长链非编码RNA NEAT1、miRNA-182-5p与2型糖尿病合并代谢性脂肪性肝病患者肝纤维化风险的相关性研究

背景随着慢性代谢性疾病的发病率逐年增加,已威胁全民健康,目前非编码RNA与内分泌代谢相关疾病的研究已成为国内外研究热点,其中长链非编码RNA核富集转录体(lncRNA NEAT1)及微小RNA(miRNA)-182-5p在2型糖尿病(T2DM)合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)中的研究鲜有报道。目的探讨T2DM合并MAFLD患者lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p在肝纤维化发生、发展中的机制及临床意义。方法纳入2021年10月—2022年6月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内分泌科就诊的T2DM患者236例为研究对象,同时纳入49名健康志愿者为健康对照组。收集研究对象一般资料与实验室检测结果。测定内脏脂肪面积(VFA)、皮下脂肪面积(SFA)。采集外周血,测定lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p。将T2DM患者其分为T2DM合并非MAFLD组(n=82)与T2DM合并MAFLD组(n=154)。进一步根据肝纤维化指数(FIB-4)将T2DM合并MAFLD组分为肝纤维化低危亚组(n=55)、肝纤维化中危亚组(n=69)、肝纤维化高危亚组(n=30)。采用Spearman秩相关分析探究肝纤维化高危亚组lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p表达水平的相关性,采用多因素有序Logistic回归分析探究T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结果健康对照组年龄、颈围(NC)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)低于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组,白蛋白(Alb)高于T2DM合并MAFLD组、T2DM合并非MAFLD组(P<0.05);T2DM合并MAFLD组BMI、腰围(WC)、VFA、SFA、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、三酰甘油(TG)、血尿酸(SUA)、lncRNA NEAT1高于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,血小板计数(PLT)低于健康对照组、T2DM合并非MAFLD组,总胆固醇(TC)低于健康对照组(P<0.05);T2DM合并非MAFLD组HOMA-IR、lncRNA NEAT1高于健康对照组,miRNA-182-5p高于健康对照组、T2DM合并MAFLD组,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)低于健康对照组、T2DM合并MAFLD组(P<0.05)。肝纤维化低危亚组VFA、SFA、AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化中危亚组、肝纤维化高危亚组,BMI、WC、NC低于肝纤维化高危亚组,TC高于肝纤维化高危亚组(P<0.05);肝纤维化中危亚组PLT、miRNA-182-5p高于肝纤维化高危亚组,AST、lncRNA NEAT1低于肝纤维化高危亚组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,肝纤维化高危亚组患者lncRNA NEAT1与miRNA-182-5p呈负相关(r_(s)=-0.438,P<0.05)。多因素有序Logistic回归分析结果显示,lncRNA NEAT1(OR=1.326,95%CI=1.087~1.616)、VFA(OR=1.019,95%CI=1.006~1.033)、miRNA-182-5p(OR=0.083,95%CI=0.027~0.257)、PLT(OR=0.956,95%CI=0.942~0.970)、AST(OR=1.048,95%CI=1.022~1.075)是T2DM合并MAFLD患者肝纤维化风险的影响因素。结论外周血lncRNA NEAT1、miRNA-182-5p与T2DM合并MAFLD患者并发肝纤维化密切相关,为该病的早期预测及诊治提供依据。

miRNA-182、miRNA-200c和胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ单独及联合检测对胃癌的诊断价值

目的探讨miRNA-182、miRNA-200c和胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)/胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)单独及联合检测对胃癌的诊断价值。方法选取65例胃癌患者和61例健康体检者,分别作为观察组和对照组,酶联免疫吸附试验检测两组受试者血清PGⅠ和PGⅡ水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-182、miRNA-200c水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ单独及联合检测对胃癌的诊断价值。结果观察组患者血清miRNA-182、miRNA-200c水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。观察组患者血清PGⅠ水平和PGⅠ/Ⅱ均低于对照组,PGⅡ水平高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ联合检测诊断胃癌的AUC为0.829(95%CI:0.633~0.859),高于各指标单独检测的0.650、0.722、0.818,此时的灵敏度为0.825,特异度为0.890。结论miRNA-182、miRNA-200c、PGⅠ/PGⅡ联合检测对胃癌的诊断价值更高,或可作为胃癌诊断的有效指标。

