MiR-92a-3p靶向KLF4促进肝细胞癌恶性进程

目的:探究微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)对肝细胞癌(HCC)的影响及其分子机制。方法:qRT-PCR检测人肝细胞癌细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B和人正常肝细胞系HL-7702中miR-92a-3p和Krüppel样因子4(KLF4)的表达。将SMMC-7721、Bel-7402细胞分组为Inhibitor NC组、miR-92a-3p Inhibitor组、mimic NC组、miR-92a-3p mimic组、mimic NC+oe-NC组、mimic NC+oe-KLF4组、miR-92a-3p mimic+oe-NC组、miR-92a-3p mimic+oe-KLF4组。qRT-PCR检测细胞中miR-92a-3p和KLF4的mRNA表达水平。Western blot检测KLF4蛋白表达水平。MTT增殖实验检测细胞活力。划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。通过TargetScan分析miR-92a-3p与KLF4的靶向关系,并通过双荧光素酶实验验证。结果:相比于正常细胞,miR-92a-3p在HCC细胞中高表达,KLF4在HCC细胞中低表达(P<0.05)。与正常表达组相比,下调miR-92a-3p显著抑制了SMMC-7721和Bel-7402细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验验证了miR-92a-3p与KLF4存在靶向结合位点。过表达KLF4能够阻碍HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制过表达miR-92a-3p对HCC细胞生长的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-92a-3p能够通过靶向下调KLF4来促进HCC细胞的增殖、迁移、侵袭。

创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与临床预后的关系

目的探讨创伤性骨折患者血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平与患者临床预后的关系。方法选择2021年8月至2022年8月收治的112例创伤性骨折患者作为创伤性骨折组,选取同期体检健康志愿者112例作为对照组。根据早期疾病预警评分(NEWS)将创伤性骨折患者分为轻中度组(n=73)和重度组(n=39);根据住院后转归情况,分为急诊手术组(n=48)、入住ICU组(n=39)、急诊死亡组(n=25)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中miR-92a-3p和miR-223-3p相对表达水平;Spearman法分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p表达水平与NEWS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析创伤性骨折患者预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-92a-3p和miR-223-3p水平对创伤性骨折患者预后的预测价值。结果与对照组比较,创伤性骨折组血清miR-92a-3p表达水平降低,血清miR-223-3p表达水平升高(P<0.05)。创伤性骨折患者轻中度组血清miR-92a-3p表达水平较重度组显著升高,血清miR-223-3p表达水平较重度组明显降低(P<0.05)。血清miR-92a-3p表达水平与NEWS评分呈负相关(r=-0.692,P<0.05),血清miR-223-3p表达水平与NEWS评分呈正相关(r=0.603,P<0.05)。急诊手术组、入住ICU组、急诊死亡组创伤性骨折患者血清miR-92a-3p表达水平依次逐渐下降(P<0.05);miR-223-3p表达水平依次明显升高(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,miR-223-3p是影响创伤性骨折患者预后的危险因素(P<0.05),miR-92a-3p是影响创伤性骨折患者预后的保护因素(P<0.05)。血清miR-92a-3p和miR-223-3p联合预测创伤性骨折患者预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.824,均优于其各自单独预测(Z二者联合-miR-92a-3P=2.519,P=0.012;Z二者联合-miR-223-3P=2.321,P=0.020)。结论创伤性骨折患者血清miR-92a-3p水平降低,血清miR-223-3p水平升高,与创伤性骨折患者预后密切相关,二者联合可以更好评估创伤性骨折患者预后情况。

血清miR-92a-3p、miR-147水平与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应的关系及对预后的评估价值

