miRNA-130a-3p通过调控NF-κB信号通路影响损伤心肌细胞

目的探讨miRNA-130a-3p在LPS诱导的心肌细胞损伤中的作用及可能机制。方法H9C2心肌细胞分为4组,即正常对照组、LPS模型组、miRNA阴性对照组、miRNA-130a-3p mimics组,利用RT-qPCR检测miRNA-130a-3p mRNA表达水平,CCK-8检测细胞活性,ELISA检测培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量,Western blot检测NF-κBp65、IκBα、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平。结果RT-qPCR结果显示LPS模型细胞中miRNA-130a-3p mRNA水平显著低于正常对照组;与正常对照组相比较,LPS组细胞活性显著降低,而与LPS组相比较,miRNA-130a-3p mimics组细胞活性显著升高;与正常对照组相比较,LPS组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著升高,而与LPS组相比较,miRNA-130a-3p mimics组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著降低;与正常对照组相比较,LPS组细胞中NF-κBp65、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著升高,IκBα与Bcl-2蛋白表达量显著降低,而与LPS组相比较,miRNA-130a-3p mimics组细胞中NF-κBp65、Bax及Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著降低,IκBα与Bcl-2蛋白的表达量显著升高。结论miRNA-130a-3p可通过抑制NF-κB信号通路激活,抑制细胞凋亡,提高细胞活性,减少炎性因子释放,从而减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

妊娠糖尿病患者血清miR130b-3-p、miR181a-5-p表达与妊娠结局的关系

目的 探究妊娠糖尿病患者血清微小RNA(miRNA)miR-130b-3p、miR-181a-5p表达与妊娠结局的关系。方法 选取2020年6月至2022年8月在北京航天总医院及北京妇产医院诊治的124例妊娠糖尿病患者作为研究组,根据妊娠结局分为良好组和不良组;采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130b-3p、miR-181a-5p表达;采用Pearson法分析血清miR-130b-3p、miR-181a-5p及二者与血脂和血糖的相关性;采用Logistic回归分析妊娠糖尿病患者不良妊娠结局的影响因素。结果 研究组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、miR-130b-3p相对表达水平高于对照组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于对照组(P<0.05)。不良组TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR、miR-130b-3p相对表达水平高于良好组(P<0.05),miR-181a-5p相对表达水平低于良好组(P<0.05)。根据Pearson相关性分析可知,血清miR-130b-3p与miR-181a-5p相对表达水平呈负相关(P<0.05),血清miR-130b-3p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05),miR-181a-5p与TC、TG、LDL-C、FBG、FINS、HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。根据Logistic回归分析得知,miR-130b-3p、TC、TG、LDL-C、FBG、FINS高水平,miR-181a-5p低相对表达水平均为妊娠糖尿病不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论 妊娠糖尿病患者血清miR-130b-3p相对表达水平升高,miR-181a-5p相对表达水平降低,二者与妊娠结局密切相关。

LncRNA HOTAIR通过miR-130a-3p/ABCC5调控乳腺癌细胞紫杉醇耐药的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)HOTAIR调控乳腺癌细胞紫杉醇耐药的潜在分子机制。方法筛选出乳腺癌紫杉醇抗性细胞系(MCF7/TR细胞),并且检测MCF7/TR细胞以及亲代细胞的HOTAIR的表达水平以及紫杉醇耐药指标(增殖水平、凋亡水平、细胞周期、细胞内紫杉醇浓度)。结果敲低HOTAIR后,紫杉醇处理可以显著抑制MCF7/TR细胞的增殖和诱导细胞凋亡,并且诱导MCF7/TR细胞停滞于G_(1)期。敲低HOTAIR后MCF7/TR细胞内紫杉醇浓度升高。miR-130a-3p与HOTAIR存在相互作用。过表达miR-130a-3p时MCF7/TR细胞内紫杉醇浓度明显升高,敲低HOTAIR后,MCF/TR细胞中miR-130a-3p的表达水平升高。miR-130a-3p靶向ABCC5 mRNA的3′端非翻译区。过表达ABCC5时MCF7/TR细胞内紫杉醇浓度明显升高。结论LncRNA HOTAIR通过miR-130a-3p/ABCC5轴减少了紫杉醇耐药细胞中紫杉醇细胞内水平,促进了乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

