miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

lncRNA MIR17HG调节miR-214-3p/RNF38信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,检测lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达。体外培养HepG2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702细胞,并比较lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达,选择Bel-7402细胞继续研究,随机分为sh-NC组、sh-MIR17HG组、anti-NC组、anti-miR-214-3p组和Bel-7402组。探究各组Bel-7402细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,蛋白质印迹法分析RNF38、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白表达,双荧光素酶验证lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38的关系。结果肝癌组织中lncRNA MIR17HG、RNF38的mRNA表达较高,miR-214-3p的mRNA表达较低,RNF38的蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。细胞SMMC-7721、HepG2、Bel-7402中lncRNA MIR17HG mRNA、RNF38 mRNA和RNF38蛋白表达高于HL-7702细胞,miR-214-3p mRNA表达低于HL-7702细胞(P<0.05)。与Bel-7402组、sh-NC组比较,sh-MIR17HG组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达减少,凋亡率和caspase-3表达增加(P<0.05);与sh-MIR17HG组、anti-NC组比较,anti-miR-214-3p组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达增加,凋亡率和caspase-3表达减少(P<0.05)。lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38分别存在靶向关系。miR-214-3p+WT-MIR17HG组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-MIR17HG组(P<0.05),miR-214-3p+WT-RNF38组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-RNF38组(P<0.05)。结论lncRNA MIR17HG可能通过调控miR-214-3p/RNF38轴促进肝癌细胞的恶性生物学行为。

CircRNA-Tbpl1海绵吸附miR-214-3p调控自噬在低氧性肺动脉高压血管重塑中的作用及其机制

目的 探讨CircRNA-Tbpl1通过海绵吸附miR-214-3p调控自噬在低氧性肺动脉高压(HPH)血管重塑中的作用,并分析其机制。方法 12只8周龄C57BL/6雄性小鼠根据随机数字表法分为两组:对照组和HPH组,每组6只,通过低氧构建HPH模型小鼠,观察两组小鼠血流动力学差异,HE染色检测肺组织病理学改变,蛋白免疫印迹(Western blot)检测选择性自噬接头蛋白(p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和重组人自噬效应蛋白(Beclin-1)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CircRNA-Tbpl1和miR-214-3p表达水平。分离小鼠原代肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)并进行高、低氧分组培养,低氧处理PASMCs,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活性,Western blot检测自噬相关蛋白表达,qRT-PCR检测CircRNA-Tbpl1的相对表达水平。通过转染和自噬诱导剂雷帕霉素干预,分析CircRNA-Tbpl1与PASMCs自噬的相关性。通过共转染shCircRNA-Tbpl1和miR-214-3p抑制物,分析CircRNA-Tbpl1/miR-214-3p对低氧诱导的PASMCs自噬和细胞增殖活性的影响。结果 与对照组小鼠比较,HPH组小鼠的右心室收缩压(RVSP)[(39.50±3.69)mmHg比(21.00±3.42)mmHg,P<0.01]、右心室肥厚指数(RVHI)[(0.43±0.05)比(0.24±0.03),P<0.01]显著增加,且HPH组小鼠肺血管出现明显的中膜肥大和外膜增生,肺血管重塑。同时,HPH组小鼠的肺组织中LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平显著上调,p62表达下调,CircRNA-Tbpl1水平[(2.99±0.28)比(1.00±0.15),P<0.01]升高,miR-214-3p水平[(0.49±0.28)比(1.00±0.11),P<0.01]降低。与高氧组比较,低氧组PASMCs细胞增殖活力[(152.02±7.81)%比(100.00±2.08)%,P<0.05]增加,LC3Ⅱ和Beclin-1表达水平上调,p62表达下调,CircRNA-Tbpl1水平[(2.84±0.34)比(1.00±0.12),P<0.01]升高,而miR-214-3P水平[(0.52±0.07)比(1.00±0.15),P<0.01]降低。此外还发现,下调CircRNA-Tbpl1可抑制低氧诱导的PASMCs自噬,减弱细胞增殖活性[(70.23±7.30)%比(100.00±4.56)%,P<0.05]。双荧光素酶报告基因检测结果显示,CircRNA-Tbpl1海绵吸附miR-214-3p。与sh-NC组比较,sh-CircRNA-Tbpl1组的自噬水平减弱,细胞增殖活力降低[(71.13±8.17)%比(100.00±5.32)%,P<0.05]。与sh-CircRNA-Tbpl1+miRNA-NC组比较,sh-CircRNA-Tbpl1+miR-214-3p抑制物组的自噬水平升高,细胞增殖活力增强[(85.78±5.37)%比(69.80±6.34)%,P<0.05]。结论CircRNA-Tbpl1可能通过海绵吸附miR-214-3p抑制低氧诱导的自噬,从而缓解HPH血管重塑。