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-92a-3p、miR-147与脓毒症患者病情严重程度、炎症反应以及预后的关系,分析miR-92a-3p、miR-147预测脓毒症患者预后的价值。方法将2018年3月至2022年6月邯郸市中心医院急诊科收治的157例脓毒症患者(患者组)和107例体检健康者(对照组)纳入研究。患者组又根据脓毒症病情分为脓毒症组(66例)和脓毒症休克组(91例)。检测纳入研究者血清miR-92a-3p、miR-147以及炎症因子水平,追踪临床结局。采用Pearson相关分析miR-92a-3p、miR-147水平与序贯器官衰竭(SOFA)评分、急性生理和慢性健康状态Ⅱ(APACHEⅡ)评分和炎症因子水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响脓毒症患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-92a-3p、miR-147在脓毒症患者预后判断中的价值。结果患者组血清miR-92a-3p水平高于对照组(P<0.05),miR-147水平低于对照组(P<0.05)。脓毒症休克组血清miR-92a-3p水平高于脓毒症组(P<0.05),miR-147水平低于脓毒症组(P<0.05)。脓毒症患者血清miR-92a-3p水平与白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)水平,APACHEⅡ评分、SOFA评分均呈正相关(P<0.05),miR-147水平与上述指标均呈负相关(P<0.05)。脓毒症休克、miR-92a-3p水平升高是脓毒症患者预后不良的危险因素(P<0.05),miR-147水平升高是保护因素(P<0.05)。miR-92a-3p、miR-147联合用于预测脓毒症患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.855,高于两者单独使用(AUC分别为0.711、0.723)。结论脓毒症患者血清miR-92a-3p水平增高,miR-147水平降低,而且与病情加重、炎症反应加剧以及预后不良有关。

circRNA_MYLK靶向miR-92a-3p调控急性B淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA_MYLK(circRNA_MYLK)对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:选取四川大学华西医院收治的56例急性淋巴细胞白血病患者为研究组,同时选取45例健康志愿者为对照组。取两组骨髓样本后分离单个核细胞,并通过流式细胞仪分选B淋巴细胞;qRT-PCR法检测单个核细胞中circRNA_MYLK、微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)表达量;Pearson法分析急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p相关性。体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)和正常B淋巴细胞,并将si-NC、si-circRNA_MYLK、anti-miR-NC、anti-miR-92a-3p、miR-NC、miR-92a-3pmimic、si-circRNA_MYLK和anti-miR-NC、si-circRNA_MYLK和anti-miR-92a-3p转染至SUP-B15细胞;qRT-PCR法检测circRNA_MYLK、miR-92a-3p表达量;CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;双荧光素酶报告实验验证circRNA_MYLK与miR-92a-3p靶向作用。结果:与对照组和正常B淋巴细胞比较,研究组患者单个核细胞和人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)中circRNA_MYLK表达量升高(P<0.05),miR-92a-3p表达量降低(P<0.05)。急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA_MYLK与miR-92a-3p呈负相关(r=-0.9682)。干扰circRNA_MYLK或过表达miR-92a-3p降低SUP-B15细胞存活率和S期细胞比例(P<0.05),增加G 0/G 1期细胞比例、细胞凋亡率(P<0.05);circRNA_MYLK可靶向调节miR-92a-3p的表达;抑制miR-92a-3p表达可逆转干扰circRNA_MYLK表达对SUP-B15细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用(P<0.05)。结论:干扰circRNA_MYLK表达可诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡并抑制细胞增殖,其机制与靶向调控miR-92a-3p表达有关。

miR-92a-3p在小鼠胚胎神经管闭合中的作用及机制

目的探讨miR-92a-3p与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4)之间的相互作用,以及两者在神经管畸形(neural tube defect,NTD)中对细胞迁移的影响。方法实验动物采用C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为NTD组与对照组,每组30只,NTD组采用全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导NTD模型,于E9.5采集胚胎样本。实验所用细胞系为小鼠神经干细胞C17.2,转染NOX4过表达质粒、miR-92a-3p模拟物/抑制剂、模拟物对照/抑制剂对照。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测胚胎和C17.2细胞中miR-92a-3p表达,采用蛋白质印迹法检测NOX4的表达。通过双荧光素酶报告基因实验明确miR-92a-3p对NOX4的结合及靶向调控关系。采用细胞划痕实验与Transwell实验观察miR-92a-3p和NOX4对细胞迁移活动的影响。统计学方法采用单因素方差分析、独立样本t检验。结果NTD组胚胎miR-92a-3p表达低于对照组(0.753±0.052与1.006±0.126,t=3.212,P=0.033),NOX4蛋白表达高于对照组(0.870±0.039与0.688±0.056,t=4.621,P=0.010)。在转染NOX43’端非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)荧光素酶报告基因的C17.2细胞中,共转染miR-92a-3p模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(0.368±0.102与1.000±0.149,t=5.530,P=0.005);共转染miR-92a-3p抑制剂组的荧光素酶活性高于抑制剂对照组(1.254±0.080与1.000±0.129,t=2.899,P=0.044)。C17.2细胞转染miR-92a-3p模拟物组,NOX4的蛋白表达低于模拟物对照组(1.077±0.142与1.432±0.300,t=2.396,P=0.044);转染miR-92a-3p抑制剂组,NOX4的蛋白表达高于抑制剂对照组(1.443±0.054与1.249±0.090,t=3.709,P=0.010)。细胞划痕的实验结果表明,转染NOX4质粒后,细胞伤口愈合的速度低于对照组[(8.8±6.5)%与(44.1±6.8)%,t=6.513,P=0.003],然而当过表达NOX4的同时转染miR-92a-3p,与转染NOX4组比较,细胞伤口愈合速度加快[(37.2±11.7)%与(8.8±6.5)%,t=3.680,P=0.021]。Transwell实验发现,转染NOX4质粒后,迁移的细胞数量低于对照组[(102.7±4.5)与(133.0±11.8)个,t=4.162,P=0.014],而共转染NOX4与miR-92a-3p后,与转染NOX4组比较,发生迁移的细胞明显增多[(176.0±11.0)与(102.7±4.5)个,t=10.680,P<0.001]。结论小鼠NTD模型中,异常低表达的miR-92a-3p能够通过上调NOX4的表达,阻碍小鼠胚胎神经管闭合过程中细胞的迁移活动,最终导致NTD的发生。