慢性心力衰竭患者微小RNA-182-5p表达水平及其与左心室重构和预后的相关性

目的探讨慢性心力衰竭患者微小RNA(miR)-182-5p表达水平,并分析其与左心室重构及预后的相关性。方法选取2019年1月至2021年12月聊城市人民医院心内科收治的慢性心力衰竭患者138例为慢性心力衰竭组(心衰组),另选取同期接受体检的120例健康志愿者为健康组,检测2组血清miR-182-5p表达水平,并采用Pearson分析miR-182-5p表达水平与左心室重构的相关性,ROC曲线分析miR-182-5p表达水平的诊断价值,连续随访1年,收集并分析心衰组生存状况,采用Kaplan-Meier生存曲线评估miR-182-5p表达水平及预后价值。结果心衰组左心室射血分数(LVEF)水平低于健康组,左心室重构指数(LVRI)和miR-182-5p表达水平显著高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);miR-182-5p表达水平与LVEF呈负相关(r=-0.496,P=0.000),与LVRI呈正相关(r=0.460,P=0.000);miR-182-5p表达水平诊断慢性心力衰竭的ROC曲线下面积为0.964,截断值为0.905,敏感性为91.3%,特异性为86.7%;Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-182-5p低表达患者生存率高于高表达患者(P=0.039)。结论慢性心力衰竭患者miR-182-5p表达水平高于健康人群,且水平越高的患者左心室重构越严重,检测miR-182-5p表达水平有助于慢性心力衰竭患者的诊断和不良预后预测。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平与急性脑梗死患者病情及预后的关系

目的 检测急性脑梗死患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并探讨其与患者病情及预后的关系。方法 选取2020年3月至2022年10月安阳市人民医院神经内科收治的136例急性脑梗死患者纳入脑梗死组,另选取本院同期136例体检健康志愿者作为对照组。根据病情程度将脑梗死组患者分为轻度组(n=42)、中度组(n=59)和重度组(n=35)。根据患者90 d随访情况分为预后良好组103例和预后不良组33例。采用qRT-PCR法检测两组受检者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并比较各组受试者miR-182-5p、miR-372-3p表达水平和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分。采用Spearman相关性分析急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p与NIHSS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性脑梗死预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-182-5p、miR-372-3p预测急性脑梗死患者预后的价值。结果 脑梗死组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.56±0.16、0.39±0.11,明显低于对照组的0.99±0.23、1.00±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);随着脑梗死患者病情程度的加重,轻度组、中度组、重度组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平逐渐降低,而NIHSS评分逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p水平与NIHSS评分均呈负相关(r=-0.483、-0.648,P<0.05);预后良好组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.62±0.17、0.42±0.12,明显高于预后不良组的0.39±0.12、0.30±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-182-5p和miR-372-3p低表达以及重度梗死是急性脑梗死预后不良的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-182-5p、miR-372-3p水平联合预测急性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)明显大于miR-182-5p单独预测的AUC (Z=1.991,P=0.046)及miR-372-3p单独预测的AUC (Z=2.294,P=0.022)。结论 急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p表达降低,两者是急性脑梗死患者不良预后的危险因素,且与病情程度密切相关,可作为急性脑梗死预后的生物标志物。

