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盐穗木miR397a增强转基因拟南芥的低温耐性
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作者 魏冉 张慧珍 +3 位作者 陈方圆 赵丽娟 李文辉 曾幼玲 《新疆大学学报(自然科学版)(中英文)》 CAS 2023年第1期87-94,共8页
盐穗木(Halostachys caspica)是耐盐性极强的苋科藜属盐生植物.miRNA是长度为21∼24 nt的内源性非编码小RNA,通常在转录后水平负调控靶基因的表达介导多种生物学过程.从盐穗木高盐胁迫下根的小RNA文库和转录组数据中,克隆盐穗木miR397a(... 盐穗木(Halostachys caspica)是耐盐性极强的苋科藜属盐生植物.miRNA是长度为21∼24 nt的内源性非编码小RNA,通常在转录后水平负调控靶基因的表达介导多种生物学过程.从盐穗木高盐胁迫下根的小RNA文库和转录组数据中,克隆盐穗木miR397a(HcmiR397a)前体序列和漆酶HcLACs(Laccase,LAC)为预测的靶基因.通过实验的方法鉴定HcmiR397a与HcLACs的靶向关系及HcmiR397a在多种非生物胁迫下的表达和HcmiR397a的转基因拟南芥在低温胁迫下的功能.研究结果表明:(1)烟草瞬时表达体系和5’RLM-RACE技术确定HcmiR397a与HcLAC17之间存在靶向切割,具体的切割位点位于HcmiR397a的第10∼11碱基处;(2)qRT-PCR检测的结果显示盐、干旱和低温胁迫下,盐穗木同化枝HcmiR397a受到显著诱导;(3)异源表达HcmiR397a的转基因拟南芥表现出较强的低温耐性. 展开更多
关键词 盐穗木mir397a(Hcmir397a) 转基因拟南芥 低温耐性
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红花miR397a基因表达及对靶基因LAC2的调控作用 被引量:3
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作者 董园园 刘秀明 +2 位作者 姚娜 赵利旦 李海燕 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第7期173-180,共8页
【目的】研究红花miR397a前体基因及成熟基因在红花不同组织中的表达水平,并对miR397a基因序列、靶基因及基因功能进行分析,为深入研究红花抗逆机制提供参考。【方法】提取红花籽粒、花瓣、茎、根、叶片等5个组织材料的总RNA,使用荧光定... 【目的】研究红花miR397a前体基因及成熟基因在红花不同组织中的表达水平,并对miR397a基因序列、靶基因及基因功能进行分析,为深入研究红花抗逆机制提供参考。【方法】提取红花籽粒、花瓣、茎、根、叶片等5个组织材料的总RNA,使用荧光定量PCR鉴定miR397a在不同组织中的表达水平;利用生物信息学方法分析红花miR397a基因序列,用原生质体转化方法验证红花miR397a调控的靶基因LAC2,并利用转基因拟南芥表型研究miR397a基因的功能。【结果】miR397a前体基因和成熟基因均能在红花不同组织中表达,且均以叶片组织中的表达量最高,分别是籽粒组织的2.5与1.9倍,差异达极显著水平;miR397a序列在不同物种间高度保守,序列中仅存在1-2个碱基的错配或缺失;miR397a对LAC2基因有调控作用,miR397a的过表达可引起LAC2表达水平降低,红花miR397a表达引起植物对NaCl的敏感性增加。【结论】红花miR397a在叶片组织中的表达量最高,基因序列保守,且红花miR397a表达可增强植物对NaCl的敏感性。 展开更多
关键词 红花 mir397a LAC2 转录后调控
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毛竹漆酶基因PeLAC的克隆与表达分析 被引量:10
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作者 李利超 孙化雨 +3 位作者 娄永峰 杨意宏 赵韩生 高志民 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期252-259,共8页
漆酶(LAC)对植物生长发育具有重要作用。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis(Carr.)Lehaie)为实验材料,克隆获得毛竹漆酶基因PeLAC的cDNA和基因组序列,长度分别为1692 bp和2785 bp。该基因包含5个内含子和6个外显子;PeLAC蛋白编码563个... 漆酶(LAC)对植物生长发育具有重要作用。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis(Carr.)Lehaie)为实验材料,克隆获得毛竹漆酶基因PeLAC的cDNA和基因组序列,长度分别为1692 bp和2785 bp。该基因包含5个内含子和6个外显子;PeLAC蛋白编码563个氨基酸,推测的分子质量和等电点分别为62.3 k D和9.056。系统进化分析表明,PeLAC与其它植物的漆酶具有较高的一致性。经预测PeLAC基因编码序列中含有miR397的靶点,利用RLM-5'RACE技术证明miR397对PeLAC能够准确切割,位点位于靶序列的第10~11位碱基之间。组织特异性分析表明,PeLAC基因在茎中表达丰度最高,根中次之,叶鞘中较少,叶片中几乎未检测到表达;随着笋高度的增加,PeLAC表达丰度上升,生长至15 cm时达到最大值,30 cm时又有所下降;而miR397的表达与PeLAC相反。本研究同时克隆了PeLAC基因上游启动子序列PeLACp,其包含ABRE、MBS等多种与逆境胁迫相关的响应元件。利用ABA(100μmol/L)和NaCl(400 mmol/L)溶液处理可明显诱导PeLAC在毛竹根中表达,而GA3(100μmol/L)处理则对其表达具有抑制作用。 展开更多
