miR-144/451的体外红系发生示踪揭示LINC01569的潜在红系发生调控影响

目的用已构建的miR-144-GFP-H1人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)示踪细胞株,以GFP荧光信号报告miR-144表达描述红系发生的进展程度,探究在红系发生过程中lncRNA的潜在功能并初步验证其功能影响。方法利用已构建的miR-144/451-GFP-H1细胞株(下文简称144-H1)进行体外红细胞诱导培养。以CD71,GPA表面分子描述进入红系发生阶段的细胞亚群。以miR-144的GFP报告基因为关键区分,对GFP阳性(高红系发生倾向)和阴性细胞群(低红系发生倾向)分别进行转录组测序,获取差异性表达的lncRNA。选取具备验证价值的lncRNA条目进行初步功能验证。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术设计对应lncRNA的功能干扰方案并获取对应lncRNA功能敲除的144-H1细胞株。使用该敲除细胞株与非敲除的144-H1细胞株进行红细胞的平行诱导培养,寻找差异节点,初步验证其对在体外发育模型下对红系发生的影响效应。结果1)构建的144-H1细胞株能够在进入体外红细胞诱导阶段后表达GFP荧光蛋白,提示miR-144的启动。2)在CD71,GPA双阳群中,GFP阳性亚群和GFP阴性亚群存在显著的lncRNA表达差异。3)对多个lncRNA条目设计了能够有效干扰其功能的序列区段删除基因编辑方案。验证编辑成功。在敲除细胞株中,lncRNA的一部分序列被直接删除。4)在红细胞诱导培养的平行验证试验中,LINC01569的功能敲除株对比非敲除株表现出明显的流式亚群差异和细胞增殖能力差异:①敲除株的GFP荧光持续高表达;②敲除株CD71-GPA双阳群在红细胞成熟过中比例持续降低;③敲除株未观察到显著的血红蛋白表达,无明显红色;④敲除株细胞增殖能力远低于非敲除株(P<0.05)。结论成功利用144-H1细胞株对lncRNA在红系发育中的潜在功能进行了探究,可设计更精密的体外发育实验来提高lncRNA功能的抓取精度。在差异性表达的lncRNA条目中,LINC01569经初步验证,对红系发生过程存在调控作用。LINC01569的功能缺失严重影响红细胞的正常分化与增殖。LINC01569在红系发生过程中的具体调控机制有待进一步探索与研究。

miR142-5p、miR144-3p在甲状腺乳头状癌中的功能研究

目的:研究miR142-5p、miR144-3p在甲状腺乳头状癌中表达情况及其功能。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测60例不同TNM分期的甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的miR142-5p、miR144-3p表达水平;流式细胞术检测miR142-5p、miR144-3p对甲状腺乳头状癌细胞(B-CPAP细胞)凋亡的影响。结果:甲状腺乳头状癌组织中miR142-5p和miR144-3p的表达水平低于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01),随着TNM分期增加两者表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);流式细胞术检测结果显示miR142-5p及miR144-3p实验组凋亡率分别为(19.11±5.80)%、(12.72±1.13)%,对照组的凋亡率为(7.22±0.71)%,空载组凋亡率为(4.29±0.61)%,实验组细胞凋亡率高于对照组及空载组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:miR142-5p、miR144-3p在甲状腺乳头状癌细胞内表达低于癌旁细胞内表达,表达水平随肿瘤分期增加而降低,其可能在甲状腺乳头状癌的发生发展中起到抑癌作用。

巨噬细胞内microRNA与结核分枝杆菌相互作用的研究进展

结核分枝杆菌(MTB)为结核病的病原菌,感染机体后主要寄生于巨噬细胞内。MiRNA是一类内源性非编码小分子RNA,在转录水平上负向调控基因的表达。miRNA在MTB感染机体后部分可稳定存在于巨噬细胞内,miR-125a,miR-144,miR-146a,miR-155等表现出明显的上调或下调的变化。本文就巨噬细胞内miRNA与MTB相互作用的研究进展作一综述。