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转基因丹参中aSm-miR858过表达致酚酸类活性成分含量显著下降 被引量:2
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作者 陈芳 冯明月 王健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1235-1244,共10页
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)体内水溶性酚酸类物质具有显著的药理活性并已成为目前研究热点。植物体内microRNAs(miRNAs)作为一类非编码小分子RNA,广泛参与生长、发育、信号转导及环境胁迫的调控,但miRNAs参与植物体内次生代谢调... 丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)体内水溶性酚酸类物质具有显著的药理活性并已成为目前研究热点。植物体内microRNAs(miRNAs)作为一类非编码小分子RNA,广泛参与生长、发育、信号转导及环境胁迫的调控,但miRNAs参与植物体内次生代谢调控研究的报道较少。本研究前期通过Small RNA高通量测序获得的1条丹参miR858(命名为Sm-miR858)序列为基础,通过overlapping PCR技术构建了人工Sm-miR858前体(aSm-miR858)植物过表达载体(35S:aSm-miR858),并对丹参进行转化,以分析丹参体内Sm-miR858过表达后对酚酸类活性成分合成的影响,进而探索Sm-miR858在丹参体内的生物学功能。实时定量PCR和RNA印迹结果显示,在各阳性转基因株系中,Sm-miR858均呈现不同程度过表达。同时,Sm-miR858的潜在靶标基因Sm-PAP1表达水平呈现相应不同程度的显著下调,且转化株系中酚酸类活性成分含量均低于同期的野生型丹参。进一步检测上述各丹参植株中酚酸类活性成分代谢途径相关酶基因表达水平。结果显示,酚酸类次生代谢途径中关键酶基因表达水平均呈现不同程度的显著下调。结果说明,丹参中可能存在SmmiR858通过负调控SmPAP1的表达,来控制酚酸代谢途径关键酶基因的表达,进而影响酚酸类物质合成的调控模式,其具体精密调控机制正在进一步研究中。 展开更多
关键词 丹参 mir858 Sm-PAP1 酚酸类活性成分
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桑树miR858及MYB转录因子基因在桑椹花青素合成过程中的表达分析 被引量:4
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作者 肖竞淇 陈怡 +6 位作者 谢岩 韩子琦 褚升瑞 董银星 邢炳楠 刘善正 孙志超 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期501-509,共9页
为探究桑树miR858及其靶向MYB转录因子基因调控桑椹花青素合成的分子机制,利用生物信息学、5′-RACE及qRT-PCR技术进行分析,使用在线网站预测,发现在桑树MYB基因家族中存在9个miR858靶基因,均为R2R3-MYB型基因,其中6个在降解组测序结果... 为探究桑树miR858及其靶向MYB转录因子基因调控桑椹花青素合成的分子机制,利用生物信息学、5′-RACE及qRT-PCR技术进行分析,使用在线网站预测,发现在桑树MYB基因家族中存在9个miR858靶基因,均为R2R3-MYB型基因,其中6个在降解组测序结果中能够被miR858靶向切割;5′-RACE技术对MYB5-1进行验证,发现切割位点位于与miRNA互补序列的第11至第12位碱基之间。对靶基因互补区进行分析发现miR858靶向区域为R3结构域中的T区,该区域核苷酸序列在第3、6、12、15、18位存在差异,但氨基酸序列一致,其切割位点具有保守性。运用Pearson对MYB与花青素合成关键基因表达进行相关性分析,发现MYB与花青素合成关键基因存在显著相关。qRT-PCR分析结果表明,miR858在黑、白桑椹的3个发育阶段表达上升,而MYB5-1基因在黑、白桑椹中的表达水平均呈现下降的趋势,二者呈现相反的表达趋势。由此推测,miR858可能通过抑制MYB5-1的表达从而调控桑椹花青素合成。本研究确定了桑树中MYB5-1为miR858作用的靶基因之一,分析了MYB5-1与花青素合成关键基因的相关性,从分子角度探究桑树miR858及靶基因MYB在桑椹花青素合成过程中的调控机制,为进一步探索桑椹花青素合成以及代谢过程提供相关数据支持。 展开更多
关键词 桑椹 mir858 花青素 MYB
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丹参体内Sm-miR858对R2R3-MYB转录因子SmPAP1进行靶向负调控作用研究 被引量:1
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作者 陈芳 佘婷婷 +4 位作者 张琳 高浩天 李国梁 王健 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期522-530,共9页
MicroRNAs(miRNAs)是一类对基因表达进行负调控的非编码小分子RNA。通过前期对丹参miRNAs的高通量测序得到了一个miR858成熟序列,命名为Sm-miR858。序列比对显示,Sm-miR858与其它植物中已鉴定的miR858序列高度保守;Small RNA Northern b... MicroRNAs(miRNAs)是一类对基因表达进行负调控的非编码小分子RNA。通过前期对丹参miRNAs的高通量测序得到了一个miR858成熟序列,命名为Sm-miR858。序列比对显示,Sm-miR858与其它植物中已鉴定的miR858序列高度保守;Small RNA Northern blotting结果显示Sm-miR858在丹参根、茎和叶组织中均有表达,叶中表达水平相对较高。为了探究Sm-miR858在丹参体内的功能,首先利用在线生物软件对Sm-miR858的靶标基因进行预测,psRNATarget分析结果显示,Sm-miR858的潜在靶标基因共有13个,其中一个靶标基因SmPAP1作为一个重要的转录因子参与丹参酚酸类活性物质的代谢调控。为了验证Sm-miR858对SmPAP1的靶向作用,采用Real-time quantitative PCR依次对烟草瞬时表达体系和丹参组织器官中的Sm-miR858与SmPAP1之间共表达相关性进行分析与实验验证。Real-time qPCR结果显示,在丹参组织中SmPAP1与Sm-miR858共表达水平存在显著的负相关性。进而分别构建Sm-miR858和SmPAP1过表达植物载体,并在烟草叶片中进行瞬时共表达研究。结果显示,与对照相比,Sm-miR858过表达会导致SmPAP1的mRNA水平显著下降,说明在丹参体内Sm-miR858的确对SmPAP1基因表达进行靶向负调控。研究结果为阐明Sm-miR858在丹参体内酚酸类活性物质代谢途径调控作用奠定坚实的基础。 展开更多
关键词 Sm-mir858 SmPAP1 丹参 靶标基因
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彩色马铃薯中miR858表达及其花青素含量变化分析 被引量:3
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作者 范菠菠 刘旭婷 +4 位作者 陈燕福 武小娟 赵娜勤 于卓 马艳红 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期5563-5569,共7页
microRNA是植物体内普遍存在的非编码小RNA,广泛参与植物生长发育、代谢调节及多种逆境胁迫响应。研究表明miR858可能是参与植物花青素合成调控的miRNA之一,但其在彩色马铃薯中调控花青素的研究尚未见有报道。本研究对彩色马铃薯不同部... microRNA是植物体内普遍存在的非编码小RNA,广泛参与植物生长发育、代谢调节及多种逆境胁迫响应。研究表明miR858可能是参与植物花青素合成调控的miRNA之一,但其在彩色马铃薯中调控花青素的研究尚未见有报道。本研究对彩色马铃薯不同部位中miR858的表达情况进行研究,同时对其花青素进行测定,以明确miR858与花青素合成间的调控关系。结果表明miR858在3个彩色马铃薯品种不同组织中均有表达,但不同组织的花青素含量与miR858的表达存在品种差异性,其中紫色马铃薯品种‘黑金刚’、‘华颂66号’中miR858的表达情况和花青素的含量呈正相关,红色马铃薯品种‘红美’miR858的表达情况和花青素的含量呈负相关,这可能是马铃薯的品种特异性决定了其花青素调控中基因表达的差异性。 展开更多
关键词 彩色马铃薯 mir858 花青素 实时荧光定量PCR
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Repress,on of MYBL2 by Both microRNA858a and HY5 Leads to the Activation of Anthocyanin Biosynthetic Pathway in Arabidopsis 被引量:30
