Mfn2、miRNA-101调控转化生长因子-β1参与肝泡型包虫病肝纤维化的研究

目的 探讨Mfn2、miRNA-101通过TGF-β1调控肝泡型包虫病肝纤维化的潜在作用。方法 收集2020年7月-2020年10月青海省人民医院确诊的20例肝泡型包虫病患者术后切除的肝组织,采集距肝脏病灶边缘2 cm以外正常肝组织、距肝脏病灶边缘2 cm以内肝组织。行HE、Masson染色,将不同标本纤维化分级,通过免疫组化、RT-qPCR检测Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的表达。结果 Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的差异表达均具有统计学意义(P<0.05)。Mfn2与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),miRNA-101与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),TGF-β1与α-SMA表达量呈正相关(P<0.05),Mfn2与miRNA-101表达量无显著相关性(P>0.05)。结论 Mfn2、miRNA-101可能抑制肝泡型包虫病肝纤维化,并且可能通过抑制TGF-β1发挥抗纤维化作用。

MIL-101(Cr)-NH_(2)负载Ag催化4-硝基苯酚加氢研究

通过水热法制备出MIL-101(Cr)-NH_(2),以MIL-101(Cr)-NH_(2)为载体采用浸渍还原法得到Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化剂。通过XRD、N_(2)-吸附脱附曲线和TEM手段对催化剂进行表征。研究了Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化4-硝基苯酚(4-NP)加氢生成4-氨基苯酚(4-AP)的性能。结果表明,3wt%Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)样品的催化加氢性能高于其它样品,仅用4 min可将4-NP催化加氢全部转化为4-AP。因此Ag/MIL-101(Cr)-NH_(2)催化剂具有较好的催化4-NP加氢性能。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC-101对前列腺癌DU145细胞DNA损伤、迁移和上皮-间质转化的影响

目的:探讨泛素化组蛋白(H2AX)在前列腺癌(PCa)和癌旁良性前列腺组织中的表达及与其PCa患者临床病理参数之间的关系,阐明新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)CUDC-101对PCa的DNA损伤、迁移及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:肿瘤基因组谱(TCGA)数据库和UALCAN数据库检索各种癌症组织中H2AX mRNA的表达情况及其在PCa与正常前列腺组织中的表达差异,分析其表达与PCa患者临床预后的关系;采用免疫组织化学染色法检测在PCa组织和癌旁良性前列腺组织中H2AX蛋白的表达情况,分析H2AX蛋白表达与PCa患者临床病理参数的关系;体外培养DU145细胞,分为对照组、5%FBS组、5%FBS+100μmol·L^(-1)CUDC-101组和5%FBS+200μmol·L^(-1)CUDC-101组,采用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测CUDC-101处理前后PCa DU145细胞的细胞划痕面积及迁移细胞数;免疫荧光染色法检测CUDC-101处理后PCa DU145细胞中上皮细胞标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)和磷酸化组蛋白γ-H2AX表达情况;Western blotting法检测CUDC-101处理后EMT相关蛋白、γ-H2AX和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达情况。结果:TCGA数据库和UALCAN数据库分析,H2AX mRNA在PCa组织中高表达,并且H2AX低表达组患者的无病生存期(DFS)明显高于H2AX mRNA高表达组(P<0.001);免疫组织化学染色,在PCa组织中H2AX蛋白强阳性表达率高于在癌旁良性前列腺组织(64.34%vs 14.29%),其过表达与PCa的T分期(P=0.001)和世界卫生组织/国际泌尿科病理学会(WHO/ISUP)预后分级分组(P=0.004)有关,但与PCa患者的年龄、Gleason评分、淋巴结转移、神经和脉管浸润无关(P>0.05);免疫荧光染色法检测,与对照组和EMT诱导组比较,CUDC-101处理组E-cadherin和γ-H2AX蛋白的荧光表达增强;细胞划痕实验和Transwell小室实验检测,与对照组比较,CUDC-101处理组DU145细胞愈合面积和迁移细胞数明显下调;Western blotting法检测,与EMT诱导组比较,CUDC-101处理组E-cadherin和γ-H2AX蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),波形蛋白(Vimentin)和p-AKT蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:H2AX蛋白过表达与PCa患者的不良预后密切关联。新型HDACi抑制剂CUDC-101可调控H2AX和AKT的磷酸化,抑制PCa细胞EMT过程。

miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系研究

目的 探究miR-101-3p与膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的关系。方法 将膀胱癌细胞分为对照组、下、上调miR-101-3p组,体外培养膀胱癌细胞。采用CCK-8实验来检测膀胱癌细胞增殖能力;通过划痕实验来检测膀胱癌细胞迁移能力;通过Transwell实验来检测膀胱癌细胞侵袭能力;3组细胞分别加入不同浓度的顺铂,观察对细胞的抑制率;Western blot法测定CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量。结果 在24 h、48 h、72 h的细胞增殖率方面,上调miR-101-3p组均低于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组低于下调miR-101-3p组(P<0.05);在24 h、48 h、72 h的细胞迁移数、侵袭数方面,上调miR-101-3p组均少于对照组、下调miR-101-3p组,而对照组少于下调miR-101-3p组(P<0.05);在CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达量方面,上调miR-101-3p组均低于对照组和下调miR-101-3p组(P<0.05);在顺铂敏感度方面,上调miR-101-3p组高于对照组、下调miR-101-3p组(P<0.05)。结论 上调miR-101-3p能够抑制CDK4、Akt、ICAM-1、MMP-9蛋白的表达,调控细胞周期,阻止膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭,提高其顺铂敏感性。

LncRNA XIST和miR-101-3p在SLE患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值

目的分析长链非编码RNA(Lnc RNA)X染色体失活特异转录本(XIST)和微小RNA-101-3p(mi R-101-3p)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞中的表达及临床应用价值。方法选取2019年4月至2021年10月在新乡市中心医院治疗的180例SLE患者作为观察组,选择同期180例健康体检者作为对照组。根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分将观察组分为稳定期组80例和活动期组100例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法对患者外周血单核细胞中Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的相对表达水平进行检测。分析Lnc RNA XIST与mi R-101-3p的相关性以及二者与SLEDAI评分的相关性;对影响SLE的因素进行logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Lnc RNA XIST、mi R-101-3p的表达对SLE的诊断价值。结果与对照组相比,观察组患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组患者较稳定期组外周血单核细胞中Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST与mi R-101-3p水平呈负相关(r=-0.410,P<0.05);Lnc RNA XIST水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.425,P<0.05),mi R-101-3p水平与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.454,P<0.05);logistic回归分析显示,Lnc RNA XIST是影响SLE的危险因素(P<0.05),mi R-101-3p是影响SLE的保护因素(P<0.05);Lnc RNA XIST、mi R-101-3p联合诊断SLE的ROC曲线下面积为0.960,均优于其各自单独诊断(Z_(二者联合-Ln-c RNA XIST)=3.268,P=0.001;Z_(二者联合-mi R-101-3p)=2.584,P=0.005)。结论SLE患者外周血单核细胞Lnc RNA XIST水平升高,mi R-101-3p水平降低,与SLE疾病活动性有关,对SLE具有一定的诊断价值。

miR-101-5p通过靶向ATAD2抑制肺鳞癌细胞的侵袭

目的 探讨微小RNA-101-5p(miR-101-5p)影响肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)细胞增殖、侵袭的分子机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载肺鳞癌TCGA-LUSC的miRNA成熟体表达数据和总RNA的测序数据,鉴定差异表达基因;分析富集于ATAD2的信号通路。培养LUSC细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-101-5p和ATAD2的mRNA表达,MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测miR-101-5p对LUSC细胞增殖和侵袭的影响,流式细胞术检测ATAD2对LUSC细胞周期的影响,Western blotting检测ATAD2蛋白的表达。双荧光素酶实验验证miR-101-5p能否与ATAD2靶向结合,最后通过LUSC细胞共转染oe-ATAD2和miR-101-5p模拟物(mimic),检测细胞增殖、克隆、侵袭能力的变化,进一步探究miR-101-5p能否通过ATAD2调节LUSC细胞的生物学功能。结果 miR-101-5p在LUSC组织及培养LUSC细胞中显著下调。过表达miR-101-5p的LUSC增殖和侵袭能力显著抑制。其下游调控靶基因ATAD2在LUSC中显著上调,且miR-101-5p和ATAD2表达呈负相关,单基因富集分析(GSEA)结果显示ATAD2显著富集于细胞周期信号通路。双荧光素酶实验结果显示,miR-101-5p靶向结合ATAD2,并通过MTT和侵袭实验发现miR-101-5p通过靶向结合ATAD2调控LUSC细胞的增殖和侵袭。结论 miR-101-5p在LUSC中低表达,miR-101-5p通过靶向抑制ATAD2降低LUSC细胞的增殖、侵袭。

