miR-192-5p在增生性瘢痕组织及成纤维细胞中的表达及调控

背景:研究表明,miRNAs的表达与肝纤维化、肾纤维化及皮肤纤维化发生有关;并证实在痛风性关节炎中miR-192-5p与表皮调节素存在靶向调控关系。目的:探讨miR-192-5p在增生性瘢痕中的表达及调控作用,并验证miR-192-5p与表皮调节素之间存在靶向调控关系。方法:①在新疆医科大学第一附属医院收集6例增生性瘢痕组织及6例正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-192-5p与表皮调节素mRNA表达。②组织块法获取原代增生性瘢痕成纤维细胞,传代培养至3-6代用于后续实验,实验分为3个组:阴性对照组、miR-192-5p模拟物组和miR-192-5p抑制物组,分别转染对应的序列。采用CCK-8法和EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot法检测表皮调节素、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA的基因和蛋白表达,生物信息学网站预测miR-192-5p靶点,双荧光素酶实验验证靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,miR-192-5p和表皮调节素在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01);②过表达miR-192-5p后,与阴性对照组比较,细胞增殖能力增强(P<0.05),EdU阳性细胞率增加(P<0.01);抑制miR-192-5p后细胞活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞率减少(P<0.05);③过表达miR-192-5p 24 h后,与阴性对照组比较,模拟物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率减小(P<0.05),miR-192-5p抑制物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率增加(P<0.01);④转染48 h后,miR-192-5p模拟物组表皮调节素mRNA及蛋白水平显著降低、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白mRNA及蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01);miR-192-5p抑制物组上述4项指标呈现相反的变化(P<0.05或P<0.01);⑤Targetscan网站预测表皮调节素与miR-192-5p有潜在结合位点;⑥双荧光素酶实验显示,miR-192-5p能够与表皮调节素靶向结合。结果说明:miR-192-5p过表达可降低表皮调节素的表达,二者可能存在负向调控;提示通过调控表皮调节素可能起到抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

甲状腺功能亢进患者外周血miRNA-21和miRNA-192的表达

目的探讨甲状腺功能亢进(甲亢)患者外周血微小RNA(miRNA)-21和miRNA-192的表达。方法选择甲亢患者97例(甲亢组)作为研究对象;另选择健康体检者80例作为对照组。采用放射免疫分析法测定甲状腺功能指标[游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、游离甲状腺素(FT4)、总甲状腺素(TT4)和促甲状腺素(TSH)]水平;采用qRT-PCR法测定外周血miRNA-21和miRNA-192表达。结果甲亢组血清miRNA-21相对表达量高于对照组,而血清miRNA-192相对表达量低于对照组(P<0.05)。甲亢组FT3、TT3、FT4和TT4水平高于对照组,而TSH水平低于对照组(P<0.05)。治疗后血清miRNA-21相对表达量低于治疗前,而血清miRNA-192相对表达量高于治疗前(P<0.05)。miRNA-21对甲亢诊断敏感度和特异度分别为75.44%和70.00%;miRNA-192对甲亢诊断敏感度和特异度分别为80.00%和72.34%。miRNA-21与FT3、TT3、FT4和TT4呈线性正相关,与TSH呈线性负相关;miRNA-192与FT3、TT3、FT4和TT4呈线性负相关,与TSH呈线性正相关。结论甲亢患者中miRNA-21高表达,而miRNA-192低表达,且与甲状腺功能密切相关,可作为诊断和治疗辅助性指标。

血清miRNA-192评估呼吸机相关性肺炎患者病情严重度及结局转归的临床价值

目的探讨微小RNA-192（miRNA-192）在呼吸机相关性肺炎（VAP）病情严重度及结局转归中的临床价值。方法前瞻性、连续性纳入武汉市急救中心姑嫂树路急救站及华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院急诊科于2014年3月1～2015年8月接诊的VAP患者,收集相关临床资料、实验室指标及影像学结果。依据预后转归的不同将其分为死亡组及存活组。采用CURB-65评分及肺炎危重度指数（PSI）评估两组患者的病情危重程度,比较两组患者的炎性标志物差异,分析CURB-65评分及PSI分级与炎症标志物的相关性。结果共纳入63例VAP患者,其中1例患者失访。依据随访结果 ,40例成功脱机、22例死亡。与存活组比较,死亡组患者降钙素原（PCT）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、miRNA-192显著增加,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;两组PSI及CURB-65评分情况比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。PSI分级与mi RNA-192（r=0.768,P〈0.05）及hsCRP（r=0.496,P〈0.05）呈正相关,其中mi RNA-192的相关性更为显著;CURB-65评分与mi RNA-192（r=0.822,P〈0.05）及PCT（r=0.687,P〈0.05）呈显著正相关。结论 mi RNA-192对于评判VAP患者病情严重度及结局转归具有重要临床价值。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

