基于miR-766-5p/Hdac3信号轴的调控网络促进急性心肌梗死发展及诱导心肌凋亡

本研究主要是miR-766-5p-HDAC3信号轴影响急性心肌梗死(AMI)病理发展通过诱导心肌细胞H9C2凋亡导致心肌纤维化(MF)。方法 采用qRT-PCR实验检测AMI患者及AMI小鼠中miR-766-5p表达;双荧光素梅报告实验(Dual-Luciferase?Reporter)验证HDAC3是miR-766-5p的靶向mRNA及qRT-PCR和Westernblot检测HDAC3与miR-766-5p的调控关系;Tunel细胞凋亡实验检测缺氧培养箱中miR-766-5pinhibitor对H9C2细胞凋亡的调控;心脏超声心动图检测心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室射血分数(LVEF);Masson和SiriusRed染色法检测分析心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠四周后左心室纤维化变化;采用CD31抗体(内皮细胞的标志基因)对小鼠左室切片进行免疫组化分析;凋亡实验检测miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠心脏中Tunel阳性细胞。结果 miR-766-5p异常表达与AMI存在相关调控作用;miR-766-5p可下调HDAC3mRNA和蛋白的表达;心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室射血分数(LVEF)有所好转,NppamRNA的表达量明显低于AMI小鼠;心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室纤维化减少,显示其心肌梗死程度有所好转;AMI组阳性信号明显增加,心肌注射miR-766-5pinhibitor后显著更加增强;miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠心脏中Tunel阳性细胞的数量远远少于AMI小鼠。结论 miR-766-5p通过抑制HDAC3的表达显著促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的病理进程。

miR-766-3p调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的探讨微小RNA(miR-766-3p)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR与免疫组化分别检测肺癌组织及癌旁组织中miR-766-3p、KIFC1的表达。体外培养肺癌细胞A549,利用脂质体试剂Lipofectamine2000将miR-766-3p mimics、si-KIFC1转染至A549细胞,MTT检测细胞活力;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-766-3p与KIFC1的靶向关系。结果 miR-766-3p在肺癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),KIFC1的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-766-3p过表达与抑制KIFC1的表达后,细胞活力显著降低,迁移与侵袭细胞数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-766-3p可通过降低肺癌细胞中KIFC1的蛋白水平从而抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。

miR-766-5 p过表达介导MMP-7对胶质瘤细胞增殖、侵袭与凋亡的影响及机制

目的探讨miR-766-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭与凋亡的影响。方法Targetscan预测miR-766-5p与基质金属蛋白酶-7(MMP-7)靶向关系并进行验证,构建miR-766-5p过表达、MMP-7过表达和miR-766-5p+MMP-7过表达胶质瘤U87细胞系,BrdU染色、流式细胞法、Transwell实验、Western印迹分别检测细胞增殖、凋亡、侵袭及相关蛋白表达。结果miR-766-5p可靶向抑制MMP-7表达,miR-766-5p过表达可抑制Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Wntl、β-链蛋白(β-catenin)蛋白表达以抑制U87细胞增殖和侵袭,可促进Bcl相关X蛋白(Bax)/B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达以促进细胞凋亡,MMP-7过表达可以缓解miR-766-5p过表达所致U87细胞增殖、侵袭抑制作用和调凋亡促进作用。结论miR-766-5p可靶向抑制MMP-7表达抑制U87细胞胞增殖、侵袭和促细胞凋亡。

沉默HOXA11-AS靶向miR-766-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)靶向微小RNA-766-3p(miR-766-3p)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响.方法以100μg/mL的ox-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h建立细胞损伤模型.将HUVEC分为对照(con)组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-766-3p组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组.RT-qPCR检测HOXA11-AS和miR-766-3p表达.流式细胞术分析细胞凋亡.试剂盒检测LDH释放量、胞内SOD活性.ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-1β水平.双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS和miR-766-3p的靶向关系.结果与con组比较,ox-LDL组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量、HOXA11-AS表达量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性、miR-766-3p表达量显著降低(P<0.05).与ox-LDL+si-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).与ox-LDL+miR-NC组比较,ox-LDL+miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).miR-766-3p是HOXA11-AS的直接靶点.与ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05).结论沉默HOXA11-AS通过靶向上调miR-766-3p表达能够抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡、氧化应激和炎性反应.