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果:在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低(P<0.01);ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51,灵敏度为76.47%,特异度为94.12%,AUC为0.913,AUC 95%置信区间(CI)为(0.856,0.971)(P<0.001)。结论:AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高,可应用于早期AML的临床诊断。

miR-92a-3p对TNF-α,IL-6和DcR3的影响

目的探讨miR-92a-3p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和诱导因子3(DcR3)的影响。方法用人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)设置阴性对照组(NC)。用1μg/mL LPS分别处理THP-1细胞6 h和24 h,实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)检测TNF-α,IL-6和DcR3的表达,作为Sepsis组(NC+LPS)。利用1μg/mL的LPS处理过表达miR-92a-3p的THP-1细胞,作为过表达miR-92a-3p的Sepsis组(miR-92a-3p+LPS)。利用q-PCR,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot分别检测各组TNF-α,IL-6和DcR3的表达情况。结果q-PCR,ELISA和Western blot检测结果显示,TNF-α和IL-6在LPS组、miR-92a-3p+LPS组和NC组的相对表达量均呈下调趋势,差异有统计学意义(P<0.05),DcR3表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-92a-3p可抑制TNF-α和IL-6的释放,具有抗炎作用,但是其对DcR3的作用不显著。

miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的探讨miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13(Homeobox protein 13,HOXA13)对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及其作用机制。方法实验分组:对照组、高糖组、anti-miR-NC+高糖组、antimiR-92a-3p+高糖组、pcDNA+高糖组、pcDNA-HOXA13+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-NC+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-HOXA13+高糖组;qRT-PCR法与Western blot法分别检测miR-92a-3p、HOXA13的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-92a-3p与HOXA13的靶向关系;Western blot法检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组miR-92a-3p的表达量升高(P<0.05),HOXA13 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平升高(P<0.05);转染anti-miR-92a-3p或转染pcDNA-HOXA13后,细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平降低(P<0.05);HOXA13是miR-92a-3p的靶基因;共转染anti-miR-92a-3p和si-HOXA13可减弱anti-miR-92a-3p对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论敲低miR-92a-3p可通过靶向调控HOXA13表达抑制细胞凋亡从而减轻高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。