FAM 19A 4、PAX 1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变早期诊断中的价值

背景与目的:目前有关宫颈病变的DNA甲基化研究较多,但DNA甲基化作为宫颈病变的诊断及分流指标在临床实践中的报道较少。本研究拟探讨FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化在宫颈病变进展中早期诊断的价值。方法:收集2020年3月—2022年3月在郑州大学第三附属医院同时行宫颈液基细胞学(thinprep cytologic test,TCT)和HPV检测的患者的宫颈细胞学标本共129例,采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测不同宫颈病变中FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化改变情况,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估3个基因甲基化改变对宫颈病变的诊断价值。本研究经郑州大学第三附属医院伦理委员会批准(伦理审批编号:2023-135-01)。结果:根据病理学检查结果分为4组:未见上皮内病变或恶性细胞(no intraepithelial lesions or malignant lesions,NILM)组(42例)、低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)组(28例)、高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)组(36例)和鳞癌(squamous cervical cancer,SCC)组(23例)。随宫颈病变级别的增加,FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因甲基化检出率逐步增高,差异有统计学意义(P均<0.05)。在HSIL组FAM19A4、PAX1、miRNA124-2甲基化检出率分别为81.2%、80.5%和71.8%,在SCC组3种基因甲基化检出率均高达100.0%;细胞学诊断宫颈癌的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.731,诊断灵敏度和特异度分别为65.9%和80.4%;FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因单独诊断HSIL+(HSIL和SCC)时,PAX1甲基化诊断HSIL+的效能最高,AUC为0.925,灵敏度为92.8%,特异度为87.3%;两两联合诊断时,FAM19A4与PAX1联合诊断HSIL+的AUC为0.930,灵敏度为95.7%,特异度为87.1%;FAM19A4与miRNA124-2联合诊断HSIL+,AUC为0.895,灵敏度为97.6%,特异度为85.7%;PAX1联合miRNA124-2诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为95.7%,特异度为89.1%;PAX1、FAM19A4及miRNA124-2基因甲基化联合诊断HSIL+,AUC为0.928,灵敏度为100.0%,特异度为81.8%。结论:FAM19A4、PAX1及miRNA124-2基因启动子区甲基化诊断宫颈病变具有较高的灵敏度和特异度,有潜力成为宫颈病变早期诊断的新指标。

CT引导下的铱-192三维后装放疗在局部晚期宫颈癌的近期疗效及安全性研究

目的:探讨CT引导下的铱-192(192Ir)三维后装放疗在局部晚期宫颈癌患者中的近期疗效及安全性。方法:选取2022年10月至2023年10月西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤放疗科收治的82例局部晚期宫颈癌患者,根据随机数表法将其分为观察组和对照组,每组41例。观察组予以CT引导下的192Ir三维后装放疗,对照组行常规二维后装放疗。对比两组近期疗效、血清肿瘤标志物指标、治疗安全性及生存质量。结果:观察组的治疗总有效率为97.56%,高于对照组的80.49%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.116,P<0.05),治疗后血清肿瘤标志物糖类抗原125(CA125)、鳞状细胞癌抗原(SCC)水平低于对照组,差异有统计学意义(t=11.352、5.507,P<0.05);观察组的放射性直肠炎发生率为7.32%,放射性膀胱炎发生率为4.88%,低于对照组的24.39%和21.95%,差异有统计学意义(χ^(2)=4.479、5.143,P<0.05);观察组治疗后的宫颈癌治疗功能评价量表(FACT-Cx)评分(生理状况、社会/家庭状况、情感状况、功能状况及附加关注)高于对照组,差异有统计学意义(t=6.150、7426、9.341、10.029、8.623,P<0.05)。结论:CT引导下的192Ir三维后装放疗对局部晚期宫颈癌患者可达到良好近期疗效,且安全性更高,有助于促进患者生存质量进一步改善。

