CircPUM1通过miR218-5p/IGF1调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:选择乳腺癌细胞作为研究对象,分析circPUM1对乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。方法:将MCF-7细胞分为MCF-7组、空载体组、circPUM1干扰组;circPUM1干扰组使用circPUM1 siRNA转染干扰circPUM1表达,空载体组使用空载体转染,MCF-7组不做其他处理;检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及miR218-5p/IGF1水平。结果:MCF-7组、空载体组和circPUM1干扰组3组细胞增殖、迁移、侵袭活性存在明显差异,其中circPUM1干扰组细胞增殖、侵袭活性最低,迁移距离最小,且差异有统计学意义(P<0.05);MCF-7组、空载体组和circPUM1干扰组3组细胞miR218-5p、IGF1水平存在明显差异,其中circPUM1干扰组细胞miR218-5p水平最高、IGF1水平最低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:circPUM1可能通过miR218-5p/IGF1调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭活性。

血清miR-218-5p、LncRNA OIP5-AS1在急性呼吸窘迫综合征患儿中表达及临床预后预测效能分析

目的探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清长链非编码RNA OIP5-AS1(LncRNA OIP5-AS1)、微小RNA-218-5p(miR-218-5p)表达情况及二者在临床预后预测中的价值。方法回顾性选择2020年7月至2022年2月秦皇岛市第一医院收治的104例ARDS患儿为ARDS组。根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))将ARDS患儿分为重度亚组(PaO_(2)/FiO_(2)≤100 mmHg,n=32)、中度亚组(100 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤200 mmHg,n=38)、轻度亚组(200 mmHg<PaO_(2)/FiO_(2)≤300 mmHg,n=34)。根据ARDS患儿28 d院内死亡情况将其分为存活亚组(n=74)和死亡亚组(n=30)。另选择同期于本院进行健康体检的98例儿童作为对照组。比较各组血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平;收集患儿性别、年龄、气道峰值压、通气时间、入住ICU时间、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2))、入院急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、入院序贯器官功能衰竭评分(SOFA)、平均气道压、潮气量、白蛋白等资料。采用Pearson相关分析ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p表达水平对ARDS患儿预后的预测价值;采用Logistic回归分析影响ARDS患儿死亡的因素。结果ARDS组血清LncRNA OIP5-AS1为2.04±0.38,显著高于对照组(1.01±0.21),miR-218-5p为0.45±0.16,显著低于对照组(1.02±0.20),差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、轻度亚组、中度亚组、重度亚组ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1表达水平依次升高,miR-218-5p表达水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡亚组血清LncRNA OIP5-AS1表达水平及入院APACHEⅡ评分、入院SOFA、平均气道压、潮气量均高于存活亚组,miR-218-5p表达水平及PaO_(2)、白蛋白均低于存活亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARDS死亡患儿中血清LncRNA OIP5-AS1与miR-218-5p表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.05)。血清LncRNA OIP5-AS1、miR-218-5p及二者联合预测ARDS患儿死亡的曲线下面积分别为0.852、0.812、0.904。LncRNA OIP5-AS1是ARDS患儿死亡的独立危险因素(P<0.05),miR-218-5p是ARDS患儿死亡的保护因素(P<0.05)。结论ARDS患儿血清LncRNA OIP5-AS1>2.04,miR-218-5p<0.39,均与病情严重程度及预后不良有关。

