川芎嗪干预早期膝骨关节炎大鼠软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因与血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达

背景:课题组前期研究发现川芎嗪能明显降低骨关节炎关节液中NO、前列腺素E2水平,对减轻骨性关节炎的炎症有一定作用,但具体机制还不清楚。目的:观察川芎嗪治疗膝骨关节炎模型关节软骨中Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b表达水平,并探讨川芎嗪治疗早期膝骨关节炎大鼠的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组,后4组通过木瓜蛋白酶关节腔注射制作早期膝骨关节炎大鼠模型。造模后川芎嗪高、低剂量组分别灌胃川芎嗪100 mg/kg和50 mg/kg,阳性对照组灌服塞来昔布24 mg/kg;正常组、模型组灌服等量生理盐水。干预6周后取材,分别行鼠软骨大体组织学评分、qR T-PCR检测软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达水平。结果与结论:(1)软骨Mankin评分:川芎嗪高、低剂量组和阳性对照组均较正常组高(P<0.05),较模型组低(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(2)川芎嗪各剂量组和阳性对照组的Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA表达较正常组上调(P<0.05),较模型组下调(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(3)川芎嗪各剂量组、阳性对照组及正常组的miR20b表达均较模型组上调(P<0.05),其中川芎嗪低剂量组<阳性对照组<川芎嗪高剂量组;(4)提示:川芎嗪对早期膝骨关节炎大鼠治疗具有积极作用,可能通过上调软骨中miR20b从而抑制血管内皮生长因子mRNA的表达,促进软骨的修复。

紫草素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响

目的探讨紫草素调控HNF1A⁃AS1/miR⁃20b⁃5p轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响。方法将子宫内膜癌细胞HEC⁃1B分为对照组、紫草素低、中、高剂量组、si⁃NC组、si⁃HNF1A⁃AS1组、miR⁃NC组、miR⁃20b⁃5p组、pcDNA⁃NC+紫草素组、pcDNA⁃HNF1A⁃AS1+紫草素组、pcDNA⁃HNF1A⁃AS1+miR⁃NC+紫草素组、pcDNA⁃HNF1A⁃AS1+miR⁃20b⁃5p+紫草素组。CCK⁃8检测细胞存活率和顺铂对HEC⁃1B细胞的半抑制浓度值(IC50);流式细胞术检测凋亡;RT⁃PCR检测HNF1A⁃AS1和miR⁃20b⁃5p的表达;Western blot检测CyclinD1、Cleaved⁃caspase⁃3、MRP1表达。双荧光素酶报告基因实验和RT⁃PCR验证HNF1A⁃AS1对miR⁃20b⁃5p的靶向调控作用。结果低、中、高剂量紫草素处理后HEC⁃1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高(P<0.05,P<0.05),HNF1A⁃AS1、CyclinD1、MRP1表达降低,miR⁃20b⁃5p和Cleaved⁃caspase⁃3表达升高,IC50值降低(P<0.01)。干扰HNF1A⁃AS1表达或过表达miR⁃20b⁃5p后,HEC⁃1B细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,CyclinD1、MRP1蛋白表达降低,Cleaved⁃caspase⁃3表达升高,IC50值降低(P<0.01)。HNF1A⁃AS1靶向负调控miR⁃20b⁃5p表达。过表达HNF1A⁃AS1可以逆转紫草素对子宫内膜癌细胞HEC⁃1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P<0.01)。过表达miR⁃20b⁃5p可以逆转pcDNA⁃HNF1A⁃AS1对紫草素处理的子宫内膜癌细胞HEC⁃1B细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响(P<0.01)。结论紫草素可抑制子宫内膜癌细胞存活,诱导细胞凋亡,提高其顺铂敏感性,其机制与调控HNF1A⁃AS1/miR⁃20b⁃5p轴有关。