中医药疗法调节miRNA对心肌缺血再灌注损伤影响的研究进展

综述中医药通过调节微小核糖核酸(miRNA)对心肌缺血再灌注损伤影响的研究进展。相关研究结果表明,中药单体(人参皂苷1、芹菜素、丹酚酸B、木犀草素等)、复方(如益气活血复方、通心络)及针灸(如电针预处理、电针内关穴、体内双内关穴电针和体外微电流预处理)可通过调控miRNA治疗心肌缺血再灌注损伤,为中医药治疗心肌缺血再灌注损伤及其相关预后干预提供切入点。

小鼠肾脏缺血-再灌注损伤miRNAs差异表达谱研究

目的筛选小鼠肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)差异性表达的微小核糖核酸(miRNAs),为进一步深入阐明肾脏IRI发生、发展的分子机制奠定基础。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性肾缺血损伤模型,将15只小鼠分为IRI组和假手术组(E组),IRI组再分为A组(缺血时间45 min,再灌注时间24 h)、B组(缺血时间25 min,再灌注时间24 h)、C组(缺血时间45 min,再灌注时间4 h)、D组(缺血时间25 min,再灌注时间4 h),每组3只。采用肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果来鉴定各组小鼠的IRI程度;采用miRNAs芯片聚类分析对小鼠IRI特定缺血时间(25、45 min)和再灌注时间(4、24 h)下肾脏差异性表达差异表达的miRNAs进行筛选鉴定;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)对小鼠IRI后差异表达miRNAs芯片miR-695与miR-145进行验证。结果肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果显示成功建立IRI模型。与假手术组相比,肾脏IRI组共检出71种差异性表达显著的miRNAs,其中30种下调表达,41种上调表达。q RT-PCR法检测结果表明,以E组特定miRNAs的表达量标准化为1,miR-695及miR-145在肾脏IRI组的相对表达量分别为11.82和0.31(均为P<0.05),与芯片结果基本一致。结论肾脏IRI后,miRNAs表达谱发生差异性改变,这些差异性表达的miRNAs将可作为肾脏IRI的分子标志物而具有潜在的临床及科研应用价值。

针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤大鼠心肌钙泵活性及基因表达的影响

目的:观察针刺心包经“内关”“郄门”穴治疗心肌缺血的作用机制。方法:将大鼠随机分为5组,假手术组、缺血-再灌注模型组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组、针刺“支沟”对照组。后3组电针相应穴位20min后,结扎冠状动脉左前降支40min,心电图(ECG)监测,再电针穴位20min,松扎,恢复灌流60min,摘取心脏,取心室肌制备心肌细胞肌浆网,定磷法测定三磷酸腺苷酶(Ca2+-ATPase)活性的高低;用Northen-Blot方法测定肌浆网Ca2+-ATPasemRNA的相对含量。结果:模型组Ca2+-ATPase活性明显降低,Ca2+-ATPasemRNA的表达下降。针刺心包经“内关”穴组和“郄门”穴组Ca2+-ATPase活性和Ca2+-ATPase mRNA表达均发生明显变化,与模型组比较均有非常显著性意义(P<0.01),针刺“支沟”穴组酶活性与基因的表达和模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺手厥阴心包经穴“内关”“郄门”穴可提高心肌细胞肌浆网Ca2+-ATPase的活性,促进Ca2+-ATPasemRNA基因的表达,减轻缺血再灌注损伤的程度,增强心肌的功能。

眼针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织半暗区Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的:探讨眼针疗法治疗缺血性脑血管病的机制。方法:线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分为假手术组、模型组与眼针组;取眼针上焦区、下焦区、肝区、肾区为施加因素;RT-PCR法检测Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达。结果:眼针组与模型组比较,差异显著(P<0.01)。结论:眼针下调脑缺血再灌注缺血区脑组织Caspase-8、Caspase-3 mRNA组表达,从而抑制细胞凋亡,可能是眼针治疗缺血性脑血管病的机制之一。

