwell实验检测体外细胞的迁移能力。生物信息学方法分析CKAP4在结肠癌细胞的表达。结果在RKO和SW620细胞中过表达miR-671-3p,细胞的体外迁移能力显著降低(RKO细胞:P<0.001;SW620细胞:P=0.004),增殖能力明显下降(RKO细胞:P=0.032;SW620细胞:P=0.012),而干扰miR-671-3p后则表现出相反的结果。另外,miR-671-3p的下游靶基因CKAP4在结肠癌表达增高,但对其生存时间无影响。体外过表达CKAP4能够逆转miR-671-3p所导致的抑制的迁移能力和增殖能力。结论miR-671-3p通过CKAP4可以有效抑制体外结肠癌细胞的增殖能力和迁移能力,提示其在结肠癌的发展进程中发挥着重要的作用。

Circ_0001946靶向miR-671-5p调控Wnt/β-catenin通路对结直肠癌细胞恶性进展的影响

[目的]探讨circ_0001946对结直肠癌细胞恶性进展的影响。[方法]培养结直肠癌HCT116、SW480、Colo320、HT29细胞和正常结直肠CCC-HIE-2细胞,实时定量PCR检测circ_0001946、miR-671-5p表达量。miRcode和双荧光素酶报告实验分析circ_0001946和miR-671-5p的关系。circ_0001946、miR-671-5p在HCT116细胞中的表达量被上调或下调后,分别检测HCT116细胞生长活性、细胞凋亡率及细胞迁移能力。免疫蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。[结果] HCT116 (4.76±0.47)、HT29 (2.85±0.57)、SW480 (2.75±0.62)、Colo320 (3.12±0.68)细胞中circ_0001946表达水平高于CCC-HIE-2细胞(1.24±0.09)(t=7.238、8.129、6.893、6.875,P均<0.05)。下调circ_0001946表达显著降低了HCT116细胞增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.05),促进了细胞凋亡(P<0.01);circ_0001946靶向miR-671-5p;circ_0001946表达被上调或miR-671-5p表达被下调后,HCT116细胞增殖和迁移能力显著上升,细胞凋亡率明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被激活。[结论] circ_0001946靶向miR-671-5p激活了Wnt/β-catenin信号通路,促进了结直肠癌细胞恶性进展。

miR-671-5p对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移及侵袭影响及其作用机制

目的探讨miR-671-5p调控非小细胞肺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞系(A549和H460)中miR-671-5p及其靶基因Kruppel样锌指转录因子6(KLF6)mRNA表达量。miR-671-5p mimic转染A549和H460细胞,设置阴性对照序列,蛋白质印迹法检测KLF6蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法、EdU法和Transwell小室法分别检测非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果与BEAS-2B细胞比较,miR-671-5p在A549和H460细胞中高表达,表达量分别为1.646±0.026和1.638±0.027,差异有统计学意义,F=153.900,P<0.001;KLF6在A549和H460中的mRNA表达量降低,分别为0.233±0.005和0.382±0.003,差异有统计学意义,F=2 077.000,P<0.001;转染miR-671-5p mimic后,A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达水平受到抑制,其中A549和H460细胞KLF6蛋白水平分别下调至0.252±0.011(t=23.970,P<0.001)和0.290±0.017(t=16.140,P<0.001)。结论 miR-671-5p可能通过调控KLF6基因促进非小细胞肺癌细胞系的增殖、迁移及侵袭,进而影响非小细胞肺癌的发生和发展。

miR-671在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的分析microRNA-671(miR-671)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探究miR-671与HCC的发生发展及临床预后的关系。方法从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中下载有关HCC的miR-671基因组学数据和研究个体的临床和病理资料,结合2017-2018年在郑州大学第一附属医院收集的22例HCC患者的病理标本,利用SPSS软件分析HCC癌组织和癌旁组织中miR-671表达水平的差异以及不同miR-671的表达水平与HCC患者临床病理特征的关系,利用Kaplan-Meier生存分析探究miR-671与HCC预后的关系。结果miR-671在HCC癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,其表达水平与TNM分期具有显著相关性(P<0.05);miR-671高表达的HCC患者整体生存率低于低表达者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-671在HCC癌组织中高表达,与HCC的发生发展及不良预后相关,有望成为提高HCC早期诊断率的肿瘤标志物和作为潜在靶向治疗位点。

miRNA-671上调抑制胃癌细胞增殖与迁移

目的探索miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和迁移的影响。方法通过qRT-PCR实验检测miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,通过CCK-8实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞增殖,通过划痕和Transwell小室实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞侵袭和迁移的影响。结果与癌旁正常组织相比,胃癌组织中的miR-671表达明显下调(P<0.01);与正常人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞中的miR-671表达也明显下调(P<0.01);miR-671表达上调明显抑制MKN45胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.01)。结论 miR-671可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在胃癌中发挥抑癌基因功能。

微小RNA 671 5p对人结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR 671 5p对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法培养人正常结肠上皮细胞NCM460和结肠癌细胞SW480、SW620、HT29和LOVO,实时荧光定量PCR(RT qPCR)检测miR 671 5p和染色盒同源物4(CBX4)mRNA水平。转染miR 671 5p mimics(miR 671 5p组)、阴性对照(miR NC组)至SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blot)检测CBX4、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶9(MMP 9)、基质金属蛋白酶14(MMP 14)及酪氨酸激酶1/信号转导子与转录激活子3(JAK1/STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR 671 5p和CBX4之间靶向关系。结果与NCM460细胞比,结肠癌细胞SW480、SW620、HT29和LOVO中miR 671 5p水平显著降低(P<0.05),CBX4 mRNA水平显著升高(P<0.05)。与miR NC组比,miR 671 5p组SW480细胞培养24、48、72 h后的OD值、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数及CyclinD1、MMP 9、MMP 14、p JAK1和p STAT3蛋白水平显著降低(P<0.05),p21蛋白水平显著升高(P<0.05)。miR 671 5p负调控CBX4表达,过表达CBX4降低了miR 671 5p过表达对SW480细胞增殖、迁移和侵袭及JAK1/STAT3信号通路的影响。结论miR 671 5p过表达可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制与下调CBX4表达、抑制JAK1/STAT3信号通路的激活有关。

下调STYK1基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭

目的探讨STYK1基因下调对结直肠癌细胞HCT-15增殖、凋亡和迁移以及MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路的影响。方法采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞HCT-15中STYK1的表达,Western blot检测抑制效果,CCK-8检测STYK1表达下调对HC-T15细胞增殖的影响,流式细胞仪检测STYK1表达下调对HC-T15细胞凋亡的影响,Transwell小室实验检测STYK1表达下调对HCT-15细胞侵袭的影响,通过Western blot检测STYK1表达下调对HCT-15细胞MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性的影响。结果与干扰对照组相比,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞增殖活性(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01),并诱导细胞凋亡(P<0.01);同时,STYK1表达下调明显抑制HCT-15细胞ERK1/2和AKT蛋白的磷酸水平。结论 STYK1基因干扰可以抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,并诱导凋亡,其机制可能与抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路活性有关。