miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制

目的探讨miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制。方法取对数生长期人淋巴瘤Jurkat细胞,分别向培养基中加入5 ml生理盐水配制的浓度为0、0.5、1.0、1.5μg/ml的多柔比星,取健康体检者(对照组)的单个核细胞。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-106a以及视网膜母细胞瘤1(RB1)、E2F转录因子1(E2F1)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA的表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测RB1、E2F1、caspase 3蛋白的表达水平。结果0μg/ml多柔比星干预人淋巴瘤Jurkat细胞miRNA-106a的表达水平明显高于对照组单个核细胞(P﹤0.01)。随多柔比星浓度升高、作用时间延长,miRNA-106a表达水平逐渐降低,光密度(OD)值逐渐降低,细胞增殖抑制率(IR)和凋亡率均逐渐升高,RB1、caspase 3 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐升高,E2F1 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,miRNA-106a与RB1、caspase 3的表达均呈负相关(P﹤0.01),与E2F1的表达呈正相关(P﹤0.01)。结论miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中高表达,其可能通过调控RB/E2F1通路相关蛋白的表达来调节淋巴瘤进展。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

miRNA-211通过BIN1介导肝癌细胞PD-L1依赖的免疫逃逸研究

目的探讨miR-211对程序性死亡-配体1(PD-L1)介导的肝癌细胞免疫逃逸作用及其相关机制。方法收集我院19例肝癌患者肿瘤组织,通过qRT-PCR检测肝癌组织中miR-211和PDL1表达水平并分析两者的相关性。检测人肝癌HepG2、HCCLM3细胞和人正常肝上皮细胞HL-02中miR-211和PD-L1表达水平。将HepG2细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-211组(转染miR-211),检测2组细胞中miR-211和PD-L1表达水平以及NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率。采用荧光素酶报告基因实验检测miR-211和BIN1的靶向关系。再将HepG2细胞分为miR-NC+oe-NC组(转染miR-NC和oe-NC)、miR-211+oe-NC组(转染miR-211和oe-NC)及miR-211+oe-BIN1组(转染miR-211和oe-BIN1),检测各组细胞中miR-211、BIN1和PD-L1表达及NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率。结果肝癌患者肿瘤组织中miR-211和PD-L1表达呈正相关(r=0.6007,P=0.001)。与HL-02细胞比较,HepG2和HCCLM3细胞中miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-211组miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率降低(P<0.05)。miR-211靶向结合并抑制BIN1。与miR-NC+oe-NC组比较,miR-211+oe-NC组miR-211、PD-L1表达水平升高(P<0.05),BIN1表达水平降低(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率降低(P<0.05)。与miR-211+oe-NC组比较,miR-211+oe-BIN1组BIN1表达水平升高(P<0.05),PD-L1表达水平降低(P<0.05),NK-92细胞对肝癌细胞的杀伤率升高(P<0.05)。结论在肝癌细胞中,miR-211靶向抑制BIN1表达,从而促进PD-L1依赖的免疫逃逸。

miRNA-15a/16调控Bmi-1蛋白在卵巢癌顺铂化疗耐药中的作用

目的探讨miRNA-15a和miRNA-16在逆转卵巢癌顺铂化疗耐药过程中的作用机制。方法使用miRNA-15a和miRNA-16模拟物转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株CoC1/DDP,予顺铂处理,qRT-PCR检测正常培养CoC1/DDP细胞组、顺铂处理组、阴性对照组、转染miRNA-15a组、转染miRNA-16组和过表达的Bmi-1质粒的转染miRNA-15a和miRNA-16组的miRNA-15a、miRNA-16的表达水平,同时应用Western blot检测各组细胞中Bmi-1的表达水平,CCK-8法、Annexin V/PI法检测每组细胞的存活及凋亡情况、γ-H2AX免疫荧光检测细胞凋亡情况。结果卵巢癌顺铂耐药细胞株CoC1/DDP中miRNA-15a和miRNA-16低表达,Bmi-1蛋白高表达。过表达miRNA-15a、miRNA-16水平,Bmi-1蛋白下降(P<0.05),细胞存活率下降(P<0.05),DNA凋亡明显增加(P<0.05),DNA损伤程度更严重(P<0.05)。过表达Bmi-1质粒可提高细胞活度(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论Bmi-1蛋白可能是miRNA-15a和miRNA-16的调节蛋白靶点,高表达miRNA-15a和miRNA-16可以通过降低Bmi-1蛋白来提高顺铂对卵巢癌细胞的敏感性。通过对卵巢癌顺铂化疗耐药性分子标记的预测和对卵巢癌肿耐药性目标的攻克提供了新的思路。