电针对大鼠局灶脑缺血再灌注后脑内血管生长因子和血管抑制因子表达的影响

目的:探讨电针对缺血性脑卒中的作用机制。方法:线栓法制备Wistar大鼠局灶脑缺血再灌注模型。将大鼠随机分为正常组、模型组、电针组。选取双侧“合谷”穴为电针穴位,采用原位杂交法检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,免疫组化法检测血管生成素(Ang-1)和内皮抑素(Endostatin)蛋白的表达。结果:模型组VEGFmRNA、Ang-1蛋白、Endostatin蛋白的表达较正常组增加(P<0·05),电针组VEGFmRNA、Ang-1蛋白比模型组增加更明显(P<0·05),而En-dostatin蛋白表达增加较模型组明显下降,差异有显著性意义(P<0·05)。结论:电针可能通过上调血管生长因子和下调血管抑制因子的表达来促进局灶脑缺血再灌注后的血管新生。

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ET-1基因表达的影响

目的 :观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织 ET- 1基因表达的影响 ,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制成大鼠 MCAO再灌注模型 ,并用地高辛精标记 ET- 1基因进行原位杂交。结果 :补阳还五汤治疗组缺血再灌注侧皮层及尾状核 ET- 1基因表达显著低于生理盐水对照组 (P<0 .0 5 ) ,两组大鼠缺血再灌注侧皮层和尾状核 ET- 1基因表达均显著高于健侧相应脑区 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。结论 :脑缺血再灌注可以诱导脑组织 ET- 1基因的异常表达 ,从而进一步加重脑损伤 ,补阳还五汤可在一定程度上下调脑缺血诱导的ET- 1基因的表达 ,可能是其防治缺血性脑血管病的主要作用机制之一。

脑络欣通对脑缺血再灌注气虚血瘀证大鼠皮质、海马CA_1区FADD和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注损伤气虚血瘀证大鼠神经细胞凋亡Fas/FasL信号转导通路FADD、Caspase-3蛋白表达的影响。方法:采用气虚血瘀证大鼠以线栓法阻塞其大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注1、3、7天。用免疫组化染色法分别检测缺血皮质或海马CA1区FADD、Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,脑络欣通组缺血皮质和海马CA1区FADD、Caspase-3蛋白表达显著降低。结论:脑络欣通可能通过抑制缺血皮质或海马CA1区FADD、Caspase-3的蛋白表达,抗神经细胞凋亡,改善气虚血瘀证大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。

针刺对兔血管再狭窄模型内皮细胞凋亡及表达的影响

目的:观察针刺对家兔实验性动脉再狭窄的防治作用并探讨其作用机理。方法:应用PTCA球囊导管对实验兔行双侧髂动脉内膜剥脱以建立动脉粥样硬化模型,术后1月髂动脉造影示50%以上狭窄者再行PTCA球囊扩张术,以建立再狭窄模型。模型成功后,将造模动物随机分成针刺实验组、普罗布考组、模型组,每组8只。自术前2天至术后14天为1疗程,针刺内关(双)、厥阴俞(双)、心俞(双)、膻中、足三里(双)等穴。髂动脉取材,石蜡切片,TUNFL染色,DAB显色,苏木素复染。观察各组动脉内皮细胞凋亡率及Bax、Bcl-2基因蛋白表达。结果:针刺组内皮细胞凋亡率及Bax基因表达明显高于模型组(P<0.01),针刺后Bax/Bcl-2比值明显升高。结论:针刺能促进兔血管再狭窄模型平滑肌细胞凋亡,调整Bax/Bcl-2比值,从而达到防治PTCA后动脉再狭窄的作用。

补阳还五汤及拆方影响脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白的表达(英文)