miR-92a-3p和miR-25-3p海绵上调Kiss1并影响雌性小鼠的青春期启动及动情周期

下丘脑Kiss1神经元产生的神经肽kisspeptin通过影响促性腺激素释放激素的分泌,参与青春期的启动、生殖系统的成熟以及排卵等过程的神经内分泌调节。Kiss1基因的表达受到包括多种反式调控因子及表观遗传的调控。预测与前期研究表明,miR-92a-3p、miR-25-3p的种子序列能够与Kiss1的3′-UTR直接结合,抑制Kiss1的表达。为进一步研究miR-92a-3p、miR-25-3p在Kiss1表达调控中的作用,本研究分别构建了对miR-92a-3p、miR-25-3p具有抑制作用的特异性吸附海绵载体:sponge-miR-92a和sponge-miR-25,以实现miRNA的功能缺失。流式细胞术和双荧光素酶报告基因系统分别证实,这2个海绵载体均能够非常有效地吸附外源性或内源性靶miRNA。sponge-miR-92a和sponge-miR-25载体被进一步包装成慢病毒LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25。实时荧光定量PCR结果显示,经LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25感染的下丘脑原代神经元细胞中,Kiss1表达水平均显著上调(P<0.05);将LV-sponge-miR-92a注射到下丘脑后,雌性小鼠阴门开启时间明显提前(P<0.05);下丘脑注射LV-sponge-miR-92a和LV-sponge-miR-25扰乱了雌性小鼠的正常动情周期。综上所述,成功构建了能够有效吸附miR-92a-3p、miR-25-3p的海绵载体,证明它们在解除miR-92a-3p、miR-25-3p对Kiss1的抑制中的作用,下丘脑注射海绵对雌性小鼠的阴门开启时间和动情周期均产生一定程度的影响,提示miR-92a-3p、miR-25-3p可能在青春期的启动和生殖成熟过程中发挥重要的作用。

miR-92a-3p靶向LATS2对宫颈癌细胞的增殖、凋亡和侵袭的影响和分子机制

目的:探讨miR-92a-3p靶向LATS2调控宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的分子机制。方法:以HeLa细胞为研究对象,分别构建抑制miR-92a-3p表达或过表达LATS2的细胞株。MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡。采用双荧光素酶报告基因法和Western blotting验证miR-92a-3p和LATS2的靶向关系。结果:与NC组和antimiR-con组比较,anti-miR-92a-3p组HeLa细胞miR-92a-3p表达显著降低(P<0.05),24 h、48 h和72 h细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞侵袭数目显著减少(P<0.05);LATS2野生型荧光素酶表达载体WT-LATS2分别与miR-92a-3p模拟物或miR-con共转染共转染HeLa细胞后,miR-92a-3p组HeLa细胞的荧光素酶活性较miR-con组显著降低(P<0.05);与miR-con组比较,miR-92a-3p组HeLa细胞LATS2蛋白表达显著降低(P<0.05);与anti-miR-con组比较,miR-92a-3p组HeLa细胞LATS2蛋白表达显著升高(P<0.05);与NC组和pcDNA-con组比较,pcDNA-LATS2组HeLa细胞LATS2蛋白表达显著升高,24 h、48 h和72 h细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞侵袭数目显著减少(P<0.05);与anti-miR-con组比较,anti-miR-92a-3p组HeLa细胞LATS2蛋白表达显著增加,24 h、48 h和72 h细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞侵袭数目显著减少(P<0.05);与anti-miR-92a-3p+si-con组比较,anti-miR-92a-3p组HeLa细胞LATS2蛋白表达显著减少,24 h、48 h和72 h细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著减少,细胞侵袭数目显著增多(P<0.05)。结论:抑制miR-92a-3p通过靶向LATS2可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,促进其凋亡。

结直肠癌患者血清miR-92a-3p表达水平及其临床意义

目的分析miR-92a-3p在体检健康者、结直肠腺瘤息肉患者以及结直肠癌（CRC）患者手术前后血清中的相对表达水平,探讨其在CRC临床诊断中的应用价值。方法用Trizol法分别对30例体检健康者、25例结直肠腺瘤息肉患者和40例CRC患者术前及术后的血清进行总RNA提取,用实时荧光定量PCR检测miR-92a-3p的相对表达水平,分析其在各组中的表达差异及其与CRC临床病理参数的关系,以受试者工作曲线确定血清miR-92a-3p的CRC诊断效能。结果 CRC术前组血清miR-92a-3p的表达水平高于结直肠腺瘤息肉组（Z=4.75,P〈0.01）、CRC术后组（Z=4.28,P〈0.01）和健康人对照组（Z=8.00,P〈0.01）;健康人对照组血清miR-92a-3p的表达水平低于CRC术后组（Z=4.08,P〈0.01）和结直肠腺瘤息肉组（Z=2.70,P=0.01）;结直肠腺瘤息肉组和CRC术后组的血清miR-92a-3p的表达水平差异无统计学意义（Z=0.99,P=0.32）;血清miR-92a-3p鉴别CRC的ROC曲线下面积（AUCROC）为0.899（95%CI：0.840-0.959）,当cut off值为2.75时,敏感性和特异性均为80%;血清miR-92a-3p的高低与CRC的浸润深度（Z=2.14,P=0.03）、淋巴结转移（Z=2.86,P=0.04）、TNM分期（Z=2.93,P〈0.01）等临床病理参数关系密切。结论血清miR-92a-3p可能为临床上CRC的筛查、病情监测等方面提供实验室依据。