奥美拉唑抑制miR-214-3p介导自噬提高上皮性卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨奥美拉唑(omeprazole, OME)能否通过抑制自噬提高人卵巢上皮性癌(卵巢癌,EOC)细胞对顺铂的敏感性及其可能机制。方法 原位杂交及免疫组化检测卵巢癌组织中miR-214-3p及自噬标记物p62表达;Pearson相关分析探讨R-214-3p和p62在EOC组织中表达量的相关性;CCK-8法检测各组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50);实时定量PCR(qRT-PCR)分析miR-214-3p及多药耐药基因-1(MDR1)表达;蛋白质印迹法检测p62及耐药蛋白p-gp表达。结果 在43例卵巢癌患者的样本中,23例(53.5%)miR-214-3p表达阳性,26例(60.5%)p62表达阳性,miR-214-3p在铂相对耐药EOC中表达低于铂敏感EOC(P<0.05);相反,p62在铂相对耐药EOC中表达明显高于铂敏感EOC(P<0.01)。miR-214-3p和p62在卵巢癌中表达呈负相关(r=-0.387,P=0.005);OME(150μmol/L)预处理后,OV2008及C13K细胞对顺铂IC50均有不同程度降低,尤以顺铂耐药株C13K更为显著(P<0.01)。与空白对照组C13K及OV2008细胞比较,顺铂作用后,C13K及OV2008细胞中miR-214-3p相对表达下降,MDR1基因在mRNA及蛋白水平表达均升高,p62蛋白表达升高(均P<0.01);相反,OME(150μmol/L)预处理可使C13K及OV2008细胞对顺铂敏感性增加,细胞中miR-214-3p相对表达明显升高、MDR1在蛋白及mRNA水平表达降低、p62蛋白表达下降(均P<0.05)。结论 OME预处理可提高卵巢癌细胞对顺铂敏感性,其机制与抑制miR-214-3p介导的自噬有关。

miR-214-3p调控PI3K/AKT通路对软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨miR-214-3p对IL-1β诱导的软骨细胞自噬和凋亡的影响及其可能的机制。方法采用10 ng/mL的IL-1β诱导大鼠关节软骨细胞24 h,构建骨关节炎(osteoarthritis,OA)细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、miR-NC组、miR-214-3p mimics组、740Y-P(PI3K/AKT通路激活剂)+miR-214-3p mimics组和LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)+miR-214-3p mimics组。通过CCK8检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡、透射电镜观察细胞中的自噬小体、Western blot检测凋亡(Bcl-2、Bax)、自噬(LC3II、Beclin-1)和PI3K/AKT通路(AKT、p-AKT)相关蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率升高(P<0.01),自噬小体明显减少,细胞中Bcl-2、LC3II和Beclin-1蛋白表达水平降低(P<0.01),Bax和p-AKT/AKT水平升高(P<0.01);与miR-NC组相比,miR-214-3p mimics组细胞活力升高(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01),自噬小体明显增多,细胞中Bcl-2、LC3II和Beclin-1蛋白表达水平升高(P<0.01),Bax和p-AKT/AKT水平降低(P<0.01);与miR-214-3p mimics单独作用相比,联合740Y-P能够逆转miR-214-3p mimics的上述作用,而联合LY294002能够进一步加重miR-214-3p mimics的上述作用。结论miR-214-3p能够促进OA细胞增殖和自噬,并抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路的激活有关。

