miR200家族在乳腺癌患者血浆中表达水平的检测及其临床意义

目的:检测microRNA200 (miR200)家族在乳腺癌患者和正常人血浆中表达水平,评价其对乳腺癌筛查、进展和预后评估的潜在价值。方法:收集82例乳腺癌患者(乳腺癌组)和30名健康女性(对照组)的血浆标本,提取血浆中的微小RNAs (miRNAs),逆转录后采用实时荧光定量PCR法检测2组受试对象血浆中miR200家族(miR200a、miR200b、miR200c、miR141和miR429)的表达水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆中miRNAs的诊断价值,分析乳腺癌患者血浆miRNAs表达水平与临床病理参数的关系;采用Cox风险比例模型进行生存分析。结果:乳腺癌组患者血浆中miR141表达水平低于对照组(P<0.01),ROC曲线下面积(AUC)为0.717 (P<0.01);miR200b表达水平低于对照组(P=0.006),AUC为0.685(P=0.003);但miR200a、miR200c和miR429表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P=0.268,P=0.075,P=0.872)。联用miR141和miR200b时,AUC为0.735,比单用miR141稍有提升。miR200家族的表达水平与乳腺癌临床病理特征和术后总生存期无关联(P>0.05)。结论:miR200b和miR141有可能作为乳腺癌诊断的分子生物学指标。

miR-200c在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-200c在肝细胞癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法收集肝细胞癌手术组织标本52例,30例癌旁正常组织作为对照,采用qRT-PCR检测肝细胞癌组织及对照组织中miR-200c的表达情况,分析miR-200c表达水平与肝细胞癌临床病理参数之间的关系。结果肝细胞癌组织中miR-200c平均表达量明显低于癌旁对照组织,差异具有统计学意义,癌旁对照组织中miR-200c平均表达量约为肝细胞癌的2.90倍。miR-200c的表达水平与肝细胞癌恶性程度、肿瘤分化程度以及AFP表达有关,miR-200c的表达水平与肝细胞癌患者年龄、性别、HBsAg、肿瘤大小、是否合并肝硬化等无关。多元Logistic回归模型分析发现,肿瘤大(OR=2.44,95%CI:1.22～10.36)、血清AFP高(OR=2.39,95%CI:1.78～5.34)、肿瘤分化程度低(OR=3.08,95%CI:2.29～6.03)是肝癌发病的独立危险因素。结论 miR-200c与肝细胞癌的发生、临床进展密切相关,它可能是肝细胞癌新的潜在的治疗靶点及诊断预后分子标志物。

microRNA-200a抑制肝细胞癌的进展及调控索拉非尼治疗效果的研究

目的研究microRNA-200a(miR200a)影响肝细胞癌的进展及调控索拉非尼治疗效果。方法构建人肝癌细胞miR200a稳转细胞株:miR200a过表达、对照组(Control)、miR200a敲低。采用qRT-PCR法检测各转染细胞株miRNA表达量,MTT的方法检测细胞活力,Western blot分析各目标蛋白表达量;Transwell法检测肝癌细胞迁移、侵袭能力。转染细胞株添加索拉非尼,复测MTT及Western blot,验证miR200a调控索拉非尼对细胞的作用和相应蛋白表达量变化,SPF级BALB/c-nu雄鼠18只,随机分为3组,每组6只。每组皮下种植miR200a过表达、Control、miR200a敲低细胞,待成瘤后每组裸鼠每天注射索拉非尼,连续14 d,处死裸鼠,取出瘤体,计算肿瘤体积,免疫组化验证瘤体目标蛋白表达及定位。结果上调miR200a不仅可以抑制人肝癌细胞的细胞活力及迁移侵袭能力,还可以降低SIRT1的表达。并且上调miR200a明显减小裸鼠的肿瘤体积。结论上调miR200a可以负性调控人肝癌细胞的增殖和迁移能力,并增加索拉非尼的药物疗效,这种作用可能是通过调控SIRT1表达来完成。