玻璃酸钠上调miR-92a-3p表达保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探讨玻璃酸钠(HA)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制。方法:取人软骨细胞第3代对数生长期的细胞进行试验。部分软骨细胞分别转染miR-92a-3p抑制剂(inhibitor)、miR-92a-3p模拟物(mimics)和相应对照(inhibitor-NC、mimics-NC)至48 h后,将细胞分为Control组(用PBS处理未经转染的细胞24 h)、IL-1β组(用0.1μL10 ng/ml的IL-1β诱导未经转染的细胞24 h)、IL-1βmimics-NC组和IL-1βmiR-92a-3p mimics组(用0.1μL10 ng/ml的IL-1β分别诱导经mimics-NC、miR-92a-3pmimics转染的细胞24 h)、IL-1β+HA组(用0.1μL 10 ng/ml的IL-1β诱导未经转染的细胞24 h后,加入0.1μL 100μg/ml HA培养24 h)、IL-1β+HA inhibitor-NC组和IL-1β+HA miR-92a-3p inhibitor组(用0.1μL 10 ng/ml的IL-1β分别诱导经inhibitor-NC、miR-92a-3p inhibitor转染的细胞24 h后,分别加入0.1μL 100μg/ml HA培养24 h)。用实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-92a-3p的表达,用四甲基偶氮唑盐法(MTT)法检测细胞活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western Blot法检测基质金属蛋白酶3(MMP-3),基质金属蛋白酶13(MMP-13)、和Ⅱ型胶原纤维α1基因(COL2A1)蛋白水平的表达。结果:与Control相比,miR-92a-3p在IL-1β组中表达显著降低(P<0.01)。当转染miR-92a-3p mimics后,IL-1β诱导的软骨细胞miR-92a-3p表达升高、细胞活力增加、凋亡率降低、细胞中MMP-3及MMP-13蛋白水平降低、COL2A1蛋白水平升高(P<0.01)。HA可增加IL-1β诱导的软骨细胞中miR-92a-3p的表达、增加细胞活性、降低细胞凋亡率、降低细胞中MMP-3和MMP-13、升高COL2A1蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。结论:HA可通过增加miR-92a-3p表达抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,增加细胞活性,保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30mmol/L高糖处理48h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。

miR-92a-3p靶向EZH2对IL-1β诱导软骨细胞合成基质降解酶的影响

目的研究miR-92a-3p靶向zeste基因增强子同源物2(EZH2)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞合成基质降解酶的影响。方法分离培养人软骨细胞,分成Normal、IL-1β(IL-1β处理)、miR-NC+IL-1β(mimics control转染后IL-1β处理)、miR-92a-3p+IL-1β(miR-92a-3p mimics转染后IL-1β处理)组,RT-PCR方法测定miR-92a-3p表达变化,Western blot检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达。靶基因预测软件发现EZH2可能为miR-92a-3p的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将pCDNA3.1-EZH2和miR-92a-3p mimics共同转染到软骨细胞中,检测MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达情况。结果与Normal比较,IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达减少,MMP-13、MMP-1表达增多,COLⅡ表达减少(P<0.05)。与miR-NC+IL-1β比较,miR-92a-3p+IL-1β组细胞中miR-92a-3p表达增多,MMP-13、MMP-1表达减少,COLⅡ表达增多(P<0.05)。miR-92a-3p靶向负调控EZH2表达。pCDNA3.1-EZH2可以逆转miR-92a-3p mimics对IL-1β条件下软骨细胞中MMP-13、MMP-1、COLⅡ蛋白表达影响。结论miR-92a-3p靶向下调EZH2抑制IL-1β诱导的软骨细胞合成基质降解酶。

lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨lnc AL928768.3如何通过miR-92a-3p/解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)轴调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖和凋亡。方法:qPCR检测RA患者滑膜组织lnc AL928768.3和miR-92a-3p表达。生物信息学手段和双荧光素酶报告基因实验分析lnc AL928768.3、miR-92a-3p与ADAM10的靶向关系,Western blot分析ADAM10表达。MTT检测MH7A细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测MH7A细胞增殖和凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)表达。结果:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中呈高表达,而miR-92a-3p呈低表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验证实,lnc AL928768.3可靶向负调控miR-92a-3p表达,且ADAM10是miR-92a-3p的直接靶基因。抑制lnc AL928768.3表达或敲低ADAM10表达均可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;干扰miR-92a-3p能够逆转抑制lnc AL928768.3对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用;过表达lnc AL928768.3或干扰miR-92a-3p表达能够逆转敲低ADAM10对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用。结论:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中表达上调,抑制lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴抑制MH7A细胞增殖并促进细胞凋亡。

