外伤性颅脑损伤患者外周血miRNA-124表达水平及其与预后的相关性研究

目的 探讨外伤性颅脑损伤患者外周血miRNA-124表达水平及其与预后的相关性。方法 回顾性选取2020年10月至2022年4月海南西部中心医院神经外科收治的外伤性颅脑损伤患者60例作为研究对象,按入院格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分将其分为轻度损伤组(GCS评分13~15分,n=12),中度损伤组(GCS评分9~12分,n=27),重度损伤组(GCS评分3~8分,n=21),同期纳入30名健康体检者作为对照组。比较4组研究对象一般情况、GCS评分以及外周血miRNA-124表达水平的差异,将颅脑损伤患者分为预后不良组和预后良好组,对所有相关指标进行单因素分析,以单因素分析中差异有统计学意义的指标为自变量代入多因素Logistic回归模型中获得颅脑损伤患者预后不良的独立预测因素,绘制miRNA-124预测颅脑损伤患者预后不良的受试者工作特征(ROC)曲线,获得最佳诊断截点,分析miRNA-124对颅脑损伤患者预后不良预测效能。结果 4组研究对象GCS评分和miRNA-124比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着颅脑损伤程度的加重,GCS评分呈现下降趋势,miRNA-124呈现上升趋势。单因素分析结果显示,预后不良组入院GCS评分和平均动脉压均低于预后良好组,而降钙素原、白细胞计数、血糖以及miRNA-124均高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,入院GCS评分、降钙素原、血糖以及miRNA-124为影响颅脑损伤患者预后的独立预测因素,入院GCS评分为独立保护因素,降钙素原、血糖以及miRNA-124为独立危险因素,其中miRNA-124每增加1个单位,颅脑损伤患者预后不良的风险增加0.894倍(OR=1.894,95%CI:1.513~2.117,P=0.011)。Pearson相关性分析显示,颅脑损伤患者外周血miRNA-124表达水平与降钙素原、白细胞计数以及血糖呈明显正相关(P<0.05),而与入院GCS评分和平均动脉压呈明显负相关(P<0.05)。ROC结果显示,以3.5为最佳诊断截点,miRNA-124预测颅脑损伤患者预后不良的曲线下面积为0.815(95%CI:0.772~0.863),敏感度为85.4%,特异度为80.8%。结论 外伤性颅脑损伤患者外周血miRNA-124表达水平明显升高,外周血miRNA-124表达水平可用于评估这类患者预后,敏感度和准确度较高,当miRNA-124≥3.5时提示患者预后不良。

外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系

目的探究外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系方法 选取2019年5月~2022年5月我院诊治的118例创伤性颅脑损伤患者,收集记录患者的一般临床资料以及病情、预后情况,观察外周血miRNA-124表达水平与患者病情严重程度的关系,并采用因素logistic回归分析影响患者预后的独立相关因素,采用受试者工作特性曲线(ROC)评估相关指标预测患者预后的预测价值,并以患者预后对相关指标进行比较分析。结果 118例患者中,轻度27例,中度50例,重度41。轻度组miRNA-124低于中、重度组,中度组miRNA-124低于重度组,差异有统计学意义(P <0.05)。118例患者中,92例预后良好,26例预后不良。影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的单因素分析结果提示,D-二聚体、APACHEⅡ评分、国家早期预警评分(NEWS)、miRNA-124、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血糖均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的相关因素(P <0.05)。进一步多因素logistic回归分析结果提示,miRNA-124(OR=5.436,95%CI:1.600~18.468,P=0.008)、血糖(OR=3.296,95%CI:1.044~10.405,P=0.042)、APACHEⅡ评分(OR=1.633,95%CI:1.023~2.607,P=0.040)均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立危险因素。受试者工作特征曲线(ROC)结果显示,mi RNA-124相对表达量的ROC曲线下面积(AUC)为0.894,其敏感度为0.808,特异度为0.917,3组指标联合的AUC为0.943,其敏感度为0.924,特异度为0.859。结论 患者的miRNA-124、血糖、APACHEⅡ评分均为影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立影响因素,且miRNA-12相对表达量与3组指标联合对创伤性颅脑损伤病情严重程度具有较好的预测效能,临床治疗可对相关指标予以关注。

miRNA-124靶标功能的生物信息学挖掘

以miRNA-124为例,将miRNA的靶标预测信息与芯片数据分析中下调的基因信息整合起来,从而筛选出miRNA-124的候选靶标,然后对这些靶标的功能进行了深入分析.研究结果表明miRNA-124的靶标可分为两类:直接靶标和间接靶标,间接靶标是通过直接靶标的调控起作用的.miRNA-124靶标的功能主要是蛋白结合作用.miRNA-124靶标的筛选和功能挖掘,为科学工作者选择和验证其它miRNAs靶标的功能打下了坚实的基础,同时此方法可以推广到其它miRNAs的功能研究中.

