miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.01)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460>CNE-2>CNE-2R,且有显著统计学差异(P<0.01)。RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2。近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P<0.000 1)。结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织。miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。

MiRNA-381表达及其与食管鳞癌放疗敏感性的关系

目的:观察人食管鳞癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系。方法:采用RT-PCR法测定人食管鳞癌细胞TE-1、TE-10、TE-11及20例符合纳入标准的食管鳞癌组织中miRNA-381的表达。完成放疗后1个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效。采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性。结果:入组患者根据近期疗效分为放疗抵抗组(6例)和放疗敏感组(14例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P<0.05)。克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为TE-11>TE-10>TE-1,且有显著统计学差异(P<0.05)。RT-PCR结果显示放疗最敏感的TE-11细胞中miRNA-381表达量最高,而放疗抵抗的TE-1细胞中miRNA-381表达量最低。近期疗效和食管鳞癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.72,P<0.05)。结论:MiRNA-381在放疗敏感的食管鳞癌细胞及临床标本中的表达量显著高于放疗抵抗的细胞及组织。MiRNA-381相对表达量越高的食管鳞癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好。

miRNA-132通过靶向调控Bmi-1表达影响鼻咽癌细胞对放射治疗敏感性

目的研究miRNA-132对鼻咽癌细胞放射治疗敏感性的影响。方法使用miRNA芯片技术,对比5-8F(亲代细胞)和5-8F/R(放射治疗抵抗细胞)中miRNA表达水平差异,从中挑选差异最为明显的miRNA-132作后续研究。使用流式细胞仪检测miRNA-132对细胞凋亡的影响。使用双荧光报告素酶、蛋白免疫印迹法等方式验证miRNA-132的下游靶基因。结果 miRNA-132可以促进鼻咽癌5-8F/R细胞的凋亡,提高其对放射治疗的敏感性,还可以抑制其体内的生长能力。miRNA-132可以抑制Bmi-1信使RNA和蛋白质表达水平。结论 miRNA-132可通过抑制下游靶基因Bmi-1来发挥其放射治疗增敏功能。

miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1的放疗敏感性

目的:探究miRNA-325-3p及其靶基因细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌细胞CNE1的放疗敏感性的影响。方法:通过miRBase、Targetscan及Microcosm三大数据库预测miRNA-325-3p的潜在靶基因,并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证,qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1中miRNA-325-3p及其靶基因的表达水平变化,通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1细胞克隆形成率的变化,流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1在不同放射剂量下凋亡水平的变化,MTT法检测miRNA-325-3p过表达和CK13敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果:CK13确认为miRNA-325-3p的潜在靶基因,鼻咽癌细胞CNE1经放射处理后,miRNA-325-3p的表达水平显著升高、CK13的表达水平显著降低(均P<0.05)。miRNA-325-3p表达量上调和CK13基因沉默均显著提高CNE1细胞的存活率[miRNA上调时(:60.14±3.55)%vs(19.23±3.42)%,t=14.37、P<0.01;CK13沉默时:(76.15±5.13)%vs(28.53±3.68)%,t=13.06、P<0.01]和克隆形成率,降低了凋亡率[miRNA上调时:(27.95±2.67)%vs(51.68±3.47)%,t=9.39、P<0.01;CK13沉默时:(20.31±2.62)%vs(38.14±3.83)%,t=6.66、P<0.01]。结论:miRNA-325-3p能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1对放疗的敏感性。