Mfn2、miRNA-101调控转化生长因子-β1参与肝泡型包虫病肝纤维化的研究

目的 探讨Mfn2、miRNA-101通过TGF-β1调控肝泡型包虫病肝纤维化的潜在作用。方法 收集2020年7月-2020年10月青海省人民医院确诊的20例肝泡型包虫病患者术后切除的肝组织,采集距肝脏病灶边缘2 cm以外正常肝组织、距肝脏病灶边缘2 cm以内肝组织。行HE、Masson染色,将不同标本纤维化分级,通过免疫组化、RT-qPCR检测Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的表达。结果 Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的差异表达均具有统计学意义(P<0.05)。Mfn2与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),miRNA-101与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),TGF-β1与α-SMA表达量呈正相关(P<0.05),Mfn2与miRNA-101表达量无显著相关性(P>0.05)。结论 Mfn2、miRNA-101可能抑制肝泡型包虫病肝纤维化,并且可能通过抑制TGF-β1发挥抗纤维化作用。

miRNA-101对激素非依赖型前列腺癌细胞系LNCaP EZH2表达的影响

目的:探讨microRNA-101(miRNA-101)对激素非依赖型前列腺癌细胞系LNCa P的果蝇zeste基因增强子的人类同源基因(EZH2)表达的影响。方法:实验分为空白组、阴性对照组和转染组。转染组通过基因重组技术构建miRNA-101表达载体,应用脂质体将其转染到LNCa P细胞中,荧光显微镜检测转染效率。3组细胞通过qRT-PCR检测细胞中EZH2 mRNA的表达。阴性对照组和转染组用Western印迹检测EZH2蛋白的水平。结果:转染组细胞培养24 h后,70%以上的细胞内出现绿色荧光基因信号。阴性对照组和转染组细胞培养72 h后,转染组细胞miRNA-101表达增加明显(P<0.01);转染组EZH2 mRNA的表达水平(0.01±0.10)显著低于空白组(0.95±0.40)和阴性对照组(0.86±0.30)(P均<0.01)。阴性对照组EZH2蛋白表达水平随培养时间延长而增加,但转染组EZH2蛋白表达水平随培养时间延长则下降。结论:miRNA-101可以抑制LNCa P细胞的EZH2的表达,具有成为前列腺癌生物治疗靶点的可能。

miRNA-101通过下调COX-2的表达影响肺癌细胞的生物学功能

目的:探讨miRNA-101(miR-101)在肺癌组织和细胞中的表达及其对人肺癌细胞增殖、克隆形成和成瘤能力的影响。方法:采用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR技术分别检测10例患者肺癌组织及相应癌旁组织、人肺癌细胞A549和NCI-H26及正常人胚肺成纤维细胞MRC-5中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)及miR-101的表达。A549和NCIH26细胞分别转染miR-NC和miR-101构建过表达miR-101的细胞系及其对照,Western blotting、CCK-8和克隆形成实验分别检测过表达miR-101对A549、NCI-H26细胞中COX-2的表达、细胞增殖和克隆形成能力的影响。用A549、A549/NC、A549/101细胞在BALB/c裸鼠皮下构建移植瘤模型,观察过表达miR-101对A549细胞小鼠移植瘤生长的影响。结果:在肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中,COX-2的表达明显高于癌旁组织(t=20.03,P=0.001)和MRC-5细胞(t=14.59,P=0.012),而miR-101的表达则相反(组织:t=18.33,P=0.002;细胞:t=28.95,P=0.000)。成功构建过表达miR-101的A549/101、NCI-H26/101细胞系,与A549、NCI-H26细胞相比,A549/101(t=26.03,P=0.000)、NCI-H26/101(t=23.29,P<0.01)细胞内COX-2表达量显著降低,A549/101和NCI-H26/101细胞的活力和克隆形成能力也显著降低(均P<0.05)。A549/101细胞小鼠皮下肿瘤的生长速度较A549细胞和A549/NC细胞显著减慢(F=14.81,P=0.003)。结论:肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中miR-101低表达、COX-2高表达,过表达miR-101可以抑制A549、NCI-H26细胞的增殖,其机制可能与下调了COX-2表达有关。