中重度颅脑损伤并发脑梗死患者血清miRNA-124与miRNA-210表达的临床意义

目的探讨血清微小RNA(microRNA,miRNA)-124和miRNA-210表达在中重度颅脑损伤并发外伤性脑梗死中的临床应用价值。方法收集商洛市中心医院和西安市第八医院住院治疗的57例中重度颅脑损伤患者的血清及临床资料,依据是否发生外伤性脑梗死分为梗死组22例,未梗死组35例,并设立对照组(24例),采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time-PCR,RT-PCR)技术检测血清miRNA-124和miRNA-210的表达。比较分析血清miRNA-124和miRNA-210的变化与外伤性脑梗死的关系。结果血清miRNA-124和miRNA-210在梗死组、未梗死组和对照组的表达分别为(0.90±0.18,0.39±0.07,0.18±0.03)和(0.95±0.20,0.42±0.10,0.21±0.04)。与对照组比较,血清miRNA-124和miRNA-210在未梗死组和梗死组的表达显著上调,差异均有统计学意义(t=22.99,23.67,均P<0.01;t=35.37,36.93,均P<0.01)。两标志物在梗死组的表达显著高于未梗死组,差异均有统计学意义(t=23.27,25.12,均P<0.01)。大脑前动脉(ACA)、大脑中动脉(MCA)及大脑后动脉(PCA)在梗死组、未梗死组和对照组的平均流速分别为(36.9±7.6,45.3±8.6,33.9±5.5)cm/s,(60.3±7.9,79.2±12.7,49.6±7.2)cm/s,(51.3±7.7,70.5±11.9,43.1±6.9)cm/s.ACA,MCA及PCA在未梗死组的平均流速与对照组比较明显增快,差异有统计学意义(t=12.23,13.10,13.16,均P<0.01)。ACA,MCA和PCA在梗死组的平均流速分别与未梗死组及对照组比较明显减慢,差异有统计学意义[(t=11.30,12.67,12.09,均P<0.01),(t=11.37,11.52,11.09,均P<0.01)]。miRNA-124和miRNA-210在梗死组的表达具有正相关性(r=0.629,均P<0.01),它们分别与梗死组ACA,MCA和PCA的平均流速具有负相关性[(r=-0.653,-0.620,-0.613,均P<0.01),(r=-0.679,-0.656,-0.637,均P<0.01)],而与未梗死组ACA,MCA和PCA的平均流速则具有正相关性[(r=0.640,0.596,0.607,均P<0.01),(r=0.676,0.625,0.638,均P<0.01)]。结论检测血清miRNA-124和miRNA-210的表达可预测外伤性脑梗死的发生及判断其危险程度,估计病情的发展状况。

miRNA-124在自发性脑出血患者血清中表达及其临床意义

目的探讨miRNA-124在自发性脑出血(ICH)患者血清中的表达及其临床意义。方法选取2017年10月至2019年10月收治的60例ICH患者为研究组。另选60例体检证实的健康成年人为对照组,按脑出血体积将ICH患者分为小血肿组(<10 ml)、中血肿组(10~30 ml)、大血肿组(>30 ml)各20例;通过定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测发病后6 h血浆miRNA-124相对表达水平。结果研究组血清中miRNA-124水平明显高于对照组(P<0.05);ICH患者随着血肿量增多血清中miRNA-124显著升高(P<0.05)。结论ICH后血清中miRNA-124标志物的检测可用于ICH的辅助诊断,也可用来评估ICH出血严重程度。