红花苷联合miR-214对肺癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:探讨红花苷联合miR-214对肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR检测miR-214在人正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549和H1299中的表达。miR-214 mimic(miR-214)及阴性对照(miR-NC)转染A549和H1299细胞。A549和H1299细胞分为对照组、红花苷组、miR-214组和红花苷+miR-214组。红花苷组细胞使用80μmoL/L红花苷处理细胞,miR-214组细胞采用miR-214转染细胞,红花苷+miR-214组细胞进行红花苷和miR-214共处理,对照组细胞不作处理。CCK-8、EdU、流式细胞术分别检测细胞活力、增殖、细胞周期和凋亡。Western blot检测蛋白表达,动物实验评价红花苷联合miR-214在体内对肺癌肿瘤增殖的影响。结果:与BEAS-2B细胞相比,miR-214在A549和H1299细胞中的表达明显减少。与miR-NC相比,miR-214转染的A549和H1299细胞中miR-214表达增加。与对照组相比,红花苷组和miR-214组细胞活力、EdU阳性细胞数和S期细胞数显著减少,G0/G1期细胞数和凋亡细胞数明显增多;与红花苷组和miR-214组相比,红花苷+miR-214组细胞活力、EdU阳性细胞数和S期细胞数进一步减少,而G0/G1期细胞数和凋亡细胞数更多。与对照组相比,红花苷组和miR-214组细胞中Akt和PI3K磷酸化水平及Bcl-2、Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显减少,Bax和cl-Caspase-3表达则显著增加。红花苷+miR-214组细胞中Akt和PI3K磷酸化水平及Bcl-2、Cyclin D1和CDK4蛋白表达较红花苷组和miR-214组更少,而Bax和cl-Caspase-3的蛋白表达则更多。动物实验结果显示,与对照组相比,红花苷组和miR-214组小鼠肿瘤体积和重量明显减小,红花苷+miR-214组小鼠肿瘤体积和重量较红花苷组和miR-214组更小。结论:红花苷联合miR-214可在体内外抑制肺癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能是通过失活PI3K/Akt信号通路实现的。

仙茅苷调节lncRNA KCNQ1OT1/miR-214-5p轴对骨质疏松大鼠骨代谢的影响王勤俭张攀张睿昕李泊泊

目的探讨仙茅苷调节长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)/miR-214-5p轴对骨质疏松大鼠骨代谢的改善作用。方法SD大鼠分为对照组、模型组、仙茅苷组、pcDNA组、pcDNA-KCNQ1OT1组、仙茅苷+sh-NC组、仙茅苷+sh-KCNQ1OT1组。ELISA法检测血清中骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大位移、最大载荷;Micro-CT检测骨微结构变化;HE染色检测股骨病理变化;qRT-PCR检测股骨中lncRNA KCNQ1OT1、miR-214-5p表达;验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-214-5p的关系。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,OCN、ALP水平、股骨最大位移、最大载荷、骨密度、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积分数及lncRNA KCNQ1OT1表达降低,TNF-α、IL-6水平、miR-214-5p表达升高(P<0.05);与模型组比较,仙茅苷组骨小梁排列间隙变小,OCN、ALP水平、股骨最大位移、最大载荷、骨密度、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积分数及lncRNA KCNQ1OT1表达升高,TNF-α、IL-6水平、miR-214-5p表达降低(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-KCNQ1OT1组股骨组织病理损伤有所缓解,OCN、ALP水平、股骨最大位移、最大载荷、骨密度、骨小梁厚度、骨小梁数量、骨体积分数及lncRNA KCNQ1OT1表达升高,TNF-α、IL-6水平、miR-214-5p表达降低(P<0.05);sh-KCNQ1OT1逆转了仙茅苷对骨质疏松症大鼠炎症反应及骨生物力学性能的改善作用以及成骨促进作用;lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-214-5p。结论仙茅苷可能通过调控lncRNA KCNQ1OT1/miR-214-5p轴改善骨质疏松症大鼠骨代谢。

miR-214在动物生殖生理调控中的功能和机制

微小核糖核酸(miRNA)是一类非编码核糖核酸(RNA),在生物体的各种生理过程中发挥重要的调控作用。微小核糖核酸214(miR-214)作为一种重要的miRNA,在动物生殖生理调控过程中具有广泛的应用和研究价值。本文对miR-214的结构,及其对生殖细胞分化、生长和凋亡的调控作用,对机体和组织器官生长发育的调控作用以及对生殖系统疾病的调控作用等方面进行了综述,并对其未来的研究进行了展望,以期为进一步探索和研究miR-214在生殖生物学中的作用及应用提供理论依据。

