miR9-2在免疫细胞发育功能中的初步研究

该研究利用CRISPR/Cas9技术构建miR9-2(micro RNA9-2)敲除小鼠,并通过流式细胞术初步鉴定miR9-2对B细胞和T细胞的影响。通过设计成熟miR9-2(mature miR9-2)序列左右两侧sgRNA1和sgRNA2,并连接pX459线性化载体。将体外转录后的单链sgRNA1、sgRNA2以及Cas9蛋白共同注射到受精卵的雄原核中,以获得miR9-2敲除小鼠。通过流式分析,观察WT(Wild-type)小鼠和杂合子(miR9-2^(+/-))小鼠相关免疫细胞的百分比和细胞数的变化情况。该研究成功构建miR9-2敲除小鼠杂合子模型。流式数据分析表明,与WT小鼠相比,杂合子小鼠脾脏中的总B细胞、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞数均显著下降;与WT小鼠相比,杂合子小鼠骨髓中总B细胞数百分比和细胞数均显著下降;未成熟B(immature B)细胞、祖前B(pro-pre B)细胞、前B(pre B)细胞的百分比和其对应细胞数均显著下降,而成熟B(mature B)细胞的百分比显著上升,其细胞数则变化不大。骨髓中,miR9-2^(+/-)小鼠的CD4^(+)和CD8^(+)T细胞百分比上升,而其对应细胞数则变化不大。在胸腺中,杂合子小鼠的DN(double negative)细胞百分比上升,其细胞数显著下降;DP(double positive)细胞百分比和细胞数均显著下降;CD4^(+)和CD8^(+)T细胞百分比均显著上升,其细胞数均显著下降。该研究表明,miR9-2的敲除对骨髓中B细胞的发育、胸腺中T细胞的发育以及脾脏中B细胞和T细胞的成熟发育造成了一定程度的影响。