MIL-101(Cr)吸附/热脱附-气相色谱-质谱法检测苯系和氯代VOCs

以金属有机骨架材料MIL-101(Cr)为填料构建了一种新型吸附采样管,将其与热脱附-气相色谱-质谱联用实现了15种典型苯系和氯代挥发性有机物(VOCs)的检测。结果显示,15种VOCs在0~100 ng范围内呈良好的线性关系,相关系数(r2)达到0.99以上,检出限为0.7~1.9 ng。在5、30、70 ng添加量下,15种VOCs的平均回收率分别为86.0%~126%、91.7%~133%和77.6%~135%,相对标准偏差(RSD)分别为6.6%~18%、2.9%~20%和1.3%~20%。MIL-101(Cr)填料吸附管测试稳定性和不同批次吸附管重复性的RSD分别为0.50%~14%和0.30%~18%。MIL-101(Cr)填料吸附管基于质量更少的填料实现了对苯系和氯代VOCs更高效的吸附、富集和热脱附,有助于降低吸附采样管的气体穿透风险。该研究拓展了MOFs材料在环境检测领域的实际应用场景。

miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

目的 探讨miR-101-3p通过靶向下调GALNT1逆转乳腺癌多西他赛(docetaxel, DTX)耐药的分子机制。方法 构建MCF-7/DTX细胞株,采用qRT-PCR检测MCF-7及MCF-7/DTX细胞株及乳腺癌患者癌组织中miR-101-3p的表达水平;向MCF-7/DTX细胞转染miR-101-3p mimics、siGALNT1、miR-101-3p inhibitor并用qRT-PCR实验评估转染效率;MTT实验用于检测调控miR-101-3p及GALNT1对MCF-7/DTX细胞DTX敏感性的影响;划痕实验用于分析转染后各组细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测调控miR-101-3p及GALNT1后MCF-7/DTX细胞的垂直侵袭能力的改变;流式凋亡实验检测各组细胞在同一浓度DTX处理下的凋亡百分比;western blot实验检测调控miR-101-3p及GALNT1对凋亡关联蛋白及上皮间充质转化标志蛋白表达量的影响。结果 MCF-7/DTX细胞和DTX患者耐药组中miR-101-3p的相对表达量呈异常降低趋势。转染miR-101-3p mimics后,与miR-NC组相比miR-101-3p mimics组DTX敏感性明显升高,迁移和侵袭能力在高水平miR-101-3p下有所降低,同时凋亡百分比显著上升凋亡蛋白表达呈相同趋势,上皮间充质转化过程受到一定抑制。MCF-7/DTX细胞中GALNT1相对表达量较MCF-7细胞明显升高,双荧光素酶实验证实了miR-101-3p与GALNT1的靶向关系并且GALNT1表达量与miR-101-3p呈负相关。回复实验进一步分析GALNT1和miR-101-3p间的关系,低水平miR-101-3p能够逆转敲低GALNT1引起的DTX高敏感性,同时一定程度恢复敲低GALNT1引起的MCF-7/DTX细胞迁移、侵袭、凋亡及EMT的改变。结论 miR-101-3p介导MCF-7/DTX细胞的DTX敏感性可能是通过靶向GALNT1完成的。