急性胰腺炎患者外周血miRNA-16和miRNA-192表达及其与病情严重程度的相关性

目的:探讨急性胰腺炎(AP)患者外周血miRNA-16和miRNA-192表达及其与病情程度的相关性。方法:选取广东省第二人民医院2019年1月至2021年1月诊治的AP患者91例为研究对象,按照病情程度分为轻中度组(n=57)和重度组(n=34);另选同期健康体检者为对照组(n=50)。受试者入院24h内采集外周静脉血,分离血清后采用实时荧光定量PCR法测定血清miRNA-16和miRNA-192表达程度。比较三组急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、miRNA-16和miRNA-192表达量;采用ROC曲线分析miRNA-16和miRNA-192在AP中的诊断价值;采用Pearson分析miRNA-16和miRNA-192与APACHEⅡ评分相关性。结果:轻中度组和重度组APACHEⅡ评分明显高于对照组,且重度组APACHEⅡ评分明显高于轻中度组,P均<0.05。轻中度组和重度组血清miRNA-16和miRNA-192相对表达量明显高于对照组,且重度组血清miRNA-16和miRNA-192相对表达量明显高于轻中度组,P均<0.05。ROC曲线分析显示,miRNA-16和miRNA-192诊断AP的灵敏度分别为67.27%和72.22%,特异度分别为63.89%和72.97%。miRNA-16和miRNA-192与APACHEⅡ评分均呈明显线性正相关,P均<0.05。结论:AP患者外周血miRNA-16和miRNA-192均呈高表达,且与病情严重程度呈明显线性正相关。

miR-192-5p及TAMs源性外泌体对人子宫内膜癌细胞裸小鼠成瘤性的影响

目的探究miR-192-5p及肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)源性外泌体对人子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞增殖及成瘤性的影响。方法采用TAMs、阴性模拟物NC转染的TAMs以及miR-192-5p转染的TAMs源性外泌体刺激子宫内膜癌细胞,并分别注入裸小鼠体内,进行肿瘤细胞移植瘤实验。然后测量各组移植瘤的体积,分别采用RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织内miR-192-5p、相关激酶(IRAK1)和下游核因子-κB(NF-κB)表达情况,评估上调miR-192-5p的表达水平对EC细胞增殖及IRAK1和NF-κB表达水平的影响。结果TAMs源性外泌体促进肿瘤生长,miR-192-5p过表达可明显缩小肿瘤体积;miR-192-5p过表达抑制了肿瘤组织中IRAK1和NF-κB的表达。结论上调TAMs中的miR-192-5p的表达水平可能通过IRA K1和NF-κB信号通路抑制EC细胞的增殖及成瘤性。

miRNA-192-5p对多发性骨髓瘤的诊断效能及其与相关临床参数的关联性

目的:分析miRNA-192-5p对多发性骨髓瘤的诊断效能,并进一步分析与患者相关临床参数的关系.方法:选取2016年5月至2019年5月在我院血液及肿瘤科治疗的多发性骨髓瘤患者90例为骨髓瘤组,同时设立正常对照组60 例为同期来我院体检的健康人群,荧光定量PCR 法对多发性骨髓瘤患者及正常人群血清中的miRNA-192-5p 含量进行检测,采用ROC 曲线分析miRNA-192-5p 对多发性骨髓瘤的诊断效能;采用Pearson 相关性分析miRNA-192-5p 与多发性骨髓瘤患者相关临床参数的关联性.结果:在多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-192-5p 表达水平为0.72±0.11,在正常对照组血清中miRNA-192-5p 表达水平为1.08±0.15,两组比较具有统计学差异(P<0.05);ROC 曲线分析结果显示,miRNA-192-5p 诊断多发性骨髓瘤的曲线下面积为0.653,截断值为0.68,敏感性为77%,特异度为56%,P =0.023;在β2-MG 含量高的多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-192-5p 的含量明显低于β2-MG 含量正常的患者血清中水平(P<0.05),在肌酐水平高的患者血清中miRNA-192-5p 的含量也明显低于肌酐水平正常的患者(P<0.05);miRNA-192-5p 的含量在血红蛋白及白蛋白低下的患者血清中明显低于血红蛋白及白蛋白正常的患者( P<0.05).多发性骨髓瘤患者miRNA-192-5p 的含量分别与IgG 和IgA 含量呈明显负相关(r=-0.457,-0.615,P<0.05).结论:miRNA-192-5p 在多发性骨髓瘤患者血清中存在异常低表达,在多发性骨髓瘤的诊断中只可作为一个辅助诊断标准,其与疾病分期和预后相关指标具有一定相关性,在多发性骨髓瘤疾病进展监测中是一个较好的标志物.

