miR-9-3p对细胞脂代谢调节功能及可能机制

目的 检测microRNA-9-3p (miR-9-3p)对HepG2细胞增殖及脂质代谢的影响,探讨其对细胞沉默信息调节因子(Sirt-1)蛋白表达的影响。方法 以HepG2细胞为体外细胞模型,应用体外细胞培养技术、噻唑蓝(MTT)比色法、转染技术和Western印迹,以miR-9-3p mimic、miR-9-3p inhibitor转染为干预手段,应用MTT比色法、Western印迹检测正常对照组、miR-9-3p mimic组、anti-miR-9-3p组3组HepG2细胞增殖水平、总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)表达水平及Sirt-1蛋白的表达。结果 miR-9-3p mimic组miR-9-3p表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);anti-miR-9-3p组miR-9-3p表达水平显著低于正常对照组(P<0.05);与正常对照组相比,miR-9-3p mimic组HepG2细胞增殖显著增加(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞增殖显著抑制(P<0.05);miR-9-3p mimic组HepG2细胞TC及TG表达水平显著增加(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞TC及TG表达水平显著降低(P<0.05);miR-9-3p mimic组HepG2细胞Sirt-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);anti-miR-9-3p组HepG2细胞Sirt-1蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。结论 miR-9-3p转染能够促进HepG2细胞增殖;miR-9-3p转染显著增加HepG2细胞TG及TC表达;miR-9-3p转染能够显著降低HepG2细胞Sirt-1蛋白表达。miR-9-3p能够影响HepG2细胞增殖及TC及TG代谢,其可能是通过调节Sirt-1蛋白表达发挥作用。

脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及其与病人临床预后的关系

目的探讨脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p的变化及临床意义。方法选取2016年3月1日至2019年3月1日收治的脑胶质瘤42例,另选20例同期健康查体者为对照,用RT-PCR法检测血浆miR-9-3p水平。42例脑胶质瘤术后随访24~60个月,记录生存情况;以血浆miR-9-3p平均值为准,分为低表达和高表达。结果脑胶质瘤病人血浆miR-9-3p水平明显降低(P<0.05),多因素Cox分析显示,血浆miR-9-3P低表达是脑胶质瘤病人不良生存预后的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,miR-9-3p低表达脑胶质瘤病人中位总生存期较高表达病人明显缩短(P<0.05)。结论人脑胶质瘤血浆miR-9-3p表达下调,与病人不良生存预后密切相关。

miR-9-3p通过IRF2BP2调控食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移和免疫逃逸

目的:探讨miR-9-3p/IRF2BP2分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)恶性生物学行为的影响。方法:采用ACLBI和Starbase数据库分析miR-9-3p在ESCC中的表达差异及其与患者生存的相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-9-3p和IRF2BP2的靶向关系。CCK-8、Annexin V-FITC/PI试剂盒和Transwell分别检测KYSE-30细胞增殖、凋亡和迁移。Western blot检测miR-9-3p/IRF2BP2轴对KYSE-30细胞PD-L1表达的影响。CD8~+T细胞与KYSE-30细胞共培养后,ELISA检测CD8~+T细胞上清中IFN-γ,IL-4和IL-10水平。结果:miR-9-3p在ESCC组织和细胞系中异常高表达,且预示较差的生存率。miR-9-3p靶向负调控IRF2BP2表达。过表达IRF2BP2抑制KYSE-30细胞增殖、迁移和免疫逃逸并促进其凋亡,而miR-9-3p可拮抗IRF2BP2的作用。结论:miR-9-3p通过抑制IRF2BP2表达促进ESCC细胞增殖、迁移和免疫逃逸并抑制其凋亡。

