进展期非小细胞肺癌血清miR125b、巨噬细胞抑制因子1表达变化与抗PD-1/PD-L1单抗治疗疗效的关系

目的 分析进展期非小细胞肺癌(NSCLC)血清miR125b、巨噬细胞抑制因子1(MIC-1)表达变化与抗程序性细胞死亡受体1(PD-1)/程序性细胞死亡配体1(PD-L1)单抗治疗疗效的关系。方法 选择南通市第一人民医院2017年1月至2019年1月收治的进展期NSCLC患者96例(NSCLC组)、肺部良性疾病患者100例(良性组)以及同期健康体检者100例(对照组),检测血清miR125b、MIC-1表达水平。NSCLC患者均接受抗PD-1/PD-L1单抗治疗,采用COX多因素回归分析影响抗PD-1/PD-L1单抗治疗进展期NSCLC患者生存时间的危险因素。结果 治疗前3组血清miR125b、MIC-1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),血清miR125b、MIC-1表达水平NSCLC组高于良性组和对照组,良性组高于对照组;治疗前后NSCLC组血清miR125b、MIC-1表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后1、3、6个月明显低于治疗前,且治疗后1、3、6个月呈逐渐下降趋势(P<0.05);血清miR125b、MIC-1表达水平与NSCLC患者病理分期、分化程度有关(P<0.05);有效组治疗前血清miR125b、MIC-1表达水平低于无效组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,血清miR125b高表达组和MIC-1高表达组患者生存率均明显低于miR125b低表达组和MIC-1低表达组患者(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,肿瘤分期、分化程度、治疗疗效以及miR125b、MIC-1表达水平是影响抗PD-1/PD-L1单抗治疗进展期NSCLC患者生存时间的独立危险因素。结论血清miR125b、MIC-1表达水平与进展期NSCLC患者病理分期、分化程度以及抗PD-1/PD-L1单抗治疗疗效有关,miR125b、MIC-1高表达患者生存率降低,检测血清miR125b、MIC-1表达水平有助于预测患者预后。

微小RNA125b-5p在氧化应激损伤中的作用实验研究

目的:利用体外神经元模型,探讨miR125b-5p对氧化应激的影响。方法:建立过氧化氢(H 2 O 2)诱导神经元细胞氧化应激模型,将miR125b-5p的类似物(mimics)转染至HT22细胞实现其过表达。造体外氧化应激模型,采用MTT(噻唑蓝)法检测细胞活力,实时定量PCR(qPCR)检测miR125b-5p表达水平及抗氧化酶HO-1、Mn SOD的基因表达水平。分析微小RNA125b-5p对氧化应激损伤的影响。结果:在体外氧化应激模型中miR125b-5p表达量明显下降;转染miR125b-5p的类似物(miR125b-5p mimics)后,和阴性对照(NC)相比,miR125b-5p在HT22细胞中过表达显著增加;MTT结果显示,miR125b-5p mimics组与对照组相比细胞存活率明显增加;qPCR结果显示,与NC组相比,miR125b-5p过表达可上调抗氧化酶HO-1和Mn SOD mRNA表达水平,发挥抗氧化作用。结论:miR125b-5p在H2O2刺激的神经元细胞中明显下调,miR125b-5p过表达可显著提高神经元细胞存活率。miR125b-5p抗过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的作用机制可能与提高抗氧化酶HO-1、Mn SOD mRNA的表达相关。

microRNA-125b在孕期酒精暴露所致新生小鼠脑神经元凋亡中的作用

目的探讨microRNA-125b(miR125b)调控孕期酒精暴露致胚胎神经元细胞凋亡的可能机制。方法给予孕期小鼠持续连续酒精暴露[50%酒精,5μL/(g·d)],对照组予以0.9%NaCl暴露;检测出生小鼠脑/体重比;Tunnel法检测新生小鼠脑组织中神经元细胞凋亡情况;利用定量PCR检测miR125b、p53、凋亡基因Bax mRNA表达水平,利用Western blot检测p53及Bax蛋白表达;体外情况下给予鼠PC-12细胞酒精暴露,然后进行miR125b mimic转染以上调miR125b表达;再次检测miR125b、p53及Bax表达水平。结果与对照组相比,酒精暴露组小鼠出生脑/体重比显著降低(P<0.05),脑组织中神经元细胞凋亡增加。酒精暴露组新生小鼠脑组织中miR125b表达明显降低,而p53及Bax在mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05);PC-12细胞转染miR125b-mimic使其过表达后,miR125b表达显著升高,与酒精暴露组相比p53及Bax表达明显下降(P<0.05)。结论miR125b通过影响p53通路进而参与影响孕期酒精暴露致小鼠脑神经元凋亡。

强心汤保护心血管内皮治疗慢性心力衰竭的作用机制

目的探讨强心汤调控miR⁃125b⁃5p、抑制核因子κB(NF⁃κB)介导的炎性因子的表达以保护心血管内皮祖细胞,治疗慢性心力衰竭(CHF)的作用机制。方法42只SPF级SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、强心汤低剂量组(7.45 g/kg)、强心汤中剂量组(14.90 g/kg)、强心汤高剂量组(29.80 g/kg)、沙库巴曲缬沙坦组(10.42 mg/kg),每组7只。除对照组外,其他各组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支方法建立CHF模型。造模后第2天分别给予相应药物灌胃,连续给药28 d。采用心脏彩超检测各组大鼠心功能指标[左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVEDs)、左室射血分数(LVEF)]。HE染色观察大鼠左心室心肌组织病理学变化。Masson染色观察各组大鼠心脏心肌纤维化情况。荧光原位杂交(FISH)检测大鼠左心室心肌组织miR⁃125b⁃5p在内皮祖细胞的表达情况。蛋白质印迹法检测大鼠左心室心肌组织脑源性神经营养因子(BDNF)、NF⁃κB p65、磷酸化NF⁃κB p65(p⁃NF⁃κB p65)蛋白表达。酶联免疫吸附测定法检测炎性因子肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素(IL)⁃1β和IL⁃6的含量。结果与对照组比较,模型组大鼠LVEDd、LVEDs升高,LVEF降低;心肌组织病理损伤严重,组织结构异常改变,横纹肌模糊,心肌细胞排列紊乱且部分变性坏死;心肌组织呈蓝色的胶原纤维、黏液沉积增多;左心室心肌组织miR⁃125b⁃5p平均光密度明显升高;左心室心肌组织BDNF蛋白表达减少,p⁃NF⁃κB p65/NF⁃κB p65值增加;TNF⁃α、IL⁃1β和IL⁃6含量明显增加(P<0.05)。与模型组比较,强心汤中、高剂量组和沙库巴曲缬沙坦组大鼠LVEDd、LVEDs均降低,LVEF均升高;左心室心肌组织的病理损伤改善明显,横纹肌清晰,心肌细胞排列整齐有序,细胞坏死减少;心肌组织呈蓝色的胶原纤维、黏液沉积减少,心肌纤维化情况明显减少;左心室心肌组织miR⁃125b⁃5p平均光密度明显降低;左心室心肌组织BDNF蛋白表达增加,p⁃NF⁃κB p65/NF⁃κB p65值降低;TNF⁃α、IL⁃1β和IL⁃6含量明显降低(P<0.05)。结论强心汤能够降低miR⁃125b⁃5p表达,抑制NF⁃κB通路的激活,降低促炎因子TNF⁃α、IL⁃1β和IL⁃6的表达,减轻心肌炎性反应、病理损伤及减少心肌纤维化,最终保护心血管内皮,改善心功能,从而治疗CHF。