基于SATB2/nox4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用

目的 基于特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox)4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。方法 收集经手术切除的结肠癌及癌旁组织各43例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析癌组织及癌旁组织中miR-182-5p与SATB2相对表达,分析miR-182-5p与SATB2在结肠癌中的相关性。SW480细胞分为对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组并进行相应转染。TargetScanHuman预测、双荧光素酶报告基因检测、染色质免疫共沉淀分析miR-182-5p与SATB2的靶向调节关系。噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖、迁移能力;qRT-PCR、Western印迹法检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达情况。体内异种移植实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤SATB2、nox4表达情况。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织miR-182-5p表达量明显升高,SATB2表达量明显降低(P<0.05),miR-182-5p与SATB2水平呈负相关(P<0.001)。miR-182-5p与SATB2存在结合位点,过表达SATB2导致miR-182-5p与SATB2的结合能力明显下降。与对照组、NC-mimics组、NC-inhibitor组相比,miR-182-5p-mimics组细胞增殖能力明显加强,迁移率明显升高,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显下降,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖能力明显降低,迁移率明显下降,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显升高,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显下降(P<0.05)。与对照组、NC-mimics组相比,miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组肿瘤体积、质量明显更大,SATB2表达量明显降低,nox4表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤体积、质量明显更小,SATB2表达量明显上升,nox4表达量明显下降(P<0.05)。结论 miR-182-5p对结肠癌细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,能够降低SATB2表达并影响SATB2/nox4信号通路及其相关蛋白,SATB2能够反向调控miR-182-5p表达。

miR-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响

目的 探究微小RNA(miR)-182调控线粒体凋亡通路对冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法 选取健康SD成年大鼠30只,8~10周龄,15只作为假手术组,15只建立冠心病模型,建模成功后获取建模大鼠心肌组织细胞,经培养、转染后分为上调miR-182a、下调miR-182组、对照组。采用RT-PCR技术检测miR-182、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)相关基因表达,观察3组细胞增殖、凋亡变化,免疫组化法检测心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western印迹检测Bcl-2、Bax表达水平。结果 在1、3、6 h与对照组比较,下调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较高,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较低,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与下调miR-182组相比,上调miR-182组GSH-PX、SOD、Bcl-2表达水平较低,足细胞凋亡率、细胞增殖密度值、miR-182、MDA、Bax表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-182通过下调表达水平调控线粒体凋亡通路Bcl-2、Bax水平低表达,从而抑制冠心病模型大鼠心肌组织细胞凋亡,对心肌细胞具有一定保护作用。

miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF对老年慢性肾衰竭病情发展的预测价值

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)、β2-微量球蛋白(β2-MG)、miR-182、血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、对老年慢性肾衰竭(CRF)病情发展的预测价值。方法:回顾性分析2021年1月~2022年1月贵阳市第二人民医院300例老年CRF患者临床资料并设置为CRF组,另选取同期300例健康体检者临床资料设置为对照组。比较CRF组与对照组入选者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF表达水平;比较不同临床特征的CRF患者血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF表达差异。结果:CRF组的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平差异无统计学意义(P>0.05)。年龄>70岁、有水肿情况、UAER>100μg/min、尿毒症期、合并血管钙化、合并继发性甲状旁腺亢进CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平高于其他CRF患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CRF患者的血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF水平与Scr、UAER呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血清miR-182、β2-MG、TGF-β1、CTGF指标在老年CRF病情发展中的预测价值较高,能够为CRF的诊断、治疗、病情评估提供科学参考依据。

