子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

外周血NLR、VEGF、miRNA let-7a水平与喉癌患者淋巴结转移的相关性

目的 分析外周血中性粒细胞/淋巴细胞比例(NLR)、血管内皮生长因子(VEGF)、miRNA let-7a表达水平与喉癌患者淋巴结转移的相关性。方法 选取2018年1月至2021年1月运城第一医院收治的60例喉癌患者作为喉癌组,30例喉部良性病变患者为对照组,另选取同期来院体检的健康人30名为健康组,比较三组外周血NLR、VEGF、miRNA let-7a。根据淋巴结转移情况将喉癌患者分为有淋巴结转移亚组和无淋巴结转移亚组,比较两个亚组之间外周血NLR、VEGF、miRNA let-7a,绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线评估NLR、VEGF、miRNA let-7a水平对喉癌患者有无淋巴结转移的诊断价值。结果 外周血NLR、VEGF水平:喉癌组>对照组>健康组,miRNA let-7a:喉癌组<对照组<健康组,差异均有统计学意义(F=110.518、727.392、402.508,P<0.05)。60例喉癌患者中无淋巴结转移28例,淋巴结转移32例。有淋巴结转移患者NLR、VEGF水平均明显高于淋巴结转移患者,miRNA let-7a表达明显低于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(t=5.078、9.956、6.353,P<0.05)。ROC结果显示,NLR、VEGF、miRNA let-7a及其联合检测的AUC分别为0.733、0.807、0.752、0.894。结论 喉癌患者外周血NLR、VEGF、miRNA let-7a表达异常,且均与淋巴结转移有关,联合检测NLR、VEGF及miRNA let-7a有助于提高喉癌淋巴结转移诊断效能。

MiRNA let-7a对人喉鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨miRNA let-7a调控高迁移率族蛋白2(HMGA2)对人喉鳞癌细胞株TU212增殖的影响。方法合成let-7a模拟体(let-7a mimics)并采用阳离子脂质体法瞬时转染入喉癌TU212细胞,裸鼠皮下注射TU212细胞,构建裸鼠移植瘤模型。RT-qPCR和Western blot法分别检测转染后TU212细胞及移植瘤内let-7a和HMGA2的表达。结果在过表达let-7a的喉癌TU212细胞中,HMGA2的转录和翻译水平下调,细胞增殖能力降低。体外成瘤实验证实,与let-7a NC组和空白对照组相比,转染let-7a mimics的喉癌细胞TU212成瘤组织的质量和体积均显著下降;let-7a过表达的TU212成瘤组织中HMGA2的mRNA和蛋白水平均明显下调。结论let-7a能显著抑制HMGA2的mRNA和蛋白表达,进而显著抑制喉癌细胞的增殖。

miRNA Let-7与乳腺癌预后的相关性分析

目的探讨Let-7家族各成员与乳腺癌患者预后相关性,寻找更有效的乳腺癌防治分子靶标。方法利用KaplanMeier plotter在线数据库分析Let-7家族各成员(Let-7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7i、miR-98、miR-202)表达与乳腺癌患者总生存期(OS)及临床病理参数的相关性,并得出相应的危险比(HR)、95%置信区间(CI)和P值。结果 Let-7a、Let-7b、Let-7c、Let-7e、Let-7f、Let-7g、miR-98高表达或miR-202低表达的患者有较好的OS(P<0.05);病理特征分析显示,Let-7a、Let-7b、Let-7f、Let-7g、miR-98、miR-202的表达与疾病临床分期存在相关性(P<0.05)。Let-7a、Let-7b、Let-7c、Let-7e、Let-7f、Let-7g、miR-98和miR-202与淋巴结表达存在相关性(P<0.05);三阴乳腺癌患者OS则与Let-7b、Let-7c、Let-7g、miR-202表达显著相关(P<0.05)。结论 Let-7与乳腺癌患者OS显著相关,各成员在乳腺癌中的预后判断中具有不同的价值,其中Let-7b、Let-7g、miR-202在不同临床参数及三阴乳腺癌中都显示出与预后密切相关,更有望成为乳腺癌防治靶标。

miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脊髓NF-200、GFAP表达的影响

目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制。方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只。采用改良Allen's法制备脊髓损伤模型。造模后1周,BMSCs组行BMSCs移植,miRNA组移植miRNA let-7b慢病毒载体感染的BMSCs,对照组注射生理盐水。移植后第3天至8周,按BBB标准量表对大鼠后肢运动功能进行评分,用免疫组化方法检测脊髓中神经丝蛋白-200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:实验时间内,各组大鼠BBB评分和脊髓NF-200表达持续升高;不同时间点BBB评分和脊髓NF-200表达以miRNA组最高,BMSCs组次之,对照组最低(P<0.05)。移植后各组脊髓GFAP表达均呈持续性增高,各时间点GFAP阳性表达面积以对照组最大,BMSCs次之,miRNA组最小(P<0.05)。结论:miRNA let-7b可能通过促进BMSCs分化为神经元样细胞、抑制脊髓损伤后反应性胶质细胞的增生及胶质瘢痕形成等机制促进损伤后的神经功能恢复。

miRNA let-7a调控HMGA2表达抑制喉癌细胞增殖并促进其凋亡的作用机制

目的:探讨在喉癌细胞株Hep-2中上调miRNA let-7a的表达对高迁移率族蛋白(high mobility group A,HMGA2)的作用机制以及对喉癌细胞增殖的影响。方法:合成miRNA let-7a模拟体(let-7a mimics)并采用阳离子脂质体法转染入Hep-2内;分别用流式细胞术和MTT法检测let-7a高表达对细胞凋亡和增殖的影响;实时荧光PCR(Real-time q PCR)和Western blot检测上调let-7a后对HMGA2表达的影响。结果:本实验将let-7a mimics成功转染入Hep-2内,流式细胞术及MTT法检测显示Hep-2内let-7a的表达上调会抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞的凋亡。RT-q PCR检测显示:let-7a mRNA在空白组和阴性对照组(NC组)的表达水平明显低于实验组(P<0.05);HMGA2 mRNA在空白组、NC组的表达水平明显高于实验组(P<0.01)。Western blot检测细胞中HMGA2蛋白的表达显示:实验组HMGA2蛋白的表达量明显低于空白组和NC组(P<0.01)。上述实验中空白组与NC组之间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:let-7a能够显著下调HMGA2基因和蛋白的表达,抑制喉癌细胞的增殖,促进其凋亡,为喉癌基因靶向治疗提供坚实的理论基础。

MiRNA Let-7和Lin28在散发性听神经瘤中的表达及意义

目的研究微小RNA Let-7与Lin28在散发性听神经瘤中的表达及二者之间的关系,探讨其对肿瘤进展可能的影响。方法收集18例经过术后病理证实的散发性听神经瘤组织作为实验组,7例正常胃迷走神经为对照组。采用RT-PCR、免疫组织化学染色方法,检测Let-7d和Lin28A/B mRNA的表达,以及Lin28蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示,Let-7dmRNA表达量在听神经瘤组织显著高于对照神经组织(P<0.001),Lin28A/B mRNA表达量在听神经瘤组织显著低于对照组织(PLin 28A=0.004,PLin28B=0.001)。在听神经瘤组织中,Let-7d与Lin28A/B mRNA的表达存在负相关关系(r=-0.671,P=0.002;r=-0.662,P=0.003)。免疫组织化学检测显示在听神经瘤与正常神经组织中均未发现Lin28蛋白阳性染色。结论在听神经瘤的生长及恶性转化抑制机制中,以微小RNA为主导的Let-7d/Lin28双向负反馈调节可能起重要作用。

鸭miRNA let-7-5p的分子生物学特征及功能预测

let-7通过影响靶基因的表达水平而参与细胞的生长、分化、凋亡等。为了研究let-7-5p在鸭上的序列特征、表达模式及其对鸭骨骼肌发育的可能作用,本文应用本课题组前期mi RNA测序数据,通过生物信息分析技术和分子生物学技术,研究了鸭let-7-5p序列特征、表达模式、其靶基因及靶基因的功能注释。结果如下:1鸭let-7-5p成熟序列是TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT;2鸭let-7-5p在北京鸭孵化第11天(E11)至E27胸肌内的表达量逐渐增加。组织间表达模式显示,在鸭E27心脏内的表达量最高(3.33),在肝脏、皮脂、肌胃、小肠和腹脂的相对表达量较低;3鸭let-7-5p靶基因的GO条目中许多条目与骨骼肌发育密切相关。研究结果能为进一步研究let-7-5p对鸭骨胳肌发育的作用奠定基础。

稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用

【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。

miRNA let-7a靶向抑制ACVR1B表达

目的:探讨miRNA let-7a对ACVR1B表达的影响。方法:生物信息学分析表明activin receptor type 1B(ACVR1B)是一个let-7a的潜在靶基因。构建ACVR1B 3’UTR野生型(ACVR1B 3’UTR-WT)和ACVR1B3’UTR突变型(ACVR1B 3’UTR-MUT)双荧光素酶报告载体,分别与let-7a模拟物(let-7a mimic)或let-7a阴性对照(let-7a NC)共同转染HEK293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组细胞的荧光素酶活性。分别转染let-7a mimic、let-7a inhibitor和let-7a NC至HEK293T细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测ACVR1B的m RNA和蛋白表达水平。结果:ACVR1B 3’UTR含有let-7a潜在的高度保守的结合靶点(77~83位点)。在HEK293T细胞中共转染ACVR1B 3’UTR-WT报告载体的let-7a mimic组比let-7a NC组荧光素酶活性组明显降低(P<0.05);而共转染ACVR1B 3’UTR-MUT报告载体的let-7a mimic与let-7a NC组其荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。在HEK293T细胞中let-7a mimic转染组中ACVR1B的mRNA和蛋白水平均低于let-7a NC组和let-7a inhibitor组(P<0.05)。结论:ACVR1B是let-7a潜在调控的靶基因,miRNA let-7a可以直接抑制HEK293T细胞中ACVR1B基因的表达。

miRNA Let-7对神经母细胞瘤细胞的抑制作用及其机制

为研究miRNA Let-7神经母细胞瘤(NB)的抑制作用,本研究采用小RNA干扰技术(siRNA)降低miRNA Let-7的表达,PCR法检测miRNA Let-7表达,Western blotting检测相关凋亡蛋白的表达,采用吸光度值反映细胞的增殖情况,Transwell方法检测细胞转移。结果显示,与未转染组和si-NC(携带空质粒的干扰RNA)转染组细胞相比,siRNA-Let-7转染组细胞的数量增多,Cleaved casp-3、Bax mRNA及其蛋白显著增高,而Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低。结果表明,miRNA Let-7能够通过抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力和促进细胞的凋亡,进而对神经母细胞瘤有重要抑制作用。

miRNA let-7对疾病调控机制的研究进展

微小RNA(mi RNA)是一种高度保守的单链小分子RNA,具有调控组织细胞的生长发育、分化以及凋亡的作用。let-7 miRNA家族是目前研究最为广泛的mi RNA家族。let-7能够在人体外周血以及体液中稳定存在,其表达以及平衡状态的维持受到调控因子的相关作用来实现。这些调控通路的异常将导致let-7家族的表达异常,就从而导致肿瘤,高血压,癫痫,心血管等疾病的发生。因此,监测let-7表达水平可预防、治疗与其相关的疾病。本文主要综述了mi RNA let-7对这些疾病的调控机制的研究进展。

宫颈鳞癌患者血浆miRNA let-7a-3p表达及其临床意义

子宫颈鳞癌在妇科恶性肿瘤最常见,病死率也高,每年全球新发病例超45万之多,是严重威胁女性健康的恶性疾病之一,近年研究发现宫颈癌发病逐渐趋于年轻化[1],其也是我国重点防治癌症之一。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程,因此尽早诊断,及时采取相应治疗措施,是降低宫颈癌死亡率以及改善患者生活质量的关键。人乳头状瘤病毒(HPV)感染,尤其是高危型HPV的感染是导致宫颈癌发生的主要危险因素。

miRNA let-7a在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤之一,由于病症不明显、缺乏早期诊断方法,且易复发并伴有化疗耐药,成为女性死亡常见原因之一。微小RNA(miRNA)是一种小非编码RNA,普遍存在于真核生物体内,参与体内多种生理、病理过程,其异常表达往往与疾病相关。miRNA let-7a作为较早被发现的miRNA,已在多种肿瘤组织中发现其表达异常,其在卵巢癌中作为抑癌基因呈现低表达,与卵巢癌的发生、发展、耐药及预后密切相关,但let-7a的作用机制复杂,其在卵巢癌中的作用机制还需进一步阐明。

急性创伤性脑损伤患者脑组织miRNA let-7i水平变化及其临床意义

创伤性脑损伤是指暴力作用于头部造成脑组织器质性损伤,我国每年有超过200万人接受创伤性脑损伤治疗[1-3]。微小RNA(miRNA)是一类小的(19-28nt)内源性RNA分子,其通过抑制来调节mRNA转录后水平的基因表达。miRNA与mRNA中的互补序列结合阻断mRNA翻译[4-5]。组织中的miRNA高度稳定,对反复冻融循环和酶促降解具有抗性,并且可以在极端pH条件下存活。由于这些特性,miRNA最近已成为许多疾病的新型生物标志物。