尿液外泌体miR-214表达在透明细胞肾细胞癌诊断和预后评估中的价值

目的探讨尿液外泌体miR-214表达在透明细胞肾细胞癌(ccRCC)诊断和预后评估中的价值。方法选取2021年2月-2022年2月临汾市中心医院接受手术治疗的ccRCC患者124例(ccRCC组)和肾脏良性疾病(肾炎、肾结石、肾囊肿等)患者124例(对照组)。收集所有患者的临床资料,并检测术前晨尿中段尿外泌体miR-214相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价尿液外泌体miR-214诊断ccRCC的效能。采用Kaplan-Meier生存曲线评估ccRCC患者的生存情况。采用Cox回归分析评估ccRCC患者总生存率的影响因素。结果ccRCC组尿液外泌体miR-214相对表达量显著低于对照组(P<0.001)。尿液外泌体miR-214诊断ccRCC的曲线下面积(AUC)为0.86,最佳临界值为0.65,敏感性为86.7%,特异性为82.2%。不同TNM分期、Fuhrman分级和有无淋巴转移、远隔转移的ccRCC患者之间尿液外泌体miR-214相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-214低表达组总生存率显著低于miR-214高表达组(P<0.001)。尿液外泌体miR-214相对表达量≤0.65、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、Fuhrman分级Ⅲ~Ⅳ级、有淋巴转移、有远隔转移是ccRCC患者总生存率降低的独立危险因素[风险比(HR)值分别为1.96、1.55、1.80、1.52、1.24,95%可信区间(CI)分别为1.07~2.83、1.03~2.38、1.06~3.07、1.13~2.68、1.09~2.18,P<0.05]。结论ccRCC患者尿液外泌体miR-214呈低表达,且与肿瘤发生、发展和转移密切相关,可作为ccRCC的诊断标志物和预后评估指标。

circRNA001263-miR-214信号轴调控鼻咽癌干细胞信号通路的机制研究

目的分析circRNA001263-miR-214信号轴调控鼻咽癌干细胞信号通路的机制,为探讨鼻咽癌新的治疗靶点提供参考。方法比较25例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织的circRNA001263-miR-214信号轴miR-214、circRNA001263 mRNA表达量,以及表皮生长因子(EGF)、WNT、Sonic hedgehog(SHH)、骨形态发生蛋白(BMP)蛋白水平。体外建立鼻咽癌干细胞模型,分析circRNA001263、miR-214表达对鼻咽癌干细胞凋亡及相关蛋白的影响。结果鼻咽癌组织miR-214、circRNA001263 mRNA及EGF、WNT、SHH、BMP蛋白的表达均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。circRNA001263 mimics组、circRNA001263 NC组、circRNA001263 inhibitor组的circRNA001263 mRNA、miR-214mRNA相对表达量及鼻咽癌干细胞EGF、WNT、SHH、BMP蛋白呈下降趋势,鼻咽癌干细胞凋亡率呈升高趋势;miR-214mimics组、miR-214NC组、miR-214inhibitor组的circRNA001263 mRNA、miR-214mRNA相对表达量及鼻咽癌干细胞EGF、WNT、SHH、BMP蛋白水平呈下降趋势,鼻咽癌干细胞凋亡率呈升高趋势;差异均有统计学意义(P<0.05)。靶基因预测发现,circRNA001263和miR-214之间存在互补配对的碱基。结论鼻咽癌干细胞通过circRNA001263和miR-214信号通路调控EGF、WNT、SHH、BMP蛋白促进凋亡。