背景:补阳还五汤是一种临床上常用的治疗缺血性脑血管疾病的中药,其作用机制还有许多不明之处。目的:观察补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注SD大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响及其作用机制,并研究方剂配伍的意义。设计:随机对照的动物实验。单位:河南中医学院第一附属医院神经内科。材料:实验在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行。选择上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供的清洁级SD大鼠60只,月龄4～5个月;雌雄各半,雌性260～310g,雄性280～330g。活血组药物选用当归120g,桃仁60g,川芎60g,加水1440mL,提取挥发油,备用。药渣及提取液加入赤芍120g,地龙60g,红花60g,再加入1440mL水,煎煮1h,滤过,药渣再加入2880mL水,煎煮1h,滤过,合并两次煎液,浓缩至1200mL,加入挥发油及吐温-803mL,混匀,即得。黄芪组药物选用黄芪1200g,加水7200mL,煎煮两次,每次1h,滤过,合并煎液,浓缩至600mL,加入吐温-802mL,即得。补阳还五汤组选用当归60g,桃仁30g,川芎30g,加水720mL,提取挥发油,备用。药渣及提取液加入黄芪1200g,赤芍60g,地龙30g,红花30g,再加入920mL水,煎煮1h,滤过,药渣再加入8640mL水,煎煮1h,滤过,合并两次煎液,浓缩至600mL,加入挥发油及吐温-803mL,混匀,即得。(黄芪组和补血组药物为补阳还五汤的拆方。)活血组药物每毫升相当生药0.4g,黄芪组药物每毫升相当于生药2g,全方组药物相当于生药2.4g。方法:将60只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、活血组、黄芪组、总方组,每组分别为12只。每只SD大鼠分别通过灌胃给药:活血组8g/kg、黄芪组40g/kg、总方组48g/kg,假手术组及模型组分别给予生理盐水20mL/kg。通过四血管结扎法制作脑缺血再灌注模型。采用缺口末端标记法原位检测凋亡细胞(TUNEL),应用免疫组化法测定Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达。主要观察指标:①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平的比较;②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较。结果:①各组SD大鼠脑组织神经元细胞凋亡水平比较:与假手术组相比,其他各组细胞凋亡明显增加(t=6.07～11.70,P<0.01);与模型组相比,活血组、黄芪组细胞凋亡减少(t=2.71,2.06,P<0.05),总方组减少明显(t=5.34,P<0.01)。②各组SD大鼠脑组织神经元Bcl-2、Bax阳性细胞表达水平的比较:与假手术组相比,活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多(t=4.59～8.82,P<0.01),Bax阳性细胞表达更加明显(t=4.59～8.55,P<0.01);与模型组相比,活血组、黄芪组、总方组Bcl-2染色阳性细胞的表达增多(t=3.48～7.75,P<0.01),Bax阳性细胞的表达降低(t=3.83～5.88,P<0.01)。活血组药物作用与黄芪组差异无显著性(P>0.05),总方组药物作用与黄芪组、活血组差异极具显著性(P<0.01)。结论:补阳还五汤及拆方通过抑制细胞凋亡的作用,达到抗脑缺血再灌注损伤的作用。黄芪组和活血组即拆方的协同作用,使总方组发挥最大的疗效。

脑络欣通对脑缺血再灌注大鼠神经元、神经胶质细胞形态学及皮质TNF-α、c-Myc蛋白表达的影响

目的:探讨脑络欣通对气虚血瘀证脑缺血再灌注大鼠神经元、神经胶质细胞形态学变化和TNF -α、c-Myc蛋白表达的影响。方法:采用气虚血瘀证模型鼠,再线栓大脑中动脉复制局部脑缺血再灌注模型,缺血2小时分别再灌注1天,3天,7天,随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组和脑络欣通组。应用光镜和免疫组化法,观察缺血侧额顶叶皮质神经元、神经胶质细胞形态学变化及TNF-α、c-Myc蛋白表达。结果:气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注后,同侧额顶叶皮质梗死区神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞出现变性、死亡,梗死灶周围小胶质细胞和星形胶质细胞增生。TNF-α、c-Myc蛋白表达阳性细胞(positive cells)和平均吸光度(A value)增加,与假手术组比较均有显著性差异(p＜0．01)。脑络欣通可明显改善大鼠神经元和神经胶质细胞的形态变化,能使TNF-α、c-Myc蛋白表达降低,与模型鼠比较有显著性差异。益气组、活血组部分时段表达降低,脑络欣通组降低明显,与益气组、活血组比较部分有显著差异。结论:脑络欣通及其拆方可通过抑制TNF-α、c-Myc蛋白的表达来调节不同细胞间相互作用,进而影响气虚血瘀证大鼠脑缺血再灌注后神经元、神经胶质细胞之间在损伤、抗损伤及修复中的相互作用,减轻病理性损伤。

