清肠温中方通过miR-675-5p/VDR信号通路调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的机制研究

目的研究清肠温中方调控DSS诱导溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th17/Treg免疫平衡及肠黏膜屏障的作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠,按体质量依照随机数字表将其随机分为空白组、模型组、清肠温中方组。空白组自由饮用去离子水,同时予去离子水灌胃;模型组和清肠温中方组自由饮用4.5%DSS溶液制备UC模型,同时模型组给予去离子水,清肠温中方组予清肠温中方灌胃。7 d后麻醉大鼠后取血及结肠组织,应用Real time-PCR法检测结肠miR-675-5p、VDR m RNA、RORγt mRNA、Foxp3 m RNA的表达,ELISA法检测血清IL-10、IL-17的表达,免疫组织化学法检测ZO-1、Occludin的蛋白表达及分布。结果与空白组比较,DSS诱导的UC大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA及血清IL-17的表达较空白组明显升高(P <0.05或P <0.01),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较空白组明显降低(P <0.05或P <0.01);清肠温中方干预后,大鼠结肠mi R-675-5p、RORγt mRNA、血清IL-17的表达较模型组明显降低(P <0.05),VDR mRNA、Foxp3 mRNA、ZO-1、Occludin、血清IL-10的表达较模型组明显升高(P <0.05或P <0.01)。结论清肠温中方可能通过降低mi R-675-5p的表达,靶向调控VDR信号通路,从而调控溃疡性结肠炎Th17/Treg免疫平衡、修复肠黏膜屏障损伤,达到治疗UC的目的。

桃红四物汤通过miR-675/NF-κB信号通路减轻肢体缺血再灌注损伤炎症反应机制研究

目的:基于miR-675/NF-κB信号通路研究桃红四物汤对肢体缺血再灌注损伤炎症反应的影响。方法:78只大鼠分为四组,除正常对照组外,其余三组均复制缺血再灌注损伤模型。于再灌注0、2、4、8 h四个时间点取材骨骼肌,HE染色观察骨骼肌形态;TUNEL荧光染色观察骨骼肌细胞凋亡情况;RT-qPCR检测miR-675-5p、NF-κB p65、p50表达;Western blot检测NF-κB p65、p50蛋白表达;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平。结果:与模型组相比,桃红四物汤组、miR-675阻滞剂组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(均P<0.05);桃红四物汤、miR-675阻滞剂干预,可保护骨骼肌细胞,减轻凋亡程度,与模型组相比,可降低NF-κB p65、p50的表达(均P<0.05)。结论:桃红四物汤可通过减轻炎症反应保护骨骼肌细胞,这一过程可能与miR-675/NF-κB信号通路的激活有关。

miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR法检测转染48 h后各组细胞中miR-708-5p的表达,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达。结果:与对照组相比,miR-708-5p组细胞中miR-708-5p的表达水平、细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,而细胞存活率、细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量以及TLR4、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-708-5p可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡并减轻细胞炎症损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。

miR-17-5p靶向PI3K/AKT信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨miR-17-5p靶向磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路调控皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测HaCaT和A431细胞中miR-17-5p的表达。构建抑制miR-17-5p表达A431细胞株,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PIK3R1、p-AKT、p-PI3K、细胞周期素(Cyclin)D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因法和Western印迹验证miR-17-5p和PIK3R1的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示A431细胞中miR-17-5p的表达显著高于HaCaT(P<0.05)。MTT法、流式细胞术和Western印迹结果证实在抑制miR-17-5p表达的A431细胞中,p-AKT、p-PI3K、CyclinD1和Bcl-2的表达明显下调,PIK3R1和Bax的表达显著上调,细胞的增殖活力减弱,凋亡率增加(均P<0.05)。PI3K/AKT信号通路激活剂胰岛素样生长因子(IGF)-1可以逆转抑制miR-17-5p表达对A431细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论miR-17-5p通过靶向下调PIK3R1激活PI3K/AKT信号通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡。

下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路抑制体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的机制研究