miR-9-3在慢性淋巴细胞白血病中的功能与调控机制

目的：探讨 microRNA-9-3（miR-9-3）在慢性淋巴细胞白血病中的作用及调控机制。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测8例正常人骨髓组织和外周血、78例新确诊慢性淋巴细胞性白血病患者骨髓组织和7种白血病细胞系的甲基化水平；采用 Western blot 技术检测甲基化阳性白血病细胞株的 NF-κB1信号转导通路活化水平。结果正常对照组 miR-9-3启动子呈非甲基化状态；7种白血病细胞株中只有 I83-E95和 WAC3CD5＋两种细胞株种呈非甲基化状态（MSP 阳性率为28.6％）；78例慢性淋巴细胞性白血病患者中65例发生 miR-9-3甲基化（MSP 阳性率为83％）。去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza2’Dc）处理后的 I83-E95和 WAC3CD5＋细胞株 miR-9-3均处于去甲基化状态。结论慢性淋巴细胞性白血病患者存在 miR-9-3异常甲基化，可能导致癌细胞异常增生；miR-9-3去甲基化可抑制 NF-κB1信号通路活化，表明 miR-9-3可能可以通过该通路抑制癌细胞凋亡，引发患者疾病恶化；甲基化的白血病细胞株可被去甲基化药物抑制，因此 miR-9-3可以作为治疗慢性淋巴细胞白血病的新基因靶点。

慢性淋巴细胞性白血病患者miR-9-3甲基化异常及其意义

目的本研究旨在探讨microRNA-9-3(miR-9-3)在慢性淋巴细胞性白血病骨髓细胞中的甲基化异常及其意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术检测8例正常骨髓组织、78例新确诊的慢性淋巴细胞性白血病患者和7种白血病细胞株甲基化水平。结果正常对照组miR-9-3呈未甲基化状态;7种白血病细胞株中有5种呈未甲基化状态(71.4%);78例慢性淋巴细胞性白血病患者中65例呈miR-9-3甲基化,MSP阳性率为83%。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza Dc)处理白血病细胞株后I83-E95和WAC3CD5+细胞株miR-9-3呈未甲基化状态。结论慢性淋巴细胞性白血病患者存在miR-9-3表达受抑,可能与其基因甲基化异常有关。而miR-9-3甲基化在激活慢性淋巴细胞性白血病患者NF-κB1信号通路的作用值得进一步研究。

miR-9-3甲基化与非小细胞肺癌患者临床病理特征的关系研究

目的研究miR-9-3甲基化与NSCLC患者临床病理特征的关系。方法收集2011年1月—2014年12月就诊于沈阳市第四人民医院的59例NSCLC患者的肿瘤标本,提取组织DNA,应用MSP方法检测miR-9-3的甲基化状态。调查患者的基本特征和临床病理特征。使用χ~2检验进行不同特征NSCLC患者甲基化率的比较。结果59例研究对象miR-9-3甲基化率为61.0%。未发现不同年龄、性别以及NSCLC类型与miR-9-3甲基化率有关差异无统计学意义(P>0.05)。在对NSCLC患者临床病理特征与miR-9-3甲基化率的比较中未发现T分期以及M分期与miR-9-3甲基化率有关差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移的患者miR-9-3甲基化率高于无淋巴结转移的患者(69.6%vs.30.8%,χ~2=6.41,P=0.01)。结论 miR-9-3甲基化状态与NSCLC患者淋巴结转移相关,提示其可能参与到NSCLC的转移过程中。

孤立低高密度脂蛋白胆固醇表型与血浆miR-9-3p、miR-28-5p的表达分析

目的探讨孤立低高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)表型血浆miR-9-3p和miR-28-5p的变化模式及其相关性。方法选取唐山市工人医院体检中心2014年1月至2015年12月174例健康体检者资料,收集其外周血血浆样本。根据血清HDL-C水平分为血脂正常表型组(86例)和孤立低HDL-C表型组(88例)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定血浆miR-9-3p和miR-28-5p的表达水平。结果脂代谢表型正常组和孤立低HDL-C表型组血浆中miR-9-3p的检出率分别为86.05%(74/86)和64.78%(57/88),差异有统计学意义(χ2=10.58,P=0.001);女性miR-9-3p水平在脂代谢正常组和孤立低HDL-C异常表型组血浆中的表达水平均高于男性[正常组:0.041(0.024,0.111)vs.0.018(0.009,0.039),Z=3.05,P=0.002;孤立低HDL-C表型组:0.029(0.024,0.059)vs.0.013(0.007,0.027),Z=3.35,P=0.001]。线性回归显示,表观健康者血浆miR-9-3p的相对表达水平与性别(β=-1.337,P<0.001)、血清HDL-C(β=1.638,P=0.041)、空腹血糖(β=0.475,P=0.044)相关。血浆miR-28-5p女性组高于男性组,差异有统计学意义[0.003(0.002,0.008)vs.0.004(0.003,0.011),P=0.028],而不同表型组中男、女比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血浆miR-9-3p是孤立低HDL-C表型的分子病理特征,性别、血清HDL-C、空腹血糖是其循环水平变化的主要影响因素。