针刺对动脉再狭窄家兔血管平滑肌细胞增殖及c-foc基因表达的影响

目的:探讨针刺对家兔实验性动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、c-foc基因表达的影响。方法:家兔随机分为正常对照组和再狭窄组。再狭窄组应用PTCA球囊导管对实验兔行双侧髂动脉内膜剥脱以建立动脉粥样硬化模型,术后1月髂动脉造影示50%以上狭窄者再行PTCA球囊扩张术,以建立再狭窄模型。将造模动物随机分成模型组、针刺组、普罗布考组。自术前2天至术后14天为1疗程,针刺内关(双)、厥阴俞(双)、心俞(双)、膻中、足三里(双)等穴。观察各组血管平滑肌细胞增殖、c-foc基因表达。结果:模型组平滑肌细胞增殖及c-foc基因表达明显高于正常对照组(P<0.01);针刺能抑制血管平滑肌细胞增殖,其c-foc基因表达低于模型组(P<0.01)。结论:针刺能抑制再狭窄兔血管平滑肌细胞增殖,抑制c-foc基因表达,调节平滑肌细胞凋亡,可能是针刺预防动脉再狭窄的作用机制之一。

大鼠肢体缺血再灌注损伤后脊髓神经元fos的表达及丹参注射液的干预作用

目的:探讨大鼠肢体缺血再灌注损伤后脊髓神经元原癌基因c-fos的表达改变及丹参注射液对其的影响。方法:通过暂阻断一侧髂总动脉和股动脉,建立肢体缺血再灌注损伤(IRI)模型。采用免疫细胞化学ABC法,观察大鼠脊髓神经元fos阳性神经元的表达和分布特点,以及丹参注射液干预后阳性神经元的改变情况。结果:大鼠肢体缺血4小时脊髓相应节段神经元fos表达增强,再灌注2小时后,fos表达进一步增强(P<0.01),并且fos阳性神经元较集中分布于脊髓相应节段同侧后角及中央管周围。而丹参注射液可抑制再灌注后fos活性(P<0.01)。结论:脊髓相应节段同侧神经元可能参与肢体IRI的发病过程,尢其是脊髓后角及中央管周围神经元可能具有更为重要的作用,丹参注射液可能对肢体IRI后脊髓神经元有保护作用,这种保护作用可能与其对fos表达的抑制作用有关。

miRNA对心肌细胞肥大的调控作用及在心肌肥厚发病中的分子生物学作用机制研究进展

心肌肥厚是由多种因素引起的心肌组织超负荷的适应性反应,为了维持心脏稳态及预防病理性心肌肥厚需要严格控制心肌细胞和非心肌细胞的信号通路。微小RNA(miRNA)是真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,长度为19~25个核苷酸。miRNA可通过调节细胞代谢、增殖、免疫反应等参与调节心肌肥厚的发生发展。miRNA影响心肌肥厚的分子生物学机制是多途径的,其参与miRNA正调控或负调控心肌肥厚都是多方面、多靶点的。

针刺对大鼠脑组织神经生物学基因表达的研究

目的采用基因芯片技术,分析探讨针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤作用的分子机制。方法取雄性Wistar大鼠6只,3只为正常对照组,另3只为针刺预处理组。针刺组先行“肾俞”“百会”针刺预处理,出针后0.5h断头取脑。基因芯片技术进行基因表达差异分析。结果针刺预处理后0.5h,大鼠脑组织表达变化大于2倍的基因共265个,20个基因表达差异具有显著性意义(P<0.05)。其中8个基因表达上调,12个基因表达下调;涉及神经元信号传递类(离子通道、递质、受体、第二信使)基因11个,涉及转录调控类基因5个,涉及代谢酶类基因2个,涉及热休克反应类基因1个,涉及细胞骨架类基因1个。结论一些针刺诱导的基因表达产物在针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤过程中发挥了重要作用;针刺预处理后神经细胞功能状态的改变可能是其随后发挥抗脑缺血再灌注损伤作用的重要基础。

草红花水提物对心肌缺血-再灌注损伤引起心肌细胞凋亡的影响

目的观测草红花水提物对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响。方法采用大鼠左冠状动脉前降支结扎法制备心肌缺血再灌注模型。实验分为3组假手术组,缺血再灌注组,草红花水提物治疗组。缺血30min,再灌注120min,检测心肌细胞凋亡指数AI、Bcl-2、Bax基因蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组AI增加,Bax阳性表达增强,Bcl-2阳性表达减弱(P<0.01);与缺血再灌注组比较,草红花水提物治疗组,AI、Bax阳性表达下降(P<0.01),Bcl-2阳性表达上调(P<0.05)。结论草红花水提物具有抑制心肌缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡作用。