IS患者血清lncRNA PVT1、miR-214水平与继发性癫痫的相关性分析

目的 探讨缺血性脑卒中(IS)患者血清长链非编码RNA变异性浆细胞瘤异位1 (lncRNA PVT1)、微小RNA-214 (miR-214)水平与继发性癫痫的相关性。方法 选取2018年6月至2021年6月眉山心脑血管病医院神内八科收治的280例IS患者作为研究对象,根据患者1年内是否发生继发性癫痫,分为单纯IS组(212例)和继发性癫痫组(68例),根据癫痫的严重程度分为轻度癫痫组(19例),中度癫痫组(33例),重度癫痫组(16例)。另选取同时期来眉山心脏血管病医院神经八科体检的150例健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定所有受试者血清lncRNA PVT1、miR-214水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平;经Pearson法分析lncRNA PVT1与miR-214的相关性,及两者与IL-1 β、IL-6、TNF-α的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响IS患者是否发生继发性癫痫的有关因素。结果 与对照组比较,单纯IS组和继发性癫痫组患者血清lncRNAPVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05);与单纯IS组比较,继发性癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05)。与轻度癫痫组比较,中度癫痫组和重度癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P<0.05);与中度癫痫组比较,重度癫痫组患者血清lncRNA PVT1水平明显升高,血清miR-214水平明显降低(P <0.05)。继发性癫痫组患者血清lncRNA PVT1与IL-1 β、IL-6、TNF-α均呈正相关(P <0.05),血清miR-214与IL-1 β、IL-6、TNF-α均呈负相关(P <0.05),血清lncRNA PVT1与miR-214水平也呈负相关(P <0.05)。多因素Logistic回归分析表明,IL-1 β、IL-6、TNF-α、lncRNA PVT1及miR-214均与IS患者继发性癫痫的发生有关(P <0.05)。结论lncRNA PVT1水平升高及miR-124水平降低与IS患者继发性癫痫的发生有关,可作为评估IS患者发生继发性癫痫的血清标志物。

miR-214-3p在骨质疏松大鼠弓状核表达变化中的初步研究

目的研究miR-214-3p在骨质疏松大鼠弓状核的表达,初步揭示其在骨质疏松发生发展中的作用。方法将4月龄雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组6只,实验组行切除卵巢手术,对照组行假手术,常规饲养8周。应用苏木精-伊红染色法和骨形态计量学检测大鼠胫骨干骺端骨密度;生物信息学分析弓状核miR-214-3p作用的靶基因;荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠弓状核阿黑皮素原mRNA表达水平以及弓状核、血清miR-214-3p表达水平;免疫组织化学染色法测定大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原表达强度。结果与对照组比较,实验组大鼠胫骨干骺端骨小梁数量、骨小梁厚度和骨小梁面积百分比均明显减小(均P<0.01),骨小梁分离度明显升高(P<0.01);实验组弓状核miR-214-3p表达水平升高(P<0.05),同时血清miR-214-3p表达水平明显升高(P<0.01);生物信息学分析显示miR-214-3p与阿黑皮素原具有良好的靶向关系;与对照组相比较,实验组弓状核阿黑皮素原mRNA的表达水平降低(P<0.05),弓状核阿黑皮素原蛋白表达强度明显降低(P<0.01)。结论骨质疏松大鼠弓状核miR-214-3p表达水平升高,可通过其自身或调控阿黑皮素原影响骨质疏松的发生发展。

虎杖苷对ApoE^(-/-)小鼠肝脏miR-214表达水平及肝功能的影响

目的研究虎杖苷(PD)对Apo E-/-小鼠肝脏mi R-214及肝功能的影响。方法采用高脂饲料喂养雄性Apo E-/-小鼠,建立小鼠AS模型。将Apo E-/-小鼠随机分为4组(n=10),即模型组(Model)、辛伐他汀组(Simvastatin)、PD低剂量组(PDL)、PD高剂量组(PDH),另设10只同龄C57BL/6J小鼠为正常对照组。连续给药12周后取血,检测小鼠血糖、血脂、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肝脏T-SOD及MDA等指标,HE染色观察肝组织病理切片,实时荧光定量PCR检测mi R-214水平。结果模型组小鼠血糖和血清中TC、TG、LDL-C、ALT和AST,以及肝脏中MDA较正常对照组显著增高(P<0.01),血清中HDL-C和肝脏中TSOD、mi R-214则显著降低(P<0.01),肝切片可见细胞内充满大小不一脂滴,大部分肝细胞呈现脂肪变性;与模型组相比,PD高剂量组能显著降低小鼠空腹血糖、血清TC、TG、LDL-C、AST、ALT以及肝脏中的MDA(P<0.05),并且能够显著升高血清HDLC和肝脏mi R-214及T-SOD(P<0.05);PD高、低剂量组小鼠肝细胞脂肪变性与模型组相比均有所减轻。结论 PD能降低AS小鼠血糖、血脂,并保护肝功能,其机制可能主要与PD升高肝脏mi R-214水平,调节T-SOD与MDA等氧化应激指标有关。