胎膜早破宫内感染产妇脐血和羊水中miR-182、TNF-α、S100B预测早产儿脑损伤价值

目的:探究胎膜早破宫内感染产妇脐血和羊水中微小核糖核酸182(miR-182)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及S100钙结合蛋白B(S100B)预测早产儿脑损伤的临床价值。方法:选取2021年6月-2023年6月在本院分娩的104例胎膜早破宫内感染产妇临床资料,分娩的早产儿胎龄均<34周,行头部影像学检查,根据是否发生脑损伤将产妇分为脑损伤组(n=36)与非脑脑损伤组(n=68)。检测并比较两组脐血和羊水中miR-182、TNF-α、S100B蛋白水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价胎膜早破宫内感染产妇脐血和羊水miR-182、TNF-α及S100B蛋白对早产儿脑损伤的预测价值。结果:脑损伤组脐血miR-182、TNF-α、S100B蛋白水平均高于非脑损伤组,羊水miR-182、TNF-α均高于非脑损伤组(均P<0.05),羊水中S100B蛋白水平两组无差异(P>0.05)。ROC曲线分析,脐血miR-182、TNF-α、S100B蛋白预测早产儿脑损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.816、0.748、0.697,灵敏度分别为72.2%、66.7%、55.6%,特异度分别为83.8%、77.9%、88.2%;羊水miR-182、TNF-α、S100B蛋白预测早产儿脑损伤的AUC分别为0.713、0.689、0.594,灵敏度分别为63.9%、55.6%、30.6%,特异度分别为86.8%、85.3%、86.8%。结论:胎膜早破宫内感染产妇脐血和羊水中miR-182、TNF-α、S100B蛋白预测其早产儿脑损伤均有一定价值。

血清miRNA-182检测在结直肠癌中的诊断价值研究

目的探讨血清miRNA-182作为结直肠癌(CRC)潜在标志物的诊断价值。方法运用荧光定量PCR法检测53例CRC患者血清miRNA-182相对表达量,并与肠良性病变患者及健康体检者进行比较分析。结果 CRC患者血清miRNA-182相对表达量明显高于肠良性病变组及对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示血清miRNA-182诊断CRC的曲线下面积为0.846,95%置信区间为0.768~0.925;诊断灵敏度为77.1%,特异度为81.1%。血清miRNA-182相对表达量与CRC患者TNM分期(P=0.011)及远距离转移(P=0.002)有关;而与其他临床特征无关。CRC患者术后血清miRNA-182相对表达量明显低于术前水平(P<0.01);而术后出现复发/转移的患者血清miRNA-182相对表达量又明显升高(P=0.019)。结论 CRC患者血清miRNA-182相对表达量明显升高,并与病情及恶性进展密切相关,血清miRNA-182可作为CRC潜在标志物用于临床诊断及病情评估。

miRNA-182通过FGF9调节肺动脉平滑肌细胞表型的研究

目的研究miRNA-182及其靶蛋白成纤维生长因子9(FGF9)对肺动脉平滑肌细胞表型转换的调节作用。方法体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC),用miRNA-182模拟体转染的方法使其过表达,FGF9siRNA转染使其沉默;使用CCK8方法检测细胞增殖能力,分别用RT-q PCR检测miRNA-182的表达,PCR方法检测FGF9及收缩型表型标记物(SMA,SM22α及myosin)的基因水平,Western blot检测其蛋白水平。结果过表达miRNA-182,收缩表型标记物SMA,SM22α及myosin基因表达水平明显升高,SMA蛋白表达量明显增加,转染miRNA-182抑制物之后,SMA蛋白表达量降低;另外,细胞相对吸光度降低,增殖被抑制,并且转染模拟体80 nmol/L较转染40 nmol/L吸光度更低;而转染miRNA-182抑制物之后,细胞相对吸光度明显增强,细胞增殖增加。过表达miR-182后,FGF9mRNA的表达明显降低,并且与模拟体的转染浓度直接相关。沉默FGF9表达之后SMA、SM22α和myosin表达增加,并抑制PASMC的增殖能力,同时沉默miR-182和FGF9表达之后,SMA、SM22α和myosin表达增高。结论miRNA-182通过靶向抑制FGF9蛋白的表达,抑制PASMC收缩型向合成型转化,同时抑制其增殖能力。