血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性研究

目的研究血清miR⁃200c表达与2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月期重复收治入院的108例2型糖尿病患者,根据首次入院时尿白蛋白水平分为无白蛋白尿组55例、微量白蛋白尿组35例、大量白蛋白尿组18例,根据第二次入院时尿白蛋白变化分为白蛋白尿进展组和非进展组,检测首次入院时血清miR⁃200c表达量并分析白蛋白尿短期进展的相关因素。结果与无白蛋白尿组、微量白蛋白尿组比较,大量白蛋白尿组患者的糖尿病病程明显延长,高血压率、FBG、HbA1c%、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与非进展组患者比较,进展组患者高血压率、Scr、eGFR、miR⁃200c均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistics回归分析显示,高血压及miR⁃200c增加是白蛋白尿短期进展的危险因素,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,miR⁃200c对白蛋白尿短期进展具有预测价值,最佳截点为0.865。结论血清miR⁃200c表达增加是2型糖尿病患者白蛋白尿短期进展的危险因素且对白蛋白尿短期进展具有预测价值。

MiR200对肾癌细胞纤维化影响的相关性分析

目的研究MiR200对肾癌细胞纤维化的影响机制,为鉴定治疗靶标提供理论依据。方法整群选取2013年1月—2015年1月该院收治的51例肾癌患者病例资料,于实验室,建立肾癌细胞株模型,采用癌旁正常组织作为对照,应用细胞侵袭实验和Westermblot法检测靶基因蛋白表达方法进行试验。结果 MiR-200组在SN12-PM6和786-0平均穿膜细胞的个数差异有统计学意义(P<0.05),MiR-200组ZEB1蛋白表达下降,而在E-cadberin蛋白表达上升,经相关系数比较,MiR-200的表达与E-cadberin成正相关(r=0.824)而ZEB1成负相关(r=-0.762)。结论 MiR-200能够调节皮脂纤维化的侵袭,降低ZEB1蛋白表达,从而E-cadberin蛋白表达上升。

MiR200对肾癌细胞增殖的影响分析

目的研究MiR200对肾癌细胞增殖的影响。方法整群选取2013年1月—2015年1月于齐齐哈尔医学院第三附属医院就诊的51例肾癌患者病理细胞和正常癌旁组织细胞,以及构建裸鼠肾癌模型,测量MiR-200在不同细胞中的表达量和肿瘤增殖情况。结果 MiR-200在裸鼠的SN12-PM6和人的786-o、A498表达中均低于正常组织的表达（P〈0.05）,在48 h后能够抑制肾癌细胞增殖（P〈0.05）,48~72 h抑制情况最为显著（P〈0.05）。结论 MiR-200在肿瘤细胞中呈低表达水平,能够抑制肾癌细胞增殖并能够抑制裸鼠肾癌细胞生长。

miR 200c-3p CXCR6与乳腺癌患者总生存期无病生存期的相关性研究

目的探讨miR 200c-3p、CXCR6与乳腺癌患者的总生存期、无病生存期的关系。方法选取2013-2015年在我院接受放化疗的乳腺癌患者120例(三阴VS非三阴乳腺癌各60例),获取该120患者的临床病理资料及术后组织石蜡切片,通过固定组织RNA提取试剂盒提取乳腺癌石蜡组织切片中的总RNA,再通过All-inOneTM miRNA定量PCR检测试剂盒检测乳腺癌石蜡组中miR 200c-3p的表达,同时应用免疫组化方法检测肿瘤组织中CXCR6的表达,根据miR-200c-3p及CXCR6不同的表达情况将120例乳腺癌患者分为4组,分析四组患者的生存情况,并分析miR 200c-3p及CXCR6表达高低与乳腺癌患者生存期的关系。结果miR-200c-3p低表达患者与高表达患者的总生存期(P=0.428)及无病生存期(P=0.542)均无差异;CXCR6高表达患者的总生存期差于低表达患者(P=0.006),CXCR6高表达组的无病生存期差于低表达组(P=0.042);四组患者的总生存期存在差异(P=0.022),无病生存期无差异(P=0.160)。两两比较显示CXCR6高表达miR-200c-3p高表达组的总生存期短于CXCR6低表达miR-200c-3p高表达组及CXCR6低表达miR-200c-3p低表达组,P值分别为0.002、0.001。结论乳腺癌患者miR 200c-3p表达与预后无明显关系,CXCR6表达高低与总生存期及无病生存期相关。

