miR126功能的多效性与先天性免疫

MicroRNAs(miRNAs)是一种重要的转录后水平进行调控的非编码小分子RNA。目前已发现许多miRNAs参与细胞增殖、分化、发育及凋亡等复杂的生物进程,其中miR126是一种来源于Egfl7第7个内含子的保守型内含子miRNA,主要在哺乳动物的内皮细胞(Endothelial cells,ECs)及浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cells,pDCs)内表达,参与血管的新生及癌细胞的增殖与迁移。最新的研究表明,miR126是迄今唯一参与先天性免疫平稳期病毒应答反应的miRNA,预示着miR126有可能成为治疗癌症及免疫缺陷病的靶标分子。文章综述了miR126在血管新生和癌症中的功能,并着重介绍了miR126与先天性免疫的关系。

miR126在成人急性髓系白血病患者骨髓中的表达

目的探讨miR126在成人急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达及与临床变量的相关性。方法应用实时定量PCR方法检测47例AML患者及9名正常人骨髓中miR126的相对表达水平,分析其与患者性别、年龄、血象、亚型分类和基因型的关系。结果 AML患者骨髓中miR126相对表达水平较正常对照组增高,但差异无统计学意义(P>0.05);miR126在M3型AML患者中表达水平明显低于非M3型(P<0.05);正常基因型与异常基因型间miR126表达无统计学差异(P>0.05);伴有(t15;17)或PML/RaRa阳性的AML患者miR126表达水平低于其他基因型AML患者(P<0.05);本研究中AML患者miR126表达水平与初诊时骨髓原始细胞百分数呈负相关(r=-0.352,P=0.018),与初诊时外周血白细胞数、年龄、性别均无相关性。结论miR126在M3型AML患者中表达低于非M3型,伴有(t15;17)或PML/RaRa阳性的AML患者miR126表达水平较其他核型表达水平低,提示miR126可用于区分AML亚型。

miR126抑制食管鳞癌血管内皮生长因子表达的实验研究

目的:探讨miR126与血管内皮生长因子在食管鳞癌中的表达及关系,以及其对食管鳞癌细胞系的影响。方法:随机选取2011年3月至2011年4月间手术治疗的食管鳞癌患者手术标本4例,,取癌组织及癌旁正常黏膜。提取肿瘤及正常癌旁组织microRNA,逆转录后用实时定量PCR的方法检测miR126的表达情况;提取标本中的mRNA和蛋白用实时定量PCR和Westernblot的方法检测VEGF的表达;培养TE-1细胞系并转染miR126模拟体,检测miR126对TE-1细胞增殖和VEGF表达的影响。结果:与正常组织相比,miR126在癌组织的表达明显降低;在RNA和蛋白水平,VEGF水平均明显升高;转染miR126模拟体的细胞BrdU掺入量较转染阴性对照的细胞明显增多,VEGF在RNA和蛋白水平上均明显降低。结论:在食管鳞癌组织中miR126水平下调,VEGF表达增高;miR126可抑制TE-1细胞的增殖,其抑制细胞增殖的作用可能是通过下调VEGF的表达而实现的。

维生素C预处理对脓毒症小鼠肺组织miR126a-5p、miR155-5p表达的影响

目的:观察维生素C(vitamin C,Vit C)干预后脓毒症小鼠肺组织炎症表达情况及miR126a-5p和miR155-5p含量的变化,分析Vit C对脓毒症急性肺损伤的潜在保护机制。方法:选择4~6周雄性小鼠18只随机分为假手术组(对照组、CON组)、脓毒症+NS组(SEP组)、脓毒症组+Vit C干预组(SEP+IR组),予Vit C 1000 mg/kg术前连续3 d尾静脉进行注射,采用盲肠穿刺结扎制作模型,术后12 h检测肺组织的湿重/干重(W/D);用HE染色的方法观察肺脏病理形态,测量肺泡的直径;用RT-qPCR检测miR126a-5p、miR155-5p的变化,Western blotting检测Caspase 1及Caspase-3的蛋白表达量,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果:与CON组相比,SEP组中肺的W/D增加,肺泡孔径明显减小;SEP组中的miR126a-5p和miR155-5p以及蛋白Caspase 1和Caspase 3表达量升高;同时可进一步促进炎症因子IL-6和TNF-α增加(P<0.05)。与SEP组相比,SEP+IR肺组织的W/D减低,肺泡孔径增大,miR126a-5p和miR155-5p以及蛋白Caspase 1和Caspase 3表达量降低,同时可进一步抑制炎症因子IL-6和TNF-α的增加(P<0.05)。结论:Vit C具有减轻肺水肿和稳定肺泡体积的作用,可能与miR126a-5p和miR155-5p诱导的Caspase 1、Caspase 3表达降低有关。