miRNA-182对细胞内钠离子通道蛋白Nav1.7表达的影响

目的:探索miRNA-182对细胞中电压门控钠离子通道1.7(Nav1.7)表达的影响及可能机制。方法:构建重组SCN9A 3'UTR双荧光素酶报告基因载体并与miRNA-182抑制物、类似物或scramble共转染HEK293细胞,通过荧光素酶活性检测观察miRNA-182和SCN9A表达的变化。用谷氨酸钠刺激PC12细胞并转染miRNA-182类似物或抑制物,利用原位杂交、免疫荧光共检测以及蛋白免疫印迹方法检测细胞中miRNA-182和Nav1.7蛋白的表达。结果:miRNA-182能抑制SCN9A 3'UTR在HEK293细胞中的表达。Nav1.7和miRNA-182在PC12细胞共表达。谷氨酸钠可使PC12细胞中Nav1.7表达增高,miRNA-182的表达降低(P<0.05);miRNA-182类似物能拮抗谷氨酸钠的刺激作用。结论:miRNA-182可负调控细胞内Nav1.7蛋白的表达。

乏情和发情初产母猪下丘脑-垂体轴中miRNA表达谱比较分析

【目的】从神经内分泌系统揭示微小RNA(microRNA,miRNA)调控初产母猪情期活动的遗传机制。【方法】利用RNA-Seq技术对乏情和发情初产母猪下丘脑-垂体轴中的small RNA进行测序,获得了母猪下丘脑和垂体miRNA表达谱,并对筛选的差异表达miRNA进行GO和KEGG等功能分析。【结果】从所构建的4个文库中共鉴定出1096个miRNAs,其中已知miRNAs 364个,新预测miRNAs 732个。以发情母猪为对照,在乏情母猪的下丘脑有16个miRNAs存在差异表达,其中6个上调,10个下调;在乏情母猪垂体有9个miRNAs存在差异表达,其中2个上调,7个下调。下丘脑中16个差异表达miRNAs共预测到5212个靶基因,垂体中9个差异表达miRNAs共预测到6897个靶基因。下丘脑中靶基因主要在细胞投射组装、质膜结合的细胞投射组装、神经元投射发育的负调控、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性等GO条目及Ras信号通路、神经营养因子信号通路、ErbB信号通路、mTOR信号通路等KEGG信号通路中显著富集;垂体中靶基因主要在mRNA加工调控、Ras GTP酶结合、泛素样蛋白连接结酶活性、表皮生长因子受体结合等GO条目及蛋白激酶、鞘脂类信号通路、凋亡、ErbB信号通路、NF-κB信号通路等KEGG信号通路中显著富集。从构建的差异表达miRNAs与生殖相关功能靶基因的调控网络中,筛选的Chr3_8404_mature、ssc-miR-9和ssc-miR-34c可能在下丘脑-垂体轴中对初产母猪情期活动的调控起重要作用。下丘脑和垂体各选4个差异表达miRNAs进行实时荧光定量PCR验证,其表达趋势与测序结果基本一致。【结论】本研究成功构建了乏情和发情初产母猪下丘脑-垂体轴miRNA的表达谱,并对差异表达miRNA的功能进行了深度挖掘,筛选到了3个对初产母猪情期活动起重要作用的miRNAs,为初产母猪情期活动遗传机制的解析提供了miRNAs方面的理论依据。

丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响

目的 探讨丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响。方法 采用缺氧诱导体外培养的HTR-8/SVneo细胞,丙泊酚干预,采用CCK-8检测细胞的活力、Transwell测定细胞迁移和侵袭,TUNEL检测细胞凋亡。通过qRT-PCR测量miR-182-5p和HIF-1α相对mRNA表达水平。Western blot检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,缺氧组细胞迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平降低,HIF-1α、VEGF表达水平升高(P <0.05)。与缺氧组比较,丙泊酚干预后,细胞迁移、侵袭能力恢复,细胞凋亡率降低(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平升高,HIF-1α、VEGF表达水平降低(P <0.05)。转染抑制剂后则逆转了丙泊酚的治疗作用。结论 丙泊酚通过调节miR-182-5p/HIF-1α轴改善缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞毒性。

