吉马酮调控miR-9a-5p/PTEN表达对脂多糖致心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响

目的探讨吉马酮调控miR-9a-5p/第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)轴对脂多糖(LPS)致心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡的影响。方法实验分为空白组(正常培养的心肌细胞),模型组(10 mg·L^-1的LPS处理心肌细胞6 h),低、中、高3个剂量实验组(50,100和200μmol·L^-1吉马酮处理模型组细胞),A组(转染miRNA模拟物阴性对照后,进行LPS处理),B组(转染miR-9a-5p模拟物后,进行LPS处理),C组(转染miRNA抑制物阴性对照后,进行LPS和200μmol·L^-1吉马酮处理),D组(转染miR-9a-5p抑制物后,进行LPS和200μmol·L^-1吉马酮处理)。用试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)含量,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印记法分别检测miR-9a-5p和PTEN mRNA水平和蛋白表达。用双荧光素酶报告基因实验和Western Blotting验证miR-9a-5p和PTEN的靶向调控关系。结果空白组、模型组、高剂量实验组、A组、B组、C组和D组的心肌细胞MDA含量分别为(9.87±0.98),(33.48±3.41),(13.48±1.64),(34.87±3.49),(15.69±1.58),(12.69±1.27)和(29.87±2.88)μmol·g^-1,细胞凋亡率分别为(6.54±0.63)%,(25.36±2.51)%,(9.74±1.01)%,(25.14±2.55)%,(12.36±1.31)%,(10.98±1.06)%和(19.64±1.83)%,miR-9a-5p分别为1.01±0.09,0.32±0.03,0.82±0.08,0.38±0.04,0.86±0.07,2.38±0.24和1.43±0.14,PTEN蛋白分别为0.38±0.04,0.87±0.06,0.51±0.04,0.82±0.07,0.51±0.05,0.45±0.05和0.74±0.06。模型组与空白对照组比较,或高剂量实验组与模型组比较,或A组与B组比较,或C组和D组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。PTEN是miR-9a-5p的靶基因,miR-9a-5p负性调控PTEN表达。结论吉马酮可抑制LPS所诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,其机制与调控miR-9a-5p/PTEN通路表达有关。

rno-miR-9a-5p靶向Egln3调控嗜铬细胞瘤凋亡机制

[目的]探讨嗜铬细胞瘤抵抗细胞凋亡的潜在机制。[方法]顺铂处理或不处理嗜铬细胞瘤细胞PC-12后,通过蛋白质组学检测两者蛋白表达差异。通过siRNA敲低上述差异基因,检测嗜铬细胞瘤细胞PC-12的凋亡水平。[结果]顺铂处理后,BIM和Egln3蛋白表达量增高,Egln3的mRNA水平显著上升(P<0.05)。过表达Egln3后,BIM的表达显著上升。敲低Egln3后,BIM的表达显著下降。Egln3能够降低BIM的泛素化水平。敲低BIM和Egln3后嗜铬细胞瘤的凋亡水平显著上升(P<0.05)。过表达BIM和Egln3后,嗜铬细胞瘤的凋亡水平显著下降(P<0.05)。过表达rno-miR-9a-5p后,Egln3的表达水平下降。敲低rno-miR-9a-5p后,Egln3的表达水平上升。过表达rno-miR-9a-5p后,嗜铬细胞瘤凋亡水平上升(P<0.05);敲低rno-miR-9a-5p后,嗜铬细胞瘤凋亡水平下降(P<0.05)。[结论]rno-miR-9a-5p通过靶向Egln3及Egln3的mRNA,降低了Egln3的蛋白表达,抑制了蛋白酶体途径对促凋亡蛋白BIM的降解,随后增强了嗜铬细胞瘤细胞PC-12的凋亡水平。

微RNA-9a-5p通过调控FOXO1表达对H2O2致神经细胞损伤的保护作用

目的探讨微RNA(miR)-9a-5p在H2O2致神经细胞损伤中的作用及其可能机制。方法以PC12细胞为研究对象,CCK-8法和流式细胞仪检测H2O2处理对细胞增殖、凋亡的影响,同时检测H2O2处理对细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的影响,分析miR-9a-5p过表达和叉头框蛋白O1(FOXO1)抑制表达对H2O2致PC12细胞损伤的作用,双荧光素酶报告基因实验验证miR-9a-5p是否靶向作用于FOXO1,分析共表达miR-9a-5p和FOXO1对H2O2致PC12细胞损伤的影响。结果H2O2处理PC12细胞,明显降低细胞存活率和细胞中miR-9a-5p的表达,诱导细胞凋亡率和LDH释放量增加,并促进细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达;miR-9a-5p过表达和FOXO1抑制表达均可逆转H2O2对PC12细胞的损伤;miR-9a-5p过表达抑制PC12细胞中FOXO1的表达,而miR-9a-5p抑制后促进细胞中FOXO1的表达,双荧光素酶报告基因实验证实FOXO1是miR-9a-5p的负调控靶基因;过表达FOXO1可逆转miR-9a-5p过表达对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用。结论miR-9a-5p可能通过靶向抑制FOXO1的表达,对H2O2致神经细胞损伤发挥保护作用。