芦丁调控miR-155和HMGB1/RAGE通路对糖尿病视网膜病变大鼠炎性反应的影响

目的:探讨芦丁对糖尿病视网膜病变大鼠炎性反应的影响及其机制。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组(0.9%氯化钠溶液灌胃)和芦丁低、中、高剂量组[分别以50、100、150 mg/(kg·d)芦丁灌胃],并取正常大鼠作为对照组(0.9%氯化钠溶液灌胃),每组20只,持续给药12周后,比较各组大鼠视网膜组织中伊凡斯兰渗透量、神经节细胞凋亡和微小RNA(miR)-155、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)mRNA表达水平,以及炎症因子水平。结果:对照组、模型组和芦丁低、中、高剂量组中伊凡斯兰渗透量分别为(1.61±0.31)μg/g、(12.84±1.24)μg/g、(9.85±0.62)μg/g、(6.80±0.53)μg/g、(2.87±0.51)μg/g,神经节细胞凋亡指数分别为(1.09±0.45)%、(30.96±2.50)%、(24.65±2.48)%、(18.61±1.41)%、(8.36±0.54)%,miR-155表达水平分别为(0.38±0.03)、(1.92±0.15)、(1.55±0.12)、(1.09±0.10)、(0.55±0.05),HMGB1 mRNA表达水平分别为(0.26±0.03)、(0.77±0.05)、(0.68±0.04)、(0.57±0.04)、(0.34±0.03),RAGE mRNA表达水平分别为(0.18±0.02)、(0.67±0.04)、(0.58±0.03)、(0.45±0.03)、(0.23±0.02)。模型组和对照组比较,伊凡斯兰渗透量、凋亡指数和miR-155、HMGB1、RAGE mRNA水平均升高(均P<0.05);芦丁低、中、高剂量组中上述指标呈剂量依赖性降低(均P<0.05)。模型组、对照组与芦丁低、中、高剂量组,芦丁各组的炎症因子水平低于模型组(均P<0.05)。结论:芦丁可保护糖尿病大鼠视网膜损伤,延缓视网膜炎症效应,其作用机制可能与抑制miR-155和HMGB1/RAGE通路有关。

通过miRNA-TF-mRNA调控网络揭示儿童1型糖尿病的潜在生物标志物

目的通过miRNA-TF-mRNA调控网络来预测儿童1型糖尿病(T1D)的潜在生物标志物。方法以基因表达综合数据库(GEO)的GSE33440数据集为基因表达阵列。利用R包微阵列数据线性模型(LIMMA)识别差异表达基因(DEG)、加权基因共表达网络分析(WGCNA)筛选最重要模块,共同基因(CGs)被确定为DEG和最重要模块中的基因的交叉点;对CGs进行GO、KEGG通路富集分析;通过miRNA-TF-mRNA调控网络预测潜在生物标志物。结果识别出51个DEG和9个重要模块;筛选出了12个CGs;CGs富集在腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路以及胰岛素受体底物2基因(IRS2);在miRNA-TF-mRNA调控网络中miR-499b-5p可靶向IRS2,通过AMPK信号通路调节儿童T1D。结论研究揭示了miR-499b-5p/IRS2可能被视为儿童T1D的潜在治疗靶点。

利用质粒介导的miRNA-1-2抑制H9C2中Hand2蛋白的表达

目的构建人miRNA-1-2的真核表达载体,并检测其对大鼠成肌细胞H9C2中Hand2蛋白表达的抑制作用。方法用PCR法体外合成miRNA-1-2前体序列的DNA模板,并定向插入到发夹RNA(hairpin RNA)表达载体pSilencer-4.1-neo上。用脂质体法将构建正确的重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2瞬时转染H9C2细胞,检测miRNA-1-2前体转录本(pre-miRNA-1-2)和miRNA-1靶基因Hand2(heart and neural crest derivatives expressed transcript 2)的表达。结果DNA测序表明重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2构建正确。pSilencer-4.1/miRNA-1-2转染的H9C2细胞中,pre-miRNA-1-2被有效表达,Hand2 mRNA表达无变化,Hand2蛋白表达被抑制。结论成功构建了miRNA-1-2的真核表达载体,由表达载体介导的miRNA-1能有效抑制Hand2蛋白的表达。

