地塞米松干预的间充质干细胞来源外泌体中miR-708对成骨分化、增殖和迁移的影响

目的探讨用地塞米松干预的间充质干细胞(MSC)来源外泌体中miR-708对MSC成骨分化、增殖和迁移的影响。方法通过超速离心获得未被和被地塞米松干预的MSC外泌体Exo-1和Exo-2,透射电镜观察外泌体形态,Wsetern印迹检测外泌体标志蛋白CD63,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两种外泌体中miR-708表达。将MSC分为对照组、Exo-1组和Exo-2组,并进行成骨诱导分化培养,外泌体处理组分别加入20μg/ml Exo-1或Exo-2,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)。茜素红染色观察细胞成骨分化能力。CCK-8检测细胞增殖活力。划痕实验评估细胞迁移能力。结果MSC外泌体有典型的茶托样结构且检测到CD63表达;用地塞米松干预的MSC外泌体中miR-708高表达。与对照组和Exo-1组相比,Exo-2组MSC成骨分化能力、增殖活力和迁移能力显著降低(P<0.05)。结论用地塞米松干预的MSC来源外泌体中miR-708可抑制MSC成骨分化、增殖和迁移。

miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR法检测转染48 h后各组细胞中miR-708-5p的表达,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达。结果:与对照组相比,miR-708-5p组细胞中miR-708-5p的表达水平、细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,而细胞存活率、细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量以及TLR4、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论:miR-708-5p可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡并减轻细胞炎症损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。

LINC00665通过靶向miR-708-5p/DKK3抑制食管癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨LINC00665在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织及细胞中的表达,并探讨其异常表达对ESCC细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法采用qRT-PCR法检测LINC00665及miR-708-5p的表达情况;采用MTS、Transwell侵袭实验检测LINC00665异常表达对ESCC细胞增殖及侵袭能力的影响。采用双荧光素酶报告基因检测LINC00665与miR-708-5p的相互作用及miR-708-5p对靶基因的调控作用。结果ESCC组织中LINC00665表达量(3.834±2.016)明显低于癌旁正常组织(7.973±2.752)(P<0.01)。LINC00665表达与ESCC淋巴结转移、浸润深度及TNM分期密切相关(P均<0.05)。LINC00665过表达明显抑制TE13细胞的增殖及侵袭能力(P均<0.05)。LINC00665过表达降低TE13细胞中miR-708-5p的表达及报告基因的荧光素酶活性(P均<0.05);miR-708-5p mimics可降低DKK3基因表达及含DKK33’UTR区结合位点片段的报告基因质粒的荧光素酶活性(P均<0.05);同时,miR-708-5p过表达可抵消TE13细胞中由LINC00665过表达诱导的DKK3基因表达上调和荧光素酶活性的上调(P均<0.05)。结论LINC00665可通过竞争结合miR-708-5p靶向调控DKK3基因表达,进而抑制ESCC细胞的增殖及侵袭能力。LINC00665有望成为ESCC患者分子靶向治疗的潜在靶点及预后评估的新型分子标志物。

circ-RAD23B通过miR-708-5p/CPNE1轴调控膀胱癌细胞增殖、细胞周期、凋亡的机制

目的探讨circ-RAD23B对膀胱癌细胞增殖、细胞周期、凋亡的影响及分子机制。方法选取49例膀胱癌患者癌组织及相应的癌旁组织;培养人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞系T24、RT4、UM-UC-3,将T24细胞分为NC组、si-NC组、si-circ-RAD23B组、miR-NC组、miR-708-5p组、si-钙离子依赖性磷脂结合蛋白(CPNE)1组、pcDNA-NC组、pcDNA-CPNE1组、si-circ-RAD23B+pcDNA-NC组、si-circ-RAD23B+pcDNA-CPNE1组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ-RAD23B、miR-708-5p和CPNE1 mRNA表达水平;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circ-RAD23B和miR-708-5p及miR-708-5p和CPNE1之间的靶向关系;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果与癌旁组织比较,膀胱癌组织中circ-RAD23B表达水平明显升高(P<0.05)。与SV-HUC-1细胞比较,膀胱癌细胞系T24、RT4、UM-UC-3中circ-RAD23B表达水平明显升高,CPNE1 mRNA和蛋白表达水平明显升高,miR-708-5p表达水平明显降低(P<0.05)。circ-RAD23B靶向调控miR-708-5p,miR-708-5p靶向调控CPNE1。circ-RAD23B和CPNE1低表达或miR-708-5p高表达,膀胱癌细胞T24中CyclinD1表达水平明显降低,Cleaved-caspase-3表达水平明显升高,细胞A值明显降低,S期细胞所占比例明显降低,G2/M期细胞所占比例明显升高,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。高表达CPNE1可逆转circ-RAD23B低表达对T24细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。结论circ-RAD23B低表达可能通过miR-708-5p/CPNE1轴抑制膀胱癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。