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作者 Yulong Wang Yiqing Wang +1 位作者 Zhaoqing Song Huiyong Zhang 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2016年第10期1395-1405,共11页
Extensive studies in various plants show that the anthocyanin biosynthetic process is affected by environmental factors and regulated by many transcription factors through sophisticated regulatory networks. However, i... Extensive studies in various plants show that the anthocyanin biosynthetic process is affected by environmental factors and regulated by many transcription factors through sophisticated regulatory networks. However, it remains largely unclear about the roles of microRNA in this process. Here, we demonstrate that miR858a is a positive regulator of anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis seedlings. Overexpression of miR858a enhances the accumulation of anthocyanins, whereas the reduced miR858a activity results in low levels of anthocyanins in STTM858 transgenic plants. We found that miR858a inhibits the expression of MYBL2, a key negative regulator of anthocyanin biosynthesis, by translational repression. In addition, ELONGATED HYPOCOTYL 5 (HYS) was shown to directly bind the MYBL2 promoter and represses its expression via specific histone modifications. Interestingly, we found that miR858a exhibits light- responsive expression in an HY5-dependent manner. Together, these results delineate the HY5- MIR858a-MYBL2 loop as a cellular mechanism for modulating anthocyanin biosynthesis, suggesting that integration of transcriptional and posttranscriptional regulation is critical for governing proper anthocyanin accumulation in response to light and other environmental factors. 展开更多
关键词 ANTHOCYANIN MYBL2 translational repression mir858a HY5
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Structural and Functional Analyses of Hub Micro RNAs in An Integrated Gene Regulatory Network of Arabidopsis 被引量:1
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作者 Zhaoxu Gao Jun Li +7 位作者 Li Li Yanzhi Yang Jian Li Chunxiang Fu Danmeng Zhu Hang He Huaqing Cai Lei Li 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期747-764,共18页
MicroRNAs(miRNAs)are trans-acting small regulatory RNAs that work coordinately with transcription factors(TFs)to shape the repertoire of cellular m RNAs available for translation.Despite our growing knowledge of indiv... MicroRNAs(miRNAs)are trans-acting small regulatory RNAs that work coordinately with transcription factors(TFs)to shape the repertoire of cellular m RNAs available for translation.Despite our growing knowledge of individual plant miRNAs,their global roles in gene regulatory networks remain mostly unassessed.Based on interactions obtained from public databases and curated from the literature,we reconstructed an integrated miRNA network in Arabidopsis that includes 66 core TFs,318 miRNAs,and 1712 downstream genes.We found that miRNAs occupy distinct niches and enrich miRNA-containing feed-forward loops(FFLs),particularly those with miRNAs as intermediate nodes.Further analyses revealed that miRNA-containing FFLs coordinate TFs located in different hierarchical layers and that intertwined miRNA-containing FFLs are associated with party and date miRNA hubs.Using the date hub MIR858A as an example,we performed detailed molecular and genetic analyses of three interconnected miRNA-containing FFLs.These analyses revealed individual functions of the selected miRNA-containing FFLs and elucidated how the date hub miRNA fulfills multiple regulatory roles.Collectively,our findings highlight the prevalence and importance of miRNA-containing FFLs,and provide new insights into the design principles and control logics of miRNA regulatory networks governing gene expression programs in plants. 展开更多
关键词 MicroRNA Transcription factor Feed-forward loop Date hub mir858A
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