miRNA-192在人体手术切除肺癌组织中的表达及临床意义研究

目的发掘与肺癌相关的特异性miRNA用于肺癌的分型分期和预后判断.方法对47例肺癌患者手术切除的肺癌组织和癌旁正常肺组织用SYBR Green实时荧光定量PCR对miRNA-192进行定量检测,比较肺癌组织和癌旁正常肺组织miRNA-192的表达是否有差异.结果吸烟者,每天吸烟支数>3支者,吸烟年数>2 a及饮酒者的肺癌患者肺癌组织miRNA-192表达量较不吸烟、每天吸烟支数<3支者,吸烟年数<2 a及不饮酒者高.总的47个病例miRNA-192在肺癌组织中表达量△CT值为(8.19±2.94),正常肺组织的表达量ΔCT值为(7.42±2.64),经配对t检验,P>0.05,miRNA-192在肺癌组织中的表达与正常肺组织差异无统计学意义(P>0.05);经相关分析肺癌组织中的miRNA-192表达倍数与临床资料之间无相关关系.结论 miRNA-192在具有吸烟及饮酒危险因素的人群中表达增高,可认为miRNA-192在肺癌的发生中具有一定的作用,但因总的47个病例的miRNA-192在肺癌组织和正常肺组织中表达差异无统计学意义,因此还无法确定miRNA-192是否属于肺癌的癌基因或抑癌基因,miRNA-192目前还不能用于肺癌的分型分期和预后判断.

尿miRNA-192,29c表达与芪蛭肾综颗粒治疗难治性肾病综合征机制研究

目的:探讨尿miRNA-192、miRNA-29c在芪蛭肾综颗粒治疗难治性肾病综合征(RNS)的机制。方法:将RNS患者44例随机分为实验组(芪蛭肾综颗粒加基础治疗)23例及对照组(黄葵胶囊加基础治疗)21例,经3月治疗后,观察尿miRNA-192、miRNA-29c与24h尿蛋白定量、总胆固醇(TC)、载脂蛋白(α)[LP(α)]、白蛋白(Alb)等指标的相关性,治疗前后尿miRNA-192、miRNA-29c的变化。结果:2组总有效率比较,差异有显著性意义(P<0.05)。尿miRNA-29c与LP(α)呈负相关,与Alb呈正相关,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。尿miRNA-192差值与24h尿蛋白定量和TC呈正相关,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。2组治疗后与治疗前比较,miRNA-29c升高,miRNA-192降低,差异有显著性或非常显著性意义(P<0.01,P<0.05);治疗后2组miRNA-29c差值比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:芪蛭肾综颗粒能抑制RNS的细胞外基质(ECM)增生,延缓肾小球硬化。尿miRNA-192、miRNA-29c可能为新型的非侵入型的检验指标。

血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a在早期宫颈癌中的诊断价值

目的 探讨血清微小RNA(miRNA)21、miRNA155-5P及miRNA20a在早期宫颈癌中的诊断价值。方法 选取新疆生产建设兵团第十三师红星医院2019年6月-2023年6月收治的100例早期宫颈癌患者作为观察组,另选同期收治的100例进展期宫颈癌患者为进展期组,100名健康志愿者为对照组。采取荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测所有受检者血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a表达水平,比较血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a表达水平与早期宫颈癌临床特征;采用Spearman相关性分析miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a与早期宫颈癌临床特征的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a对早期宫颈癌的诊断价值。结果 各组血清miRNA21、miRNA155-5P及miRNA20a相对表达水平及临床分期、病理分级、浸润深度比较,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果表明,miRNA21、miRNA20a与早期宫颈癌临床分期、病理分级、浸润深度呈正相关,miR155-5P与早期宫颈癌临床分期呈正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,三者联合、miRNA21、miRNA155-5P、miRNA20a的曲线下面积(AUC)依次为0.897、0.721、0.698、0.641,灵敏度分别为83.54%、73.25%、72.67%、69.57%,特异度分别为81.45%、78.56%、82.54%、72.67%。结论 早期宫颈癌患者血清miRNA21、miRNA155-5P及 miRNA20a表达水平明显升高,且与临床特征密切相关。