血清miRNA-182-5p在结直肠癌患者中的表达水平和临床价值

目的探讨结直肠癌患者血清中miRNA-182-5p的表达水平及其临床价值。方法选取2017年2月至2019年2月北京中医药大学东直门医院收治的结直肠癌患者70例纳入观察组,选取本院同期健康体检者60例纳入对照组。提取所有研究对象的总RNA,采用聚合酶链反应检测miRNA-182-5p的相对表达水平,分析其在各组中的表达差异及其与结直肠癌临床病理特征的关系,以受试者操作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC曲线)确定其诊断结直肠癌的效能。结果观察组患者血清和肿瘤组织miRNA-182-5p表达水平均显著高于对照组(均P<0.01);观察组患者有淋巴结转移、肿瘤最大径≥50 mm和TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的miRNA-182-5p表达水平均显著高于无淋巴结转移、肿瘤最大径<50 mm和TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(均P<0.05)。当miRNA-182-5p取诊断阈值为30.82时,曲线下面积为0.876(95%CI:0.669~0.947,P=0.003),对结直肠癌的诊断灵敏度为84.76%、特异度为80.13%。结论结直肠癌患者体内存在血清miRNA-182-5p表达上调,与疾病临床病理特征相关,提示miRNA-182-5p有望成为诊断结直肠癌的潜在标志物。

miRNA-182、miRNA-375在结直肠癌患者外周血中的表达及与预后的关系

目的探究微小RNA-182(miRNA-182)、miRNA-375在结直肠癌患者外周血中的表达及与预后的关系。方法采用定量荧光聚合酶链反应(PCR)扩增技术对治疗前82例结直肠癌患者血浆miRNA-182、miRNA-375水平进行检测,并根据患者结直肠癌根治术后1年预后结果分为预后良好组和预后不佳组,收集并整理患者的一般资料,采用Logistic回归分析影响结直肠癌患者预后的相关因素,以受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血miRNA-182、miRNA-375水平对患者预后的预测价值。结果82例结直肠癌患者中,预后不佳37例(预后不佳组),预后良好45例(预后良好组)。预后不佳组患者分化程度为低分化、肿瘤生长方式为浸润型所占比例及外周血miRNA-182、miRNA-375水平均高于预后良好组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤分化程度为低分化、肿瘤生长方式为浸润型、外周血miRNA-182及miRNA-375水平偏高均为结直肠癌患者预后不佳的危险因素(P﹤0.01)。ROC分析显示,外周血miRNA-182、miRNA-375单独及联合检测预测结直肠癌患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.80、0.82、0.88,外周血miRNA-182、miRNA-375单独检测对结直肠癌患者预后的预测效能低于二者联合。结论外周血miRNA-182、miRNA-375水平偏高的结直肠癌患者更易出现淋巴结转移等预后不佳情况,且miRNA-182、miRNA-375水平均对结直肠癌患者的预后具有一定的预测效能。

粪便miRNA675-5p联合qFIT检测对结直肠癌筛查的诊断价值

目的探讨粪便miRNA675-5p联合qFIT在结直肠癌筛查中的诊断价值。方法纳入2016年1月至2021年12月于武汉科技大学附属天佑医院和十堰市太和医院就诊的173例患者,收集其临床资料及粪便标本,包括48例结直肠癌组、46例腺瘤组、42例息肉组、37例正常对照组。采用qRT-PCR法检测粪便miRNA675-5p,定量粪便免疫化学检测(qFIT)检测粪便潜血。采用ROC曲线评估qFIT及miRNA675-5p联合qFIT检测对结直肠癌及腺瘤的诊断价值。结果结直肠癌组的qFIT值[259.94(36.25,758.55)]明显高于腺瘤组[0(0,13.42)]、息肉组[0(0,0)]、正常对照组[0(0,0)],差异有统计学意义(均P<0.01);腺瘤组高于息肉组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结直肠癌组qFIT敏感度为85.4%,特异度为100%;腺瘤组qFIT敏感度为28.3%,特异度为97.3%。联合检测(miRNA675-5p联合qFIT)结直肠癌组敏感度100%,特异度89.2%;腺瘤组敏感度71.7%,特异度86.5%。结直肠癌组、腺瘤组联合检测优于qFIT单独检测,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论miRNA675-5p联合qFIT检测能够提高早期结直肠癌筛查诊断效能。