关键词 毛竹 漆酶基因 miR397 表达分析
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陆地棉miR397b的生化功能验证 被引量:3
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作者 丁妍 王燕美 刘进元 《上海农业学报》 CSCD 2017年第1期10-14,共5页
植物中的漆酶(LAC)作为蓝铜氧化酶家族的一个分支,可以聚合木质素单体形成木质素。拟南芥、番茄中miR397b可以调控LAC蛋白家族的表达,但验证棉花中miR397b生化功能的相关报道目前尚无。选取开花后25 d的陆地棉纤维材料,通过RLM-5'R... 植物中的漆酶(LAC)作为蓝铜氧化酶家族的一个分支,可以聚合木质素单体形成木质素。拟南芥、番茄中miR397b可以调控LAC蛋白家族的表达,但验证棉花中miR397b生化功能的相关报道目前尚无。选取开花后25 d的陆地棉纤维材料,通过RLM-5'RACE试验,验证了对GhLAC4 mRNA的切割发生在miR397b和GhLAC4的互补区域,即证明了GhLAC4是miR397b的靶基因。本研究预示着GhmiR397b可能参与棉花纤维中木质素的形成过程,为研究GhLAC4在棉花纤维发育过程中的调控作用提供了基础。 展开更多
关键词 陆地棉 纤维发育 miR397b GhLAC4 靶基因 生化功能 降解
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龙眼miR397家族成员分子特性及其在体胚发生早期的表达分析 被引量:2
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作者 徐小萍 廖琪 +3 位作者 陈旭 陈晓慧 林玉玲 赖钟雄 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期567-577,共11页
【目的】探讨龙眼miR397家族成员的分子特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】以‘红核子’龙眼胚性愈伤组织为材料,通过对龙眼miR397前体序列二级结构分析、进化树构建、靶基因预测与裂解位点验证、以及龙眼miR397a在龙眼体... 【目的】探讨龙眼miR397家族成员的分子特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】以‘红核子’龙眼胚性愈伤组织为材料,通过对龙眼miR397前体序列二级结构分析、进化树构建、靶基因预测与裂解位点验证、以及龙眼miR397a在龙眼体胚发育早期和不同激素浓度处理下的表达规律进行分析。【结果】龙眼miR397前体序列5端臂上可生成两个序列高度重合的成熟体序列dlo-miR397a和dlo-miR397,二者仅有5端两个碱基TC之间的差异,前体能形成稳定的茎环结构;进化树分析发现龙眼miR397前体与桃、可可、脐橙等亲缘关系较近,处于同一分支,龙眼miR397与拟南芥、甜橙、葡萄等亲缘关系较近,处于较为保守的同一分支,miR397家族成员较前体序列在进化上更为保守。靶基因预测表明龙眼miR397家族主要靶向调控漆酶基因家族和一条姐妹染色单体粘连蛋白(dlo_039206.1)。裂解位点验证发现靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的裂解位点,但位于预测区间外。miR397a在体胚发生过程中对于靶基因姐妹染色单体粘连蛋白的调控模式在0~3 d较为一致,均为下调表达,6~12 d为显著上调表达,且二者呈典型的负调控关系。龙眼miR397a在不同浓度2,4-D与GA3激素处理下均出现下调表达趋势,而靶基因姐妹染色单体粘连蛋白则在激素处理下的表达趋势并不明显,可能由于靶向裂解位点在预测区外所致。【结论】龙眼miR397a可能在龙眼体胚发生早期的6~12 d,通过靶向调控姐妹染色单体粘连蛋白影响龙眼体胚发生早期形态建成。龙眼miR397家族在进化上较为保守,其靶基因主要靶向调控龙眼漆酶家族和姐妹染色单体粘连蛋白。龙眼miR397a在不同浓度2,4-D与GA3激素处理下均出现下调表达趋势,表明其在龙眼体胚发生早期可能通过激素信号传导参与龙眼体胚发生早期形态建成。 展开更多
关键词 龙眼 miR397 体细胞胚胎发生 靶基因 实时荧光定量PCR
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miR397调控植物生长发育和胁迫响应的分子机制 被引量:3
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作者 袁慧 曾超珍 +2 位作者 董旭杰 严明理 刘志祥 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期583-592,共10页
miR397是植物中保守的miRNA之一,在不同植物中miR397家族大多由1~3个成员组成。通过调控漆酶基因等miR397广泛参与调控植物生长发育和胁迫响应,从而影响植物种子产量、果实品质等重要经济性状。因此,miR397作为分子育种的重要靶标在植... miR397是植物中保守的miRNA之一,在不同植物中miR397家族大多由1~3个成员组成。通过调控漆酶基因等miR397广泛参与调控植物生长发育和胁迫响应,从而影响植物种子产量、果实品质等重要经济性状。因此,miR397作为分子育种的重要靶标在植物遗传改良中具有很大的应用潜力。本文对miR397在植物中的分布、miR397靶基因的鉴定、miR397调控植物生长发育和胁迫应答的分子机制进行了评述,并提出了仍有待解决的问题,以期为miR397在植物遗传改良中的应用提供参考。 展开更多
关键词 miR397 靶基因 漆酶 木质素 胁迫响应 生长发育
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Inhibition of miR397 by STTM technology to increase sweetpotato resistance to SPVD