胃癌外体(exosome)内miRNA-1的检测分析

目的检测胃癌细胞系来源外体（exosome）及其胃癌组织和血清中exosome内miRNA-1的表达水平并分析其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR分别检测胃癌细胞系来源exosome、胃癌患者组织及血清exosome内miRNA-1的表达水平,分析其与临床资料相关性,并绘制ROC曲线进行效能分析。结果 miRNA-1在人胃癌细胞系MGC-803（6.51±0.41）和SGC-7901（14.81±1.30）中的含量明显高于胃上皮细胞系GES-1（1.05±0.25）,差异有统计学意义（t分别为11.26、10.38,P均〈0.01）;而MGC-803、SGC-7901细胞培养上清exosome内miRNA-1的表达水平（49.98±11.77和28.68±4.66）显著高于GES-1来源exosome（1.00±0.02）差异有统计学意义（t分别为4.162、5.942,P均〈0.01）;25对胃癌组织标本中有18例癌组织miRNA-1表达上调,7例表达下调,胃癌组织[1.110（0.070,4.307）]平均表达水平高于癌旁组织[1.149（1.110,2.075）],差异有统计学意义（Z=-1.897,P〈0.05）。miRNA-1在胃癌患者血清exosome内的表达水平[4.130（0.151,12.720）]较体检健康者血清exosome内表达水平[0.704（0.077,7.243）]明显增高（Z=-2.407,P〈0.05）,且与胃癌的淋巴结转移相关;胃癌患者血清exosome内miRNA-1的ROC曲线下面积（AUC^ROC）为0.723 0,95%可信区间（CI）为0.627 0～0.818 7,cut off值为2.39,敏感性为66%,特异性为68%。结论胃癌组织及其胃癌患者血清来源exosome内富含miRNA-1,有望成为新的胃癌诊断标志物。

慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异研究

目的探讨慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异。方法 30只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组20只。正常组等容量生理盐水腹腔注射,模型组予阿霉素腹腔注射造模;采用心脏彩超检测心功能,采用生理记录仪记录血流动力学,心脏切片行Tunel染色检测细胞凋亡,采用Real-time PCR法检测miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA表达;采用Western blot及免疫组化法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。结果与正常组比,模型组大鼠左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室终末舒张压(LVEDP)明显增大(P<0.05),而左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左心室平均压(LVAP)、左心室内压最大上升速率(dp/dtmax)及左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)下降(P<0.01),Tunel染色示心肌凋亡明显。miRNA-1、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01),miRNA-133表达下降(P<0.01)。结论 miRNA-1、Caspase-3、Caspase-9在心肌凋亡中表达增加,miRNA-133表达下降。

利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠

目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

miRNA-1和心肺复苏后心功能障碍严重程度的相关性研究

目的探讨miRNA-1表达水平和心肺复苏后心功能障碍严重程度的相关性。方法选择2014年2月~2016年2月期间在本院急诊科心肺复苏成功的心脏骤停患者62例作为病例组,按年龄、性别匹配取62例健康自愿者作为对照组,采用Real-time PCR检测miRNA-1表达水平。观察病例组患者超声心动图心功能各项指标,分析miRNA-1表达水平与心功能障碍严重程度的相关性。结果病例组miRNA-1表达水平明显高于对照组(P<0.05),心功能Ⅳ级组miRNA-1表达水平明显高于心功能Ⅲ级组(P<0.05),miRNA-1表达水平与心功能指标E峰、E/A值、LVEF、LVEDD呈负相关(P<0.05),miRNA-1表达水平与心功能障碍严重程度呈正相关(r=0.864,P<0.01)。结论miRNA-1参与了心肺复苏后心肌细胞凋亡的发生和发展,与心功能障碍严重程度密切相关,其具体途径可能是通过调节靶基因从而促进或抑制靶基因蛋白表达而实现。

miRNA-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-1对大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法应用转染的方法使培养的大鼠H9c2心肌细胞高表达miRNA-1(miRNA-1组),real-time PCR方法检测miRNA-1表达水平以确定转染成功后,MTT法检测细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡情况,分别采用real-time PCR和Western Blot方法检测凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,并与常规条件下培养的H9c2细胞(空白对照组)和转染随机合成的miRNA阴性对照片段(阴性对照组)比较。结果与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA-1 mimics后,H9c2大鼠心肌细胞miRNA-1表达水平明显升高,细胞凋亡率显著增加,细胞生存率、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论转染的miRNA-1 mimics能够上调细胞内的miRNA-1表达水平,抑制心肌细胞增殖,促进细胞凋亡。