补骨脂素通过miR-101/PI3K/Akt轴对骨肉瘤细胞侵袭、转移的影响

目的探讨补骨脂素对骨肉瘤细胞侵袭、转移的抑制作用及可能的作用机制。方法用不同浓度补骨脂素作用于人骨肉瘤细胞(human osteosarcoma cells,MG-63),用CCK-8法检测细胞的存活情况,筛选最佳抑制浓度;用实时荧光定量法检测骨肉瘤组织与正常组织中微小RNA(microRNA,miR)-101的相对表达量。将对数生长期骨肉瘤细胞MG-63随机分为对照组、miR101模拟物阴性对照组(miR-NC组)、miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组。用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]实验检测细胞增殖抑制率;用肿瘤细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭和迁移能力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肌磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)mRNA的表达情况;用蛋白印迹法(Western blotting)检测磷酸化肌磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况。结果与对照组比较,miR-101组、补骨脂素组和补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP2和MMP9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。与miR-101组和补骨脂素组比较,补骨脂素联合miR-101组的细胞增殖抑制率升高,细胞侵袭数量、细胞迁移数量、PI3K和Akt mRNA,p-PI3K、p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论补骨脂素能够降低骨肉瘤细胞MG-63的增殖能力,并抑制其侵袭和迁移能力,其作用机制可能与调节miR-101水平、影响PI3K/Akt信号通路有关。

溃疡性结肠炎患者血清miR-101-3p、PTX3水平变化及其与病情的关系

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者血清中微小RNA-101-3p(miR-101-3p)和正五聚蛋白3(PTX3)的水平变化及其与UC病情的关系。方法选取该院2020年3月至2023年7月收治的124例UC患者作为UC组,另选取同期124例体检健康者作为对照组。根据Mayo评分分为活动期71例、缓解期53例,并将活动期患者分为轻度组20例、中度组28例、重度组23例。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验检测血清PTX3水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清miR-101-3p水平。采用Pearson相关分析血清miR-101-3p水平与PTX3水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响UC患者病情的因素;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-101-3p、PTX3对UC患者病情的诊断价值。结果UC组血清miR-101-3p水平低于对照组,PTX3水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,UC患者血清miR-101-3p水平与PTX3水平呈负相关(r=-0.482,P<0.05)。活动期患者血清miR-101-3p水平低于缓解期,PTX3水平高于缓解期,差异均有统计学意义(P<0.05)。在活动期UC患者中,血清miR-101-3p水平轻度组>中度组>重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血清PTX3水平为轻度组<中度组<重度组,任意两组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清miR-101-3p水平升高是UC患者病情处于活动期的保护因素(P<0.05),PTX 3水平升高是UC患者病情处于活动期的危险因素(P<0.05)。血清miR-101-3p、PTX3单项及联合检测诊断UC患者病情处于活动期的曲线下面积(AUC)分别为0.820(95%CI:0.741~0.884)、0.853(95%CI:0.778~0.910)、0.977(95%CI:0.933~0.996),联合检测诊断的AUC明显高于miR-101-3p、PTX3单项检测(Z=4.010、3.663,均P<0.05)。结论UC患者血清miR-101-3p水平明显降低,PTX3水平明显增加,二者与UC患者病情有关,并且2项指标联合检测诊断UC患者病情处于活动期的价值更佳。

LncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制研究

目的 探讨lncRNA NEAT1在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用机制。方法 采用RT-qPCR法检测宫颈腺癌细胞系HeLa、宫颈鳞癌细胞系SiHa和人子宫内膜上皮细胞系EM中lncRNA NEAT1的表达;干扰或过表达lncRNA NEAT1后,通过CCK-8和Transwell观察宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,扫描电镜观察细胞侵袭性伪足的变化;采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1与miR-101-3p的靶向关系;通过免疫荧光、Transwell、CCK-8等方法检测lncRNA NEAT1/miR-101-3p/RAC1对SiHa和HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 相比于EM细胞(0.99±0.04),宫颈癌SiHa(7.59±0.10,P<0.01)和HeLa(1.50±0.07,P<0.05)细胞中lncRNA NEAT1的表达明显升高。相比于sh-NC组,sh-NEAT1组(加入NEAT1敲低质粒)细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量明显减少(P<0.05);相比于OE-NC组,OE-NEAT1组(加入NEAT1过表达质粒)SiHa、HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及侵袭性伪足数量显著增加(P<0.05)。miR-101-3p与突变的NEAT1共转染后,相比于对照组(3.10±0.16)荧光素酶活性无显著变化(2.99±0.11,P>0.05),而与野生型NEAT1共转染后,相比于对照组(2.97±0.13)荧光素酶活性显著降低(1.15±0.05,P<0.01),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p靶向结合。RT-qPCR结果显示,与sh-NC组(SiHa,0.97±0.09;HeLa,1.07±0.06)相比,sh-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达明显升高(SiHa,3.86±0.39;HeLa,2.62±0.51,P<0.01);与OE-NC组(SiHa,0.98±0.20;HeLa,1.05±0.18)相比,OE-NEAT1组miR-101-3p mRNA表达显著降低(SiHa,0.35±0.05;HeLa,0.14±0.03,P<0.05),提示lncRNA NEAT1与miR-101-3p的表达呈负相关。CCK-8、Transwell结果显示,siRNA-RAC1、miR-101-3p mimic使SiHa和HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制(P<0.05),上调lncRNA NEAT1可部分逆转以上现象,使细胞增殖、迁移和侵袭数目增加(P<0.05)。结论 宫颈癌细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,它作为miR-101-3p的竞争性内源RNA(ceRNA),通过竞争性结合miR-101-3p并部分控制其对RAC1的调控,进而调节宫颈癌细胞侵袭性伪足的形成并诱导细胞增殖、迁移和侵袭。

血清miRNA-21、术前清蛋白-球蛋白比值对大脑胶质瘤预后的预测价值

目的:探讨血清miRNA-21、术前清蛋白-球蛋白比值与胶质瘤预后的关系。方法:选取2019年1月—2023年1月243例术后病理检查确诊为胶质瘤的病人,收集病人年龄、性别、吸烟和饮酒情况、体质指数、Karnofsky表现状态(KPS)、肿瘤大小、肿瘤位置(脑区)、切除范围、术前淋巴细胞计数、术前清蛋白水平、辅助放疗、化疗等资料,并根据磁共振成像数据计算肿瘤大小,采集病人术前1周血液学指标数据,评估术前清蛋白与球蛋白比值(AGR)及总生存期(OS)。检测血清miRNA-21,OS由Kaplan-Meier分析估计,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析AGR和miRNA21的预测能力。Cox比例风险模型用于单变量和多变量分析。结果:排除65例不符合纳入标准的病人和12例失访病人,共纳入166例病人。Kaplan-Meier分析曲线显示,AGR≤1.75或miRNA-21≤48的病人OS明显低于AGR>1.75或miRNA-21>48的病人(P均<0.001)。1年生存期:AGR和miRNA-21的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.680,0.631;2年生存期:AGR和miRNA-21的AUC分别为0.651,0.656。在多变量分析中,AGR[HR=0.785,95%CI(0.357,0.979),P=0.040]和miRNA-21[HR=0.757,95%CI(0.378,0.985),P=0.039]均是OS的独立预测因子。结论:术前AGR和miRNA-21与胶质瘤病人的OS显著相关。基于术前炎症、免疫和营养状况等指标,AGR和miRNA-21可为胶质瘤病人制定更有效的术前调节策略和更好的辅助治疗方案。

