miR26a-1 rs7372209和miR-612 rs12803915位点多态性与海南地区肺癌遗传易感性的关联研究

目的:探讨海南地区人群miR26a-1(rs7372209,C>T)及miR-612(rs12803915,G>A)多态性是否与肺癌遗传易感性相关,为本地区人群肺癌的防治提供理论依据。方法:采用病例-对照的研究方法,征得符合纳入标准的研究对象同意后,对其进行问卷调查并采集外周静脉血,提取DNA,采用SNaPshot技术进行基因分型,利用卡方检验、Logistic回归分析等统计学方法分析两位点多态性与肺癌发生的关联强度。结果:本次调查共纳入病例组142名,对照组211名,两组年龄、性别及肿瘤家族史构成无差异(P=0.258、0.143、0.688),病例组的吸烟率和饮酒率均显著高于对照组(P=0.002、0.023);校正混杂因素后,rs7372209位点突变等位基因T携带者(即CT和TT基因型)较携带野生基因型CC者的肺癌发生风险降低42%(OR=0.58,95%CI=0.37~0.90,P=0.016),并且这种保护作用关联性在不吸烟人群(OR=0.50,95%CI=0.26~0.96,P=0.038)及不饮酒人群(OR=0.52,95%CI=0.31~0.86,P=0.011)中更为显著。结论:miR26a-1 rs7372209位点T等位基因降低了海南地区人群,尤其是非吸烟和非饮酒人群的肺癌发生风险。

miR26a靶向EZH2抑制肝癌HepG2细胞的增殖活性

目的探讨mi R26a靶向EZH2抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性的影响并探讨其可能的分子机制。方法设计合成mi R26a mimic,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和mi R26a mimic组,采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R26a的表达水平,MTT检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因系统检测mi R26a与EZH2的靶向关系,Western blot检测各组细胞中EZH2蛋白的表达。结果 MTT分析及流式细胞术的检测证实过表达mi R26a能够抑制肝癌细胞的增殖效应,促进肝癌细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因系统以及Western blot的结果均证实mi R26a能够显著下调EZH2在蛋白水平的表达。结论 mi R26a能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系。

内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD⁃L1表达

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa⁃mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT⁃qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R⁃like endoplas⁃mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT⁃qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体⁃1配体(programmed death receptor ligand 1,PD⁃L1)表达变化。结果HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR⁃26a⁃5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR⁃26a⁃5p的靶基因,miR⁃26a⁃5p升高巨噬细胞PD⁃L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR⁃26a⁃5p和PD⁃L1表达上升,PTEN表达下降,p⁃AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD⁃L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路及PD⁃L1的表达。

circRNA_0051079通过靶向miR⁃26a⁃5p/PTEN轴诱导视网膜神经变性的分子机制

目的探讨circ_0051079对缺血/再灌注(I/R)损伤诱导的视网膜神经变性的影响及机制。方法从C57BL/6J乳鼠眼球中分离视网膜神经节细胞(RGC),随机分为对照组、siRNA组(转染阴性siRNA)、si_circ_0051079组(转染si⁃circ⁃0051079干扰RNA)、模拟物对照组(转染Scr mimic)、miR⁃26a⁃5p组(转染miR⁃26a⁃5p mimic)、miR⁃26a⁃5p+vector组(转染pcDNA 3.1)、miR⁃26a⁃5p+PTEN组(转染pcDNA 3.1⁃PTEN),分别在正常、缺氧(体积分数1%O_(2)暴露)或氧化应激(50μmol·L^(-1) H_(2) O_(2)暴露)条件下培养24 h,进行RT⁃qPCR、CCK⁃8、TUNEL、RNA免疫沉淀(RIP)等检测。于15只C57BL/6小鼠左眼中建立I/R损伤模型,对侧眼保持正常眼压作为对照,I/R损伤后0 d、3 d和7 d各取5只小鼠收集视网膜检测circ_0051079表达。另取20只C57BL/6小鼠分为正常对照组(用针头插入左眼前房但不升高眼压)、I/R组(左眼I/R损伤处理)、I/R+对照shRNA组(左眼注射无序shRNA并建立I/R损伤模型)、I/R+circ_0051079 shRNA组(左眼注射circ_0051079 shR⁃NA并建立I/R损伤模型)。I/R损伤后7 d,取视网膜进行蛋白免疫荧光染色。收集2020年11月至2021年3月急性闭角型青光眼和白内障患者的房水样本各20例,进行RT⁃qPCR测定。结果缺氧或氧化应激条件下培养的RGC中circ_0051079表达量较正常条件下培养的RGC增加(均为P<0.05)。在缺氧或氧化应激条件下培养,si_circ_0051079组RGC细胞活力均较siRNA组增加,RGC凋亡细胞数均减少(均为P<0.05)。荧光素酶报告基因分析和RIP检测结果表明,circ_0051079可以通过调节miR⁃26a⁃3p/PTEN信号转导进而影响RGC功能。动物实验中,I/R损伤可致视网膜组织中circ_0051079表达量升高(P<0.05)。与正常对照组(1.00±0.07)相比,I/R+circ_0051079 shRNA组小鼠视网膜中circ_0051079表达水平(0.37±0.04)下降(P<0.05),同时I/R诱导的视网膜神经变性减轻。临床研究中,与白内障患者房水样本相比,青光眼患者房水样本中circ_0051079和PTEN mRNA表达增加,miR⁃26a⁃3p表达降低(均为P<0.001)。结论circ_0051079可能是缺血性视网膜病变诊断和治疗的潜在靶点。

幽门螺杆菌相关胃疾病中miR⁃26a、COX⁃2的表达水平及临床意义

目的探究幽门螺杆菌相关性胃部疾病中miR⁃26a、环氧化酶-2(COX⁃2)的表达以及相关的临床意义。方法选取武汉市黄陂区人民医院2017年1月至2018年6月经病理组织证实为胃癌、萎缩性胃炎、浅表性胃炎的患者,收集患者胃部组织标本,按照病理类型不同分为胃癌组(46例)、萎缩性胃炎组(37例)、浅表性胃炎组(41例),采用免疫组织化学法测定胃部组织标本中miR⁃26a、COX⁃2的表达,选择吉姆萨染色法判断患者是否感染Hp,分析Hp相关胃部疾病miR⁃26a、COX⁃2表达的意义及相关性,并探讨胃癌组织miR⁃26a、COX⁃2表达与病理特征的相关性。结果三组幽门螺杆菌感染阳性率情况对比,胃癌组>萎缩性胃炎组>浅表性胃炎组,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组和萎缩性胃炎组miR⁃26a与COX⁃2表达水平具有相关性(P<0.05)。而浅表性胃炎组miR⁃26a与COX⁃2表达水平无相关性(P>0.05)。胃癌组和萎缩性胃炎组分析结果提示,幽门螺杆菌感染与miR⁃26a、COX⁃2表达水平均有相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。而浅表性胃炎组幽门螺杆菌表达与miR⁃26a、COX⁃2表达则无相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。在胃癌组患者中,miR⁃26a、COX⁃2表达水平与胃癌转移、浸润深度、TNM分期有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论幽门螺杆菌相关胃疾病中miR⁃26a、COX⁃2的表达水平有差异,幽门螺杆菌可能通过调节miR⁃26a、COX⁃2的表达影响相关胃炎及胃癌的进展。