基于miRNA-124探讨益脾养肝方对大鼠肝癌前病变影响的实验研究

目的探讨益脾养肝方对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导大鼠肝癌前病变模型,以益脾养肝方(YPYGF)组方干预后各组大鼠不同肝细胞形态变化,以及对肝细胞中miRNA-124变化的影响。方法以DEN诱导180只Wistar大鼠肝癌前病变模型,成模后随机分为6组各30只(空白组、DEN组、护肝片组、低剂量组、中剂量组、高剂量组),给予不同干预后,通过HE染色观察各组肝细胞形态变化,并采用免疫荧光染色法及qRT-PCR法检测肝细胞中miRNA-124表达水平变化,以研究益脾养肝方对大鼠模型肝癌前病变的影响。结果与DEN组比较,益脾养肝方干预下肝癌前病变大鼠肝组织内miRNA-124表达水平显著升高,肝癌前病变组织及细胞凋亡改善显著,各组间比较,YPYGF高剂量组作用最明显。结论益脾养肝方能够有效修复受损的肝细胞,改善肝脏功能,延缓肝癌前病变进展,其治疗机制可能与改善肝细胞中抑癌因子miRNA-124的表达,进而抑制肝细胞凋亡的作用相关。

血清miRNA-124、miRNA-221在缺血性脑卒中患者中的临床应用价值分析

目的观察血清中的miRNA-221和miRNA-124在缺血性脑卒中患者中的应用价值。方法收集65例缺血性脑卒中患者的临床资料,根据患者脑卒中的发生情况进行分组,其中完全性卒中(CS)患者纳入A组(33例),进展性卒中(SIE)患者纳入B组(32例),另外选取同期在本院进行健康体检的35例健康人纳入C组。采集所有患者的静脉血液,检测所有患者血清中miRNA-221和miRNA-124的表达水平,观察其临床应用价值。结果A组的总胆固醇、空腹血糖、甘油三酯和收缩压均高于B组、C组,且B组高于C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A组和B组miRNA-221表达水平低于C组,且A组低于B组;A组和B组miRNA-124表达水平高于C组,且A组高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。缺血性脑卒中的miRNA-221和miRNA-124水平为负相关性(r=-0.573、-0.582,P<0.05);miRNA-221和危险因素中的总胆固醇、空腹血糖、甘油三酯和收缩压之间呈负相关性(r=-0.456、-0.463、-0.467、-0.466,P<0.05);miRNA-124和危险因素中的总胆固醇、空腹血糖、甘油三酯和收缩压之间呈正相关性(r=0.522、0.513、0.501、0.509,P<0.05)。结论通过对血清中miRNA-221、miRNA-124水平的检测可以有效的判断出缺血性脑卒中的发生情况,为评估病情的严重程度提供了有效的依据。

外泌体miRNA-124在颅脑创伤过程中表达及意义的研究进展

颅脑创伤仍是目前致死率和致残率居全身创伤首位的疾病,颅脑创伤后的炎症反应、氧化应激以及轴突的损伤修复等过程至关重要。然而,对于颅脑创伤病人的诊断、治疗及其预后的预测等仍缺乏有效的手段。外泌体miRNA已被阐明具有调节各种生物功能的机制,其中miRNA-124是中枢神经系统含量最丰富的miRNA,与上述过程联系紧密,有望协助早期诊断颅脑创伤,并为其提供治疗靶点、预测预后等。对国内外关于miRNA-124在颅脑创伤过程中的表达及其意义的研究进展进行综述,从而更准确地为其作为生物标志物和未来治疗靶点,进一步理解颅脑损伤的发生、发展提供全新的视角。

miRNA-124 in immune system and immune disorders

In recent years,miR-124 has emerged as a critical modulator of immunity and inflammation.Here,we summarize studies on the function and mechanism of miR-124 in the immune system and immunity-related diseases.They indicated that miR-124 exerts a crucial role in the development of immune system,regulation of immune responses,and inflammatory disorders.It is evident that miR-124 may serve as an informative diagnostic biomarker and therapeutic target in the future.