呼吸机相关肺炎患者病原菌分布及血清miR-101-3p、斯钙素1的检测分析

目的 探究呼吸机相关肺炎(ventilator-associated pneumonia,VAP)患者病原菌分布及血清微小RNA-101-3p(microRNA-101-3p,miR-101-3p)、斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)表达水平在VAP诊断中的临床意义。方法 选取2020年1月至2023年4月在安徽医科大学附属六安医院进行机械通气治疗,发生VAP的患者121例作为VAP组,未发生VAP的患者87例为非VAP组,同期健康体检者83例为对照组。采集VAP组患者下呼吸道分泌物进行病原菌鉴定;测定所有研究对象的血清STC1、降钙素原(procalcitonin,PCT)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、miR-101-3p水平。采用Pearson法分析血清miR-101-3p、STC1与炎症因子PCT、CRP、TNF-α的相关性;采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析血清miR-101-3p、STC1对VAP的诊断价值。结果 121例VAP患者共检测分离出病原菌218株,其中革兰氏阴性菌124株(56.88%),革兰氏阳性菌86株(39.45%),真菌8株(3.67%);VAP组的血清miR-101-3p、PCT、CRP、TNF-α水平均显著高于非VAP组和对照组(P<0.05),STC1水平显著低于非VAP组和对照组(P<0.05);VAP患者的血清miR-101-3p水平与PCT、CRP、TNF-α呈正相关(P<0.05),STC1水平与PCT、CRP、TNF-α呈负相关(P<0.05);ROC曲线显示血清miR-101-3p、STC1单独及联合诊断VAP患者的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.766、0.750、0.841,联合诊断价值高于二者单独诊断(Z二者联合-miR-101-3p=2.275、P=0.023,Z二者联合-STC1=2.856、P=0.004)。结论 VAP患者以革兰氏阴性菌感染为主,血清miR-101-3p呈高表达、STC1呈低表达,血清miR-101-3p、STC1联合诊断对于VAP的发生具有一定的诊断价值。

miRNA-101对激素非依赖型前列腺癌细胞系LNCaP EZH2表达的影响

目的:探讨microRNA-101(miRNA-101)对激素非依赖型前列腺癌细胞系LNCa P的果蝇zeste基因增强子的人类同源基因(EZH2)表达的影响。方法:实验分为空白组、阴性对照组和转染组。转染组通过基因重组技术构建miRNA-101表达载体,应用脂质体将其转染到LNCa P细胞中,荧光显微镜检测转染效率。3组细胞通过qRT-PCR检测细胞中EZH2 mRNA的表达。阴性对照组和转染组用Western印迹检测EZH2蛋白的水平。结果:转染组细胞培养24 h后,70%以上的细胞内出现绿色荧光基因信号。阴性对照组和转染组细胞培养72 h后,转染组细胞miRNA-101表达增加明显(P<0.01);转染组EZH2 mRNA的表达水平(0.01±0.10)显著低于空白组(0.95±0.40)和阴性对照组(0.86±0.30)(P均<0.01)。阴性对照组EZH2蛋白表达水平随培养时间延长而增加,但转染组EZH2蛋白表达水平随培养时间延长则下降。结论:miRNA-101可以抑制LNCa P细胞的EZH2的表达,具有成为前列腺癌生物治疗靶点的可能。

miRNA-101通过下调COX-2的表达影响肺癌细胞的生物学功能

目的:探讨miRNA-101(miR-101)在肺癌组织和细胞中的表达及其对人肺癌细胞增殖、克隆形成和成瘤能力的影响。方法:采用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR技术分别检测10例患者肺癌组织及相应癌旁组织、人肺癌细胞A549和NCI-H26及正常人胚肺成纤维细胞MRC-5中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)及miR-101的表达。A549和NCIH26细胞分别转染miR-NC和miR-101构建过表达miR-101的细胞系及其对照,Western blotting、CCK-8和克隆形成实验分别检测过表达miR-101对A549、NCI-H26细胞中COX-2的表达、细胞增殖和克隆形成能力的影响。用A549、A549/NC、A549/101细胞在BALB/c裸鼠皮下构建移植瘤模型,观察过表达miR-101对A549细胞小鼠移植瘤生长的影响。结果:在肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中,COX-2的表达明显高于癌旁组织(t=20.03,P=0.001)和MRC-5细胞(t=14.59,P=0.012),而miR-101的表达则相反(组织:t=18.33,P=0.002;细胞:t=28.95,P=0.000)。成功构建过表达miR-101的A549/101、NCI-H26/101细胞系,与A549、NCI-H26细胞相比,A549/101(t=26.03,P=0.000)、NCI-H26/101(t=23.29,P<0.01)细胞内COX-2表达量显著降低,A549/101和NCI-H26/101细胞的活力和克隆形成能力也显著降低(均P<0.05)。A549/101细胞小鼠皮下肿瘤的生长速度较A549细胞和A549/NC细胞显著减慢(F=14.81,P=0.003)。结论:肺癌组织和A549、NCI-H26细胞中miR-101低表达、COX-2高表达,过表达miR-101可以抑制A549、NCI-H26细胞的增殖,其机制可能与下调了COX-2表达有关。