高低淋巴结转移潜能鼻咽癌细胞与LEC共培养后目标细胞miR-92a-3p表达及其靶基因功能分析

目的观察高低淋巴结转移潜能的鼻咽癌(NPC)细胞系5-8F(高淋巴结转移潜能)及6-10B(低淋巴结转移潜能)与淋巴管内皮细胞(LEC)共培养后各目标细胞中miR-92a-3p的表达情况,预测其靶基因并分析其功能,探讨其对NPC淋巴结转移的影响及作用机制。方法依据Transwell上下室接种细胞的不同进行分组,LEC+5-8F组Transwell上室接种LEC、下室接种5-8F细胞,LEC+6-10B组上室接种LEC、下室接种6-10B细胞,5-8F+LEC组上室接种5-8F细胞、下室接种LEC,6-10B+LEC组上室接种6-10B细胞、下室接种LEC,作为对照的LEC组、5-8F组、6-10B组分别接种LEC、5-8F细胞、6-10B细胞于6孔板中,以共培养后的Transwell上室细胞和6孔板培养的单细胞为目标细胞。各组细胞培养48 h时,采用qRT-PCR法检测各组目标细胞中miR-92a-3p。通过4个miRNA靶基因预测网站miRDB、miRTarbase、miRWalk、TargetScan预测miR-92a-3p的靶基因并取交集,使用KOBAS3.0在线网站对共同预测的靶基因进行KEGG通路分析。结果LEC+5-8F组、LEC+6-10B组、LEC组细胞中miR-92a-3p的相对表达量分别为605.00±119.00、46.30±11.40、1.01±0.16,组间相比,P均<0.05。5-8F+LEC组、5-8F组细胞中miR-92a-3p的相对表达量分别为212.00±39.40、1.00±0.08,组间相比,P<0.05。6-10B+LEC组、6-10B组细胞中miR-92a-3p的相对表达量分别为4.14±0.87、1.02±0.24,组间相比,P<0.05。有74个基因被4个miRNA靶基因预测网站共同预测为miR-92a-3p的靶基因,富集在TGFβ、PI3k/Akt、AMPK、mToR以及钙信号通路等与肿瘤转移相关的通路上。结论高低淋巴结转移潜能的NPC细胞系与LEC共培养后目标细胞中miR-92a-3p表达均升高,NPC细胞系与LEC共培养后细胞中miR-92a-3p的表达水平与淋巴结转移潜能有关,miR-92a-3p可能是NPC淋巴结转移的潜在标志物。

LncRNA TBX5-AS1靶向miR-92a-3p调控结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA T-box转录因子5反义RNA 1(LncRNA TBX5-AS1)对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌组织、癌旁组织中TBX5-AS1和miR-92a-3p的表达量。体外培养人结直肠癌细胞HCT116,分别将TBX5-AS1过表达载体(pcDNA-TBX5-AS1)及其对照空载体(pcDNA)、miR-92a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-92a-3p)及其阴性对照(anti-miR-NC)、miR-92a-3p寡核苷酸模拟物(miR-92a-3p mmics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、pcDNA-TBX5-AS1与miR-92a-3p mimics转染至HCT116细胞。MTT法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测TBX5-AS1和miR-92a-3p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中TBX5-AS1的表达量降低,miR-92a-3p的表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。转染pcDNA-TBX5-AS1或转染anti-miR-92a-3p后细胞活力降低,克隆形成数和侵袭细胞数减少,迁移距离缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。TBX5-AS1可靶向调控miR-92a-3p;转染miR-92a-3p mmics后细胞活力升高,克隆形成数和侵袭细胞数增多,迁移距离增加,差异有统计学意义(P<0.05)。共转染pcDNA-TBX5-AS1与miR-92a-3p mmics能够逆转pcDNA-TBX5-AS1对HCT116细胞生物学行为的作用。结论TBX5-AS1过表达可通过抑制miR-92a-3p的表达,减弱结直肠癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。