miRNA-124-3p靶向EZH2调控肝癌细胞转移和侵袭能力的机制研究

目的探讨miRNA-124-3p靶向果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)调控肝癌细胞转移和侵袭能力的机制。方法H22细胞分为Con组、mimic组、inhibitor组,mimic组和inhibitor组中分别转染miRNA-124-3p类似物mimic和抑制物inhibitor。实时荧光定量PCR法检测EZH2 mRNA表达水平。PI染色-流式细胞术检测细胞周期的变化,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞转移和侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,免疫荧光法检测细胞EZH2的表达变化,Western blot法检测细胞中EZH2、细胞外因子1(wnt-1)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因法验证miRNA-124-3p和EZH2的靶向关系。结果与Con组比较,mimic组细胞EZH2蛋白和mRNA表达水平均下调,细胞24 h迁移率下降,转移细胞数、侵袭细胞数和克隆形成数均减少,EZH2的荧光强度下调,wnt-1和β-catenin蛋白表达水平均上调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Con组和mimic组比较,inhibitor组EZH2蛋白和mRNA表达水平均上调,细胞24 h迁移率上升,转移细胞数、侵袭细胞数和克隆形成数均增加,EZH2的荧光强度上调,wnt-1和β-catenin蛋白表达水平均下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。荧光素酶报告基因结果显示miRNA-124-3p是EZH2的调控非编码RNA,miRNA-124-3p可以靶向结合EZH2。结论miRNA-124-3p可以靶向抑制EZH2表达,下调wnt-1、β-catenin蛋白水平,改善肝癌细胞的转移和侵袭。

上皮性卵巢癌原发灶和转移灶中miRNA-124表达水平的研究

目的探讨miRNA-124和其靶蛋白表皮生长因子受体(EGFR)在上皮性卵巢癌(EOC)原发灶及转移灶中的表达。方法 2016年5月至2018年3月于宁波市鄞州人民医院进行手术治疗的EOC患者60例,采用显色原位杂交(CISH)技术检测miRNA-124在EOC原发灶和转移灶中的表达;采用免疫组化法检测EGFR蛋白的表达。结果46(76.67%)例原发灶中miRNA-124表达阳性,18(30.00%)例转移灶中miRNA-124表达阳性,miRNA-124在原发灶中的表达率明显较转移灶高,差异有统计学意义(χ~2=26.250,P<0.001)。原发灶及转移灶中EGFR的的阳性表达率均为100.00%,原发灶中强阳性(+++)表达率较转移灶低,差异有统计学意义(χ~2=13.575,P<0.05)。miRNA-124和EGFR在原发灶和转移灶中的表达量呈负相关(r=-0.482,P=0.021)。结论 miRNA-124在EOC原发灶和转移灶中的表达有所差异。miRNA-124可能通过靶向EGFR调节EOC的转移,其可能成为治疗EOC潜在靶点,但是具体作用机制还需要进一步体内外研究。

血清miRNA-124 miRNA-221在缺血性脑卒中的临床应用

目的探讨血清miRNA-124、miRNA-221在缺血性脑卒中患者中的临床应用价值。方法收集缺血性脑卒中患者85例的临床资料，将脑卒中患者分为完全卒中组和进展卒中组，选取同期本院健康体检者38例为对照组。采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测血清miRNA-124、miRNA-221的表达。结果脑卒申患者血清miRNA-124、miRNA-221表达与对照组比较分别上调和下调，差异有统计学意义（Pc0．01）；miRNA—124在进展卒中组的表达水平低于完全卒中组（t=21．37，P〈0．01），miRNA-221的表达水平则高于完全卒中组（t=22．26，P〈0．01）。完全卒中组和进展卒中组miRNA-124、miRNA-221表达均呈负相关（r=-0．687，-O．692，P〈0．01）。两组患者中miRNA．124，miRNA-221的表达水平分别和甘油三酯、总胆固醇、收缩压及空腹血糖具有相关性[（r=0．387，0．316，0．369，0．337，P〈0．01）；（r=-0．328，-0．368，-0．329，-O．382，P〈0．01）]。结论检测血清miRNA．124、miRNA-221表达可预测缺血性脑卒中疾病的发生及判断其危险程度，估计病情的发展状况。