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01)。孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05)。迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01)。结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展。

子痫前期患者胎盘中miRNA-101和内质网蛋白ERp44的表达和意义

目的探讨子痫前期患者胎盘中miRNA-101和内质网蛋白ERp44的表达和意义。方法选取2013年5月~2014年5月入住山东省交通医院分娩的100例产妇的胎盘绒毛组织,随机均分为对照组和子痫前期组,每组各50例。采用RT-PCR法检测各组胎盘组织中miRNA-101的表达情况;Western blot法检测过表达和封闭miRNA-101后,各胎盘组织ERp44的表达情况;采用流式细胞仪检测滋养细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,子痫前期组中miRNA-101的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。在滋养细胞HTR-8/SVneo中过表达miRNA-101后,ERp44的表达显著下调(P<0.05);封闭miRNA-101后,ERp44的表达上调(P<0.05);过表达miRNA-101,细胞凋亡数量减少;封闭miRNA-101,细胞凋亡数量增加。结论子痫前期中,miRNA-101可通过调控内质网蛋白ERp44的表达来调控胎盘滋养细胞的凋亡过程。

miRNA-21/101/125a/195/200b在肝硬化、肝癌中的表达变化

目的观察microRNA(miRNA)-21/101/125a/195/200b在肝硬化、肝癌中的表达变化。方法收集患者肝组织样本,其中血管瘤6份、肝硬化10份,肝癌及癌旁组织14对;除血管瘤外,其余样本均HBsAg阳性。PCR检测各组miR-21、miR-101、miR-125a、miR-195、miR-200b的表达。采用Pearson相关性分析探索miR-101的表达与临床相应指标之间的相关性。结果与对照组相比,肝硬化组血小板(PLT)明显降低,凝血酶原时间(PT)延长、国际标准化比值(INR)升高,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBil)升高;HE染色、Masson染色及网状纤维染色显示符合肝硬化诊断。与肝硬化组相比,肝癌组白细胞(WBC)、PLT均有所升高,PT、INR降低,AST、TBil表达下降;与对照组、肝硬化组相比,肝癌组甲胎蛋白(AFP)表达显著升高,免疫组化染色符合肝癌诊断。PCR检测miRNA的表达,与对照组相比,miR-101、miR-195在肝硬化组中的表达下降;与癌旁组织相比,miR-21在肝癌中的表达升高,miR-101、miR-195的表达则显著降低。miR-125a、miR-200b的表达在各组间无明显变化。Pearson相关性分析发现miR-101与PLT表达水平呈正相关,相关系数为0.375。结论 miR-101在肝硬化、肝癌组织中表达降低,且与血小板水平呈正相关,提示miR-101是慢性肝病的负调控因子。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

miRNA-101调控转化生长因子-β1信号通路参与肝纤维化的研究

目的探讨miRNA-101及转化生长因子(TGF)-β1信号通路在肝纤维化中的作用。方法选取2013年1月～2018年1月新疆医科大学第二附属医院手术切除的20例肝纤维化组织作为研究组,选择20例正常肝脏组织作为对照。采用免疫组化法分别检测肝组织中TGF-β1、平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,采用实时定量PCR(q RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、α-SMA的mRNA及miRNA-101的表达情况,分析TGF-β1、α-SMA及miRNA-101的相关性。结果肝纤维化组织中TGF-β1的mRNA表达水平明显高于正常肝组织(P <0.05),肝纤维化组织中α-SMA的mRNA表达水平与正常肝组织比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。TGF-β1和α-SMA在肝纤维化组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关(r=0.53、0.57,均P <0.05)。TGF-β1和α-SMA的mRNA表达水平呈正相关(r=0.633,P <0.01)。肝纤维化组织miRNA-101水平低于正常肝组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miRNA-101与TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平呈负相关(r=-0.442、-0.327,均P <0.01)。结论 miRNA-101下调可能通过调控TGF-β1而参与肝纤维化。