CircPTPN22作为miR-766-3p分子海绵促进类风湿关节炎病理进程

目的本研究旨在探索circPTPN22在类风湿关节炎(RA)外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达及参与RA的机制。方法RT-PCR检测circPTPN22在20例RA和20例健康人(HCs)PBMCs中的表达,生物信息学预测能与其结合的microRNA(miRNA),并用功能学实验和双荧光素酶试验进行验证。检测miRNA在RA患者PBMCs中的表达并计算受试者工作特征曲线(ROC)评估miRNA在RA中的临床意义。结果CircPTPN22表达水平在RA PBMCs中显著降低。ROC分析提示circPTPN22是RA患者的潜在诊断生物标志物(AUC=0.7025),相关性分析结果显示cirPTPN22的表达与RA的SJC、anti-CCP呈负相关关系(SJC:r=-0.723;anti-CCP:r=-0.618)。MiR-766-3p在RA PBMCs中显著上调;ROC分析提示miR-766-3p的表达可以将RA患者与HCs区分开来(AUC=0.9125)。生物信息学分析、双荧光素酶试验和功能学实验显示circPTPN22能抑制miR-766-3p的表达,miR-766-3p通过调控下游靶基因SIRT5参与RA。结论CircPTPN22通过与miR-766-3p竞争性结合调控下游靶基因SIRT5参与RA的发生与发展,且circPTPN22是RA的潜在诊断生物标志物。

外周血miR-766-3p的表达对肝癌患者预后的预测价值

目的:为探究外周血miR-766-3p的表达对肝癌患者预后的预测价值。方法:回顾性分析我院于2015年8月至2017年8月收治的124例肝癌患者的病历资料,作为研究组,同时选取同时期124例体检健康人群为对照组,检测外周血miR-766-3p水平。统计肝癌不同病理特点的外周血miR-766-3p水平,并比较124例肝癌患者治疗前后的miR-766-3p的表达水平。结果:外周血miR-766-3p的表达受肿瘤大小、TNM分期及侵袭转移的因素影响,差异具有统计学意义(P<0.05),且水平与TNM分期、肿瘤大小呈显著的负相关;研究组外周血miR-766-3p的水平低于对照组(P<0.05);肝癌患者治疗后的miR-766-3p水平明显高于治疗前水平(P<0.05)。结论:过表达外周血miR-766-3p可抑制肝癌细胞生长,抑制癌症的发展。

微小核糖核酸miR-766通过靶向调控环腺苷酸活化交换蛋白1促进高糖培养下心肌细胞凋亡

目的探讨微小核糖核酸miR-766在不同葡萄糖浓度培养的心肌细胞中的表达水平，明确其对心肌细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法在不同葡萄糖浓度条件下（正常糖5mmol／L、高糖15、25及35mmol／L）培养的心肌细胞中，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测miR-766的表达差异，以流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡情况，Western blot法检测各组环腺苷酸活化交换蛋白l（Epac-1）、Bax蛋白、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）活化片段蛋白表达水平。采用生物信息学预测miR-766的靶基因，并进一步采用双荧光素酶报告基因法进行验证。组间数据比较采用t检验。结果与5mmol／L相比，miR-766在15、25及35mmol／L组的心肌细胞中表达上调（3．40±0．38，4．61±0．34，6．17±0．42比0．97±0．04，t=11．13l-21．493，P〈0．05），而转染miR-766抑制剂后，细胞的凋亡率明显降低[（16．43±0．31）％比（26．45±0-31）％，t=39．566，P〈0．05]；Western blot结果表明，在人心肌细胞中miR-766高表达者Epac-1的蛋白表达减少（0．48±0．07比1．00±O．12，t=6．695，P〈0．05），而抑制miR-766的表达后Epac-1的表达增加（1．23±0．12比0．70±0．10，t=5．884，P〈0．05）；荧光素酶报告基因结果表明，miR-766模拟物或抑制剂与Epae-1基因3＇-非翻译区野生型报告基因共转染时，报告基因荧光素酶活性明显变化（3．22±0．07比5．01±0．96，6．98±0．61比5．01±O．96，t=-3．239～-3．008，P〈0．05）；在高糖培养条件下抑制miR-766表达能够部分拮抗高糖对Epac-1蛋白表达的抑制作用（0．80±0．05比0．53±0．05，t=6．810，P〈0．05）；在miR-766模拟物处理的H9e2细胞中回补Epae-1，easpase-3活化片段蛋白的表达则明显降低（O．67±0．07比1．07±0．12，t=-5．050，P〈0．05）。结论在高糖培养的心肌细胞中高表达的miR-766通过靶向调控Epac-l基因的表达，进而促进细胞的凋亡。