乳腺癌组织中miR218-5p、IGF-1的表达水平及其临床意义

目的探讨乳腺癌组织中微小RNA-218-5p(miR218-5p)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达水平的变化及其临床意义。方法选取中国科学院大学深圳医院(光明)甲乳外科2016年6月至2019年8月经手术切除的120例乳腺癌组织蜡块标本作为乳腺癌组,另随机抽取60例乳腺癌患者标本切缘的癌旁正常组织(距癌旁组织的距离超过5 cm)作为癌旁组,并选择我院同期住院治疗的90例良性乳腺纤维瘤病变组织作为良性病变组。比较三组组织标本miR218-5p、IGF-1水平的表达,比较乳腺癌组不同TNM分期患者组织标本miR218-5p、IGF-1水平的表达,采用Spearman相关性分析法分析miR218-5p、IGF-1与TNM分期的相关性。结果癌旁组组织中miR218-5p、IGF-1的阳性细胞表达率分别为(1.21±0.28)%、(2.63±0.20)%,良性病变组分别为(0.70±0.11)%、(3.80±0.55)%,乳腺癌组分别为(0.44±0.09)%、(6.51±1.10)%,乳腺癌组织中miR218-5p的阳性细胞表达率明显低于良性病变组和癌旁组,IGF-1的阳性细胞表达率明显高于良性病变组和癌旁组,良性病变组组织中miR218-5p阳性细胞表达率明显低于癌旁组,IGF-1的阳性细胞表达率明显高于癌旁组,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅰ级和Ⅱ级乳腺癌组织中的miR218-5p、IGF-1的阳性细胞表达率分别为(0.35±0.03)%、(6.90±1.34)%,Ⅲ级和Ⅳ级分别为(0.23±0.01)%、(11.85±2.12)%,Ⅲ级和Ⅳ级乳腺癌组织中的的miR218-5p阳性细胞率明显低于Ⅰ级和Ⅱ级乳腺癌,IGF-1阳性细胞率明显高于Ⅰ级和Ⅱ级乳腺癌,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,miR218-5p与TNM分期呈负相关(r=-0.385,P<0.05),IGF-1与TNM分期呈正相关(r=0.693,P<0.05),乳腺癌组织中miR218-5p与IGF-1的表达呈负相关(r=-0.326,P<0.05)。结论乳腺癌组织中,miR218-5p表达较低,IGF-1有明显高表达,miR218-5p和IGF-1表达水平与临床病理特征有明显相关性。

非小细胞肺癌组织中lncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)MNX1-AS1、微RNA(miR)-218-5p表达及临床意义。方法选取2015年1月至2017年1月湖北省中医院诊治的120例NSCLC患者,取术中获取的NSCLC组织和癌旁组织,应用荧光定量PCR检测LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达。分析NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p的相关性及与临床病理特征的关系。以LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p相对表达量的均值(2.321、1.213)为界分为高、低表达组,分析其对NSCLC患者生存预后的影响。结果NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达高于癌旁组织,miR-218-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.561,P<0.01)。不同淋巴结转移、肿瘤分期患者LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1高表达组生存曲线低于LncRNA MNX1-AS1低表达组,miR-218-5p低表达组生存曲线低于miR-218-5p高表达组(P<0.05)。结论NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低,两者与患者预后不良有关,可能作为预后评估指标。

miR-218-5p通过靶向下调ANKRD1抑制地塞米松诱导的人成骨细胞HFOB1.19损伤

目的:探讨miR-218-5p对地塞米松诱导的人成骨细胞损伤的影响和可能机制。方法:体外培养人成骨细胞HFOB1.19,分别转染miR-218-5p模拟物、ANKRD1小干扰RNA或共转染miR-218-5p模拟物与ANKRD1过表达载体,然后采用10μmol/L地塞米松干预转染后的细胞24 h,RT-qPCR检测细胞中miR-218-5p和ANKRD1 mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清中IL-6、IL-1β和TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证ANKRD1和miR-218-5p的调控关系。结果:地塞米松抑制成骨细胞中miR-218-5p表达,促进ANKRD1表达(P<0.05)。过表达miR-218-5p或敲减ANKRD1降低了地塞米松诱导的成骨细胞凋亡率及Bax蛋白、IL-6、IL-1β和TNF-α表达(P<0.05),促进了Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。过表达ANKRD1逆转了过表达miR-218-5p对地塞米松诱导的成骨细胞凋亡及炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达的抑制作用。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-218-5p可靶向结合ANKRD1;过表达miR-218-5p抑制了成骨细胞凋中ANKRD1表达。结论:miR-218-5p可通过靶向抑制ANKRD1减少地塞米松诱导的成骨细胞凋亡及炎症因子表达,减轻成骨细胞损伤。

