miR-762对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究

目的:分析miR-762在子宫内膜癌(EC)患者癌组织中的表达水平及其对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究。方法:qRT-PCR检测54例EC癌组织和癌旁组织以及正常子宫内膜细胞ESC和EC细胞系中miR-762及腺瘤性结肠息肉2(APC2)mRNA表达水平。不同放射剂量处理Ishikawa细胞,qRT-PCR检测miR-762和APC2 mRNA表达水平。将Ishikawa细胞分为空白对照组(blank组)、Lv-NC组(感染miR-762 sponge阴性对照慢病毒),Lv-miR-762 SP组(感染miR-762 sponge慢病毒)、Lv-miR-762 SP+si-NC组和Lv-miR-762 SP+si-APC2组。qRT-PCR和Western blot检测miR-762和APC2表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-762和APC2的靶向关系。采用6 Gy射线照射各组Ishikawa细胞,克隆形成实验检测细胞放射敏感性;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax等蛋白表达水平。结果:在EC癌组织及细胞系中miR-762高表达,而APC2低表达。随着射线照射剂量的增加,Ishikawa细胞中miR-762表达水平逐渐升高(P<0.05),APC2 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05),呈剂量依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实,APC2是miR-762靶基因。抑制miR-762可明显下调miR-762表达水平,上调APC2表达水平,增强细胞放射敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并下调CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平,上调p21和Bax蛋白表达水平(P<0.05)。此外,干扰APC2基因可显著逆转抑制miR-762表达对Ishikawa细胞放射敏感性的促进作用。结论:miR-762在EC癌组织及细胞系中高表达,抑制其表达可通过上调APC2表达从而增强Ishikawa细胞的放射敏感性。

miR-762在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:miR-762在多种恶性肿瘤中存在表达异常,参与肿瘤的增殖、凋亡及侵袭转移。观察miR-762在胰腺癌组织和细胞系中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭转移的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术检测于河北医科大学第四医院行胰腺癌根治术的胰腺癌组织和细胞株中miR-762的表达。通过LipofectamineTM2000将miR-762模拟物(mimics)、miR-762抑制物(inhibitors)及其阴性对照序列(scramble序列)分别转染胰腺癌PANC-1细胞。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相关分子标志物表达。结果:胰腺癌组织中miR-762 mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.01)。胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1、AsPC-1、SW-1990中miR-762 mRNA的表达量也显著高于正常胰腺上皮细胞HPDE(P<0.01)。转染miR-762 mimics后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著增加,而转染miR-762 inhibitors后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著降低(P<0.01)。同时miR-762 mimics组450 nm处的吸光度(D450)值、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达量显著增加,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量显著降低;而miR-762inhibitors组D450、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-cadherin、vimentin表达量显著降低,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-cadherin表达量显著增加(P<0.05)。结论:miR-762在胰腺癌组织和细胞株中高表达,上调miR-762表达可能通过调控N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达促进EMT进程,从而增强PANC-1细胞的增殖和侵袭转移能力。

miR-762与sTREM-1 sFLT-1在急性肺损伤中的相关性研究

目的:观察miR-762在急性肺损伤患者血浆中的表达并探究其与潜在的价值。方法:收集本医院2018年9月至2021年9月接诊的60例肺损伤患者,并依据临床症状和mMRC评分分为中低危组和高危组。急性生理学及慢性健康状况(Acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)评分分析各组患者的得分;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆中人可溶性髓系细胞触发受体-1(Soluble myeloid cell trigger receptor-1,sTREM-1)检测试剂盒、人可溶性FMS样酪氨酸激酶1(Soluble FMS like tyrosine kinase 1,sFlt-1)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验检测血浆中miR-762的表达量。绘制受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)判断miR-762对肺损伤患者的诊断价值及其截断值。结果:高危组、中低危组患者血浆sTREM-1、sFLT-1的含量也明显高于正常组,miR-762的相对表达量显著高于正常组。与中低危组相比,高危组血浆sTREM-1、sFLT-1的含量及miR-762相对表达量均显著升高。ROC曲线显示,miR-762相对表达量作为预测中低危组患者的曲线下面积(Area under curve,AUC)=0.987,95%置信区间(Confidence interval,CI):(0.9688~1.000),截断值为1.210;预测高危组患者的AUC=1.00,95%CI:(1.000~1.000),截断值为2.396。miR-762与APACHEⅡ得分显著升高,sTREM-1、sFLT-1的含量均呈正相关,相关系数(r)分别为0.386、0.321、0.432。结论:急性肺损伤患者血浆miR-762的表达水平升高与肺损伤病情加重相关,是急性肺损伤的预测标记物。