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作者 LI Chen LIU Xuan-xuan +11 位作者 ABOUELNASR Hesham MOHAMED HAMED Arisha KOU Meng TANG Wei YAN Hui WANG Xin WANG Xiao-xiao ZHANG Yun-gang LIU Ya-ju GAO Run-fei MA Meng LI Qiang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2022年第10期2865-2875,共11页
As a critical food crop,sweetpotato(Ipomoea batatas(L.)Lam.)is widely planted all over the world,but it is deeply affected by Sweetpotato Virus Disease(SPVD).The present study utilized short tandem target mimic(STTM)t... As a critical food crop,sweetpotato(Ipomoea batatas(L.)Lam.)is widely planted all over the world,but it is deeply affected by Sweetpotato Virus Disease(SPVD).The present study utilized short tandem target mimic(STTM)technology to effectively up-regulate the expression of laccase(Ib LACs)by successfully inhibiting the expression of mi R397.The upstream genes in the lignin synthesis pathway were widely up-regulated by feedback regulation,including phenylalanine ammonialyase(PAL),4-coumarate-Co Aligase(4 CL),hydroxycinnamoyl Co A:shikimatetransferase(HTC),caffeicacid O-methyltransferase(COMT),and cinnamyl alcohol dehydrogenase(CAD).Meanwhile,the activities of PAL and LAC increased significantly,finally leading to increased lignin content.Lignin deposition in the cell wall increased the physical defence ability of transgenic sweetpotato plants,reduced the accumulation of SPVD transmitted by Bemisia tabaci(Gennadius),and promoted healthy sweetpotato growth.The results provide new insights for disease resistance breeding and green production of sweetpotato. 展开更多
关键词 SWEETPOTATO miR397 STTM SPVD lignin content
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棉花miR397-LAC4模块调控棉铃虫抗性研究
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作者 王志安 魏太平 +3 位作者 罗晓丽 肖娟丽 刘圆 张安红 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1629-1636,共8页
miRNA(microRNA)通过调控其靶标基因在植物的生长、发育和抗逆过程中扮演着重要的角色。该研究采用分子生物学和生物化学等方法,探讨棉花miR397-LAC 4参与植株木质素生物合成和对棉铃虫抗性响应机制。结果发现:(1)棉花miR397(ghr-miR397... miRNA(microRNA)通过调控其靶标基因在植物的生长、发育和抗逆过程中扮演着重要的角色。该研究采用分子生物学和生物化学等方法,探讨棉花miR397-LAC 4参与植株木质素生物合成和对棉铃虫抗性响应机制。结果发现:(1)棉花miR397(ghr-miR397)在转录后调控漆酶基因(GhLAC 4)的表达,GhLAC 4属于蓝铜氧化酶家族,通过调控木质素合成,抵御棉铃虫入侵棉花。(2)GUS报告基因融合表达和酶活性测定表明,ghr-miR397在转录后切割靶标基因GhLAC 4抑制其表达。(3)利用VIGS(virus induced gene silencing)技术在棉花中沉默和过表达ghr-miR397,棉铃虫抗性检测分析表明,沉默miR397表达会增加棉花对棉铃虫的抗性,但过表达ghr-miR397则会降低棉花的抗性。(4)选择性和非选择性棉铃虫实验分析、组织化学染色和木质素含量测定表明,沉默GhLAC 4表达会减少木质素的积累,增加棉花对棉铃虫的敏感性。研究表明,ghr-miR397-GhLAC 4模块共同微调棉花木质素合成来参与棉花抗虫性调控,同时也为棉花抗虫育种提供了新思路。 展开更多
关键词 miR397 GhLAC4 木质素 棉铃虫
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