隔姜灸天枢穴对UC大鼠结肠组织的mi RNA表达谱的影响

目的探讨隔姜灸天枢穴对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织mi RNA表达谱的影响,从mi RNA的角度探讨隔姜灸的效应机制。方法将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(UC组)和隔姜灸组(GM组),每组10只。采用4%DSS制备UC大鼠模型,GM组取双侧天枢穴进行隔姜灸干预。干预7 d后,采用苏木精-伊红染色观察隔姜灸干预UC大鼠的效应,并采用RNA-seq的方法检测大鼠结肠组织的miRNA表达谱。结果病理结果提示,隔姜灸能明显减轻UC大鼠结肠组织的炎症。与NC组比较,UC组大鼠结肠组织差异表达mi RNAs有45个,其中上调42个,下调3个;与UC组比较,GM组大鼠结肠组织差异表达mi RNAs有8个,其中上调3个,下调5个。UC病理状态下表达量改变的mi R-139-5p,miR-204和miR-184,均可被隔姜灸天枢穴干预后逆转,其预测靶基因的pathways与UC的免疫炎症密切相关。结论隔姜灸天枢穴对DSS诱导的UC大鼠结肠组织黏膜损伤具有保护效应,这与其影响结肠组织miRNA表达谱相关,主要调节了UC结肠组织异常表达的miR-139-5p,miR-204和mi R-184。

基于MAPK信号通路探讨针刺加亚低温对CIRI大鼠脑组织miRNA-204及其靶基因表达的影响

目的:观察针刺联合亚低温对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠脑组织miRNA-204及其靶基因表达的影响,探讨针刺联合亚低温对CIRI的保护机制.方法:将60只Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、亚低温组和针刺联合亚低温组,每组10只.除空白组和假手术组外,其余4组大鼠均制备CIRI模型.造模成功后,空白组常规饲养72 h,不做任何处理;假手术组与模型组常规饲养72 h,术后只捆绑,不予其他处理;针刺组常规饲养72 h,捆绑后予以针刺大椎、百会和水沟;亚低温组常规饲养72 h,捆绑后用亚低温法维持大鼠温度72 h;针刺联合亚低温组常规饲养72 h,捆绑后予以亚低温及针刺干预,针刺方法同针刺组,亚低温方法同亚低温组.干预72 h后,观察各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积比值、缺血侧海马组织miRNA-204及其靶基因Map3k8、Ntrk2和Ppp3r1的表达.结果:干预前,与空白组和假手术组相比,造模大鼠的神经功能缺损评分及梗死面积均明显增加,组间差异均具有统计学意义(均P<0.01),说明造模成功.干预后,与模型组相比,3个干预组神经功能缺损评分均显著降低(均P<0.01);与针刺组和亚低温组比较,针刺联合亚低温组梗死面积比值显著减少(均P<0.01);在miRNA-204表达方面,与模型组相比,3个干预组大鼠的脑组织中miRNA-204表达均显著降低(均P<0.05),其中针刺联合亚低温组下调miRNA-204表达的趋势最显著(P<0.01);与针刺组和亚低温组相比,针刺联合亚低温组Map3k8表达显著升高(均P<0.01),但Ntrk2和Ppp3r1表达的组间差异无统计学意义(均P>0.05).结论:针刺、亚低温、针刺联合亚低温干预均可降低CIRI大鼠的神经功能缺损评分,缩小脑梗死面积,其中针刺联合亚低温作用最为显著;在调节miRNA-204靶基因Map3k8表达方面,针刺联合亚低温的作用优于单独针刺或亚低温干预,但在调节Ntrk2和Ppp3r1表达方面,针刺组、亚低温组和针刺联合亚低温组作用相当.

外泌体在骨性关节炎发病机制中的研究进展

外泌体与骨性关节炎(OA)关系密切,参与OA多种生理及病理学过程。本文阐述外泌体在OA发展过程中的作用机制,综述间充质干细胞、成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞等各类细胞所分泌的外泌体在OA发病进程尤其是骨代谢过程中的重要作用,同时对外泌体在OA治疗中的应用前景进行展望。