乳腺癌细胞中长链非编码RNA HOTAIR和PRC2相互作用的研究

目的:检测数种乳腺癌细胞系中长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)和多梳抑制复合物2(polycomb repressive complex 2,PRC2)的表达及相互影响。方法:在美国国立癌症研究所(national cancer institute,NCI)60细胞库,检测HOTAIR表达情况,选择高表达、低表达的乳腺癌细胞系及对照细胞系。蛋白印迹法检测这些细胞系中PRC2组件的表达,组蛋白3(histone3,H3)甲基化情况,用实时聚合酶联反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HOTAIR与PRC2的相互影响。构建高表达HOTAIR细胞系,RT-PCR检测相关致癌、凋亡基因,用microRNA200c(miR200c)逆转。结果:通过正向、负向干预HOTAIR表达,高表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR与PRC2有协同作用,低表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR对PRC2有拮抗作用。PRC2复合物中,zeste基因增强子的人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)作为活性亚基表达更稳定。组蛋白3第27位赖氨酸的三甲基化(trimethylation of lysine 27 on histone 3,H3K27Me3)并未在正负向干预HOTAIR后发生明显蛋白水平变化。在MDA-MB-231细胞系中,过表达HOTAIR和EZH2会使同源异形盒基因(homeobox D10,HOXD10)表达增高,而B细胞迁移基因2(B-cell translocation gene 2,BTG2),磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)基因的表达降低。过表达鼠肉瘤(rat sarcoma,RAS)基因组乳腺细胞系,HOTAIR基因表达亦增高,而BTG2基因降低。共转miR200c RAS基因的乳腺细胞系中,HOTAIR表达下调,BTG2表达上调。结论:在不同HOTAIR表达水平的乳腺癌细胞中,HOTAIR与PRC2的作用不相同,沉默彼此,对H3K27Me3无明显影响。HOTAIR和PRC2复合物会促进HOXD10基因表达,并抑制BTG2、PTEN表达。而RAS可影响HOTAIR表达,但对下游调控的作用能被miR200C逆转。

miR-200c在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-200c(Homo sapiens miR-200c)在人胃癌组织的表达改变情况及其临床意义。方法:采用原位杂交检测40例正常人群胃黏膜组织以及121例胃癌患者组织中miR-200c的表达情况。结果:原位杂交实验证实miR-200c在胃癌组织中表达显著下调。在121例胃癌组织中,miR-200c的表达水平与胃癌临床分期(P<0.05)以及淋巴结转移(P<0.01)情况显著相关。结论:miR-200c在胃癌组织中表达下调,其下调程度与胃癌临床分期以及淋巴结转移情况相关。

miR200c过表达对寡灶型转移细胞株体外特性的影响

目的探索miR200c稳定过表达对寡灶型转移肿瘤细胞株体外癌症生物学特性的影响。方法通过慢病毒感染建立稳定上调miR200c表达的寡灶型转移细胞株MDA-435-OL-miR200c(实验组),并同时建立阴性对照组(感染空质粒LV3NC)和阳性对照组(多灶型细胞株MDA-435-POL),通过CCK-8增殖曲线测定、琼脂平板克隆实验、Transwell小室迁移和侵袭实验来阐明上调miR200c对寡灶型转移细胞体外特性的影响以及上调目的基因后寡灶型与多灶型转移细胞株体外癌症生物学特性的不同和联系。结果在稳定寡灶转移细胞株中过表达miR200c对细胞体外克隆形成率为(0.69±0.02),迁移细胞数为(21.20±2.35),侵袭细胞数为(56.80±5.22),均较阴性对照组显著增加(P<0.05),与阳性对照组体外特性基本一致。但miR200c过表达对增殖能力没有显著的影响。结论寡灶型细胞株稳定上调miR200c后体外克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力均有所提高,且呈现出多灶型细胞株的特性。

miR200c、E-Cad和ZEB1在子痫前期患者胎盘组织中的差异表达

目的:探讨miR200c和E-Cad、ZEB1的靶向关系。方法:采用qRT-PCR检测子痫前期患者和正常妊娠者胎盘组织miR200c和E-Cad、ZEB1表达;western blotting检测E-Cad和ZEB1蛋白水平表达。结果:qRT-PCR结果显示,与正常妊娠者比较,子痫前期患者胎盘组织中miR200c的表达水平显著增高,E-Cad mRNA表达水平显著升高,ZEB1 mRNA表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。western blotting结果显示,与正常妊娠者比较,子痫前期患者E-Cad蛋白水平显著升高,ZEB1蛋白水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR200c调控E-Cad和ZEB1的表达。