miR-218-5p靶向HMGB1参与脂多糖诱导的足细胞损伤

目的探究miR-218-5p、高迁移率蛋白B1(HMGB1)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法将小鼠足细胞分为4组:正常对照组、LPS诱导组、HMGB1 shRNA+LPS组、miR-218-5p mimics+LPS组。Western blot和Real-time PCR分别检测各组HMGB1、TLR4、MyD88、TNF-α、IL-6、synaptopodin、ZO-1蛋白和mRNA表达水平;免疫荧光检测synaptopodin、ZO-1的表达和定位;Transwell检测足细胞迁移能力;双荧光素酶报告基因验证miR-218-5p和HMGB1的关系。结果LPS刺激后,HMGB1、TLR4、MyD88表达明显升高,炎性因子TNF-α、IL-6表达升高,而足细胞标记蛋白synaptopodin、ZO-1表达降低,同时足细胞迁移能力明显增强。沉默HMGB1或过表达miR-218-5p可降低TLR4、MyD88,TNF-α、IL-6表达,增加synaptopodin、ZO-1表达,抑制足细胞迁移能力,缓解足细胞损伤。荧光素酶报告基因检测提示miR-218-5p可直接作用于HMGB1的3’UTR区,调控HMGB1的翻译过程。结论HMGB1在LPS诱导的足细胞损伤中发挥重要作用,沉默HMGB1或过表达miR-218-5p可通过抑制HMGB1通路,减轻LPS诱导的足细胞炎症反应,缓解足细胞损伤。

miR-145-5p靶向IGF 1R介导AKT通路抑制猪骨骼肌卫星细胞增殖和分化

旨在探讨miR-145-5p对猪骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。本研究采用qRT-PCR检测miR-145-5p的组织表达谱和发育性表达规律;选用1 d晋汾白猪趾长伸肌进行骨骼肌卫星细胞的分离与培养,分别转染miR-145-5p模拟物(mimics)及其对照组(mimics NC),miR-145-5p抑制剂(inhibitor)及其对照组(inhibitor NC),每个处理3个重复,利用qRT-PCR、EdU和CCK-8方法检测增殖相关基因表达量、EdU阳性细胞数和细胞增殖活性;待猪骨骼肌卫星细胞分化后利用qRT-PCR、Western blot和免疫荧光染色方法探究分化相关基因mRNA和蛋白水平及肌管形成情况;采用双荧光素酶试验、qRT-PCR和Western blot探究miR-145-5p对下游IGF 1R和AKT通路的影响。结果显示,miR-145-5p基因在肝和肺中表达量最高,心和皮下脂肪中次之(P<0.05);随着日龄的增加,miR-145-5p在猪背最长肌中的表达量持续升高(P<0.05)。在猪骨骼肌卫星细胞体外培养过程中,转染miR-145-5p mimics极显著下调Ki 67和CDK 1的表达(P<0.01),显著下调PCNA和CDK 4的表达(P<0.05),阳性细胞指数极显著降低(P<0.01),细胞活性显著低于对照组(P<0.05)。在分化方面,过表达miR-145-5p极显著下调MyOD、MyOG和Myf 5的表达量(P<0.01),MyOD蛋白水平显著降低(P<0.05),MyHC阳性肌管面积少于对照组;转染miR-145-5p inhibitor则出现相反的结果。过表达miR-145-5p显著降低IGF1R mRNA和蛋白的相对表达量(P<0.05),显著降低AKT蛋白的磷酸化水平;而干扰miR-145-5p能极显著上调IGF1R mRNA和蛋白的相对表达量(P<0.01),并能挽救转染si-IGF1R对p-AKT蛋白的抑制作用(P<0.01)。本研究结果表明,miR-145-5p通过负调控IGF1R mRNA和蛋白的相对表达水平,并影响AKT通路,抑制猪骨骼肌卫星细胞的增殖和分化,进而参与骨骼肌的发育过程。研究结果丰富了猪肌肉生长发育的分子网络,并为肌肉性状的分子育种提供了靶标。

白花丹素通过调控miR-218-5p/CNTN1表达对子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的探讨白花丹素通过调控微小RNA-218-5p(miR-218-5p)/接触蛋白(CNTN)1表达对子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测1.0、2.5、5.0μmol/L白花丹素对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖的抑制作用;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)与Western印迹方法检测白花丹素对HEC-1A细胞miR-218-5p及CNTN1的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与CNTN1的作用关系。分别将miR-218-5p mimic、miR-NC、si-CNTN1、si-NC转染入HEC-1A细胞,继而在HEC-1A细胞转染anti-miR-218-5p后用白花丹素处理。采用MTT、Transwell实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力变化。Western印迹检测CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p21蛋白表达。结果白花丹素作用子宫内膜癌HEC-1A细胞后可明显降低细胞增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),而p21蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且随着作用浓度的增加其作用效果越显著;白花丹素可明显上调miR-218-5p表达而下调CNTN1表达,且呈剂量依赖效应;双荧光素酶报告基因实验验证CNTN1是miR-218-5p的靶基因;miR-218-5p过表达或沉默CNTN1表达能够显著抑制HEC-1A细胞增殖、迁移及侵袭;抑制miR-218-5p表达能够显著减弱白花丹素对HEC-1A细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论白花丹素可通过调控miR-218-5p/CNTN1表达进而抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭。