血清miRNA-21和miRNA-192表达与糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨血清miRNA-21和miRNA-192表达与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的相关性。方法选择2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者(DM组)38例、DN患者(DN组)27例及同期体检健康者(对照组)30例,采用实时荧光定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)技术检测血清miRNA-21和miRNA-192表达,采用PHILIPS-IU22彩色多普勒超声诊断仪检测肾主动脉(main renalartery,MRA)收缩期的峰值速度(peak systolic velocity,PSV)及阻力指数(resistance index,RI)等血流相关参数,比较分析以上指标的变化与DN的关系。结果DN组和DM组RI明显高于对照组,DN组RI明显高于DM组,DN组PSV明显低于DM组和对照组(P<0.05)。DN组和DM组miRNA-21表达高于对照组,miRNA-192低于对照组,DN组miRNA-21表达高于DM组,miRNA-192低于DM组(P<0.05)。DN组血清miRNA-21与miRNA-192表达呈负相关(r=-0.837,P<0.05);miRNA-21表达与RI水平呈正相关(r=0.812,P<0.05),与PSV水平呈负相关(r=-0.793,P<0.05);miRNA-192与RI水平呈负相关(r=-0.807,P<0.05),与PSV水平呈正相关(r=0.782,P<0.05)。DM组血清miRNA-21与miRNA-192表达呈负相关(r=-0.816,P<0.05);miRNA-21与RI水平呈正相关(r=0.714,P<0.05);miRNA-192表达与RI水平呈负相关(r=-0.745,P<0.05)。结论血清miRNA-21和miRNA-192表达与DN的发生发展有相关性,检测miRNA-21和miRNA-192表达可为DN的早期发现及治疗提供基因依据。

糖尿病视网膜病变患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3炎症小体和预后不良的关系

目的探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-20b-3p、miR-192表达与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体和预后不良的关系。方法选取2021年1月至2022年3月我院收治的DR患者165例。根据临床分级标准分为增生型DR(PDR)组89例和非增生型DR(NPDR)组76例,另选取同期我院收治的100例单纯2型糖尿病(T2DM)患者纳入T2DM组及100例体检健康志愿者纳入对照组。检测并对比4组血清miR-20b-3p、miR-192和外周血单核细胞NLRP3 mRNA、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA表达、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。采用Pearson相关性分析DR患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3炎症小体相关指标的相关性。DR患者出院后随访1年,根据是否发生视力残疾分为预后不良组47例和预后良好组118例,比较预后不良组和预后良好组血清miR-20b-3p、miR-192水平。收集DR患者的临床资料,单因素和多因素Logistic回归分析影响DR患者预后不良的因素。结果对照组、T2DM组、NPDR组、PDR组血清miR-20b-3p、miR-192表达依次降低,外周血单核细胞NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA和血清IL-1β、IL-18水平依次升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,DR患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β、IL-18水平呈负相关(P<0.05)。随访1年,165例DR患者视力残疾发生率为28.48%(47/165)。多因素Logistic回归分析显示,T2DM病程偏长、PDR占比偏高和糖化血红白蛋白(HbA1c)、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β、IL-18水平升高为影响DR患者预后的独立危险因素,miR-20b-3p、miR-192升高为独立保护因素(P<0.05)。结论DR患者血清miR-20b-3p、miR-192低表达,与NLRP3炎症小体激活和预后不良密切相关,可能成为DR患者病情和预后评估的指标。