miR-708-5p靶向GAGE12I抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-708-5p靶向GAGE12I对胃癌(gastric cancer,GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 qRT-PCR检测miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中的表达;MTT法、克隆形成实验和Transwell小室法检测miR-708-5p和GAGE12I对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的影响;双荧光素酶报告基因实验验证miR-708-5p与GAGE12I之间的靶向关系; Western blot检测miR-708-5p对GAGE12I表达的影响;靶标回复实验验证GAGE12I对miR-708-5p抑制GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭作用的影响.结果 miR-708-5p在GC组织和GC细胞AGS和BGC-823中低表达;上调miR-708-5p和沉默GAGE12I抑制GC细胞AGS增殖、迁移和侵袭; GAGE12I是miR-708-5p的靶基因,且miR-708-5p负性调节GAGE12I表达,过表达GAGE12I可部分逆转miR-708-5p对GC细胞AGS和BGC-823增殖、迁移和侵袭的抑制作用.结论 miR-708-5p可靶向GAGE12I抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭.

miR-708与JAK1在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及调控关系

目的初步探讨miR-708在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法选取25只雄性SD大鼠,随机抽取10只作为假手术组,其余大鼠采用线栓法构建大鼠脑缺血再灌注模型(MACO),将术后存活的10只SD大鼠设为缺血再灌注1d组,采用实时定量荧光PCR法(real time,PCR)比较各组大鼠外周血和脑组织的miR-708表达及脑组织中JAK1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠脑组织中JAK1蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,实验组外周血及脑组织中miR-708mRNA表达显著降低(P<0.01),而脑组织中JAK1 mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。相关性分析发现miR-708与JAK1表达呈负相关。结论 miR-708可能通过抑制其靶基因JAK1的表达在脑缺血再灌注损伤中发挥保护作用。

miR-708与慢性乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者预后的关系

目的探究miR-708与慢性乙型肝炎(CHB)相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者预后的关系。方法前瞻性选取2018年3月至2020年6月在海南医学院第二附属医院就诊的128例CHB-ACLF患者(设为CHB-ACLF组)和100例CHB患者(设为CHB组)作为研究对象。根据CHB-ACLF患者的预后生存情况将其分为生存组(n=66)和死亡组(n=62)。采用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-708的表达水平,并分析其与CHB-ACLF患者预后90 d生存情况的关系。结果CHB-ACLF组的血清miR-708相对表达量低于CHB组(0.43±0.16比0.75±0.14),两组差异有统计学意义(P<0.05)。生存组的血清miR-708相对表达量高于死亡组(0.52±0.14比0.33±0.11),两组差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,国际标准化比值(INR)、肌酐和终末期肝病模型(MELD)评分是CHB-ACLF患者预后生存的独立危险因素(P<0.05),miR-708是CHB-ACLF患者预后生存的独立保护因素(P<0.05)。miR-708判断CHB-ACLF患者预后生存情况的ROC曲线下面积(AUC)为0.864,敏感度为79.03%,特异度为80.30%。限制性立方样条拟合logistic回归分析结果显示,miR-708与CHB-ACLF患者预后生存情况呈线性关系(非线性检验P>0.05)。结论检测CHB-ACLF患者血清miR-708的表达水平有助于判断患者的预后生存情况。