Ku70作为RNA解旋酶调节miR-124的加工成熟及神经细胞的分化

目的Ku70蛋白主要通过其DNA结合特性参与双链DNA断裂(DSB)的非同源端连接(NHEJ)修复,有报道称其具有RNA结合功能,本文探索Ku70是否具有RNA解旋酶活性并影响miRNA加工成熟。方法利用RNA免疫共沉淀(RIP)测序结合生物信息学分析Ku蛋白结合的RNA;蛋白质印迹法(Western blot,WB)结合定量反转录PCR(qRTPCR)检测Ku蛋白与miRNAs的表达关系;生物膜干涉技术(BLI)实验分析Ku蛋白与RNA的结合能力;电泳迁移率变动分析(EMSA)实验确定Ku70及Ku80的RNA解旋酶活性;形态学检测结合WB分析Ku70调节miR-124引起的神经细胞功能变化;免疫荧光结合形态学分析寨卡病毒(ZIKV)感染后Ku70及miR-124的变化与神经元分化关联。结果研究发现,Ku70蛋白具有RNA解旋酶活性,并通过其RNA解旋酶活性影响miRNA加工成熟。Ku70缺失引起许多miRNAs上调,其中包括神经细胞特异的miR-124。在人神经前体细胞(h NPCs)和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中敲低Ku70可促进miR-124的成熟,从而导致上述细胞向神经元分化。本文进一步发现,ZIKV感染影响了Ku70及miR-124的表达,导致细胞形态的分化。结论本研究揭示了Ku70的一种新功能,即Ku70有可能参与miRNA的成熟调控和神经细胞的分化,并且可能是ZIKV病毒致小头症的原因之一。

miRNA-124a评估腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术治疗2型糖尿病疗效的研究

目的探讨miRNA-124a(miR-124a)在腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术(LRYGB)治疗T2DM疗效中的作用。方法回顾性分析2014年12月至2015年9月在苏州大学附属第一医院接受LRYGB治疗的16例T2DM患者的临床资料,比较手术前后不同时段BMI、WC、TC、TG、HDL-C、LDL-C、FPG、FIns、FC-P、HbA1c、胰岛素抵抗指数(HMOA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)水平,qPCR检测不同时段miRNA-124a水平。结果 LRYGB术后3个月体重[(76±16)vs(90±21)kg]、BMI[(28±5)vs(33±7)kg/m2]、WC[(93±11)vs(105±13)cm]、TC[(4.2±0.7)vs(5.0±1.2)mmol/L]、TG[(1.0±0.3)vs(1.8±0.9)mmol/L]、FPG[(6.7±0.7)vs(11.2±3.6)mmol/L]、FIns[(9.1±6.3)vs(16.4±9.4)mIU/L]、HbA1c[(6.7±0.8)%vs(9.4±1.7)%]、HOMA-IR[2.2(1.0,4.4)]vs 5.6(2.2,14.5)]较术前降低(P<0.05或P<0.01);LDL-C术后6个月较术前降低[(2.4±0.7)vs(3.0±0.9)mmol/L,P<0.05];FC-P术后12个月较术前降低[(1.7±0.6)vs(2.9±1.9)ng/ml,P<0.05];miR-124a术后3个月较术前升高[7.0(1.7,14.9)vs 4.3(1.2,10.3),P<0.05];HDL-C、HOMA-β术后6个月较术前升高[(1.4±0.2)vs(1.2±0.2)mmol/L、59.5(44.5,100.2)vs 39.93(21.9,54.7),P<0.05]。miRNA-124a与体重、BMI、WC、TC、TG、FPG、FIns、FC-P、HbA1c、HOMA-IR呈负相关,与HDL-C、HOMA-β呈正相关(P<0.05)。结论 miR-124a可能成为一种新型检验项目以评估LRYGB治疗T2DM后疗效。

miRNA-124-3p抑制剂通过Wnt/β-catenin信号通路调节缺氧缺糖心肌细胞凋亡的研究

目的利用缺氧缺糖(OGD)诱导心肌细胞损伤的模型,探讨miRNA-124-3p抑制剂对Wnt/β-catenin信号通路及心肌细胞凋亡的影响。方法利用低氧培养箱与低糖DMEM培养基建立OGD细胞模型,细胞分为正常对照组、OGD组、NC-siRNA组、miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组,利用Western blot检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对模型细胞中Wnt1及β-catenin表达的影响;利用CCK-8实验检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对心肌细胞活性的影响;利用Western blot检测miRNA-124-3p抑制剂与Wnt1 siRNA对凋亡相关的蛋白p53、Bcl-2、Bax及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的影响。利用ELISA检测各组细胞悬液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6与IL-1β的水平。结果miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组心肌细胞Wnt1及β-catenin表达水平降低。CCK-8检测结果显示,与OGD组比较,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组心肌细胞活性增高,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,与OGD组比较,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组p53、Bcl-2表达水平升高,Bax及cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA结果显示,miRNA-124-3p抑制剂组和Wnt1 siRNA组TNF-α、IL-6与IL-1β水平降低,而二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论miRNA-124-3p抑制剂通过调节Wnt1及β-catenin表达来调控Wnt/β-catenin信号通路,进而调控OGD条件下诱导的心肌细胞的凋亡,减轻细胞损伤,降低炎性因子的释放,发挥心肌保护作用。