急性脑梗死患者阿司匹林抵抗与血小板miR126的相关性

目的探讨急性脑梗死患者阿司匹林抵抗(AR)与血小板miR126的相关性。方法选择51例急性脑血栓形成患者作为病例组,60例无脑梗、心梗的健康人作为对照组。通过血小板聚集实验区分AR和非阿司匹林抵抗(NAR),采用RT-PCR检测血小板miR126水平。结果病例组血小板miR126水平低于对照组(P<0.05);对照组中AR的miR126水平明显高于NAR(P<0.05)。结论急性脑梗死患者血小板miR126水平低于健康人,但与AR无相关性;血小板miR126水平降低在一定程度上提示急性脑梗死的发生。

miR-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响及机制

目的 观察微小RNA(miR)-126对七氟烷麻醉致老龄大鼠认知功能障碍的影响,并探讨相关作用机制。方法 采用随机数字表法将60只大鼠分成对照(Control组)、七氟烷麻醉(Model)组、miR-126激动剂对照(agonist NC)组和miR-126激动剂(agonist)组,每组15只。采用3%七氟烷麻醉4 h建立麻醉造模,agonist NC和agonist组大鼠于麻醉前1 d经侧脑室注射miR-126 agonist或agonist NC进行干预。术后2 d进行Morris水迷宫验测试大鼠认知功能;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理学变化;Tunel染色观察海马组织细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测海马组织中miR-126表达水平;Western印迹检测海马组织中磷脂酰肌醇3激酶[PI3K(p110α亚基)]、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)、AKT、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解凋亡蛋白酶(Cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。结果 与Control组比较,Model组逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间明显缩短,穿越平台次数明显减少,海马组织损伤明显严重,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显升高,miR-126表达水平明显降低,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显降低,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显升高(P均<0.05);与Model组比较,agonist组逃避潜伏期明显明显缩短,原平台象限停留时间明显延长,穿越平台次数明显增加,海马组织损伤明显改善,海马组织细胞凋亡率、IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显下降,miR-126表达水平明显增加,PI3K(p110α亚基)、p-AKT、Bcl-2蛋白表达量明显上升,Bax和Cleaved-casapse-3蛋白表达量明显下降(P均<0.05),而agonist NC组以上各指标无显著性变化(P>0.05)。结论 miR-126通过激活PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡及炎症反应,改善七氟烷诱导的老龄大鼠认知功能障碍。

基于miR-126/ADAM9信号通路探讨五脏温阳化瘀汤抗大鼠动脉粥样硬化的作用机制

目的基于微小RNA-126(miR-126)/解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)信号通路研究五脏温阳化瘀汤抗大鼠动脉粥样硬化的作用。方法取SPF级SD雄性大鼠38只,随机选择6只大鼠设为空白组,剩余32只大鼠通过腹腔注射维生素D 3注射液联合高脂饲料喂养方法制备动脉粥样硬化模型。造模6周后将造模成功的大鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组及五脏温阳化瘀方低、中、高剂量组,每组6只。空白组和模型组给予生理盐水灌胃,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀钙片27.3 mg/(kg·d)灌胃,五脏温阳化瘀方低、中、高剂量组分别给予五脏温阳化瘀汤1.25 g/(kg·d)、2.5 g/(kg·d)、5 g/(kg·d)灌胃,均1次/d,连续灌胃12周。灌胃结束后,采用ELISA法检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,HE染色观察主动脉病理形态,qRT-PCR法检测主动脉组织中miR126及ADAM9 mRNA表达情况,Western blot法检测主动脉组织中ADAM9蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β水平和主动脉组织中ADAM9 mRNA及蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),血清HDL-C水平和主动脉组织中miR-126相对表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,各药物组大鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β水平和主动脉组织中ADAM9 mRNA及蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),血清HDL-C水平和主动脉组织中miR-126相对表达量均明显升高(P均<0.05);与五脏温阳化瘀方低、中剂量组比较,阿托伐他汀组与五脏温阳化瘀方高剂量组大鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β水平和主动脉组织中ADAM9 mRNA及蛋白相对表达量均更低(P均<0.05),血清HDL-C水平和主动脉组织中miR-126相对表达量均更高(P均<0.05),五脏温阳化瘀方高剂量组与阿托伐他汀组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。模型组大鼠主动脉血管内皮缺损、内膜增厚,大量泡沫细胞聚集和炎细胞浸润;各药物组大鼠主动脉病理改变较模型组轻,泡沫细胞及炎性细胞浸润少。结论五脏温阳化瘀方可以通过激活miR-126/ADAM9信号通路,降低炎症因子水平,减轻动脉粥样硬化大鼠炎症反应,从而发挥抗动脉粥样硬化作用。