胃癌患者手术前后miRNA-101、miRNA-21表达水平及其临床意义

目的探讨胃癌患者手术前后血浆miRNA-101、miRNA-21表达水平及其临床意义。方法选取50例行胃癌根治术的胃癌患者为胃癌组,另选取同期健康体检者50例为健康对照组,分别于术前、术后1周及术后1个月检测胃癌患者,体检时检测健康体检者血浆中miRNA-101、miRNA-21表达水平;并比较不同临床特征胃癌患者的血浆miRNA-101、miRNA-21表达水平。结果术前胃癌组患者血浆miRNA-101相对表达量明显低于健康对照组,miRNA-21相对表达量明显高于健康对照组(P﹤0.01)。与术前比较,术后1周及术后1个月胃癌患者血浆miRNA-101相对表达量逐渐增高,血浆miRNA-21相对表达量逐渐降低(P﹤0.05)。不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况的胃癌患者术前血浆miRNA-101、miRNA-21相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论胃癌患者血浆miRNA-101、miRNA-21可作为胃癌潜在的生物标志物,有望成为胃癌诊断、手术疗效评估的新手段。

FAM 19A 4、PAX 1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变早期诊断中的价值

背景与目的:目前有关宫颈病变的DNA甲基化研究较多,但DNA甲基化作为宫颈病变的诊断及分流指标在临床实践中的报道较少。本研究拟探讨FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变进展中早期诊断的价值。方法:收集2020年3月—2022年3月在郑州大学第三附属医院同时行宫颈液基细胞学(thinprep cytologic test,TCT)和HPV检测的患者的宫颈细胞学标本共129例,采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测不同宫颈病变中FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化改变情况,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估3个基因甲基化改变对宫颈病变的诊断价值。本研究经郑州大学第三附属医院伦理委员会批准(伦理审批编号:2023-135-01)。结果:根据病理学检查结果分为4组:未见上皮内病变或恶性细胞(no intraepithelial lesions or malignant lesions,NILM)组(42例)、低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组(28例)、高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组(36例)和鳞癌(squamous cervical cancer,SCC)组(23例)。随宫颈病变级别的增加,FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因甲基化检出率逐步增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。在HSIL组FAM19A4、PAX1、miRNA124-2甲基化检出率分别为81.2%、80.5%和71.8%,在SCC组3种基因甲基化检出率均高达100.0%;细胞学诊断宫颈癌的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.731,诊断灵敏度和特异度分别为65.9%和80.4%;FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因单独诊断HSIL+(HSIL和SCC)时,PAX1甲基化诊断HSIL+的效能最高,AUC为0.925,灵敏度为92.8%,特异度为87.3%;两两联合诊断时,FAM19A4与PAX1联合诊断HSIL+的AUC为0.930,灵敏度为95.7%,特异度为87.1%;FAM19A4与miRNA124-2联合诊断HSIL+,AUC为0.895,灵敏度为97.6%,特异度为85.7%;PAX1联合miRNA124-2诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为95.7%,特异度为89.1%;PAX1、FAM19A4及miRNA124-2基因甲基化联合诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为100.0%,特异度为81.8%。结论:FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化诊断宫颈病变具有较高的灵敏度和特异度,有潜力成为宫颈病变早期诊断的新指标。

MIL-101(Cr)-NH_(2)负载Ag催化4-硝基苯酚加氢研究

通过水热法制备出MIL-101(Cr)-NH_(2),以MIL-101(Cr)-NH_(2)为载体采用浸渍还原法得到Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化剂。通过XRD、N_(2)-吸附脱附曲线和TEM手段对催化剂进行表征。研究了Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化4-硝基苯酚(4-NP)加氢生成4-氨基苯酚(4-AP)的性能。结果表明,3wt%Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)样品的催化加氢性能高于其它样品,仅用4 min可将4-NP催化加氢全部转化为4-AP。因此Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化剂具有较好的催化4-NP加氢性能。