益气活血方基于miR-124调控Wnt通路促进神经再生

目的探讨益气活血方(脑络欣通)对MCAO-R气虚血瘀证大鼠神经再生的影响及可能的作用机制。方法随机数字表法将大鼠分成4组:正常组、模型组、脑络欣通组、通心络组,其中脑络欣通组和通心络组分别用脑络欣通溶液、通心络溶液灌胃。观察各组大鼠生命状态并进行神经功能缺损、气虚证和血瘀证评分,运用激光多普勒仪动态监测局部脑血流量(r CBF),TTC染色检测脑梗死体积,免疫组化结合免疫荧光染色检测脑组织Nestin和Brd U表达,荧光定量PCR检测mi RNA-124水平,Western blotting检测Wnt3a、GSK3β和β-catenin蛋白表达水平。结果脑络欣通和通心络都能改善模型大鼠神经功能,降低气虚证和血瘀证评分,减少脑梗死体积,r CBF提高(P<0.01);脑络欣通和通心络组Brd U表达增强,与正常组比较,其他3组阳性细胞数明显增多(P<0.01),与模型组比较,脑络欣通和通心络组显著增多,Nestin表达明显增强(P<0.01)。脑络欣通能抑制模型大鼠脑组织mi RNA-124和Wnt3a应激性的高表达,同时提高β-catenin的表达水平(P<0.01)。但脑络欣通和通心络对模型大鼠GSK3β蛋白表达均无明显影响(P>0.05)。结论脑络欣通可能通过影响脑组织mi RNA-124的表达而激活Wnt通路,从而发挥对气虚血瘀型脑缺血的神经保护以及神经再生的作用。

miR-124基于PI3K/Akt通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响

目的 探讨微小RNA-124(miR-124)基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)通路对脓毒症大鼠肾组织炎症和氧化应激的影响。方法 将72只SD大鼠均分为假手术组(不做任何处理)、模型组(造模成功后不做任何处理)、miR-124-agomir组(miR-124高表达腺病毒载体处理)、agomir-NC组(阴性对照空载体处理)、LY294002组(PI3K/Akt抑制剂处理)、miR-124-agomir+LY294002组(miR-124高表达腺病毒载体和PI3K/Akt抑制剂处理)。除假手术组外,其余各组均采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症肾损伤模型,并于造模成功后按各组相应给药处理。观察各组大鼠行为变化、肾组织炎症细胞浸润现象;检测各组大鼠肾功能指标、肾组织细胞凋亡、肾组织miR-124、PI3K/Akt通路蛋白表达水平、氧化应激相关蛋白、炎症因子及凋亡相关蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾组织坏死及炎症细胞浸润现象严重,血清肌酐和血尿素氮水平、细胞凋亡率、磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、磷酸化核转录因子(p-NF)-κB p65/NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α、NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白、Caspase-3表达升高(P<0.05),miR-124、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,miR-124-agomir组大鼠肾组织上述指标变化明显改善(P<0.05);LY294002组大鼠肾组织上述指标变化进一步加重(P<0.05)。miR-124-agomir+LY294002组大鼠逆转miR-124-agomir组上述指标(P<0.05)。结论 miR-124通过抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡来改善脓毒症大鼠肾损伤进程,其机制可能与激活PI3K/Akt通路,诱导Nrf2/HO-1途径活化有关。