MiR-218-5p通过靶向抑制TDP1表达促进鱼藤酮诱导的胃癌细胞凋亡

目的探讨过表达miR-218-5p和抑制TDP1的表达对鱼藤酮诱导损伤胃癌细胞凋亡的影响,阐明其可能的作用机制。方法采用RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞和四种胃癌细胞中miR-218-5p及TDP1表达水平,并分析其相关性。双荧光素酶报告基因验证miR-218-5p对TDP1的靶向调控作用。采用1.0μmol/L鱼藤酮诱导胃癌细胞损伤,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。Western blot检测细胞线粒体中TDP1水平及细胞Bax、Cyt-c蛋白的表达。结果miR-218-5p在胃癌细胞中低表达(P<0.05),TDP1高表达(P<0.01),两者表达呈负相关(R^(2)=0.9580,P=0.0212)。与对照组比较,损伤组SGC-7901细胞发生G;期阻滞,凋亡率升高(P<0.01)。与损伤组比较,miR-218-5p-mimic组SGC-7901细胞G;期阻滞加剧,细胞凋亡率进一步升高(P<0.01),Bax及Cyt-c表达上调(P<0.01),而线粒体中TDP1蛋白水平降低(P<0.01);TDP1过表达组细胞G_(1)期阻滞得到缓解,凋亡率降低(P<0.01),线粒体中TDP1蛋白水平升高(P<0.01),Bax及Cyt-c表达降低(P<0.01)。结论miR-218-5p可靶向抑制TDP1表达,诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能与抑制线粒体DNA损伤修复及功能维持、激活线粒体内源性凋亡途径有关。

LINC00649通过miR-424-5p/IGF1R轴调控内质网应激介导的宫颈癌细胞凋亡

目的探讨LINC00649/miR-424-5p/IGF1R对内质网应激(ERs)介导的宫颈癌(CC)细胞凋亡的影响。方法从GEO数据库中获取CC相关的数据,并分析差异表达的miRNAs。利用生物信息学数据库预测miR-424-5p的上、下游靶点,将LINC00649和IGF1R纳入研究,随后双荧光素酶实验进一步验证靶向关系。qRT-PCR检测LINC00649、miR-424-5p和IGF1R在CC组织和细胞中的表达水平。CCK-8和流式细胞术分别评估CC细胞增殖和凋亡变化。Western blot检测ERs相关蛋白GRP78、CHOP和Caspase-12的表达。结果与癌旁组织和H8细胞相比,LINC00649和IGF1R在CC组织和细胞中表达上调,而miR-424-5p下调(均P<0.05)。LINC00649的异常高表达与CC患者的预后不良有关,敲减LINC00649可通过促进ERs来抑制CC细胞活力,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。LINC00649吸附miR-424-5p上调IGF1R的表达。miR-424-5p抑制剂或过表达IGF1R均可部分逆转敲减LINC00649对CC细胞的影响(均P<0.05)。结论 LINC00649能够通过miR-424-5p/IGF1R抑制CC细胞的ERs过程进而减少细胞凋亡,提高细胞活力。