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01)。孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05)。迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01)。结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展。

子痫前期患者胎盘中miRNA-101和内质网蛋白ERp44的表达和意义

目的探讨子痫前期患者胎盘中miRNA-101和内质网蛋白ERp44的表达和意义。方法选取2013年5月~2014年5月入住山东省交通医院分娩的100例产妇的胎盘绒毛组织,随机均分为对照组和子痫前期组,每组各50例。采用RT-PCR法检测各组胎盘组织中miRNA-101的表达情况;Western blot法检测过表达和封闭miRNA-101后,各胎盘组织ERp44的表达情况;采用流式细胞仪检测滋养细胞的凋亡情况。结果与对照组相比,子痫前期组中miRNA-101的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。在滋养细胞HTR-8/SVneo中过表达miRNA-101后,ERp44的表达显著下调(P<0.05);封闭miRNA-101后,ERp44的表达上调(P<0.05);过表达miRNA-101,细胞凋亡数量减少;封闭miRNA-101,细胞凋亡数量增加。结论子痫前期中,miRNA-101可通过调控内质网蛋白ERp44的表达来调控胎盘滋养细胞的凋亡过程。

miRNA-21/101/125a/195/200b在肝硬化、肝癌中的表达变化

目的观察microRNA(miRNA)-21/101/125a/195/200b在肝硬化、肝癌中的表达变化。方法收集患者肝组织样本,其中血管瘤6份、肝硬化10份,肝癌及癌旁组织14对;除血管瘤外,其余样本均HBsAg阳性。PCR检测各组miR-21、miR-101、miR-125a、miR-195、miR-200b的表达。采用Pearson相关性分析探索miR-101的表达与临床相应指标之间的相关性。结果与对照组相比,肝硬化组血小板(PLT)明显降低,凝血酶原时间(PT)延长、国际标准化比值(INR)升高,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBil)升高;HE染色、Masson染色及网状纤维染色显示符合肝硬化诊断。与肝硬化组相比,肝癌组白细胞(WBC)、PLT均有所升高,PT、INR降低,AST、TBil表达下降;与对照组、肝硬化组相比,肝癌组甲胎蛋白(AFP)表达显著升高,免疫组化染色符合肝癌诊断。PCR检测miRNA的表达,与对照组相比,miR-101、miR-195在肝硬化组中的表达下降;与癌旁组织相比,miR-21在肝癌中的表达升高,miR-101、miR-195的表达则显著降低。miR-125a、miR-200b的表达在各组间无明显变化。Pearson相关性分析发现miR-101与PLT表达水平呈正相关,相关系数为0.375。结论 miR-101在肝硬化、肝癌组织中表达降低,且与血小板水平呈正相关,提示miR-101是慢性肝病的负调控因子。

miRNA-101调控转化生长因子-β1信号通路参与肝纤维化的研究

目的探讨miRNA-101及转化生长因子(TGF)-β1信号通路在肝纤维化中的作用。方法选取2013年1月～2018年1月新疆医科大学第二附属医院手术切除的20例肝纤维化组织作为研究组,选择20例正常肝脏组织作为对照。采用免疫组化法分别检测肝组织中TGF-β1、平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)的表达水平,采用实时定量PCR(q RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、α-SMA的mRNA及miRNA-101的表达情况,分析TGF-β1、α-SMA及miRNA-101的相关性。结果肝纤维化组织中TGF-β1的mRNA表达水平明显高于正常肝组织(P <0.05),肝纤维化组织中α-SMA的mRNA表达水平与正常肝组织比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。TGF-β1和α-SMA在肝纤维化组织中的阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强,呈正相关(r=0.53、0.57,均P <0.05)。TGF-β1和α-SMA的mRNA表达水平呈正相关(r=0.633,P <0.01)。肝纤维化组织miRNA-101水平低于正常肝组织,差异有统计学意义(P <0.05)。miRNA-101与TGF-β1、α-SMA的mRNA表达水平呈负相关(r=-0.442、-0.327,均P <0.01)。结论 miRNA-101下调可能通过调控TGF-β1而参与肝纤维化。