miRNA-1介导的c-Met与宫颈癌进展的相关性研究

目的:分析c-Met、miRNA-1在宫颈癌组织中的表达水平变化,以及其与癌组织病理特征之间的相关性,探究miRNA-1和c-Met与宫颈癌生物学行为的关系。方法:收集内蒙古自治区人民医院2015年3月至2017年3月收治的50例宫颈癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中c-Met表达;采用RT-PCR检测癌组织及癌旁组织中miRNA-1的相对表达量;采用配对t检验对比分析癌组织与癌旁组织中c-Met、miRNA-1表达;应用Spearson线性相关检验分析c-Met、miRNA-1表达水平与宫颈癌患者临床病理特征间的相关性;应用Kaplan-Meier和Log-rank检验统计分析c-Met、miRNA-1表达对宫颈癌患者生存情况的影响。结果:宫颈癌组织中c-Met表达高于癌旁组织,24个月随访结果显示,c-Met表达越低,宫颈癌患者生存率越高。癌组织中miRNA-1表达水平显著低于癌旁组织,为癌旁组织的(0.41±0.07)倍,差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-1表达水平越低,患者生存率越低。结论:在宫颈癌组织中miRNA-1表达下调,c-Met表达上调,其表达与宫颈癌发生发展、预后有关,提示miRNA-1和c-Met可作为宫颈癌诊断和预后的重要生物学指标。

结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中HIF-1α与miRNA-200b表达的相关性

目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α与miRNA-200b在结直肠癌及缺氧的结直肠癌细胞中的表达以及两者的相关性。方法采用实时定量PCR检测50例结直肠癌患者的结直肠癌组织及其癌旁组织中HIF-1α与miRNA-200b的表达。利用Co Cl_2构建结肠癌细胞系的缺氧诱导模型,通过实时定量PCR和Western blot分别测定缺氧的Caco-2细胞中HIF-1α和miRNA-200b基因表达并确立两者相关性。结果 HIF-1α在癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0.01）,miRNA-200b在癌组织中的表达显著低于癌旁组织（P〈0.01）,且HIF-1α和miRNA-200b在癌组织中的表达呈负相关（r=-0.324,P〈0.05）。缺氧处理2 h后,HIF-1α表达升高,miRNA-200b表达降低;随着缺氧时间延长（4~12 h）HIF-1α表达逐渐降低,miRNA-200b的表达缓慢上升;缺氧16 h,HIF-1α的表达回升且达到另一个高峰,miRNA-200b的表达降至最低。Real-time PCR和Western blot联合检测发现,HIF-1α和miRNA-200b表达呈相反的趋势。结论 HIF-1α可能通过抑制miRNA-200b的表达从而参与结直肠癌上皮细胞EMT的过程。

miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法 RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Western blot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低(均P<0.05)。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。

TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p在胃癌组织中的表达及与疾病演进的相关性

目的研究转谷氨酰胺酶2(transglutaminase,TGM2)、核富集转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript1,NEAT1)、miRNA-17-5p在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达及与疾病演进的相关性。方法选取病理科保存的GC组织标本74例,为研究组,另选取同一时间段病理科保存的正常胃黏膜(距离癌组织>5 cm)74例,为对照组,检测TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p表达水平,统计研究对象一般资料及GC患者与疾病演进的相关性。结果与对照组比较,研究组TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无淋巴转移比较,有淋巴转移患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与临床Ⅲ~Ⅳ期比较,Ⅰ~Ⅱ期患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与黏膜下层比较,TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p阳性表达率升高与发生GC独立相关(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p预测发生GC曲线下面积(AUC)分别为0.662、0.716、0.754。结论GC患者组织中TGM2、NEAT1阳性表达率增高,miRNA-17-5p阳性表达率降低,其阳性表达的高低与患者淋巴转移、临床分期、病灶深度显著相关,在临床诊断中具有重要意义。