miRNA-218-5p通过HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应

目的:探讨微小RNA-218-5p(miRNA-218-5p)通过调节高迁移率族盒蛋白1(HMGB1)信号通路对RAW264.7细胞源性泡沫细胞炎症反应的影响。方法:将RAW264.7细胞分为对照组、模型组、miRNA mimics组及miRNA NC组。对照组细胞正常培养;模型组细胞采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导24 h建立泡沫细胞模型;miRNA mimics组及miRNA NC组分别转染miRNA-218-5p mimics及miRNA mimics control 24 h后再用80mg/L ox-LDL诱导24 h建立泡沫细胞模型。应用油红O染色检测各组细胞内脂质变化;试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达量;qPCR检测各组细胞中miRNA-218-5p表达量;Western Blot检测各组细胞中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)p65及p-NF-κB p65蛋白水平;通过双萤光素酶报告基因实验检测miRNA-218-5p对HMGB1的靶向作用。结果:与对照组比较,模型组细胞的泡沫化程度增加,细胞中miRNA-218-5p表达量显著下降(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著上升(P<0.05);与模型组细胞相比,miRNA mimics组细胞的泡沫化程度降低,细胞中miRNA-218-5p表达量显著上升(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4和p-NF-κB p65水平显著下降(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miRNA-218-5p能与HMGB1 mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)结合,抑制萤光素酶的活性。结论:miRNA-218-5p能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化,还可通过调节HMGB1信号通路抑制RAW264.7细胞源性泡沫细胞的炎症反应。

长链非编码RNA KCNQ1OT1靶向调控miR-218-5p对结肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控micro RNA-218-5p(miR-218-5p)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制。方法:收集2019年1月至4月在宜昌市第一人民医院行根治性结肠癌切除术的30例肿瘤组织和相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测lncRNA KCNQ1OT1,miR-218-5p在结肠癌组织、癌旁正常组织、5种结直肠癌细胞系(HCT-116,SW480,SW620,DLD-1,HT29)及正常结肠上皮细胞系CCD841中的表达水平;干预结肠癌细胞系HCT-116和SW480中lncRNA KCNQ1OT1和miR-218-5p的表达,采用CCK-8法检测结肠癌细胞的增殖,Transwell法检测结肠癌细胞的迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;用Starbase数据库预测lncRNA KCNQ1OT1的靶向miRNA,并用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因法验证lncRNA KCNQ1OT1与miR-218-5p的靶向关系。结果:与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞系相比,结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平显著上调,miR-218-5p的表达显著下调(P<0.05);过表达lncRNA KCNQ1OT1促进SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,且减少处于G0/G1期的细胞比率,抑制细胞凋亡;在结直肠癌组织中lncRNA KCNQ1OT1的表达水平与miR-218-5p的表达水平呈负相关(r^2=0.437,P<0.001);双荧光素酶报告基因法分析证实lncRNA KCNQ1OT1能特异性结合miR-218-5p,并能降低其表达;过表达miR-218-5p抑制HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,增加处于G0/G1期的细胞比率,促进细胞凋亡,且miR-218-5p的表达可以抑制由lncRNA KCNQ1OT1过表达引起的细胞增殖、迁移和侵袭能力的增加及凋亡的减少。结论:LncRNA KCNQ1OT1通过靶向调控miR-218-5p表达影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进结直肠癌的发展。

miR-218-5p/GTSE1调控轴抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨GTSE1在肺腺癌中的分子机制,以及其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法将PC-9和A549细胞分为多组,进行过表达或沉默GTSE1、miR-218-5p。通过TCGA数据确定和评估miR-218-5p和靶基因GTSE1在肺腺癌中的预后意义。qRT-PCR和Western blot分别检测GTSE1和miR-218-5p的mRNA和蛋白表达水平。CCK-8、克隆形成、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验分析miR-218-5p和GTSE1的靶向关系。结果GTSE1在肺腺癌组织和细胞中高表达,且高表达GTSE1的肺腺癌患者预后不良。过表达GTSE1可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。另外,miR-218-5p在肺腺癌组织和细胞中低表达,并且能够靶向下调GTSE1的表达。实验结果显示,高表达miR-218-5p能够抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,而其抑制作用能够被GTSE1过表达处理所恢复。结论miR-218-5p/GTSE1轴能够抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果 与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P<0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P<0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P<0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P<0.05)。结论 MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

