miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

miR-93-5p/FOXJ2轴介导胃癌细胞的生物学功能

目的:评估miR-93-5p对胃癌细胞的调节和功能。方法:采用qPCR检测miR-93-5p在胃癌组织、胃癌细胞系中表达,MTT、克隆形成、Transwell实验检测miR-93-5p对胃癌细胞增殖、侵袭的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-93-5p与FOXJ2的靶向关系。结果:miR-93-5p在胃癌细胞系和胃癌组织中表达升高,抑制miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖和侵袭能力受抑。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-93-5p mimic显著降低MKN28和MKN45细胞Wt-FOXJ2相对荧光素酶活性,FOXJ2为胃癌细胞中miR-93-5p的直接靶基因。结论:miR-93-5p靶向FOXJ2促进胃癌细胞的增殖和侵袭,miR-93-5p/FOXJ2轴可能是判断胃癌预后的生物标志物和治疗靶点。

miR-145和miR-93对泌乳素腺瘤耐药的研究进展

泌乳素腺瘤是最常见的功能性垂体肿瘤,临床表现为高催乳素血症、肿瘤局部压迫症状、垂体卒中、多激素混合腺瘤.目前指南推荐,多巴胺激动剂(DA)是首选治疗药物,有效率为67%,但约20%的垂体泌乳素瘤会出现耐药现象.微小核糖核酸(miRNA)参与肿瘤的发生发展、侵袭以及药物抵抗等过程.近年来,miRNA在耐药溴隐亭催乳素瘤中的表达知之甚少.本文系统阐述miRNA的生物学特征、生物学功能以及CircOMA1-miR-145-5P-TPT_(1)轴和lncRNA H19-miR-93-ATG7轴在垂体腺瘤中耐药的调控网络,为基础研究及临床提供参考.

miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中HGF、GLUT4表达及GLUT4分布的影响

目的探讨miR-93-5p对胰岛素抵抗细胞模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达及GLUT4分布的影响。方法将细胞分为对照组、模型组、miR-93-5p inhibitor组、inhibitor-NC组、miR-93-5p mimics组和mimics-NC组。对照组细胞正常培养,模型组构建胰岛素抵抗细胞模型,其余组分别转染miR-93-5p inhibitor、inhibitor-NC、miR-93-5p mimics、mimics-NC,转染完成后构建胰岛素抵抗模型。CCK-8检测细胞存活率;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算葡萄糖消耗量;qPCR检测miR-93-5p、HGF、GLUT4的mRNA表达水平;Western blot检测HGF、GLUT4蛋白表达水平;免疫荧光检测GLUT4的表达和分布。结果与对照组相比,模型组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01),miR-93-5p水平显著升高(P<0.01),GLUT4膜分布减少。与模型组相比,miR-93-5p inhibitor组细胞存活率、葡萄糖消耗量、HGF、GLUT4 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),miR-93-5p水平显著降低(P<0.01),GLUT4膜分布增多;mimics组结果相反。结论miR-93-5p能够抑制胰岛素抵抗细胞模型中HGF和GLUT4的表达,并减少GLUT4的膜分布,具有促进胰岛素抵抗的功能。

miR-93-5p在骨碎补总黄酮介导的兔骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用及机制

目的:探讨miR-93-5p在骨碎补总黄酮(TFRD)介导的兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化中的作用。方法:采用成骨培养液对rBMSCs进行成骨诱导分化,通过茜素红S和油红O染色分别检测rBMSCs的成骨和成脂分化。运用荧光定量PCR(qPCR)检测miR-93-5p的表达,Western免疫印迹检测FZD6、ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法检验miR-93-5p和FZD6的结合。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,TFRD促进rBMSCs的成骨分化,抑制miR-93-5p的表达,促进FZD6和成骨相关基因ALP和Runx2的表达。双荧光素酶报告基因分析表明,FZD6是miR-93-5p的下游靶基因。过表达miR-93-5p抑制rBMSCs的成骨分化和FZD6、ALP和Runx2的蛋白表达,而过表达FZD6逆转miR-93-5p的抑制作用。使用WNT通路抑制剂(KYA1797K)处理rBMSCs,可逆转TFRD对成骨分化的促进作用,导致成骨细胞分化减少,ALP、Runx2和WNT通路相关蛋白(Dishevelled和β-catenin)表达下调。结论:TFRD通过下调miR-93-5p,促进FZD6的表达,激活WNT信号通路,促进rBMSCs成骨分化,从而有助于口腔种植体骨结合。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P<0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P<0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P<0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P<0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P<0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。