2型糖尿病患者miR⁃375、miR⁃126表达水平及与胰岛素抵抗关系

目的探究2型糖尿病(T2DM)患者微小RNA⁃375(miR⁃375)、miR⁃126表达水平及其与胰岛素抵抗的关系。方法选择2019年1月至2019年12月新乡医学院第一附属医院收治的80例T2DM患者,根据空腹血糖(FPG)及口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果分为T2DM前期组32例、T2DM组48例,另选择血糖、血脂正常的40例健康人为对照组,检测各组miR⁃375、miR⁃126、空腹血糖(FPG)、空腹血胰岛素(FIns)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA⁃IR),分析miR⁃375、miR⁃126水平与HOMA⁃IR的关系。结果FPG、餐后2h血糖(2hPG)、HOMA⁃IR、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)、FIns及miR⁃375表达水平:对照组<T2DM前期组<T2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)水平:对照组>T2DM前期组>T2DM组,差异有统计学意义(P<0.05)。T2DM前期组、T2DM组miR126表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但T2DM前期组、T2DM组miR126表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM患者miR⁃375表达与FPG、2hPG、FIns、HOMA⁃IR呈正相关(r=0.461,0.523,0.506,0.624,P<0.05),miR126表达与FPG、2hPG、FIns、HOMA⁃IR呈负相关(r=-0.349,-0.457,-0.423,-0.439,P<0.05)。miR⁃375表达上调、miR126表达下调是影响T2DM患者HOMA⁃IR的危险因素(P<0.05)。结论T2DM患者血浆miR⁃375表达上调、miR⁃126表达下调,且表达水平与胰岛素抵抗密切相关。

GLP-1受体激动剂联合阿卡波糖治疗T2DM临床效果及其影响

目的探究胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂联合阿卡波糖治疗肥胖2型糖尿病的临床效果及其对糖脂代谢、炎性因子、miR126水平的影响。方法回顾性分析2015年6月至2016年12月间在常规治疗基础上应用阿卡波糖治疗的患者49例（对照组），以及应用阿卡波糖联合GLP-1受体激动剂治疗的患者49例（观察组）的临床资料。结果治疗后，观察组的临床总有效率为91．84％，显著高于对照组的7347％（P〈0．05）；两组患者的空腹血糖、餐后血糖、BMI水平及总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平均低于治疗前，且观察组水平显著低于对照组（P〈0．05）；两组患者的高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平及miR126水平均高于治疗前，且观察组水平显著高于对照组（P〈0．05）；两组患者的血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达水平均低于治疗前（P〈001），且观察组表达水平显著低于对照组（P〈0.01）。结论GLP-1受体激动剂联合阿卡波糖可有效调节肥胖T2DM患者的血糖及血脂水平，能显著下调血清炎症因子，促进miR126的表达，并有效提高临床疗效。

LncRNA HOTAIR/miR-126在喉癌中的表达及相关性

目的探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中长链非编码RNA(LncRNAs)HOX基因座转录反义RNA(HOTAIR)和微小核糖核酸(miR)-126的表达及相关性。方法选取46例LSCC患者的喉癌组织及癌旁正常组织,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-126和LncRNA HOTAIR表达,分析与肿瘤分化程度的相关性。结果与癌旁正常组织相比,喉癌组织中miR-126表达水平显著降低(P<0.01);生物信息学预测LncRNA HOTAIR的作用靶点是miR-126;喉癌组织中LncRNA HOTAIR表达水平显著升高(P<0.05),且随肿瘤分化程度而增加。结论LncRNA HOTAIR靶向miR-126参与介导LSCC的发生和肿瘤细胞分化。

黄芩苷通过miR-126-5p调节WEE1对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨黄芩苷通过微小核糖核酸(miR)-126-5p调节WEE1对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法细胞计数试剂(CCK)-8法测定0、10、50、100、150、200μmol/L黄芩苷对体外培养的人食管癌细胞(EC109)增殖率的影响,筛选黄芩苷合适作用浓度。体外培养EC109,分为对照组、黄芩苷低、高剂量组、阴性对照组、黄芩苷高剂量+miR-126-5p inhibitor组,分组处理细胞后,以5-乙炔-2′-脱氧尿苷(EdU)染色、CCK-8法检测EC109细胞增殖;以Hoechst33258染色检测EC109细胞凋亡率;以免疫荧光染色检测EC109 B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)/Bcl-2;检测细胞迁移与侵袭;以免疫印迹实验检测各组EC109细胞WEE1、增殖蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮间质转化标志蛋白N-钙黏蛋白(cadherin)及E-cadherin表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组EC109细胞miR-126-5p、WEE1 mRNA表达。结果与对照组比较,低、高剂量黄芩苷可明显降低EC109细胞增殖、迁移、侵袭能力和PCNA、N-cadherin蛋白表达及WEE1表达,明显升高细胞凋亡率、Bax/Bcl-2、miR-126-5p及E-cadherin蛋白表达(P<0.05);miR-126-5p inhibitor可减弱高剂量黄芩苷对EC109恶性行为的影响(P<0.05)。结论黄芩苷通过上调miR-126-5p而降低WEE1的表达,进而抑制食管癌细胞增殖、迁移侵袭,促使其凋亡。