miR-9-3p对ConA诱导的小鼠慢性实验性肝损伤的影响

目的探讨miR-9-3p对刀豆蛋白A(ConA)诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤的影响。方法ConA构建小鼠慢性实验性肝损伤模型,高通量测序筛查模型动物肝组织miRNA的差异表达。BALB/c小鼠40只,随机分成对照组、ConA损伤组、过表达组(ConA+慢病毒包装miR-9-3p组)、过表达对照组(ConA+慢病毒空载体组)每组10只;各模型组小鼠经尾静脉按8 mg/kg体重注射ConA每周1次(对照组注射等体积生理盐水),连续8周;过表达组于第7周经尾静脉注射,将慢病毒包装的miR-9-3p过表达质粒(2×107 TU/mL)注射到小鼠体内,每周1次,连续2周;过表达对照组注射等量慢病毒空载体;于ConA末次给药7 d后处死小鼠收集样本,电子天平检测肝脏指数变化,血清酶学检测AST,ALT水平,HE染色检测模型小鼠肝脏组织病理改变;蛋白印迹(Western Blot)检测模型小鼠肝脏组织中COL1A1及α-SMA蛋白的表达变化。结果高通量测序显示慢性肝损伤模型中miR-9-3p表达明显下调。在肝损伤鼠体内过表达miR-9-3p后,血清AST和ALT水平明显下降;HE染色检测观察到过表达的miR-9-3p明显减轻肝ConA诱导的肝脏组织病理损伤,与ConA损伤组比较,细胞肿胀坏死减弱,小叶结构恢复;Western Blot检测过表达miR-9-3p后COL1A1及α-SMA蛋白的表达明显减低。结论miR-9-3p可减弱ConA诱导所致小鼠慢性实验性肝损伤。

外泌体miR-9-3p在非小细胞肺癌血清中表达及检测的临床意义

目的分析外泌体miR-9-3p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)血清中的表达水平,探讨血清外泌体miR-9-3p检测在NSCLC诊断中的临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在山东省青岛疗养院诊疗的80例NSCLC患者(NSCLC组)、50例肺部良性病变患者(良性对照组)为研究对象,美国Invitrogen;总外泌体分离试剂盒提取两组患者血清外泌体,使用miRcute miRNA提取分离试剂盒从外泌体中提取miRNA,实时荧光定量PCR检测两组miR-9-3p水平,Spearman相关分析NSCLC血清miR-9-3p与常规标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFR A21-1)水平相关性,评价血清外泌体miR-9-3p联合CEA、CYFR A21-1检测诊断NSCLC的价值。结果NSCLC患者血清miR-9-3p水平明显高于良性对照组;NSCLC患者血清外泌体miR-9-3p水平与CEA、CYFRA21-1水平具有明显相关性(P<0.01);血清miR-9-3p联合CEA、CYFR A21-1检测诊断NSCLC的敏感性、准确性、阴性预测值与各单项检测比较明显提高(P<0.01),分别为95.00%、91.54%、91.49%。结论血清外泌体miR-9-3p可作为诊断NSCLC的新型标志物,联合常规标志物检测明显提高诊断NSCLC效能。