miR-93-5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-93-5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1(protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1)对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法使用LipofectamineTM2000分别将质粒inhibitor NC、miR-93-5p inhibitor、pcDNA、pc-PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA组和pc-PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT-PCR检测细胞中miR-93-5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与PKMYT1的靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1(Cyclin D1)、细胞周期素B1(Cyclin B1)的蛋白表达水平。结果与BEAS-2B细胞相比,SPC-A-1细胞、A549细胞、LTEP-α-2细胞中miR-93-5p表达水平均升高(均P<0.01),PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.001)。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.05),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-93-5p NC+3′UTR-WT组相比,miR-93-5p mimic+3′UTR-WT组细胞相对荧光素酶活性下降(P<0.001)。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc-PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低(均P<0.001),G2/M期细胞比例升高(P<0.001)。结论沉默miR-93-5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。

miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨miR-93-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用机制。方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞用于实验,将细胞分为control组、H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组。miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic组转染miR-93-5p模拟物。24 h后,除control组外,H/R组、miR-NC组、miR-93-5p mimic组建立H/R模型。2 h后采用聚合酶链式反应(PCR)法检测心肌细胞中miR-93-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果:与control组比较,H/R组miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组和miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达、心肌细胞存活率、SOD和GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-93-5p通过降低H/R心肌细胞的炎症和氧化应激水平,发挥抗细胞凋亡作用。

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p表达与Th1/Th2平衡的关系

目的 呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)下呼吸道感染患儿外周血微小RNA-93-5p表达与辅助型T细胞1/2(Th1/Th2)平衡的关系。方法 选取儿科建档就诊的RSV下呼吸道感染患儿58例为RSV组,同时选取年龄性别匹配的健康儿童60例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血清miR-93-5p水平;流式细胞仪计数Th1、Th2百分率,计算Th1/Th2表达,酶联免疫吸附法检测白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、IL-4、IL-10及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)水平,Spearman分析miR-93-5p与Th1/Th2的关系;Logistics回归分析影响RSV下呼吸道感染发生的危险因素。结果 RSV组miR-93-5p水平高于对照组(P<0.05);RSV组Th1、Th1/Th2低于对照组(P<0.05),RSV组Th2高于对照组;RSV组IL-2、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05);RSV组IL-4、IL-10水平高于对照组(P<0.05);RSV组miR-93-5p与IL-2、IFN-γ、Th1/Th2比值呈负相关性(P<0.05);与IL-4、IL-10呈正相关性(P<0.05);Logistics回归分析显示高水平miR-93-5p与低水平的Th1/Th2是影响RSV下呼吸道感染的危险因素(P<0.05)。结论 RSV下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p呈高表达,其高表达可能与Th1/Th2平衡密切相关。

利拉鲁肽上调miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤的影响

目的:探讨利拉鲁肽上调miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法:取对数期H9c2心肌细胞,分为对照组、缺氧/复氧组、利拉鲁肽组、anti-miR-93-5p组、anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组。anti-miR-93-5p组和anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组细胞转染anti-miR-93-5p 50μmol/L,24 h后,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组、利拉鲁肽组加入利拉鲁肽100μmol/L,预处理12 h。除对照组外,其余组建立缺氧/复氧模型。检测比较各组心肌细胞存活率、心肌细胞凋亡率、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性]、miR-93-5p表达、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:与对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,anti-miR-93-5p组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与利拉鲁肽组比较,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高(P<0.05);与anti-miR-93-5p组比较,anti-miR-93-5p+利拉鲁肽组心肌细胞存活率、SOD、GSH-Px活性、miR-93-5p水平、Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、MDA含量、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:利拉鲁肽可改善缺氧/复氧心肌细胞损伤,可能是通过上调miR-93-5p表达、降低细胞氧化应激水平、减少细胞凋亡发挥其心肌保护作用。