miRNA-132通过靶向调控Bmi-1表达影响鼻咽癌细胞对放射治疗敏感性

目的研究miRNA-132对鼻咽癌细胞放射治疗敏感性的影响。方法使用miRNA芯片技术,对比5-8F(亲代细胞)和5-8F/R(放射治疗抵抗细胞)中miRNA表达水平差异,从中挑选差异最为明显的miRNA-132作后续研究。使用流式细胞仪检测miRNA-132对细胞凋亡的影响。使用双荧光报告素酶、蛋白免疫印迹法等方式验证miRNA-132的下游靶基因。结果 miRNA-132可以促进鼻咽癌5-8F/R细胞的凋亡,提高其对放射治疗的敏感性,还可以抑制其体内的生长能力。miRNA-132可以抑制Bmi-1信使RNA和蛋白质表达水平。结论 miRNA-132可通过抑制下游靶基因Bmi-1来发挥其放射治疗增敏功能。

蛇床子素上调miRNA-9抑制BACE-1表达治疗阿尔茨海默病

目的探讨蛇床子素上调miRNA-9治疗AD的作用机制。方法基因芯片技术筛选蛇床子素治疗后差异表达的microRNAs;数据库和Cytoscape预测miRNA-9调控的靶基因;脂质体2000建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型,MTT法检测蛇床子素对细胞活力的影响;将miRNA-9抑制剂转入到APP高表达的SH-SY5Y细胞中,RT-PCR法检测各组miR-9、BACE-1 mRNA的表达情况;Western blot方法检测细胞中BACE-1蛋白的表达情况。结果数据库结果显示,蛇床子素调控的miRNA-9可以与BACE-1靶向结合。本实验成功建立APP高表达的SH-SY5Y细胞模型。MTT结果显示,50μmol·L^(-1)蛇床子素对细胞有较好的保护作用。RT-PCR结果显示,蛇床子素可以上调miR-9的表达,抑制剂组miRNA-9表达最低。与模型组相比,蛇床子素可以抑制BACE-1 mRNA和蛋白的表达,且抑制剂组的BACE-1 mRNA和蛋白表达最多。结论蛇床子素治疗阿尔茨海默病可能与上调miRNA-9,从而抑制BACE-1表达有关。

miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性研究

目的研究循环miRNA-1和急性心肌梗死后心肌缺血程度的相关性。方法入选经冠状动脉造影确诊为非急性心肌梗死的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者为对照组;符合2012年全球统一心肌梗死定义的急性ST段抬高心肌梗死患者为实验组;对两组病例采集血液标本,采用qPCR技术检测miRNA-1表达水平;同时对实验组进行ACC/AHA冠脉造影评分,比较两组间miRNA-1表达水平差异,并进一步分析实验组miRNA-1表达水平和ACC/AHA冠脉造影评分的相关性。结果入选42例病例,对照组21例,实验组21例。两组病例的micRNA-1相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);并且实验组各病例的micRNA-1相对表达量和ACC/AHA冠脉评分存在显著相关性差异有统计学意义湘关系数:R=0.6385,P<0.05)。结论循环miRNA-1和心肌梗死后心肌缺血程度存在显著相关性,miRNA-1有望成为新的检测心肌梗死和临床风险评估的分子标志物。

长链非编码RNA M通过作为miRNA-1的中心诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:探究LncRNA M是否可以通过作为miRNA-1的中心来诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移。方法:将体外培养的VSMC按照各检测指标需要进行转染,通过生物信息学找到可以与LncRNA M结合的miRNA-1;通过双荧光素酶报告基因检测各组的荧光素酶活性;RT-PCR检测LncRNA M与miRNA-1之间的调控关系,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,从而找出LncRNA M及miRNA-1对细胞增殖的影响;通过MTT实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移情况。结果:通过生物信息学及双荧光素酶报告基因检测得出LncRNA M可能是miRNA-1的一个靶向调控基因,并且miRNA-1能够和LncRNA M结合从而调控其在VSMC中的表达;RT-PCR和流式细胞术研究发现,敲低LncRNA M可能通过上调miRNA-1的表达来促进VSMC细胞的增殖。通过MTT实验和Transwell实验发现,与对照组相比miRNA-1 mimics组、miRNA-1 mimics+pmirGLO组的细胞活力和迁移率明显上升(P<0.05),过表达LncRNA M后其细胞活力和细胞迁移率明显下降(P<0.05)。结论:LncRNA M可能通过作为miRNA-1的中心上调miRNA-1的表达诱导VSMC的增殖和迁移。