miRNA let-7a和miRNA let-7f早期诊断肝癌的临床价值

目的探讨原发性肝癌患者miRNA let-7a、miRNA let-7f的表达。方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者。采用RT-PCR方法检测miRNA let-7a、miRNA let-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的表达水平。选择同期该院体检的40例健康者作为健康对照者。比较肝癌患者和健康对照者血清miRNA let-7a、let-7f的表达差异。结果肝癌癌变组织miRNA let-7a[(0.18±0.04)×103]、miRNA let-7f[(0.19±0.01)×103]分别较癌旁组织[(1.52±0.11)×103、(0.67±0.10)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01);肝癌患者血清miRNA let-7a[(0.22±0.06)×103]、miRNA let-7f[(0.15±0.04)×103]较健康对照者[(1.13±0.21)×103、(0.62±0.12)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA let-7a、miRNA let-7f在肝癌患者病变组织及血清中异常偏低表达,可作为早期诊断肝癌的重要标志物,为临床诊断提供参考。

miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响

目的:构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法:以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNApre-let-7a1基因序列,将miRNApre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMVneo中,构建成pSilencerTM4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNAlet-7a1在转录水平的表达。根据miRBaseTargets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果:pSilencerTM4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilen-cerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNAlet-7a1。pSilencerTM4.1-let-7a1质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示:pSilencerTM4.1-let-7a1转染后的A549活细胞数目明显减少。结论:成功构建了真核表达载体pSilencerTM4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNAlet-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。

鸡miRNA let-7b前体区单核苷酸多态性与生长肉用性状关联分析

为了探讨miRNA let-7b前体区SNP多态位点rs71292045、rs71292453与鸡生长肉用性状的关联性,以杏花鸡和隐性白洛克鸡杂交所得到的F2代肉鸡生长性状和肉用性状资料为研究素材,进行相关性分析。结果显示:1)SNP多态位点rs71292045不同基因型与鸡的胸肌率、腿胸比呈显著相关;2)SNP多态位点rs71292453不同基因型与鸡的胸肉重、腿肉重、腿肌率、胸肌率、腿胸比呈显著相关;3)SNP多态位点rs71292045对胸肌率的优势基因型是GA,腿胸比的优势基因型是AA;对位点71292453而言,胸肉重的优势基因型是TC,腿肉重的优势基因型是CC,腿肌率的优势基因型是CC,胸肌率的优势基因型是TC,腿胸比的优势基因型是TT。本研究结果可为肉鸡经济性状的选育和提高提供一定的参考。

miRNA let-7家族在胶质瘤发生与发展中作用的进展

胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤。WHO中枢神经系统肿瘤分类将胶质瘤分为Ⅰ~Ⅳ级,其中Ⅰ、Ⅱ级为低级别胶质瘤(low grade glioma,LGG),Ⅲ、Ⅳ级为高级别胶质瘤(high gradeglioma,HGG),胶质瘤级别愈高,恶性程度愈高[1]。目前,胶质瘤的治疗仍以手术为主,并结合放疗和化疗等综合治疗,但胶质瘤治疗效果欠佳。成人HGG的1、5年生存率分别约为30%、13%,间变性胶质瘤及胶质母细胞瘤(WHO分级Ⅳ级)的中位生存时间分别为2~3年和1年[2]。随着分子生物学研究的发展,治疗恶性胶质瘤的靶点已转向人体干细胞内基因及蛋白因子。

MiRNA Let-7a及miR-34a与氯化镧抑制宫颈癌淋巴转移作用的相关性研究

目的探究miRNA Let-7a及miR-34a与氯化镧抑制宫颈癌淋巴转移作用的相关性。方法应用宫颈癌U14荷瘤小鼠,随机分为对照组及给药组,给药组小鼠给予氯化镧(含氯化镧2mg/kg),连续灌胃14d后,解剖检查并根据淋巴转移程度进行等级评分,应用逆转录实时荧光定量PCR分别检测两组小鼠宫颈组织中Let-7a及miR-34a的表达,并与淋巴转移等级进行相关性研究。结果给药组与对照组相比,宫颈癌组织MiRNA Let-7a及miR-34a的水平显著上调,宫颈癌转移程度有所缓解,且Let-7a及miR-34a与小鼠淋巴转移等级呈正相关变化,差异具有显著性(P<0.05)。结论氯化镧通过增加Let-7a及miR-34a的表达,抑制宫颈癌荷瘤小鼠淋巴转移程度,且Let-7a及miR-34a的水平变化能够作为氯化镧药理作用的分子标记物,为临床研究提供潜在的治疗靶点及诊断指标。