白花丹素对胶质瘤细胞生长侵袭的影响及机制研究

目的分析中药提纯制剂白花丹素对胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其作用机制。方法体外常规培养SWO-38和U251细胞，应用0～50μmol／L白花丹素作用48h后，MTT检测细胞存活率的变化，计算半数抑制浓度fIC如；应用0、2．5、5、10μmol／L白花丹素处理细胞48h后。流式细胞仪检测细胞凋亡；划痕实验检测细胞侵袭迁移能力；Western blotting检测细胞中SOX2蛋白的表达：实时荧光定量PCR检测细胞miR200b、miR200c、miR-203和miR-21表达的变化。结果MTT显示O～50μmol/L白花丹素处理SWO-38、U251细胞后细胞存活率逐渐下降，IC50分别为6．8μmol／L和7．4μmol／L；0、2．5、5、10μmol／L白花丹素作用SWO-38、U251细胞48h后凋亡细胞的比例逐渐增加，细胞中miR200b、miR200c和miR-203的表达逐渐增加，差异有统计学意义（P〈0．051；划痕实验显示白花丹素作用后两株细胞的侵袭能力下降；Western blotting结果显示SOX2蛋白的表达降低。结论白花丹素抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭迁移，促进其凋亡，可能与其升高miR200b、miR200c和miR-203的表达，降低SOX2蛋白的表达有关。

miR200c对卵巢上皮性癌细胞转移潜能影响及其机制探讨

目的:探讨miR200c对卵巢癌细胞SKOV3和HO-8910转移潜能的影响及其调控机制。方法:人工合成miR200cmimic(实验组)和对照无关序列(阴性对照组),用脂质体将其转入SKOV3和HO-8910细胞,以SKOV3和HO-8910为空白对照,培养48h后,应用RT-PCR技术检测miR200c的相对表达;采用Transwell小室装置检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞中上皮向间质转化相关蛋白ZEB1、E-cadherin和Vimentin的表达;同时应用酶联免疫吸附实验检测间皮素和CA125的表达变化。结果:miR200c表达与空白对照组比较,SKOV3-mimic组为297.40±5.26倍,F=77.571,P<0.001;HO-8910-mimic组为348.57±6.50倍,F=63.563,P<0.001。侵袭到滤膜下的细胞数SKOV3-mimic组为74.20±7.44,低于空白对照组和阴性对照组,F=48.413,P<0.001;HO-8910-mimic组为98.67±7.62,低于空白对照组和阴性对照组,F=55.133,P<0.001。迁移到滤膜下的细胞数SKOV3-mimic组为56.27±6.36,低于空白对照组和阴性对照组,F=55.354,P<0.001;HO-8910-mimic组为91.33±5.75,亦低于空白对照组和阴性对照组,F=60.374,P<0.001。SKOV3-mimic组E-cadherin蛋白相对表达量为155.36±18.52,较对照组高,F=62.451,P=0.002,ZEB1和Vimentin蛋白表达降低,P值分别为0.003和0.005;HO-8910-mimic组E-cadherin蛋白相对表达量为149.90±38.53,较对照组高,F=54.536,P=0.002,ZEB1和Vimentin蛋白表达降低,P值分别为0.006和0.005。转染miR200cmimic后,SKOV3中CA125表达降低了33.2%,F=35.646,P=0.005,间皮素表达降低了39.6%,F=25.625,P=0.006;HO-8910中CA125表达降低了37.2%,F=27.426,P=0.007,间皮素表达降低了41.2%,F=33.735,P=0.005。结论:miR200c可通过miR200c/ZEB1/E-cadherin和间皮素/CA125通路抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力。