血清外泌体miR-9-3p水平与2型糖尿病轻度认知功能障碍的相关性研究

目的探讨血清外泌体miR-9-3p水平与2型糖尿病(T2DM)轻度认知功能障碍(MCI)的相关性。方法为横断面研究。选取2016年2月至2021年3月就诊于南京大学医学院附属鼓楼医院内分泌科的T2DM患者,以及同期年龄、性别和教育年限匹配且认知功能正常的健康对照者作为研究对象。收集研究对象性别、年龄和教育年限,检测其血清外泌体miR-9-3p水平、空腹C肽(FCP)、空腹胰岛素、空腹血糖(FPG),并计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),完善简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和3.0 T高分辨率头颅磁共振检查(检测灰质体积)。根据临床诊断标准将T2DM患者分为认知功能正常组和合并MCI组。采用单因素方差分析比较组间血清外泌体miR-9-3p等的差异,采用偏相关分析评估T2DM患者血清外泌体miR-9-3p与认知功能及灰质体积的相关性,采用多因素logistic回归分析法分析T2DM患者血清外泌体miR-9-3p与其发生MCI风险的关系,并通过受试者工作曲线评估血清外泌体miR-9-3p对患者MCI的预测价值。结果最终纳入70例研究对象。其中,健康对照者23名,认知功能正常的T2DM患者35例,合并MCI的T2DM患者12例。3组研究对象间性别、年龄和教育年限差异均无统计学意义(P>0.05)。合并MCI的T2DM患者血清外泌体miR-9-3p水平高于认知功能正常的T2DM患者和健康对照者[分别为(2111.9±722.7)、(1264.6±699.3)和(586.3±275.3)fM,P<0.001]。在T2DM患者中,校正性别、年龄和教育年限后,血清外泌体miR-9-3p水平与MMSE得分、MoCA得分以及灰质体积均呈负相关(r值分别为-0.390、-0.322和-0.549,均P<0.05)。logistic回归分析结果显示,在调整性别、年龄、教育年限、FCP和HOMA-IR后,血清外泌体miR-9-3p是T2DM患者发生MCI的独立影响因素(OR=1.241,95%CI 1.033~1.490,P=0.021)。血清外泌体miR-9-3p预测T2DM患者MCI的受试者工作曲线下面积为0.824,敏感度为91.7%,特异度为68.6%。结论血清外泌体miR-9-3p水平升高与T2DM患者的MCI风险增加相关。

miR-9-3在慢性淋巴细胞性白血病患者中的表达异常及其意义

目的本研究旨在探讨microRNA-9-3（miR-9-3）在慢性淋巴细胞行白血病骨髓细胞中的表达异常及其意义.方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测8例正常骨髓组织、78例新确诊的慢性淋巴细胞行白血病患者和7种白血病细胞系甲基化水平.结果正常对照组miR-9-3启动子呈未甲基化状态;7种白血病细胞株中有5种呈未甲基化状态（71.4%）;78例慢性淋巴细胞性白血病患者中65例miR-9-3甲基化,MSP阳性率为83%.5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-AzaDc）处理白血病细胞株后I83-E95和WAC3CD5＋细胞株miR-9-3处于未甲基化状态.结论慢性淋巴细胞行白血病患者存在miR-9-3表达受抑,可能与其基因甲基化异常有关.而miR-9-3甲基化在激活慢性淋巴细胞性白血病患者NF-κB1信号通路的作用值得进一步研究.

miR-9-5p通过SIRT1/NF-κB通路促进胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨miR-9-5p通过调控SIRT1及NF-κB表达对胰腺癌细胞(PANC-1)凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。方法使用miR-9-5p mimic慢病毒转染人胰腺癌PANC-1细胞建立稳转株(mimic组),空载体转染作为阴性对照组(NC组),以未处理的PANC-1细胞作为空白对照组(空白组)。采用qRT-PCR检测PANC-1细胞中miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA的表达水平;Western Blot检测SIRT1、NF-κB通路相关蛋白及Caspase-3蛋白表达量;ELISA检测细胞裂解液中SIRT1及Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-9-5p和SIRT1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-9-5p、SIRT1及Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果mimic组miR-9-5p mRNA表达较对照组明显升高,结果有统计学意义,提示转染成功。与空白组及NC组相比,mimic组SIRT1 mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65上调(P<0.01),Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-9-5p可抑制野生型SIRT1细胞的荧光活性,miR-9-5p可靶向调控SIRT1的表达;Pearson相关分析发现miR-9-5p和SIRT1的表达水平呈负相关(r=-0.849,P<0.05);miR-9-5p和Caspase-3的表达水平呈正相关(r=0.796,P<0.05)。结论过表达miR-9-5p可促进PANC-1细胞凋亡相关基因Caspase-3的表达,其机制可能与靶向调控SIRT1继而调节NF-κB通路有关,这将为胰腺癌的诊断及治疗提供新的思路。