脑源性神经生长因子对mir124表达及兴奋性电流的影响

目的探讨BDNF对海马miRNA-124表达及齿状回颗粒细胞兴奋性突触后电流(s EPSCs)的影响,以明确BDNF对颞叶内侧癫痫(MTLE)发病机制的影响。方法选取哈尔滨医科大学附属第一临床医院神经外科2008年4月-2010年10月手术治疗的MTLE患者12例。RT-pcr技术检测BDNF孵育后MTLE患者海马组织mir-124表达、膜片钳技术检测BDNF对海马颗粒细胞s EPSCs的影响。结果 (1)BDNF降低了颞叶癫痫海马miRNA-124的表达(P<0.01);(2)BDNF增加了颗粒细胞sEPSCs的频率和幅度(P<0.01)。结论 BDNF降低了颞叶癫痫海马mir-124的表达,提高颗粒细胞sEPSCs的频率和幅度,从而可能对人类MTLE的发病起到促进作用。

miR-124靶向抑制NFATc1调控小鼠C3H10T1/2细胞软骨分化的研究

目的研究miR-124是否通过调控预测的靶基因活化T细胞核因子c1(NFATc1)表达调节小鼠C3H10T1/2细胞的软骨分化。方法培养C3H10T1/2细胞,行软骨诱导分化,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹法检测NFATc1和软骨标记基因Aggrecan、CollagenⅡ、Collagen X mRNA及蛋白的表达水平。使用在线靶基因预测软件预测NFATc1 mRNA的3’端非翻译区(3’UTR)结合位点,构建NFATc1 3’UTR野生型及突变型的荧光素酶报告载体,检测双荧光素酶报告基因,观察miR-124对NFATc1 3’UTR荧光素酶活性的影响。转染miR-124模拟物或抑制物并进行软骨诱导,观察miR-124对NFATc1的调控作用。结果与诱导前比较,成软骨诱导组软骨分化相关基因Aggrecan、Col2a1和Col10a1 mRNA表达水平升高(P均<0.01);Sox 9和NFATc1 mRNA表达水平随着软骨分化进展而增加(P均<0.001);Col2a1、Sox 9和NFATc1蛋白呈逐渐增强表达,而肥厚性标记Col10a1蛋白显示较稳定表达。NFATc1 mRNA的3’UTR与miR-124的种子区存在理论上的互补碱基配对序列。转染NFATc1野生型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物者的荧光素酶活性低于加入miR-124抑制物者,加入miR-124抑制物者的蛋白表达强于加入miR-124模拟物者(P均<0.05);转染NFATc1突变型质粒的C3H10T1/2细胞中,加入miR-124模拟物与加入miR-124抑制物的荧光素酶活性无变化(P>0.05)。蛋白免疫印迹法与实时定量PCR结果均显示,转染miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平低于Control组(P均<0.01),miR-124组与si-NFATc1组的NFATc1表达水平相近(P>0.05)。过表达miR-124后,NFATc1大约降低了60%,而这种降低可被miR-124抑制物逆转。转染NFATc1野生型质粒的miR-124模拟物组的NFATc1荧光素酶活性减低(P均<0.05),转染NFATc1突变型质粒的miR-124模拟物组NFATc1荧光素酶活性无变化(P均>0.05)。结论 miR-124通过抑制靶基因NFATc1的表达调控C3H10T1/2细胞软骨分化。

miR-124在血管性痴呆患者血清中表达差异及其意义

目的探讨miR-124在血管性痴呆患者血清中表达差异及其意义。方法选取2018年1月至2019年5月我院收治的血管性痴呆患者68例(观察组),再选择体检结果显示为健康者50例(对照组)。治疗前,对患者的一般资料进行对比并对观察组和对照组的miR-124相对表达水平进行检测;治疗3个月后,对治疗前与治疗后miR-124相对表达水平进行对比,并根据治疗结果分为良好组与不良组,比较两组的miR-124相对表达水平。结果治疗前miR-124的相对表达水平观察组高于对照组(P<0.005)。治疗后3个月后,观察组的miR-124的相对表达水平较治疗前低,差异有统计学意义(P<0.015)。良好组和不良组在年龄、性别、体重上,差异无统计学意义(P>0.05);而在高血压、高血脂及miR-124±,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析发现,在预测血管性痴呆患者治疗后预后时,高血脂的AUC曲线下面积为0.742;高血压的AUC曲线下面积为0.705;血清miR-124相对表达水平的AUC曲线下面积为0.821。以最大约登指数计算得出最大AUC面积相应参数截止值,高血脂为5.220(敏感度=60.00%,特异性=85.70%);高血压为1.965(敏感度=75.00%,特异性=69.00%);A清miR-124相对表达水平为4.225(敏感度=80.00%,特异性=78.60%)。结论miR-124表达水平有可能作为血管性痴呆患者预后不良的一个指标。