lncRNA PITPNA-AS1靶向miR-92a-3p/TCF21对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA PITPNA-AS1在卵巢癌中的作用及其可能的分子机制。方法采用荧光实时定量聚合酶链式反应(qPCR)技术检测卵巢癌组织和对应的癌旁组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞系中PITPNA-AS1的表达水平。将PITPNA-AS1表达最少的细胞系分为对照组和实验组,分别转染阴性对照质粒或PITPNA-AS1质粒。细胞计数实验(CCK-8)法和Transwell法检测细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学方法预测和双荧光素酶活性报告基因实验验证PITPNA-AS1作用的分子机制。qPCR和Western blot检测PITPNA-AS1相互作用的基因表达。结果PITPNA-AS1在卵巢癌组织中表达低于癌旁组织(P<0.01)。PITPNA-AS1在卵巢癌细胞系中的表达水平均低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),OVCAR-3细胞表达最少(P<0.01)。与对照组比较,过表达PITPNA-AS1能抑制OVCAR-3细胞的增殖活力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)。PITPNA-AS1与miR-92a-3p存在靶向关系(P<0.01),miR-92a-3p与转录因子21(TCF21)存在靶向关系(P<0.01)。过表达PITPNA-AS1导致OVCAR-3细胞中miR-92a-3p的表达下降(P<0.01),TCF21基因的表达增加(P<0.01)。结论PITPNA-AS1在卵巢癌组织和细胞系中低表达,PITPNA-AS1可靶向调控miR-92a-3p/TCF21抑制卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖和侵袭。

hsa-miR-92a-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的:探究hsa-miR-92a-3p在不同人类疾病中的表达差异,利用多种生物信息数据库对hsa-miR-92a-3p的靶基因及对靶基因的生物学功能进行预测分析,构建靶基因集合编码蛋白质间的相互关系网络。方法:通过使用miRDB、TargetScan、Clip-seq、miRWalk四个数据库预测hsa-miR-92a-3p的靶向调控基因,利用venny2.0取交集,最终确定hsa-miR-92a-3p的靶基因集合范围。然后通过string11.5构建所预测靶基因集合编码蛋白质间的相互关系网络图。最后通过DAVID和KOBAS3.0公共数据库对所预测的靶基因交集进行功能富集分析(GO分析)和信号转导通路富集分析(KEGG分析)。结果:筛选出192个hsa-miR-92a-3p的靶基因,PTEN、ITPR1、MAPK8、FBXW7、KAT2B、SMAD7为关键靶基因,通过GO分析及KEGG分析,发现这些靶基因显著富集于PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路、细胞衰老等信号通路中。结论:初步探索了hsa-miR-92a-3p靶基因调控网络,为进一步深入研究hsa-miR-92a-3p的分子调控机制及成为临床诊断和检测潜在的生物标志物提供理论依据。

首发精神分裂症患者外周血miR-22-3p、miR-92a-3p表达及其对预后的影响

目的:探讨首发精神分裂症患者外周血微小RNA(miR)-22-3p、miR-92a-3p表达及其对预后的影响。方法:给予65例首发精神分裂症患者(患者组)第二代抗精神病药治疗;治疗前采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测外周血单核细胞中miR-22-3p、miR-92a-3p表达,并与25名健康体检者(对照组)比较;治疗前及1年后随访时分别给予阳性和阴性症状量表(PANSS)、临床总体印象量表(CGI)、社会功能缺陷筛选量表(SDSS)评估以及病中攻击行为评定;分析患者miR-22-3p、miR-92a-3p表达与临床相关因素的关系。结果:患者组miR-22-3p、miR-92a-3p相对表达量明显高于对照组;患者组中,miR-22-3p、miR-92a-3p高表达亚组的病程、病中攻击行为比例明显高于低表达亚组(P均<0.05);miR-22-3p、miR-92a-3p高表达亚组1年后随访时PANSS、CGI、SDSS评分显著高于低表达亚组(P均<0.05);多因素Logistic回归分析显示miR-22-3p、miR-92a-3p是影响首发精神分裂症患者预后的危险因素。结论:首发精神分裂症患者外周血miR-22-3p、miR-92a-3p异常高表达,可能是影响患者病情及预后的危险因素。