circRNF20/miR-766-5p/MTHFR轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究circRNF20在乳腺癌(BC)中的表达及对BC细胞恶性生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法BC细胞系分为:Control组(空白对照)、Si-NC组(阴性对照)、Si-circRNF20组(转染体外靶向敲低circRNF20的siRNA)、Si-circRNF20+in-miR-766-5p组(共转染体外靶向敲低circRNF20的siRNA和miR-766-5p抑制物)和Si-circRNF20+5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)组(共转染体外靶向敲低circRNF20的siRNA和重组pcDNA的MTHFR过表达质粒)。qRT-PCR、Western blot或免疫组化检测circRNF20、miR-766-5p和MTHFR表达。采用CCK-8和集落形成检测细胞增殖;采用划痕愈合和Transwell实验评估细胞迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶分析circRNF20、miR-766-5p和MTHFR之间的作用关系。建立异种移植小鼠模型,分析circRNF20对体内异种肿瘤生长的影响。结果circRNF20和MTHFR在BC中高表达,miR-766-5p低表达(P<0.05)。敲低circRNF20可明显抑制BC细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭能力(P<0.05),加速细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-766-5p表达或上调MTHFR可明显削弱敲低circRNF20对BC细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。miR-766-5p与circRNF20和MTHFR均存在靶向关系(P<0.05)。circRNF20的敲低抑制了体内异种移植肿瘤的生长(P<0.05)。结论敲低circRNF20通过上调miR-766-5p并抑制MTHFR的表达,从而抑制BC细胞恶性生物学行为。

MiR-766-3p下调Mipu1表达促进小鼠单核巨噬细胞凋亡

MiR-766-3p可以调控细胞凋亡,但其在动脉粥样硬化中对巨噬细胞的凋亡机制尚不清楚。本研究构建了高脂喂养的ApoE敲除小鼠动脉粥样硬化模型,采用定量PCR检测了动脉粥样硬化组织中miR-766-3p的表达水平。结果发现,miR-766-3p在小鼠动脉粥样硬化组织中表达上调。生物信息学预测发现,Mipu1可能为miR-766-3p调控的潜在靶基因。采用荧光素酶报告基因分析验证了miR-766-3p对Mipu1的调控作用。采用定量PCR和Western blot检测miR-766-3p对Mipu1表达的调控作用,采用流式细胞仪和Western blot检测miR-766-3p调控Mipu1对RAW264.7细胞凋亡的影响。结果发现,miR-766-3p可促进RAW264.7细胞凋亡,其机制可能与其下调Mipu1表达有关。本文初步探索了miR-766-3p对巨噬细胞的凋亡调控在动脉粥样硬化发病中的作用机制,为进一步防治动脉粥样硬化提供了新思路。

MicroRNA-766-3p靶向调控SIRT6抑制肝癌进展的实验研究

目的:探究miR-766-3p是否可通过调节靶基因SIRT6影响肝细胞癌(HCC)的发生与发展进程。方法:RT-PCR及Western blot检测miR-766-3p及SIRT6在HCC组织及癌旁组织中的表达;CCK-8、流式凋亡检测技术、划痕实验及Trans well小室检测miR-766-3p/SIRT6对HCC细胞生长、凋亡、转移及侵袭能力的影响;荧光报告基因实验及western blot技术检测miR-766-3p对SIRT6表达的影响。结果:miR-766-3p在HCC组织中低表达,而SIRT6高表达。过表达miR-766-3p通过与SIRT6的3’UTR区结合降低SIRT6的表达。上调miR-766-3p明显抑制HepG2细胞增殖、转移及侵袭能力,促进细胞凋亡;但SIRT6过表达后终止miR-766-3p的以上作用。结论:miR-766-3p通过靶向负调控SIRT6的表达抑制HCC进展。

微小RNA-766-5p通过调控组氨酸磷酸酶基因表达影响胃癌细胞增殖和放射敏感性

目的研究微小RNA(miR)-766-5p对人胃腺癌细胞(AGS)细胞增殖和放射敏感性的影响及潜在作用机制。方法以胃上皮细胞GES-1为对照,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞系AGS、MGC803、MKN-28和SGC-7901中组氨酸磷酸酶(LHPP)mRNA和miR-766-5p的表达,AGS细胞转染anti-miR-766-5p,确定抑制miR-766-5p表达对细胞的影响,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定AGS细胞存活率,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞中LHPP、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和γ-H2AX蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-766-5p和LHPP的调控关系。结果与GES-1相比,miR-766-5p在胃癌细胞系AGS、MGC803、MKN-28和SGC-7901表达量升高[(3.30±0.24)、(2.89±0.19)、(2.05±0.21)、(1.99±0.19)比(1.00±0.10),P<0.05],LHPPmRNA[(0.85±0.09)、(1.01±0.11)、(0.75±0.08)、(0.99±0.10)比(4.46±0.25)]、蛋白表达量[(0.45±0.05)、(0.35±0.05)、(0.30±0.04)、(0.46±0.05)比(1.08±0.12)]降低(P<0.05);抑制miR-766-5p表达可抑制胃癌AGS细胞增殖并增强细胞的放射敏感性;miR-766-5p靶向负调控LHPP的表达;敲减LHPP可逆转anti-miR-766-5p对AGS细胞增殖和放射敏感性的作用。结论miR-766-5p通过靶向促进LHPP表达增强胃癌AGS细胞的放射敏感性并抑制癌细胞增殖。miR-766-5p有望成为胃癌临床放射增敏靶点。