miR-214与MIR31HG在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中微小RNA(miR)-214及MIR31HG的表达及其临床意义。方法回顾性分析2016年2月-2017年2月于中国医科大学附属盛京医院胸外科行手术治疗的NSCLC患者104例,应用荧光实时定量PCR检测NSCLC癌组织和癌旁组织中miR-214与MIR31HG的表达,分析组间miR-214与MIR31HG的表达差异及其与临床病理特征之间的关系,采用ROC曲线分析miR-214与MIR31HG对NSCLC的预测价值。结果 NSCLC癌组织与癌旁组织的miR-214相对表达量分别为(0.37±0.08)、(1.15±0.09),MIR31HG的相对表达量分别为(8.15±1.15)、(1.33±0.31)两者具有统计学意义(t/P=64.877/0.000,58.230/0.000)。癌组织中miR-214及MIR31HG表达与肿瘤分期、组织学分级有关(tmiR-214=12.462、13.834,P=0.000、0.000;tMIR31HG=11.573、12.278,P=0.000、0.000),而与患者病理类型、肿瘤直径及是否存在淋巴结转移无关(P>0.05)。癌组织中miR-214与MIR31HG表达呈负相关(r=-0.618,P=0.000)。miR-214预测NSCLC的敏感度为0.823,特异度为0.772;MIR31HG预测NSCLC的敏感度为0.807,特异度为0.854。结论 NSCLC癌组织中miR-214表达降低,MIR31HG表达升高,二者可能与NSCLC的发生发展有关,有希望成为预测NSCLC发生、发展的肿瘤标志物。

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。

miR-214通过MAPK信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响

目的:探讨miR-214通过MAPK信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响。方法:体外培养构建放射抵抗性的肺癌H358细胞株(H358-RR); q PCR实验检测H35和H358-RR细胞中miR-214的表达水平,q PCR检测miR-214-mimic在H358-RR中的转染效率及miR-214的表达情况; Western blot检测miR-214-mimic对ERK1、jnk和p38MAPK蛋白表达水平的影响;免疫荧光检测γ-H2AX聚集点的情况及对放射的敏感性; CCK-8实验检测H358-RR细胞株接受放射后活性的变化;单细胞凝胶电泳检测放射线照射后不同组肺癌细胞DNA损伤情况。结果:成功构建H358-RR放射抵抗细胞株,q PCR检测H358-RR细胞中miR-214的表达水平高于H358细胞,q PCR检测miR-214-mimic的转染效率良好,可以有效增加miR-214的表达水平,Western blot检测转染miR-214-mimic后ERK1、jnk和p38MAPK的表达水平相应升高;过表达miR-214之后,免疫荧光检测γ-H2AX聚集点的表达明显较少,DNA损伤较少;过表达miR-214后,H358-RR细胞接受放射后细胞活力降低水平减少;过表达miR-214后H358-RR抵抗放射线及对DNA损伤修复的能力增强。结论:miR-214通过影响MAPK信号通路调控非小细胞肺癌的DNA损伤及修复能力,影响其对放疗的敏感性。

miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义。方法选择21例行肾上腺皮质肿瘤手术患者的术后切除组织,其中肾上腺皮质腺瘤组织8份,其瘤旁正常组织8份,肾上腺皮质癌组织5份;另选人肾上腺皮质癌SW-13细胞系(SW-13细胞系)和裸鼠皮下移植瘤组织6份。采用RT-PCR技术检测各组织中的miR-214表达。结果与肾上腺皮质腺瘤组织和瘤旁正常组织比较,肾上腺皮质癌组织、SW-13细胞系、裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达明显降低(P均<0.01);与肾上腺皮质癌组织和SW-13细胞系比较,裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达降低(P<0.05)。结论 miR-214表达下调可能参与肾上腺皮质癌的发生、发展,深入探讨其功能和作用机制有重要意义。