结直肠癌组织中长链非编码RNA NEAT1和miR-218-5p的表达及其与患者预后的关系

目的探究结直肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)和miR-218-5p的表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2014年7月至2015年7月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院确诊并接受治疗的95例结直肠癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(real time qPCR)法检测组织中lncRNA NEAT1和miR-218-5p的表达水平,并分析两者与患者临床病理特征及预后的关系。采用Cox比例风险回归模型分析影响结直肠癌患者预后生存的危险因素。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中lncRNA NEAT1的表达水平较高,miR-218-5p的表达水平较低,两组差异均有统计学意义(P均<0.05)。结直肠癌组织中lncRNA NEAT1和miR-218-5p的表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,高表达lncRNA NEAT1组患者的5年病死率显著高于低表达lncRNA NEAT1组(63.64%比41.18%,P<0.05),低表达miR-218-5p组患者的5年病死率显著高于高表达miR-218-5p组(65.31%比36.96%,P<0.05)。Cox比例风险回归模型分析结果显示,肿瘤分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、高表达lncRNA NEAT1、低表达miR-218-5p均为结直肠癌患者预后生存的危险因素。Pearson相关性分析结果显示,lncRNA NEAT1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.563,P=0.000)。结论结直肠癌组织中lncRNA NEAT1呈高表达,miR-218-5p呈低表达,且两者均与患者的临床病理特征及预后生存有关。

运动通过microRNA-218-5p/HMGB1/TLR4途径改善OJ致肠黏膜屏障损伤的研究

目的:研究miR-218-5p在阻塞性黄疸(OJ)致肠黏膜屏障损伤中的机理,以及有氧运动改善肠黏膜屏障损伤的效果,并探讨其作用机制。方法:30只雄性KM小鼠随机分为3组:假手术组(S)、模型组(M)及运动组(TM)。M及TM组小鼠均采用手术线直角悬挂胆总管法构建阻塞性黄疸模型。在术后7天,TM组进行坡度为0、速度为10 m·min-1的无负重训练(30 min/天)。干预6周后,HE染色观察小鼠肠粘膜形态学变化;生物化学分析法和ELISA法检测血清ALT、AST和TBIL肝功能指标、DAO和D-乳酸肠屏障功能生化指标;qRT-PCR检测miR-218-5p和HMGB1,TLR4,NF-κBp65 mRNA在肠组织中的表达变化;免疫组织化学染色法观察HMGB1,TLR4,NF-κBp65蛋白在肠组织中的表达。结果:HE染色显示,S组小鼠肠黏膜正常;M组肠黏膜萎缩,绒毛断裂;TM组小鼠肠黏膜排列相对规则。血清检测结果显示,S组DAO表达水平最低,TM组较M组降低。D-乳酸水平变化同DAO。qRT-PCR和免疫组织化学染色结果显示,TM组小鼠肠组织中HMGB1,TLR4,NF-κBp65 mRNA和蛋白表达均显著低于M组,S组表达水平最低;miR-218-5p的表达则呈相反趋势。结论:在阻塞性黄疸回肠组织中,miR-218-5p可以直接负性调控HMGB1的表达,进而影响其及其下游信号因子的表达,从而参与肠黏膜损伤的发生发展过程;有氧运动通过上调miR-218-5p,抑制HMGB1-TLR4通路及其下游信号因子的表达,从而发挥对肠粘膜屏障的保护作用。

LncRNA PVT1通过竞争miR-149-5p上调CHI3L1并影响变应性鼻炎进展的研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)PVT1对变应性鼻炎(AR)进展的影响及其相关作用机制。方法24只BALB/c小鼠,其中6只作为对照组,余18只采用卵白蛋白和氢氧化铝建立AR模型并采用随机数字表法均分为模型组、AR+NC组(尾静脉注射空载体慢病毒)、AR+shPVT1组(尾静脉注射LncRNA PVT1干扰载体慢病毒),每组6只。采用行为学评分评估各组小鼠过敏症状;HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织病理学改变;实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中LncRNA PVT1、miR-149-5p和几丁质酶-3样蛋白1(CHI3L1)mRNA的表达;Western blot检测CHI3L1蛋白表达;ELISA分析各组小鼠血清IgE、白细胞介素(IL)-5、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。构建LncRNA PVT1和CHI3L1的野生型(WT)和突变型(MT)荧光素酶报告质粒,单独或同时与miR-149-5p mimic共转染293T细胞,采用双荧光素酶实验分析并计算各组细胞荧光素酶相对活性。结果与模型组相比,AR+shPVT1组小鼠行为学评分降低;血清中IgE、IL-5和TNF-α水平降低;鼻黏膜组织中LncRNA PVT1 mRNA表达水平降低,miR-149-5p mRNA表达水平升高,CHI3L1 mRNA及蛋白水平均降低,鼻黏膜组织炎症反应减轻。双荧光素酶实验证实LncRNA PVT1通过竞争性结合miR-149-5p,上调miR-149-5p靶基因CHI3L1的表达。结论在AR模型小鼠中异常高表达的LncRNA PVT1通过发挥竞争性内源RNA作用抑制miR-149-5p表达而上调CHI3L1的表达,引发小鼠鼻黏膜组织的炎性症状并促进过敏反应。