MiRNA-101在结直肠腺瘤及结直肠癌中表达差异的分析

目的检测miRNA-101在结直肠腺瘤及结直肠癌组织中的表达差异并探讨其临床意义。方法收集33例结直肠腺瘤组织(管状绒毛腺瘤8例,管状腺瘤25例)及瘤旁正常组织,31例结直肠癌组织及癌旁正常组织,采用荧光定量PCR技术测定miRNA-101的相对表达量,分析其与年龄、性别、病理类型等之间的关系。结果miRNA-101在腺瘤中的表达高于瘤旁组织(P<0.05),在癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.05),在不同年龄、性别、病理类型及肿瘤部位的相对表达量均无差异,无统计学意义。结论miRNA-101在腺瘤组织中表达升高,在结直肠癌组织中表达降低,提示其在正常结直肠组织到结直肠腺瘤再到结直肠癌的发生发展过程中发挥了重要的调控作用。

CircBACH1调节miR-101-3p/KPNA2轴对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究环状RNA BACH1(circBACH1)靶向微小RNA-101-3p(miR-101-3p)/核转运蛋白α2(KPNA2)轴对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:qRT-PCR法分析OS组织中circBACH1和miR-101-3p表达水平。双荧光素酶检测circBACH1和miR-101-3p及KPNA2和miR-101-3p的靶向关系。在OS细胞MG-63中转染相应质粒记为si-NC组、si-circBACH1组、si-circBACH1+anti-NC组、si-circBACH1+anti-miR-101-3p组、miR-NC组、miR-101-3p mimics组、miR-101-3p mimics+pcDNA组、miR-101-3p mimics+KPNA2组。平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达变化。小鼠移植瘤实验验证circBACH1对OS肿瘤生长及miR-101-3p/KPNA2的影响。结果:在OS组织中,circBACH1表达上调,miR-101-3p表达下调(P<0.05)。抑制circBACH1表达,可显著抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡(P<0.05)。抑制miR-101-3p表达可促进OS细胞增殖与侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.05)。miR-101-3p过表达可下调KPNA2表达,抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡(P<0.05)。KPNA2过表达可以逆转过表达miR-101-3p对OS细胞增殖与侵袭的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果显示,抑制circBACH1表达,移植瘤体积及质量降低,miR-101-3p表达水平升高,KPNA2表达水平降低(P<0.05)。结论:circBACH1在OS组织中高表达,抑制circBACH1表达,可抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡,其与调节miR-101-3p/KPNA2轴有关。

miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

目的 探讨miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛(docetaxel, DTX)耐药的分子机制。方法 构建MCF-7/DTX细胞株,采用qRT-PCR检测MCF-7及MCF-7/DTX细胞株及乳腺癌患者癌组织中miR-101-3p的表达水平;向MCF-7/DTX细胞转染miR-101-3p mimics、siGALNT1、miR-101-3p inhibitor并用qRT-PCR实验评估转染效率;MTT实验用于检测调控miR-101-3p及GALNT1对MCF-7/DTX细胞DTX敏感性的影响;划痕实验用于分析转染后各组细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测调控miR-101-3p及GALNT1后MCF-7/DTX细胞的垂直侵袭能力的改变;流式凋亡实验检测各组细胞在同一浓度DTX处理下的凋亡百分比;western blot实验检测调控miR-101-3p及GALNT1对凋亡关联蛋白及上皮间充质转化标志蛋白表达量的影响。结果 MCF-7/DTX细胞和DTX患者耐药组中miR-101-3p的相对表达量呈异常降低趋势。转染miR-101-3p mimics后,与miR-NC组相比miR-101-3p mimics组DTX敏感性明显升高,迁移和侵袭能力在高水平miR-101-3p下有所降低,同时凋亡百分比显著上升凋亡蛋白表达呈相同趋势,上皮间充质转化过程受到一定抑制。MCF-7/DTX细胞中GALNT1相对表达量较MCF-7细胞明显升高,双荧光素酶实验证实了miR-101-3p与GALNT1的靶向关系并且GALNT1表达量与miR-101-3p呈负相关。回复实验进一步分析GALNT1和miR-101-3p间的关系,低水平miR-101-3p能够逆转敲低GALNT1引起的DTX高敏感性,同时一定程度恢复敲低GALNT1引起的MCF-7/DTX细胞迁移、侵袭、凋亡及EMT的改变。结论 miR-101-3p介导MCF-7/DTX细胞的DTX敏感性可能是通过靶向GALNT1完成的。

