伊立替康调控SNHG1/miR-195的表达抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制研究

目的研究伊立替康对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法以16 ml/L、32 ml/L、64 ml/L浓度的伊立替康处理肝癌细胞HepG2,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达,qPCR检测SNHG1和miR-195表达。构建抑制SNHG1表达的HepG2细胞,或构建过表达SNHG1的细胞并进行32 ml/L伊立替康处理,观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。StarBase软件预测出miR-195是SNHG1的靶基因,双荧光素酶报告实验进一步验证。细胞HepG2中转染anti-miR-195并使用32 ml/L伊立替康处理,检测细胞增殖、迁移和侵袭。结果不同浓度伊立替康明显降低HepG2细胞活性,并呈剂量和时间依赖性。32 ml/L伊立替康显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数、Cyclin D1蛋白、MMP-2蛋白、SNHG1表达量,明显提高P21、E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。抑制SNHG1表达显著降低24 h、48 h和72 h的细胞活性,减少迁移细胞数侵袭细胞数、Cyclin D1、MMP-2蛋白表达量,提升P21、E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。过表达SNHG1逆转了伊立替康对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭、Cyclin D1、MMP-2蛋白表达的抑制作用,以及逆转对P21、E-cadherin蛋白表达的促进作用。SNHG1靶向调控miR-195表达。抑制miR-195表达逆转伊立替康抑制HepG2细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论伊立替康通过调控SNHG1/miR-195表达抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭。

联合检测miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210对急性淋巴细胞性白血病的诊断价值分析

目的:研究联合检测微小核苷酸195(miR⁃195)、细胞因子信号转导抑制因子⁃3(SOCS3 mRNA)、微小核苷酸210(miR⁃210)在急性淋巴细胞性白血病(ALL)诊断及危险度评估中的价值。方法:选取2014年2月至2017年2月收治的120例ALL患者为研究对象,初诊患者74例、缓解组患者22例、复发患者24例,另选取健康体检的儿童120例作为对照组,分别对不同组别研究对象的miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平,初诊组患者不同危险度与miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平的相关性,初诊组患者危险度的危险因素以及单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能进行分析。结果:对照组、缓解组、复发组、初诊组以及不同危险度患者的miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平差异明显(P<0.05)。经两两比较,各组miR⁃195、miR⁃210表达水平从高到低依次为对照组、缓解组、初诊组、复发组以及标危组、中危组、高危组,SOCS3 mRNA表达水平从高到低依次为复发组、初诊组、缓解组、对照组以及高危组、中危组和标危组(P<0.05)。患者的危险度与miR⁃195、miR⁃210表达水平呈现负相关,与SOCS3 mRNA呈现正相关,联合检测灵敏度显著高于单独检测患者的miR⁃195、miR⁃210、SOCS3 mRNA的标危、中危以及高危临界值分别为2.43、2.01、1.34;6.32、5.44、4.09;0.66、0.98、1.22。结论:联合检测miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210在ALL患者诊断中灵敏度较高,且miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平与ALL患者危险度呈显著相关,建议在临床中推广。

SP94修饰的肝靶向阳离子基因载体的制备及其体外评价

目的:研究适配体SP94修饰的阳离子基因载体H_3R_5,合成新型肝靶向纳米复合物SP94-H_3R_5/miR195,增加对肝癌细胞的靶向性,提高基因的转染效率。方法:经半胱氨酸修饰的SP94与H_3R_5末端的半胱氨酸发生氧化反应,组装得到SP94-H_3R_5,利用~1 H-NMR鉴定SP94-H_3R_5载体的结构,通过电位粒度仪测定纳米复合物的电位和粒径,利用琼脂糖凝胶电泳考察载体对miR195的压缩能力。以体外培养的人肝癌SK-Hep-1为研究对象,CCK8法检测SP94-H_3R_5和H_3R_5对细胞增殖的抑制作用,采用激光共聚焦显微镜考察肝癌细胞对纳米复合物的摄取,以pEGFP为报告基因考察基因转染效率,Western blot实验检测SK-Hep-1细胞VEGF的蛋白表达。结果:SP94-H_3R_5具有生物相容性,可以压缩miR195形成稳定的纳米复合物,SP94-H_3R_5/miR195与H_3R_5/miR195相比可以更多地被SK-Hep-1摄取(P<0.01),SP94-H_3R_5转染效率高于非靶向载体H_3R_5,对VEGF的阻滞作用也更高(P<0.01)。结论:SP94-H_3R_5兼具纳米材料的被动靶向作用和适配体的主动靶向作用,有潜力成为肝癌治疗中的新型载体。