miRNA调控小鼠涎腺发育基因及相关性研究

目的:本研究旨在通过小鼠胚胎发育时期涎腺miRNA基因芯片的检测,研究miRNA靶基因调控小鼠涎腺胚胎发育机制以及相互联系。方法:选择在胚胎发育第18天、第19天、及出生当天、出生后3d4个时期形态发育完整下颌下腺作为标本,通过检测基因芯片,建立基因表达谱,运用生物信息学方法,分析这4个时段miRNA表达及相互联系,靶基因的调控关系。结果:建立miRNA与靶基因间调控网络。结论:miRNA在调节小鼠细胞周期、脂质代谢、离子转运、细胞增殖过程中起重要作用,从而使样本在胚胎期到出生后样本发生表型上的变化。

miRNA-135在调控前列腺癌细胞增殖中的应用及机制

目的观察miRNA-135在调控激素非依赖性前列腺癌细胞增殖能力中的作用及其机制。方法利用微小核糖核酸(miRNA)基因芯片检测激素非依赖性前列腺癌和激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达差异。经过体外转染miRNA-135后对DU145和PC3细胞进行MTT检测,了解细胞的增殖情况。利用miRNA-135靶基因预测软件miRwalk和miRanda预测,初筛miRNA-135调控的基因和相关通路。结果 miRNA基因芯片结果显示,激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达量高于激素非依赖性前列腺癌组织(P﹤0.05);miRNA-135可以抑制DU145和PC3细胞的生长,尤其在第48 h和第72 h以后(P﹤0.05);转染miRNA-135后,前列腺癌细胞株DU145和PC3中STAT6的表达水平较转染NC的细胞株明显下调。结论 miRNA-135能够抑制激素非依赖性前列腺细胞DU145和PC3的增殖能力,有望成为前列腺癌治疗的新靶标。

胃癌淋巴结转移相关外周血MicroRNA分子标记物的临床价值

目的分析不同时期胃癌患者外周血中MicroRNA(miRNA)的表达差异,以寻找一种特异性高的肿瘤标记物。方法选取2010年5月至2012年12月上海浦东新区人民医院普外科住院治疗的80例胃癌患者,将其按照淋巴结转移数目分为N0组(无淋巴结转移)46例、N3组(淋巴结转移大于7枚)34例,并选取同一时期的体检健康者40例为健康对照组。取外周血进行基因芯片检测,并选择在N0组与N3组表达差异显著的hsa-miR-106a,采用实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)扩大标本量进行检测。结果 qRT-PCR检测结果显示,N3组的外周血hsa-miR-106a表达水平较N0组及健康对照组明显上调,差异有统计学意义(P<0.05),但N0组与健康对照组外周血hsa-miR-106a表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。hsa-miR-106a表达水平除了与胃癌淋巴结转移有关外(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位、组织学类型、肿瘤类型及分化程度都无关(P>0.05)。结论 hsa-miR-106a在有淋巴结转移的胃癌患者外周血中高表达,可作为胃癌筛查的重要肿瘤标记物。

Importin-8、CRM1对miR-122在肝细胞核进出的影响探究

为探究肝脏细胞核中miRNAs的生理功能,首先获得肝脏细胞核中高表达的miRNAs,并且分别抑制miRNA进核和出核的核转运蛋白表达,进一步探究miRNA在细胞核与细胞质转运的机制。采用细胞核提纯技术,分别提取了人肝癌细胞系Hep3B和Huh-7细胞核,利用miRNA基因芯片技术(miRNA microarray)检测细胞核中miRNA的信号值表达情况;利用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)技术,验证细胞核中表达量高的miRNA;最后分别抑制miRNA的进核和出核转运蛋白,探究转运蛋白对细胞核miRNA转运的影响。结果表明,核转运蛋白Importin-8与CRM1分别负责miR-122在肝脏细胞的进核与出核。

miR-134 miR-17～92基因簇与卵巢癌耐药的关系

目的检测并验证miR-134及miR-17～92基因簇在紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞中的差异表达并探讨两者参与卵巢癌耐药的可能机制。方法2010年10月至2012年12月于中国医科大学附属盛京医院，用Affymetrix GeneChip miRNA芯片对紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞miRNA基因表达谱进行分析。选取差异表达明显的miR-134和miR-17～92基因簇，采用Real-timePCR方法进一步验证芯片结果。应用生物信息学分析软件预测miR-134和miR-17～92基因簇各自潜在的靶基因并通过WesternBlot对部分靶基因进行验证。结果与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比，耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134低表达，miR-17～92基因簇高表达。软件预测得到miR-134基因簇潜在靶基因c-Myc，MRP1／ABCCl等共128个，软件预测得到miR-17～92基因簇潜在靶基因BIM，PTEN，ABCAl等共30个。与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比，耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134潜在靶基因c-Myc蛋白高表达；miR-17～92基因簇潜在靶基因BIM蛋白低表达（P均〈0．05），PTEN蛋白虽表达增高但差异无统计学意义。结论MicroRNA表达谱基因芯片可筛查出紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞的差异表达基因。低表达miR-134和高表达的miR-17～92基因簇可能分别通过调节其潜在靶基因c-Myc及BIM蛋白表达参与卵巢癌化疗耐药。