血清miRNA-182联合癌胚抗原对胃癌的诊断效能及临床意义

目的miR-182在不同类型的癌症中可起癌基因的作用被发现在胃癌组织中的表达增高且其高表达与病情进展及不良预后有关,然而目前关于血清miRNA-182的表达水平及其对胃癌的诊断效能的研究报道较少。文中探讨血清miRNA-182联合癌胚抗原(CEA)对胃癌的诊断效能及临床意义。方法选择2017年6月-2018年6月在贵州省人民医院消化内科经病理学检查证实且均未进行治疗的68例胃癌患者(胃癌组),行胃镜病理检查确诊的65例胃炎患者(胃炎组)以及健康体检人群65例(对照组)。采用原位杂交检测胃癌组织及癌旁组织中miRNA-182表达;采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测血清miRNA-182的相对表达量及临床常规检测CEA,并分析miRNA-182的表达水平与患者临床病理特征的关系;采用ROC曲线分析miRNA-182、CEA及两者联合对胃癌的诊断效能。结果胃癌患者组织中miRNA-182阳性表达率(76.47%)显著高于癌旁组织(22.06%),且Ⅲ期+Ⅳ期胃癌组织中miRNA-182阳性表达率(95.24%)显著高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌组织中miRNA-182阳性表达率(46.15%),差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌患者血清中miRNA-182相对表达量(5.17±0.60)、CEA表达为15.39(10.25~18.37)ng/mL分别高于胃炎患者(4.29±0.63)和2.98(2.41~4.67)ng/mL以及对照组(4.26±0.59)、2.92(2.55~4.63)ng/mL;Ⅰ+Ⅱ期胃癌患者血清miRNA-182相对表达量(4.84±0.57)及CEA的表达水平10.12(4.55~15.48)ng/mL均低于Ⅲ期患者(5.40±0.49)、16.82(15.15~20.63)ng/mL和Ⅳ期患者(5.34±0.60)、17.36(14.66~19.09)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果发现,miRNA-182高表达与肿瘤TNM分期、分化程度、转移有关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miRNA-182诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.850(95%CI 0.786~0.914),其相应的灵敏性和特异度分别为73.5%和84.6%;CEA诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.947(95%CI 0.913~0.980),其相应的灵敏性和特异度分别为83.8%和73.4%;两指标联合诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.967(95%CI 0.943~0.991),其相应的灵敏性和特异度分别为94.1%和86.2%,且两指标联合诊断胃癌的准确性为90.2%,均优于单个指标(78.9%、79.7%)。结论血清miRNA-182联合CEA检测可提高胃癌诊断的灵敏性和准确性,对胃癌早期发现及治疗具有一定的临床价值。

基于“虚-毒-瘀”病机探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重与炎症免疫相关miRNA的关系

慢性阻塞性肺疾病急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)是慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的特殊时期,其炎症反应强烈,免疫功能低下,AECOPD可由多种因素促成,最常见诱因是呼吸道感染。长期暴露于炎性反应因子的压力下,COPD患者环境适应储备能力下降,继而表现出衰弱状态,病情加重。近年来,从微观分子基因领域研究AECOPD的发病机制已成为临床研究热点,microRNA(miRNA)通过影响靶基因的表达,调节相关信号蛋白表达水平,从而激活或抑制相关信号通路,参与AECOPD炎症免疫的发生发展。该文基于“虚-毒-瘀”病机,认为中医正气、毒邪、瘀血宏观理论与miRNA从基因层面调控炎症免疫反应的微观病理机制不谋而合,因此,从中医“虚-毒-瘀”病机入手,探讨miRNA通过抑制或降解mRNA,调控炎症免疫相关信号通路在AECOPD中的作用,以期为临床提供新的治疗思路。