何首乌颗粒剂对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及miRNA-101表达的影响

目的研究何首乌对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及双侧海马区mi RNA-101表达的影响,并探讨其作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为4组,每组30只,分别为假手术组、石杉碱甲组、模型组、中药组。除假手术组外,使用化学试剂冈田酸(OA)注射SD大鼠杏仁核部位,形成阿尔茨海默病模型。造模后每组分别予以相应干预(假手术组与模型组均灌等容量生理盐水)。干预21 d结束后,运用Morris水迷宫作为行为学检测方法,评测大鼠学习记忆能力,行为学观察共进行5 d,结束后处死实验大鼠,取双侧海马运用RT-PCR进行mi RNA-101半定量检测。结果经21 d干预后,与模型组相比,中药组与石杉碱甲组的阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力均更强,其差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药组与石杉碱甲组大鼠双侧海马区mi RNA-101的相对表达量增加(P<0.01)。结论何首乌能显著改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,对阿尔茨海默病有一定的治疗作用;通过提高模型大鼠海马区mi RNA-101的含量来改善症状可能是其作用机制之一。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC-101对前列腺癌DU145细胞DNA损伤、迁移和上皮-间质转化的影响

目的:探讨泛素化组蛋白(H2AX)在前列腺癌(PCa)和癌旁良性前列腺组织中的表达及与其PCa患者临床病理参数之间的关系,阐明新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)CUDC-101对PCa的DNA损伤、迁移及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:肿瘤基因组谱(TCGA)数据库和UALCAN数据库检索各种癌症组织中H2AX mRNA的表达情况及其在PCa与正常前列腺组织中的表达差异,分析其表达与PCa患者临床预后的关系;采用免疫组织化学染色法检测在PCa组织和癌旁良性前列腺组织中H2AX蛋白的表达情况,分析H2AX蛋白表达与PCa患者临床病理参数的关系;体外培养DU145细胞,分为对照组、5%FBS组、5%FBS+100μmol·L^(-1)CUDC-101组和5%FBS+200μmol·L^(-1)CUDC-101组,采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测CUDC-101处理前后PCa DU145细胞的细胞划痕面积及迁移细胞数;免疫荧光染色法检测CUDC-101处理后PCa DU145细胞中上皮细胞标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和磷酸化组蛋白γ-H2AX表达情况;Western blotting法检测CUDC-101处理后EMT相关蛋白、γ-H2AX和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达情况。结果:TCGA数据库和UALCAN数据库分析,H2AX mRNA在PCa组织中高表达,并且H2AX低表达组患者的无病生存期(DFS)明显高于H2AX mRNA高表达组(P<0.001);免疫组织化学染色,在PCa组织中H2AX蛋白强阳性表达率高于在癌旁良性前列腺组织(64.34%vs 14.29%),其过表达与PCa的T分期(P=0.001)和世界卫生组织/国际泌尿科病理学会(WHO/ISUP)预后分级分组(P=0.004)有关,但与PCa患者的年龄、Gleason评分、淋巴结转移、神经和脉管浸润无关(P>0.05);免疫荧光染色法检测,与对照组和EMT诱导组比较,CUDC-101处理组E-cadherin和γ-H2AX蛋白的荧光表达增强;细胞划痕实验和Transwell小室实验检测,与对照组比较,CUDC-101处理组DU145细胞愈合面积和迁移细胞数明显下调;Western blotting法检测,与EMT诱导组比较,CUDC-101处理组E-cadherin和γ-H2AX蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),波形蛋白(Vimentin)和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:H2AX蛋白过表达与PCa患者的不良预后密切关联。新型HDACi抑制剂CUDC-101可调控H2AX和AKT的磷酸化,抑制PCa细胞EMT过程。

miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系研究

目的 探究miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法 将膀胱癌细胞分为对照组、下、上调miR-101-3p组,体外培养膀胱癌细胞。采用CCK-8实验来检测膀胱癌细胞增殖能力;通过划痕实验来检测膀胱癌细胞迁移能力;通过Transwell实验来检测膀胱癌细胞侵袭能力;3组细胞分别加入不同浓度的顺铂,观察对细胞的抑制率;Western blot法测定CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量。结果 在24 h、48 h、72 h的细胞增殖率方面,上调miR-101-3p组均低于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组低于下调miR-101-3p组(P<0.05);在24 h、48 h、72 h的细胞迁移数、侵袭数方面,上调miR-101-3p组均少于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组少于下调miR-101-3p组(P<0.05);在CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量方面,上调miR-101-3p组均低于对照组和下调miR-101-3p组(P<0.05);在顺铂敏感度方面,上调miR-101-3p组高于对照组、下调miR-101-3p组(P<0.05)。结论 上调miR-101-3p能够抑制CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达,调控细胞周期,阻止膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭,提高其顺铂敏感性。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

miR-101-5p通过靶向ATAD2抑制肺鳞癌细胞的侵袭

目的 探讨微小RNA-101-5p(miR-101-5p)影响肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)细胞增殖、侵袭的分子机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载肺鳞癌TCGA-LUSC的miRNA成熟体表达数据和总RNA的测序数据,鉴定差异表达基因;分析富集于ATAD2的信号通路。培养LUSC细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-101-5p和ATAD2的mRNA表达,MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测miR-101-5p对LUSC细胞增殖和侵袭的影响,流式细胞术检测ATAD2对LUSC细胞周期的影响,Western blotting检测ATAD2蛋白的表达。双荧光素酶实验验证miR-101-5p能否与ATAD2靶向结合,最后通过LUSC细胞共转染oe-ATAD2和miR-101-5p模拟物(mimic),检测细胞增殖、克隆、侵袭能力的变化,进一步探究miR-101-5p能否通过ATAD2调节LUSC细胞的生物学功能。结果 miR-101-5p在LUSC组织及培养LUSC细胞中显著下调。过表达miR-101-5p的LUSC增殖和侵袭能力显著抑制。其下游调控靶基因ATAD2在LUSC中显著上调,且miR-101-5p和ATAD2表达呈负相关,单基因富集分析(GSEA)结果显示ATAD2显著富集于细胞周期信号通路。双荧光素酶实验结果显示,miR-101-5p靶向结合ATAD2,并通过MTT和侵袭实验发现miR-101-5p通过靶向结合ATAD2调控LUSC细胞的增殖和侵袭。结论 miR-101-5p在LUSC中低表达,miR-101-5p通过靶向抑制ATAD2降低LUSC细胞的增殖、侵袭。

血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a在早期宫颈癌中的诊断价值

目的 探讨血清微小RNA(miRNA)21、miRNA155-5P及miRNA20a在早期宫颈癌中的诊断价值。方法 选取新疆生产建设兵团第十三师红星医院2019年6月-2023年6月收治的100例早期宫颈癌患者作为观察组,另选同期收治的100例进展期宫颈癌患者为进展期组,100名健康志愿者为对照组。采取荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测所有受检者血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a表达水平,比较血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a表达水平与早期宫颈癌临床特征;采用Spearman相关性分析miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a与早期宫颈癌临床特征的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a对早期宫颈癌的诊断价值。结果 各组血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a相对表达水平及临床分期、病理分级、浸润深度比较,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果表明,miRNA21、miRNA20a与早期宫颈癌临床分期、病理分级、浸润深度呈正相关,miR155-5P与早期宫颈癌临床分期呈正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,三者联合、miRNA21、miRNA155-5P、miRNA20a的曲线下面积(AUC)依次为0.897、0.721、0.698、0.641,灵敏度分别为83.54%、73.25%、72.67%、69.57%,特异度分别为81.45%、78.56%、82.54%、72.67%。结论 早期宫颈癌患者血清miRNA21、miRNA155-5P及 miRNA20a表达水平明显升高,且与临床特征密切相关。