目的:探讨下调miR-150-5p调控PI3K/AKT信号通路对体外糖尿病肾病足细胞模型凋亡的影响和机制。方法:以小鼠足细胞MPC5作为研究对象,分成Control(空白对照)、Model(高糖处理)、Anti-NC(转染inhibitor control后高糖处理)、Anti-miR-150-5p组(转染miR-150-5p inhibitor后高糖处理),Realtime PCR方法测定细胞中miR-150-5p表达,MTT方法测定细胞增殖变化,PI单染法检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot法检测细胞中C-Caspase-3、cyclinD1、p-AKT、p-PI3K蛋白表达。PI3K/AKT抑制剂LY294002处理转染miR-150-5p inhibitor后的足细胞,给予高糖处理,检测细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,Model组细胞中miR-150-5p表达水平升高,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,细胞G1期比例升高,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平升高,cyclinD1蛋白表达水平下降,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达水平下降。与Anti-NC组比较,Anti-miR-150-5p组细胞中miR-150-5p表达水平降低,细胞增殖能力升高,细胞凋亡率降低,细胞G1期比例降低,细胞中C-Caspase-3蛋白表达水平降低,cyclinD1蛋白表达水平升高,p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达水平升高。PI3K/AKT抑制剂LY294002逆转miR-150-5p inhibitor对高糖条件下足细胞增殖、周期和凋亡影响。结论:下调miR-150-5p通过促进PI3K/AKT信号通路激活减少体外糖尿病肾病足细胞模型细胞凋亡。

miR-16-5p靶向PTENPI3KAKT信号通路对非小细胞肺癌细胞活性和迁移能力的影响

目的探讨AS-miR-16-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞活性和迁移能力的影响及潜在的作用机制。方法将NSCLC A549细胞分为3组,分别为Black组、miR-NC组和AS-miR-16-5p组。miR-NC组和AS-miR-16-5p组分别转染阴性对照miRNA(miR-NC)及AS-miR-16-5p,Black组不进行任何干预。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测A549细胞中miR-16-5p的表达;应用MTT检测A549细胞活性;划痕实验和Transwell实验检测A549细胞迁移能力;Western blotting法检测A549细胞中PTEN/PI3K/AKT信号通路关键蛋白表达水平。结果与miR-NC组和Black组相比,AS-miR-16-5p组miR-16-5p表达水平下调(P<0.05);AS-miR-16-5p显著抑制A549细胞活性,显著减少A549细胞迁移率(均P<0.05);AS-miR-16-5p显著上调A549细胞中PTEN蛋白表达水平,而显著下调PI3K和AKT蛋白表达水平(P<0.05)。结论AS-miR-16-5p能抑制NSCLC A549细胞活性和迁移能力,此外,AS-miR-16-5p通过负调控PTEN/PI3K/AKT信号通路有可能成为NSCLC治疗新靶点。

miR-146a-5p抑制TRAF6/NF-кB信号通路影响滋养细胞的炎症反应

目的:探讨微小核糖核酸(miR)-146a-5p与子痫前期的关系及作用机制。方法:对体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3,经脂多糖(LPS)诱导后,与空白对照组相比,检测在LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p和TRAF6的表达。设计分组分为control组、LPS组、miR-146a-5p mimic组、miR-146a-5p inhibitor组。通过QPCR定量检测各组JEG-3细胞中miR-146a-5p以及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)的mRNA水平;利用Western Blot检测JEG-3细胞内TRAF6/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:(1)miR-146a-5p mimic组的miR-146a-5p表达明显高于其余3组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p的表达量增加,TRAF6表达量明显下调(P<0.05)。(3)与对照组比较,加入miR-146a mimic后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显下降(P<0.05),加入miR-146a inhibitor后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),与LPS组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)Western Blot结果显示加入miR-146a mimic后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达较对照组明显下降;加入miR-146a inhibitor后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达则明显升高。结论:miR-146-5p可能通过抑制TRAF6/NF-κB信号通路影响子痫前期母胎界面的炎症反应。

miR-425-5p靶向ZNF423基因调控Notch信号通路促进胃癌细胞侵袭转移

目的探究miR-425-5p靶向ZNF423基因通过Notch信号通路对胃癌细胞侵袭转移的影响和机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人胃上皮细胞GES-1和3种胃癌细胞(AGS、SGC-7901和BGC-823)中miR-425-5p和ZNF423的表达水平。以SGC-7901细胞为研究对象,构建抑制miR-425-5p表达的细胞株,qRT-PCR检测miR-425-5p的表达水平,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测迁移侵袭和Notch信号通路相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-425-5p和ZNF423的靶向调控关系。结果与GES-1细胞相比,3种胃癌细胞中miR-425-5p的表达显著上调,ZNF423的表达显著下调。稳定抑制miR-425-5p表达的细胞株构建成功。抑制miR-425-5p可显著抑制MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes5和Hey1蛋白的表达,抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭。沉默ZNF423可逆转抑制miR-425-5p表达对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。沉默ZNF423还可逆转抑制miR-452-5p表达对胃癌细胞中Notch信号通路的抑制作用。结论miR-425-5p通过下调ZNF423表达激活Notch信号通路,进而促进胃癌细胞的侵袭和转移。