加味逍遥散通过外泌体miRNA途径发挥抗肝癌作用

背景:在课题组先前研究中发现加味逍遥散具有明显的抗肝癌作用,但具体作用机制不明。目的:基于高通量测序结合生物信息学,探讨加味逍遥散对二乙基亚硝胺慢性诱导的原发性肝癌模型大鼠血浆外泌体miRNA水平的调节作用。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、肝癌模型组、加味逍遥散组。以二乙基亚硝胺持续给药12周诱导肝癌模型,从第17周开始,加味逍遥散组大鼠给予加味逍遥散灌服,每日1次,直至第20周末停药,空白对照组和肝癌模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,通过检测大鼠肝组织的形态结构、肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白表达验证抗肝癌效应。使用超速离心法分离提取各组大鼠血浆外泌体,利用高通量测序技术筛选出大鼠血浆外泌体中差异表达的miRNA,生物信息学预测加味逍遥散通过肝癌血浆来源外泌体miRNA发挥抗肝癌作用的潜在生物标志物,并进行功能分析。结果与结论:①加味逍遥散对肝癌模型大鼠肝组织的形态结构有显著改善作用,与肝癌模型组相比,加味逍遥散组肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白的表达均显著降低;②生物信息学分析显示,加味逍遥散组对肝癌模型组上调的miR-223-3p与基因E2F1、NCOA1存在靶向结合位点,并且与肝癌生存率及预后密切相关。由此可见,加味逍遥散对肝癌有治疗作用,可能是通过肝癌血浆来源外泌体miR-223-3p靶向负调控NCOA1/E2F1进而发挥抗肝癌效应。

血清miRNA-21、术前清蛋白-球蛋白比值对大脑胶质瘤预后的预测价值

目的:探讨血清miRNA-21、术前清蛋白-球蛋白比值与胶质瘤预后的关系。方法:选取2019年1月—2023年1月243例术后病理检查确诊为胶质瘤的病人,收集病人年龄、性别、吸烟和饮酒情况、体质指数、Karnofsky表现状态(KPS)、肿瘤大小、肿瘤位置(脑区)、切除范围、术前淋巴细胞计数、术前清蛋白水平、辅助放疗、化疗等资料,并根据磁共振成像数据计算肿瘤大小,采集病人术前1周血液学指标数据,评估术前清蛋白与球蛋白比值(AGR)及总生存期(OS)。检测血清miRNA-21,OS由Kaplan-Meier分析估计,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析AGR和miRNA21的预测能力。Cox比例风险模型用于单变量和多变量分析。结果:排除65例不符合纳入标准的病人和12例失访病人,共纳入166例病人。Kaplan-Meier分析曲线显示,AGR≤1.75或miRNA-21≤48的病人OS明显低于AGR>1.75或miRNA-21>48的病人(P均<0.001)。1年生存期:AGR和miRNA-21的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.680,0.631;2年生存期:AGR和miRNA-21的AUC分别为0.651,0.656。在多变量分析中,AGR[HR=0.785,95%CI(0.357,0.979),P=0.040]和miRNA-21[HR=0.757,95%CI(0.378,0.985),P=0.039]均是OS的独立预测因子。结论:术前AGR和miRNA-21与胶质瘤病人的OS显著相关。基于术前炎症、免疫和营养状况等指标,AGR和miRNA-21可为胶质瘤病人制定更有效的术前调节策略和更好的辅助治疗方案。

6-姜烯酚通过miRNA-26a-5p/DAPK1减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

为探究6-姜烯酚(6-Shogaol,6-SH)对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)的保护作用,采用分子对接观察6-SH能否自发性结合microRNA-26a-5p(miRNA-26a-5P),双萤光素报告基因检测验证miRNA-26a-5p与死亡相关蛋白激酶1(ceath associated protein kinase 1,DAPK 1)的靶向关系;线栓法制备大鼠CIRI模型,雄性SD大鼠随机为假手术组、模型组、6-姜烯酚组;于CIRI后72 h进行改良神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色,评分后采集脑组织标本进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察神经细胞病理损伤情况,透射电镜观察神经元超微结构及自噬情况,免疫荧光检测自噬标志物,实时荧光定量和蛋白印迹法检测自噬和钙超载相关蛋白和基因。实验结果表明6姜烯酚可上调miRNA-26a-5p的表达,抑制DAPK1的表达,减轻大鼠CIRI后过度自噬和钙超载,发挥神经保护作用。

糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药

背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物,但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs,探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs,将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株,CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因,RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达,表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192,细胞对顺铂的IC50显著增高,顺铂引起的细胞凋亡率显著降低;反之,在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达,顺铂的IC50显著降低,顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR,并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达,诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药,并减少顺铂引起的细胞凋亡。