环状RNA-SCAF8通过miR-93-5p/TXNIP通路促进血管内皮细胞焦亡

目的:探究环状RNA(circRNA)-SR相关CTD相关因子8(SCAF8)在高糖环境下对血管内皮细胞焦亡发挥的作用及机制。方法:将来源于人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、高糖对照组分别置于5、33 mmol/L葡萄糖浓度的细胞培养基培养,RNA对照组、circRNA-SCAF8抑制组、微RNA(miR)-93-5p过表达组和miR-93-5p抑制组分别在高糖环境下加入无功能siRNA、circRNA-SCAF8抑制分子、miR-93-5p过表达分子和miR-93-5p抑制剂。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、流式细胞术和Hoechst 33342/碘化丙啶双荧光染色法检测细胞存活率和焦亡率,采用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、NOD样受体家族蛋白3(NLRP-3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子表达,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA-SCAF8、miR-93-5p和TXNIP的基因表达,采用荧光原位杂交法定位circRNA-SCAF8和miR-93-5p,采用双荧光素酶实验验证miR-93-5p与上下游分子的靶向调控关系。结果:与RNA对照组比较,circRNASCAF8抑制组和miR-93-5p过表达组细胞存活率升高(均P<0.01),细胞焦亡率降低(均P<0.01),TXNIP、NLRP-3、caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子的表达量显著减少(均P<0.05);抑制circRNA-SCAF8后miR-93-5p的表达量显著增加(P<0.01),过表达miR-93-5p后circRNA-SCAF8的表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。miR-93-5p通过与circRNA-SCAF8的3'UTR区结合下调circRNA-SCAF8表达,miR-93-5p通过与TXNIP的3'UTR区结合下调TXNIP表达。circRNA-SCAF8和miR-93-5p均位于细胞质中,在细胞中高度关联。qRT-PCR结果显示,过表达或抑制miR-93-5p后,TXNIP的相对表达量较RNA对照组分别增加或减少(均P<0.05),证明miR-93-5p可调控TXNIP基因表达。结论:circRNASCAF8/miR-93-5p/TXNIP通路可能参与调控高糖环境下血管内皮细胞焦亡。

miR-93表达与甲状腺腺瘤手术应激胰岛素抵抗患者的关联性

目的探讨miR-93表达与甲状腺腺瘤(TA)手术应激胰岛素抵抗(EIR)患者的关联性。方法采用氧化酶法检测32例TA合并EIR(实验组)患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FBG)和空腹血清胰岛素(FINS),用qRT-PCR检测miR-93表达水平,并与32例单纯TA组(对照组)和30例健康体检者(健康组)进行比较。结果实验组TC、TG、FBG、FINS和miR-93水平分别为(6.4±0.6)mmol/L、(2.4±1.0)mmol/L、(6.3±0.5)mmol/L、(36.2±12.6)MIU/L和1.83±0.61;对照组分别为(6.3±0.6)mmol/L、(1.9±1.0)mmol/L、(6.0±0.5)mmol/L、(20.5±10.3)MIU/L和2.95±0.49;健康组分别为(5.1±0.7)mmol/L、(1.4±0.7)mmol/L、(5.1±0.6)mmol/L、(17.7±9.1)MIU/L和3.44±0.42。实验组和对照组患者治疗前miR-93表达水平分别为1.82±0.62和2.93±0.49,实验组TG、FBG和FINS水平高于对照组(P<0.01)和健康组(P<0.01),实验组miR-93水平低于对照组(P<0.01)和健康组(P<0.01);2组患者治疗前后miR-93表达水平差异无统计学意义(P>0.05),miR-93表达水平与TC、TG、FBG和FINS呈负相关。结论 miR-93在TA患者呈低表达,在EIR患者也呈低表达,miR-93表达水平与TC、TG、FBG和FINS呈负相关;miR-93作为保护性因素而不是致病因素参与TA手术EIR的发生和发展。

miR-93通过靶定PTEN基因增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性

微小RNA(miRNA)参与了肿瘤的耐药过程.本研究通过建立对奥沙利铂(oxaliplatin,Oxa)耐药的肝癌细胞系BEL-7402/Oxa和Hep-3B/Oxa,利用miRNA芯片结合实时荧光定量PCR的方法,筛选得到数个参与肝癌细胞对奥沙利铂耐药的miRNA分子,其中miR-93表达增加最为明显.MTT实验发现,增加肝癌细胞株中miR-93的表达可以增强其对奥沙利铂的耐药性.进一步结合生物信息学、荧光报告载体及免疫印迹实验,证实miR-93通过靶定抑癌基因PTEN增加肝癌细胞对奥沙利铂的耐药性.总之,肝癌耐药细胞系的建立及其miRNA差异表达谱的分析,以及miRNA分子对肝癌细胞发生奥沙利铂耐药的具体作用及其分子机制的研究,不仅有助于理解肝癌细胞发生耐药的分子机制,而且为探索克服肝癌对奥沙利铂耐药性的有效途径提供可靠依据.

Hsa-miR-93在肝癌中的作用机制研究

目的观察hsa-miR-93对肝癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在肝癌中的作用机制。方法用real time RT-PCR法分析hsa-miR-93在人肝癌和癌旁肝组织的表达情况。此后构建hsa-miR-93过表达载体,同时合成二甲氧修饰的hsa-miR-93的反义核苷酸序列,二者转染肝癌细胞株观察它们对肝癌细胞生长及细胞周期的影响,分别以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。转染后CCK-8法检测肝癌细胞生长情况,通过流式细胞仪分析细胞周期。结果hsa-miR-93在肝癌组织中表达明显高于癌旁肝组织。hsa-miR-93过表达载体可以促进肝癌细胞生长,促进细胞周期的G1/S期转换,而hsa-miR-93反义序列抑制肝癌细胞生长,使肝癌细胞阻滞于G1期(P<0.05)。结论hsa-miR-93通过促进细胞周期的G1/S期转换而促进肝癌细胞生长,提示hsa-miR-93可能是肝癌的发病机制中一个重要分子。