强直性脊柱炎患者外周血miR-223和MMP-3、MMP-9表达水平检测及其临床意义

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血血浆中miR-223和基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9的表达水平及其临床意义。方法随机选取48例AS患者作为观察组,选取同期健康体检者48例作为对照组,采用实时逆转录聚合酶链式反应及酶联免疫吸附试验检测miR-223、MMP-3及MMP-9的表达。应用SPSS17.0软件绘制检测指标的受试者工作特征曲线(ROC曲线),对其诊断价值进行分析评价。结果观察组患者外周血中miR-223、MMP-3及MMP-9的表达均高于对照组,在疾病活动期表达水平均有不同程度的升高。血浆中miR-223、MMP-3及MMP-9之间的表达存在一定相关性(P<0.01),也与患者疾病活动指数、人体白细胞抗原-B27、C反应蛋白及红细胞沉降率等指标均存在一定相关性(P<0.01)。ROC曲线分析表明,miR-223、MMP-3及MMP-9对AS具有较高的诊断敏感度和特异度,联合检测能提高临床对AS的诊断能力。结论外周血miR-223、MMP-3及MMP-9在AS患者中存在差异表达,并具有一定的临床诊断能力,有望成为新的生物学诊断指标。

MiR-873对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-873在心肌细胞缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)损伤中的作用及其相关机制。方法:采用体外培养大鼠H9c2心肌细胞构建H/R模型,并转染miR-873模拟物(mimic),实验分为对照组、H/R组、阴性对照组及miR-873 mimic组。Real-time PCR检测各组miR-873的表达水平;蛋白质印迹法检测egl-9家庭缺氧诱导因子3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,Egln3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平;ELISA试剂盒以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing,aspartate-specific proteases-3,caspase-3)活性检测试剂盒分别用来检测细胞凋亡和caspase-3活性;采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-873对Egln3的作用靶点,并将实验分为阴性对照组、携带野生型(wild type,WT)报告基因的Egln3 3'-非编码区(3'-untranslated regions,3'-UTR)组(WT组)和携带突变型(mutant type,MUT)报告基因的Egln3 3'-UTR组(MUT组)。为进一步检测Egln3对miR-873 mimic作用的影响,实验构建了Egln3过表达细胞,并将其分为H/R组、H/R+miR-873 mimic组、H/R+pcDNA3-Egln3(pcEgln3)组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组。结果:与对照组相比,H/R组中miR-873表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,miR-873 mimic组中H9c2心肌细胞凋亡和caspase-3活性下降,Bax/Bcl-2比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);荧光素酶活性检测结果表明:与阴性对照组相比,WT组荧光素酶活性显著下调,差异有统计学意义(P<0.05),而MUT组荧光素酶活性无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。过表达实验结果表明:与H/R组相比,miR-873 mimic组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值均显著下降(均P<0.05);与miR-873 mimic组相比较,H/R+pcEgln3组和H/R+miR-873 mimic+pcEgln3组细胞凋亡和Bax/Bcl-2比值显著上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:MiR-873通过靶向作用于Egln3而抑制H/R心肌细胞凋亡。

lncRNA VPS9D1-AS1调节miR-331-3p/SERP1轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨lncRNAVPS9D1-AS1对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法 分析宫颈癌细胞和宫颈癌组织中lncRNAVPS9D1-AS1表达情况;将SiHa细胞分为si-NC组、si-VPS9D1-AS1组、si-VPS9D1-AS1+inhibitor-NC组、si-VPS9D1-AS1+miR-331-3p inhibitor组和control组,qRT-PCR检测转染效率;通过集落形成实验、流式细胞术、Transwell实验、宫颈癌细胞肿瘤异种移植生长等一系列功能实验研究lncRNAVPS9D1-AS1对宫颈癌的影响。采用荧光素酶报告基因法、蛋白质印迹法验证lncRNAVPS9D1-AS1与miR-331-3p、miR-331-3p与SERP1的靶向关系。结果 VPS9D1-AS1在宫颈癌组织和细胞中上调表达(P<0.05);与si-NC组比较,si-VPS9D1-AS1组SiHa细胞集落形成数、PCNA、SERP1表达、迁移与侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9表达降低,细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3表达升高(P<0.05);下调miR-331-3p可逆转VPS9D1-AS1敲低对SiHa细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-331-3p与lncRNA VPS9D1-AS1、miR-331-3p与SERP1存在靶向调控关系(P<0.05);裸鼠实验表明,体内抑制VPS9D1-AS1表达可显著降低移植瘤质量、体积、SERP1表达,升高miR-331-3p表达(P<0.05)。结论 lncRNA VPS9D1-AS1在宫颈癌组织和细胞中上调表达,敲低VPS9D1-AS1通过调节miR-331-3p/SERP1轴,抑制宫颈癌细胞的恶性进展。