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为Control组(未进行任何处理),NC组(转染随机序列RNA Oligo),miR-708-5p组(转染miR-708-5p mimics)。MTT检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,Western blot检测URGCP表达水平;实时荧光定量PCR检测miR-708-5p、URGCP基因mRNA表达水平;荧光素酶实验验证miR-708-5p与URGCP的靶向关系。结果与HLF-1细胞株相比,肺癌细胞株A549细胞miR-708-5p表达水平降低,URGCP-mRNA表达升高(P<0.05),同时,URGCP蛋白水平升高。转染72h后,与Control、NC组比较,miR-708-5p组细胞URGCP基因mRNA明显降低,URGCP蛋白表达量明显降低(P均<0.01)。miR-708-5p组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于Control、NC组(P<0.05)。与WT-URGCP组相比,miR-708-5p+WT-URGCP组细胞荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。结论miR-708-5p在非小细胞肺癌A549细胞中低表达,过表达miR-708-5p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,机制可能与负性调控URGCP有关。

miR-708在儿童急性淋巴细胞白血病中的诊断及预后

目的探讨miR-708对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的治愈率和存活率的提高作用以及预后标志物。方法采集90例已确诊为ALL的儿童血液样本和20例健康儿童血液样本;qRT-PCR检测技术检测所有血液样本中miR-708的表达水平;非配对t检验分析两组之间的相关性;采用利用接受者操作特征(ROC)曲线分析miR-708在儿童ALL患者中的诊断价值;以Kaplan-Meier生存曲线法评估miR-708表达水平对儿童ALL的预后生存情况。结果与健康儿童血样相比,miR-708在儿童ALL血样中表达显著上调(P<0.001);ROC曲线显示曲线下面积(AUC)为0.882,说明miR-708在儿童ALL中具有良好的诊断潜力;Kaplan-Meier生存曲线提示过表达的miR-708与患者不良预后相关。结论miR-708在儿童ALL患者血液中显著上调,并可以作为儿童ALL的诊断及预后的有效标志物。

毛蕊花苷通过miR-708-3p抑制乳腺癌MCF-7细胞的恶性表型

目的探究毛蕊花苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法人乳腺癌MCF-7细胞随机分为对照组(生理盐水)以及实验组(毛蕊花苷50μmol·L-1)。给药24 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测EMT相关蛋白的表达。结果 72 h时,对照组和实验组的细胞存活率分别为(95.03±6.31)%和(80.11±5.17)%;细胞迁移数目分别为(91.03±9.37)和(58.69±5.08)个;细胞侵袭数分别为(83.47±7.88)和(42.86±4.91)个;E-钙粘蛋白相对表达量分别为0.73±0.07和1.27±0.11;B-钙粘蛋白相对表达量分别为0.88±0.08和0.53±0.04。实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。实验组miR-708-3p相对表达量显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论毛蕊花苷通过上调miR-708-3p抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移,侵袭和EMT。抑制肿瘤进展。

miR-708对肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-708对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人肺腺癌A549细胞株随机分为转染组和对照组,转染组通过质粒转染上调miR-708表达,对照组采用常规质粒转染。转染24h,EDU染色后荧光显微镜下观察,计算2组A549细胞增殖率;转染后24、48h,采用细胞划痕实验检测2组A549细胞迁移距离。结果转染24h,转染组A549细胞增殖率[(19.58±1.15)%]较对照组[(42.04±1.04)%]低(P<0.05);转染24、48h,转染组细胞迁移距离[(0.47±0.03)、(0.90±0.02)cm]较对照组[(0.75±0.04)、(1.44±0.02)cm]短(P<0.05)。结论miR-708可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移能力。

微小RNA-708靶向调控FOXO3表达及对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨微小RNA-708(miR-708)对叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达的靶向调控作用及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用脂质体法向NSCLC细胞A549转染miR-708抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并设空白对照组。采用实时定量PCR(QPCR)检测miR-708水平以评估转染效率,分别采用MTT法、细胞划痕实验和侵袭实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-708对FOXO3的靶向关系,采用QPCR检测FOXO3 mRNA水平。结果Inhibitor组的miR-708水平为0.241±0.057,低于空白对照组的1.027±0.121和NC组的1.186±0.254(P<0.05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor组转染后24~48 h时的细胞增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(33.24±1.98)%和(202.9±8.4)个,均低于空白对照组的(54.23±2.16)%和(352.7±12.5)个及NC组的(55.63±2.78)%和(361.2±13.7)个,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-708模拟物可抑制野生型FOXO3 3’端非翻译区的荧光素酶活性,而不影响突变型。QPCR结果显示,Inhibitor组的FOXO3 mRNA水平高于空白对照组和NC组(P<0.05)。结论下调miR-708水平可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能通过靶向FOXO3来发挥促癌作用,有望成为NSCLC防治的潜在靶点。