miR-762通过靶向调控NCOR1表达对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-762与核受体辅助抑制因子1(NCOR1)的靶向关系及其对人舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡的影响,为TSCC临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测48例TSCC患者癌组织及其癌旁正常组织中miR-762和NCOR1 mRNA表达水平,并通过Pearson相关分析法分析两者表达的相关性。采用RT-qPCR法和Westernblotting法检测人正常舌上皮细胞Hacat及人TSCC细胞(Tca-8113、CAL-27、SCC-15和SCC-9)中miR-762和NCOR1 mRNA及蛋白表达水平。将miR-762 inhibitor或si-NCOR1分别或同时转染至CAL-27细胞中,实验分为空白对照组、inhibitor-NC组、miR-762 inhibitor组、si-NC组、si-NCOR1组和miR-762 inhibitor+si-NCOR1组,采用RT-qPCR法检测CAL-27细胞中miR-762和NCOR1 mRNA表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,EdU法检测各组EdU染色阳性细胞率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Westernblotting法检测各组细胞中NCOR1、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,荧光素酶报告实验验证miR-762与NCOR1的靶向调控关系。结果:与癌旁正常组织和正常上皮细胞Hacat比较,TSCC组织和TSCC细胞中miR-762表达水平明显升高(P<0.01),而NCOR1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),且在TSCC组织中miR-762与NCOR1 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.711,P=0.003)。荧光素酶报告实验证实NCOR1是miR-762的靶基因。与空白对照组和inhibitor-NC组比较,miR-762 inhibitor组细胞增殖活性、EdU阳性细胞率和细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与miR-762 inhibitor组比较,miR-762 inhibitor+si-NCOR1组细胞增殖活性、EdU阳性细胞率和细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3及Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:抑制miR-762表达能通过靶向上调NCOR1表达抑制TSCC细胞的增殖,并促进细胞凋亡。

miR-762对卵巢癌细胞增殖的影响

目的判断miR-762在卵巢癌中的作用,以及miR-762对卵巢癌细胞增殖的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析40位卵巢癌患者标本中miR-762和menin蛋白的表达情况,进一步通过荧光素酶报告基因实验分析miR-762对menin蛋白的调节作用。在人卵巢上皮性SKOV3细胞中分别过表达或沉默miR-762后,通过四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验观察miR-762对细胞增殖的影响,进一步通过蛋白免疫印迹(western blot)实验检测miR-762对menin蛋白及Wnt通路中增殖相关蛋白的调节作用。结果 qPCR检测发现,与癌旁组织相比miR-762在肿瘤中表达较高,western blot和qPCR实验发现,menin蛋白在卵巢癌中表达较低。报告基因实验证明,miR-762可以直接打靶menin蛋白。MTT检测发现miR-762过表达后可以通过抑制menin蛋白及激活Wnt通路来促进卵巢癌细胞系SKOV3细胞的增殖。结论 miR-762在人卵巢癌组织中呈高表达,并可能通过抑制menin蛋白及激活Wnt通路从而促进卵巢癌的进程。

lncRNA717对胃癌细胞生物学行为的影响及调控机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)717对胃癌细胞增殖、转移等生物学行为的影响及其调控机制。方法收集2021年1至12月宁波大学附属第一医院手术切除或活检的31例胃癌组织及配对癌旁组织,以及胃癌细胞系AGS、HGC-27和人正常胃黏膜细胞系GES-1。采用qRT-PCR法检测lncRNA717在胃癌组织及癌旁组织、各细胞系中的表达水平。采用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法、Transwell法和划痕试验分别评估lncRNA717对细胞增殖、侵袭和迁移中的影响。采用荧光素酶报告基因测定、qRT-PCR法和Western blot法检测各组标本和细胞中lncRNA717、miR-762和干扰素调节因子(IRF)7表达水平。结果与癌旁组织相比,lncRNA717在胃癌组织中显著下调,与正常细胞相比,lncRNA717在胃癌细胞中显著下调。过表达lncRNA717抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。lncRNA717可以吸附miR-762,上调miR-762能抑制IRF7的表达,促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而过表达lncRNA717后逆转了miR-762对细胞的增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论lncRNA717可抑制胃癌细胞的增殖和转移,这可能与调控miR-762/IRF7有关。提示lncRNA717可作为胃癌的潜在生物标志物和治疗靶点。