miR-214对PTEN蛋白的影响及其在胃癌细胞中的生物学行为

目的探讨miR-214通过上调PTEN蛋白影响胃癌细胞的生物学行为的方式及其分子机制。方法q PCR检测不同胃癌细胞株中miR-214的表达水平和胃癌组织中miR-214和PTEN的表达水平;双荧光素酶实验检测miR-214和PTEN蛋白间的相互关系;MTT增殖实验检测miR-214及PTEN对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-214及PTEN对胃癌细胞侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹检测miR-214对PTEN蛋白表达情况的影响。结果胃癌组织中miR-214表达水平高于癌旁组织,PTEN表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。MGC-803细胞株中miR-214表达水平高于MGC-823、SGC-7901(P<0.05)。抑制miR-214的表达后,PTEN蛋白活性相应上调(P<0.05)。miR-214-siRNA组MGC-802细胞株的细胞增殖能力较对照组弱,穿膜细胞数少于对照组(P<0.05)。miR-214-siRNA+PTEN-mimic组MGC-802细胞株细胞增殖率低于miR-214-siRNA组,穿膜细胞数少于miR-214-siRNA组(P<0.05)。结论 miR-214和PTEN蛋白共同作用参与胃癌细胞的生物学行为的调控,miR-214通过上调PTEN蛋白影响胃癌细胞的增殖和侵袭行为。

MiR-214靶向线粒体相关凋亡诱导因子2对T细胞淋巴母细胞性淋巴瘤Jurkat细胞增殖、凋亡和侵袭的调控作用

目的:本文旨在探索miR-214对T细胞淋巴母细胞性淋巴瘤(T-LBL)Jurkat细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制。方法:Jurkat细胞分为4组:Jurkat(对照组);miR-214 inhibitor组;sh-AIFM2组;miR-214 inhibitor+sh-AIFM2组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-214和线粒体相关凋亡诱导因子2(AIFM2)的表达;荧光素酶分析验证miR-214与AIFM2的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭。结果:在Jurkat细胞中,miR-214负向调控AIFM2表达。MiR-214可直接靶向AIFM2。与对照组相比,miR-214 inhibitor组细胞增殖下降,细胞凋亡增加;sh-AIFM2组细胞增殖上升,细胞凋亡降低(P<0. 05)。而且,sh-AIFM2会减弱miR-214 inhibitor对细胞增殖的抑制和对细胞凋亡的诱导(P<0. 05)。另外,miR-214 inhibitor可降低细胞侵袭;sh-AIFM2会增强细胞侵袭(P <0. 05)。Sh-AIFM2会抑制miR-214inhibitor导致的细胞侵袭的下降(P<0. 05)。结论:MiR-214可通过靶向AIFM2促进Jurkat细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡。

急性心肌梗死患者血清循环miR-214水平及其与冠状动脉病变范围的关系

目的:了解急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者血清中循环mi R-214表达水平及其与冠状动脉病变范围的关系。方法:收集2011年9月至2012年1月在中南大学湘雅医院心内科住院的AMI患者45例(AMI组),并选择同时期在中南大学湘雅医院体检中心体检的20例健康人员为对照组。AMI组按冠状动脉病变的范围又分为单支、双支和三支病变组(n=20,13,12)。提取各组人员入院时血清中总RNA,并行荧光定量PCR检测循环mi R-214表达水平,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测患者空腹血浆中胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)分泌水平。比较不同冠状动脉病变支数组间循环mi R-214和PLGF水平,并分析上述指标与AMI病变范围的相关性。结果:AMI各亚组血清中循环mi R-214水平低于对照组,且病变范围越广下降水平越明显,各组间对比差异均有统计学意义(均P<0.05);AMI各亚组血浆中PLGF表达水平高于对照组,且随病变范围增大表达水平升高越明显,各组间对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。AMI组血清中循环mi R-214水平与血浆中PLGF水平呈负相关(r=-0.588,P<0.01)。结论:AMI组循环mi R-214水平显著降低,且它与AMI的病变范围存在相关性。循环mi R-214有可能作为AMI早期诊断和预后的生物学标志物。