红树莓提取物通过miR-194-5p/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨红树莓提取物对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞AGS,分为对照组(NC组,细胞常规培养24 h)、不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)红树莓提取物组(分别用20、40、80、160 mg/ml红树莓提取物干预AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-194-5p组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-194-5p的AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-NC组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-NC的AGS细胞24 h),CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中MMP-2、MMP-9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-194-5p表达。结果与NC组比较,胃癌细胞AGS经不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)的红树莓提取物干预24 h后,细胞A值、迁移数和侵袭数及细胞中MM-P2、MMP-9表达明显降低(P<0.05),而miR-194-5p表达明显升高(P<0.05)。与NC组比较,80 mg/ml的红树莓提取物降低了AGS细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达(P<0.05)。与转染anti-miR-NC的AGS细胞比较,80 mg/ml的红树莓提取物作用的敲减miR-194-5p的AGS细胞A值、迁移数和侵袭数及MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达升高(P<0.05)。结论红树莓提取物可能通过上调miR-194-5p及阻碍PI3K/AKT信号通路来抑制胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭。

lncRNA PVT1通过miR-1207-5p靶向调控Wnt6/β-catenin2信号通路对高级别浆液性卵巢癌的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PTV1对高级别浆液性卵巢癌增殖和迁移能力的影响。方法收集61例高级别浆液性卵巢癌患者的癌组织及相应癌旁正常组织,qRT-PCR检测miR-1207-5p、lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌组织、癌旁正常组织及不同细胞系中的表达情况。构建lncRNA PVT1沉默细胞系,分为Ovcar3-siPVT1组、Ovcar3-siNC组、NC组。采用MTT和平板克隆实验、Transwell和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移;双荧光素酶报告基因检测验证miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6的靶向关系,StarBase和TargetScan网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;Western blotting检测Wnt6/β-catenin2信号通路相关蛋白的表达。构建siPVT1+过表达miR-1207-5p、siPVT1+过表达Wnt6细胞系,以siPVT1+siNC为对照,验证lncRNA PVT1的调控作用。结果qRT-PCR结果显示,高级别浆液性卵巢癌组织中lncRNA PVT1的表达水平显著高于正常癌旁组织(P<0.05)。与NC组和Ovcar3-siNC组相比,Ovcar3-siPVT1组中lncRNA PVT1的表达显著下调,细胞克隆数、侵袭数减少,细胞迁移率降低,Wnt6、β-catenin2蛋白表达水平明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果证明miR-1207-5p与lncRNA PVT1、Wnt6具有靶向关系。经StartBase和TargetScan网站预测分析,miR-1207-5p分别与lncRNA PVT1、Wnt6存在靶向结合位点。与siPVT1+NC组相比,siPVT1+过表达miR-1207-5p组和siPVT1+过表达Wnt6组细胞克隆数和迁移数明显增加(P<0.05)。结论lncRNA PVT1在高级别浆液性卵巢癌中高表达。高表达lncRNA PVT1可能通过上调miR-1207-5p表达增强Wnt6/β-catenin2信号通路的活性,从而促进高级别浆液性卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

miR-212-5p通过靶向PCED1B基因抑制Wnt/β-catenin信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和凋亡

目的研究miR-212-5p对膀胱癌(BC)细胞凋亡和增殖的影响和潜在分子机制。方法以正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1为对照,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测BC细胞系T24、RT4和UM-UC-3中miR-212-5p和PCED1B的表达;在RT4细胞中转染miR-212-5p和si-PCED1B,Western印迹检测PCED1B、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3和β-catenin蛋白表达,CCK-8实验和流式细胞术分别检测细胞增殖率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-212-5p和PCED1B的关系。结果与miR-NC组相比,miR-212-5p组RT4细胞中miR-212-5p含量显著升高,CyclinD1和酶切caspase-3表达量均显著降低,细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高(均P<0.05)。与si-NC组相比,si-PCED1B组RT4细胞中PCED1B、CyclinD1和酶切caspase-3、细胞增殖率均显著下降(均P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-212-5p组PCED1B蛋白水平显著低于miR-NC组(P<0.05),anti-miR-212-5p组PCED1B蛋白水平显著高于anti-miR-NC组(P<0.05)。恢复PCED1B表达后RT4细胞中的PCED1B、CyclinD1和酶切caspase-3表达量、细胞增殖率均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-NC组β-catenin蛋白水平相比,miR-212-5p组显著降低(P<0.05);与miR-212-5p+pcDNA-NC组β-catenin蛋白水平相比,miR-212-5p+pcDNA-PCED1B组显著升高(P<0.05)。结论miR-212-5p靶向PCED1B可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响BC细胞凋亡和增殖。miR-212-5p可能是BC的潜在分子靶点。

miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究

目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。

咪唑安定通过上调miR-290-5p调节PI3K/AKT信号通路抑制缺氧诱导心肌细胞损伤的机制研究

目的探讨咪唑安定(MID)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响和分子机制。方法采用不同浓度的MID预处理H9C2细胞24 h,缺氧诱导后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测H9C2细胞存活率,确定MID最佳浓度。将H9C2细胞分为正常(NC)组、缺氧(hypoxia)组、MID+hypoxia组、miR-NC+hypoxia组、miR-290-5p+hypoxia组、anti-miR-NC+MID+hypoxia组、anti-miR-290-5p+MID+hypoxia组。CCK-8法检测细胞存活;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-290-5p的表达;蛋白质印记(Western blot)检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路相关蛋白的表达。结果8、16、32μmol/L的MID预处理H9C2细胞缺氧后细胞存活率显著升高(P<0.05),16μmol/L为MID的最佳浓度。与NC组比较,hypoxia组H9C2细胞凋亡率显著升高,miR-290-5p的表达和PI3K通路活性显著降低(P<0.05)。与hypoxia组比较,MID+hypoxia组H9C2细胞凋亡率显著降低,miR-290-5p的表达显著升高,PI3K通路活性显著升高(P<0.05)。与MID+hypoxia组比较,miR-290-5p+hypoxia组H9C2细胞存活率显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+MID+hypoxia组比较,anti-miR-290-5p+MID+hypoxia组H9C2细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,PI3K通路活性显著降低(P<0.05)。结论咪唑安定通过上调miR-290-5p激活PI3K/AKT信号通路有关进而对缺氧诱导的心肌细胞损伤具有保护作用。

miR-155-5p调节Wnt信号通路促进肾透明细胞癌细胞的增殖与转移

目的研究miR-155-5p和Wnt信号通路在肾透明细胞癌细胞中的作用机制。方法采用qRT-PCR检测细胞中miR-155-5p的表达。WB检测各细胞中Wnt信号通路相关蛋白磷酸化水平及蛋白表达水平。通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果肾透明细胞癌细胞中miR-155-5p的表达明显高于正常细胞。过表达miR-155-5p促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。加入通路蛋白抑制剂后,我们发现其会减弱过表达miR-155-5p对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的促进能力。结论miR-155-5p和Wnt在调节肾透明细胞癌发生发展中起着关键作用,miR-155-5p可能成为肾透明细胞癌治疗的新靶点。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

miR-224-5p靶向调控KIF23通过NF-κB信号通路影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探索微小RNA-224-5p(miR-224-5p)对驱动蛋白超家族23(KIF23)的靶向关系及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(H8)和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、MS751、HT-3)中miR-224-5p和KIF23 mRNA表达,选择miR-224-5p表达量最低的HeLa细胞开展后续研究。在HeLa细胞中转染si-KIF23或miR-224-5p,探讨敲减KIF23或过表达miR-224-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blot)检测KIF23、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和NF-κBp65蛋白水平;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-224-5p和KIF23之间的靶向关系;共转染si-KIF23和anti-miR-224-5p,观察miR-224-5p低表达对敲减KIF23诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和NF-κB信号通路活化的影响。结果:miR-224-5p在SiHa、HeLa、MS751、HT-3细胞中表达下调(P<0.05),KIF23 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。敲减KIF23或过表达miR-224-5p显著降低HeLa细胞存活率、细胞迁移数和侵袭数,并显著抑制CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平(P<0.05)。另外,敲减KIF23显著降低细胞中NF-κBp65表达量(P<0.05)。miR-224-5p靶向调控KIF23表达。miR-224-5p低表达可以逆转敲减KIF23抑制HeLa增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达的作用,以及逆转敲减KIF23抑制NF-κB信号通路活化的作用。结论:miR-224-5p靶向调控KIF23并通过NF-κB信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA NRSN2-AS1通过miR-129-5p/Wnt5a轴靶向调控Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌发生、发展的影响