血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断价值

目的评估血清微小RNA(miR)-210、miR-218-5p和肾损伤分子(KIM)-1水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断价值。方法选择2019年1月至2020年12月复旦大学附属妇产科医院诊断为妊娠期高血压疾病的患者106例为研究组,选择同期健康产检孕妇75例为对照组。比较研究组与对照组血清miR-210、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)水平;分析血清miR-210、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-MG水平与妊娠期高血压疾病严重程度及肾功能的关系;评估血清miR-21、miR-218-5p、KIM-1和β_(2)-MG水平对妊娠期高血压疾病患者肾损伤的诊断效能;分析妊娠期高血压疾病患者血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平间的相关性。结果研究组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于对照组,血清miR-218-5p水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度子痫前期组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于轻度子痫前期组和妊娠期高血压组,血清miR-218-5p水平明显低于轻度子痫前期组和妊娠期高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);轻度子痫前期组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于妊娠期高血压组,血清miR-218-5p水平明显低于妊娠期高血压组,差异有统计学意义(P<0.05)。肾功能异常组血清miR-210、KIM-1和β_(2)-MG水平明显高于肾功能正常组,血清miR-218-5p水平明显低于肾功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-210、KIM-1、miR-218-5p联合检测诊断妊娠期高血压疾病患者肾损伤的灵敏度为84.6%,特异度为95.5%,曲线下面积为0.957,明显优于各指标单独检测(P<0.05)。妊娠期高血压疾病患者血清miR-210和KIM-1水平与miR-218-5p水平均呈负相关(r=-0.555、-0.542,P<0.05),而血清miR-210与KIM-1水平呈正相关(r=0.575,P<0.05)。结论血清miR-210、miR-218-5p和KIM-1水平与妊娠期高血压疾病的发生、发展有关,且对患者肾损伤具有较高的诊断价值,联合检测的诊断价值优于各指标单独检测。

miR-218-5p、HMGB1在过敏性紫癜患儿外周血中的表达及临床意义

目的探讨miR-218-5p与HMGB1在HSP、HSPN患儿外周血的表达及临床意义。方法选择过敏性紫癜(Henoch-Sch nlein purpura,HSP)、紫癜性肾炎(Henoch-Sch nlein purpura nephritis,HSPN)住院患儿各30例作为实验组,门诊体检儿童30例作为对照组。采用RT-PCR技术检测外周血中miR-218-5p的表达,ELISA法检测外周血中HMGB1的表达,观察3组儿童中miR-218-5p、高迁移率族蛋白1(high-mobility group box-1,HMGB1)的表达水平,同时分析HSP组、HSPN组两组间白细胞计数(white blood cell,WBC)、中性粒细胞绝对计数(absolute neutrophil count,ANC)、淋巴细胞绝对计数(absolute lymphocyte count,ALC)、红细胞计数(red blood cell,RBC)、血小板计数(platelet,PLT)、尿素(urea,UREA)、肌酐(creatinine,CRE)、尿酸(uric acid,UA)的表达。结果miR-218-5p表达在对照组、HSP组、HSPN组逐渐降低;HMGB1表达在对照组、HSP组、HSPN组逐渐增高;miR-218-5p、HMGB1、WBC、ANC与肾脏损伤发生差异有统计学意义;而ALC、RBC、UREA、CRE、UA与肾脏损伤发生差异无统计学意义;miR-218-5p是HSP患儿发生肾脏损伤的独立保护性因素,HMGB1是独立危险性因素;miR-218-5p在HSP发展过程中诊断肾脏损伤的最佳截断值为0.515,敏感度为100.0%,特异性为76.7%;HMGB1诊断肾脏损伤的最佳截断值为3348.2pg/ml,敏感度为86.7%,特异性为90.0%。结论miR-218-5p可能通过靶向调节HMGB1的表达参与HSP、HSPN的发病机制,并且与病情严重程度相关,有望成为HSP患儿的生物学靶点。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。