miR-155对前列腺癌放射治疗的增敏作用

目的探讨miR-155在前列腺癌放射治疗(简称放疗)中的增敏作用。方法转染anti-miR-155,抑制前列腺癌DU145和PC-3细胞中miR-155水平,联合应用放射治1疗,通过观察DU145和PC-3细胞的存活率、黏附率,以及前列腺癌细胞的凋亡率,并观察Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性的变化。结果与对照组相比,DU145和PC-3细胞经放射或antimiR-155单独处理后,细胞存活率(放射组分别为25.6%±2.0%和21.6±1.0%;anti-miR-155处理组分别为20.5%±1.0%和15.5%±1.0%)和黏附率(放射组分别为0.8%±0.1%和0.7%±0.1%;anti-miR-155处理组分别为0.7%±0.1%和0.6%±0.1%)均显著降低(P<0.01);前列腺癌细胞凋亡率增高(放射组分别为3.3%±0.3%和4.2%±0.3%;anti-miR-155处理组分别为4.1%±0.1%和3.9%±0.2%);Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性均提高(P<0.01);联合组的细胞存活率(分别为10.1%±0.5%和6.1%±0.5%)和黏附率(分别为0.4%±0.1%和0.4%±0.1%)低于单独处理组(P<0.01,n=6),细胞凋亡率(分别为6.9%±0.4%和6.8%±0.3%),Caspase-3和Caspase-9表达水平和活性等均高于单独处理组(P<0.01)。结论抑制miR-155可增加人前列腺癌的放疗敏感性,提高放射线对人前列腺癌细胞的治疗效果,其机制可能与Caspase-3和Caspase-9参与细胞凋亡的途径相关。

microRNAs224和21对人胶质瘤干细胞存活的影响及相关的分子机制

目的探讨microRNAs 224和21对人胶质瘤干细胞存活的影响及相关的分子机制。方法 q PCR检测恶性胶质瘤样品、人GBM干细胞、人工建立的GBM干细胞系和人体组织中microRNAs的失调表达情况。GBM神经球干细胞系、GBM干细胞系(0822、0308和A172)、人工建立的细胞系U373及永生化人星形胶质细胞分别转染miR-21,miR-224模拟物或抑制剂,然后通过膜联蛋白Ⅴ染色及Caspase 3/7活性检测细胞凋亡,活细胞计数检测细胞生长情况。利用Target Scan生物学软件预测miR-21和miR-224的靶基因,并利用荧光素酶报告检测microRNAs对Bim基因的靶向作用。Western blot检测细胞转染miR-21或miR-224模拟物或抑制剂后对Caspase 3,Caspase 9及Bim蛋白表达的影响。结果 q PCR检测结果表明,GSC、人肿瘤组织和GBM神经球干细胞中,miR-21和miR-224显著上调表达(P<0.05)。细胞凋亡和细胞生长检测结果表明,miR-224和miR-21能调控GSC细胞凋亡和生长。靶基因预测分析Caspase 3,Caspase 9和Bim 3'-UTR序列为miR-224和miR-21潜在的靶基因,荧光素酶实验进一步证实Caspase 3,Caspase9和Bim 3'-UTR序列为miR-224和miR-21的直接靶点。进一步的实验证明,miR-224和miR-21通过直接靶向Caspases和Bim调控细胞生长和凋亡。结论上述结果表明miR-224和miR-21是GSC的凋亡抗性的重要生理驱动因子,其为胶质瘤的治疗提供了新的靶标。