目的探讨NRSN2-AS1对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其相关分子机制。方法应用qRT-PCR法检测96例ESCC和癌旁组织及ESCC细胞系中NRSN2-AS1的表达水平。通过体外细胞功能实验分析NRSN2-AS1过表达对ESCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;应用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验,验证NRSN2-AS1和miR-129-5p的靶向关系及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。应用qRT-PCR法分别检测NRSN2-AS1/miR-129-5p/Wnt5a分子轴的表达。结果NRSN2-AS1在ESCC组织中(2.48±0.90)的表达显著高于癌旁组织(1.02±0.73,t=4.480,P<0.01)。NRSN2-AS1在食管癌细胞系Eca109(1.99±0.04)、TE1(2.43±0.09)、TE13(3.68±0.21)和KYSE150(4.44±0.26)中的表达显著高于对照组(1.00±0.08,P均<0.01)。NRSN2-AS1过表达可促进Eca109细胞的增殖能力(P<0.01);上调NRSN2-AS1可促进Eca109细胞的迁移及侵袭能力(P均<0.01)。NRSN2-AS1可通过竞争性结合miR-129-5p,上调Wnt5a的表达,进而激活Wnt/β-catenin信号通路。结论NRSN2-AS1可通过miR-129-5p/Wnt5a轴激活Wnt/β-catenin信号通路,促进ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭,其有望成为ESCC治疗的潜在靶点。

Hsa-miR-210-5p靶基因预测及其相关信号通路的生物信息学分析

为深入研究miR-210-5p的调控机制及生物学功能提供理论机制,应用生物信息学方法分析miR-210-5p序列,预测其靶基因,用Veney2.1.0绘制韦恩图得到靶基因集合,并对其靶基因集合进行蛋白质互作分析,GO功能注释分析和KEGG Pathway分析。结果发现,已知的成熟miR-210-5p序列在各物种间高度保守。蛋白质互作分析显示,miR-210-5p预测靶基因所编码蛋白质间相互作用关系较复杂,尤其是靶基因CDK8、MED18、MED13等编码的蛋白质,在互作中起关键作用。GO分析发现其靶基因集合可能参与细胞组分、分子功能、生物调节等生物学过程;KEGG pathway分析发现其靶基因集合主要富集在MAPK、VEGF、癌症、甲状腺激素信号通路等信号通路。miR-210-5p调控靶基因参与多种重要的生物学过程,为后续研究提供了线索。

MiR-150-5p下调通过激活Wnt信号通路促进人牙周膜干细胞成骨分化及MMP2表达

目的:探讨mi R-150-5p在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化过程中的水平变化和其对hPDLSCs成骨分化的影响及相关机制。方法:采用有限稀释法分离培养h PDLSCs,对h PDLSCs进行成骨诱导,以mi R-150-5p抑制物(mi R-150-5p-inhibitor)及其阴性对照(miR-inhibitor-NC)转染hPDLSCs;采用real-timeRT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、R unt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)及mi R-150-5p水平;采用蛋白质印迹法检测ALP、Runx2、OPN、β-连环蛋白(β-catenin)、转录因子4 (TC F-4)及基质金属蛋白酶2 (MMP2)的蛋白表达水平;使用ALP检测试剂盒测定ALP活性。结果:分离培养的h PDLSCs经成骨诱导后,其ALP、R unx2及OPN转录水平随培养天数增加逐渐升高(P<0.05),而mi R-150-5p水平逐渐下降(P<0.05),即miR-150-5p水平与hPDLSCs成骨分化呈相反变化趋势;mi R-150-5p-inhibitor转染的h PDLSCs中,ALP、Runx2、OPN转录及表达水平,Wnt通路分子β-catenin、TCF-4及MMP2表达水平,以及A LP活性均显著增加(均P<0.05);当miR-150-5p-inhibitor联合Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)处理h PDLSCs后,miR-150-5p下调引起的ALP、Runx2、OPN及MMP2表达和ALP活性增加均出现显著性逆转(均P<0.05)。结论:MiR-150-5p下调能够通过激活Wnt信号通路促进h PDLSCs成骨分化及MMP2表达,提示低水平的miR-150-5p有利于hPDLSCs的成骨分化过程。