直肠癌组织中miR-93表达水平与血管生成参数及磁共振血流灌注参数的相关性

目的:观察直肠癌组织中miR-93表达水平与直肠癌组织血管生成参数及动态增强磁共振血流灌注(DCE-MR)参数的相关性,为miR-93在直肠癌血管生成中的评价意义及价值提供研究基础。方法:随机选取2018年04月至2019年04月经术后病理确诊为直肠癌的患者32例,所有患者术前均行直肠DCE-MR检测,对肿瘤横断面兴趣区进行K^(trans)、K^(ep)、V_(e)和iAUC的定量测量,术后病理以Western blot检测血管内皮细胞生长因子(vasular endothelial growth factor,VEGF)表达,以免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD),以qRT-PCR检测miR-93在直肠癌组织及配对癌旁直肠组织中的表达,以Pearson rank相关性检验观察miR-93表达水平与直肠癌直径、直肠癌组织血管生成参数(VEGF及MVD)、磁共振成像非形态学表征(ADC及TIC分型)及直肠MRI血流灌注参数(K^(trans)、K^(ep)、V_(e)及iAUC)的相关性。结果:miR-93在直肠结论:miR-93表达水平与直肠肿瘤组织中血管生成参数及磁共振血流灌注参数具有相关性,可能用来对直肠癌血管生成进行评估,并作为直肠癌生物学行为的预测参数。

老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系

目的探讨老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系。方法收集老年胃癌患者160例和同期老年健康体检者160例分别作为胃癌组和对照组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定血清miR-93-5p水平。结果胃癌组血清miR-93-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同TNM分期、局部浸润深度、淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异有统计学意义(P<0.05),TNM分期高、局部浸润深度深、有淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平明显高于TNM分期低、局部浸润深度浅、无淋巴结转移者。血清miR-93-5p诊断胃癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.871,95%CI为0.868~0.874,根据此截断值判断胃癌的灵敏度为71.25%,特异度为96.25%。血清miR-93-5p高表达组5年总生存率(51.09%)和无病生存率(39.13%)均明显低于低表达组(79.41%、70.59%,χ^2=13.477、15.516,P<0.001)。Cox比例风险模型结果显示:血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸润深度、分化程度、淋巴结转移为胃癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-93-5p水平升高,且与临床分期、浸润深度、淋巴结转移关系密切,在胃癌诊断和预后评估中具有重要价值。

miR-93-5p 靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组(转染anti-miR-93-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CCNG2组(转染pcDNA-CCNG2)、anti-miR-93-5p+si-con组(共转染anti-miR-93-5p和si-con)、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组(共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2),均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低(P<0.05);抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。

胆管癌患者miR-93的表达水平及其临床意义

目的探讨miR-93在胆管细胞癌(cholangiocarcinoma,CC)中的表达及其临床意义。方法选取我院60例外科行手术的胆管癌患者癌旁组织及癌组织标本以及细胞培养实验检测HIBEC、RBE、HUCCT1等miR-93表达水平;统计胆管癌临床特征与miR-93的表达水平的相关性;分析胆管癌患者miR-93的表达水平与预后的关系。结果胆管癌细胞株RBE、HUCCT1中miR-93相对表达量显著高于正常细胞株HIBE(P<0.05)。胆管癌患者癌组织中的miR-93相对表达量与癌旁组织相比,显著高于癌旁组织中的表达量(P<0.05)。在miR-93在癌组织表达与临床特征关系中发现,分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期均与胆管癌组织中miR-93表达水平有相关性(P<0.05);影响患者预后的独立危险因素为miR-93高表达、TNM分期Ⅲ期及有淋巴结转移等,差异有统计学意义(P均<0.05)。miR-91表达未上升胆管癌患者随访3生存率明显高于miR-91高表达患者(P<0.05)。结论在胆管癌患者中miR-93存在高水平表达,而且胆管癌的发展、发生及预后都可能与其关系密切。

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的探讨微小miRNA-93-3p(miR-93-3p)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti-miR-NC组、anti-miR-93-3p组、HG+miR-NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-93-3p的表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-caspase-3)、磷酸化-磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化-蛋白激酶B(p-AKT)表达量。结果与NC组相比,HG组miR-93-3p的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),C-caspase-3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-93-3p组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05);与HG+miR-NC组相比,HG+miR-93-3p组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),C-caspase-3、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。结论miR-93-3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。