miR-130a-3p在HCC致病机制中的作用及作为预后标志物的评估

目的分析miR-130a-3p是否参与肝细胞癌(hepatocellalar carcinoma,HCC)疾病演进并抑制转移,评估其作为预后标志物的可能。方法基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中miR-130a-3p的表达量和HCC患者生存信息,综合分析miR-130a-3p的表达分布以及对HCC诊断和预后价值的评估;通过抑制miR-130a-3p的表达,进而检测HepG2细胞增殖活力、细胞的迁移和侵袭能力;利用LncBase 3.0预测miR-130a-3p的靶基因,并通过Western blot检测V-maf肌骨神经纤维肉瘤肿瘤基因同源物B(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B,MAFB)蛋白质表达水平,明确miR-130a-3p对MAFB的调控作用。结果miR-130a-3p在HCC组织中显著低表达(t=-13.556,P<0.001),且表达量与患者的总生存时间密切相关(Log-rank=4.675,HR=0.681,P=0.031),此外,其表达量还可以有效区分HCC患者和健康对照(AUC=0.891);抑制miR-130a-3p的表达后,HepG2细胞的增殖(t=24.950,P<0.001)、迁移(t=7.503,P=0.012)及侵袭(t=6.350,P=0.011)能力显著增强;MAFB是miR-130a-3p的靶基因之一,并且抑制miR-130a-3p后,其表达量上调(t=130,P<0.001)。结论miR-130a-3p可以作为HCC的预后评估标志物并抑制其转移。

lncRNA MEG3靶向miR-130a-5p调控人视网膜色素上皮细胞损伤的研究

目的探讨lncRNA MEG3在年龄相关性黄斑变性(AMD)患者中的表达及其靶向miR-130a-5p对人视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响。方法选取2020年6月至2021年8月永州职业技术学院附属医院收治的AMD患者38例以及同期的健康体检者38例,收集其空腹静脉血,qRT-PCR检测其血清lncRNA MEG3表达水平。不同浓度(0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L)过氧化氢(H2O2)处理人RPE细胞系ARPE-19细胞构建RPE细胞损伤模型,并检测lncRNA MEG3在H2O2处理的ARPE-19细胞中表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验分析lncRNA MEG3与miR-130a-5p的靶向关系。ARPE-19细胞分为对照组(常规培养,不进行任何特殊处理)、H2O2组(200μmol/L H2O2处理24 h)、Vector组(转染pcDNA3.1-NC 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h)、lncRNA MEG3组(转染pcDNA3.1-lncRNA MEG324 h后200μmol/L H2O2处理24 h)、lncRNA MEG3+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-lncRNA MEG3和miR-NC 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h)、lncRNA MEG3+miR-130a-5p组(共转染pcDNA3.1-lncRNA MEG3和miR-130a-5p mimics 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h),qRT-PCR检测各组细胞中lncRNA MEG3、miR-130a-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活性,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,2,7-二氯二氢代荧光黄二醋酸(DCFH-DA)荧光探针法、硫代巴比妥酸(TBA)法、水溶性四唑盐1(WST-1)法分别检测各组细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、β-淀粉样蛋白(Aβ)水平,Western blot检测各组细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)通路相关蛋白表达。结果与健康体检者比较,lncRNA MEG3在AMD患者血清中呈低表达(P<0.05)。与0μmol/L H2O2处理组比较,100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L H2O2处理ARPE-19细胞均可降低细胞存活率以及下调细胞中lncRNA MEG3表达水平(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和RIP实验证实lncRNA MEG3与miR-130a-5p存在靶向关系。过表达lncRNA MEG3通过下调miR-130a-5p表达提供了H2O2诱导的ARPE-19细胞存活率、SOD水平及Nrf2、HO-1蛋白表达水平,降低了细胞凋亡率及ROS、MDA、IL-6、TNF-α、Aβ水平(P<0.05)。结论lncRNA MEG3在AMD患者血清中呈低表达,上调lncRNA MEG3可靶向负调控miR-130a-5p表达,激活Nrf2/HO-1通路,减轻人RPE细胞氧化应激和炎症反应,保护细胞免受损伤。

低氧经miR-130a-3p靶向Sirt7对人滋养细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的探究低氧条件下miR-130a-3p靶向去乙酰化酶7(Sirt7)对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法以HTR-8/SVneo细胞为研究对象,将miR-130a-3p inhibitor及其阴性对照inhibitor-NC转染至细胞中或联合Sirt7抑制剂97491干预,采用低氧(1%O 2)处理48 h,qRT-PCR检测细胞中miR-130a-3p及Sirt7 mRNA表达水平;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞中Sirt7、HIF-1α、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平;TargetScan Human 7.1在线软件和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-130a-3p与Sirt7的靶向关系。结果低氧可上调HTR-8/SVneo细胞中miR-130a-3p表达水平,下调Sirt7 mRNA和蛋白表达水平;miR-130a-3p低表达可升高Sirt7 mRNA表达水平;提高细胞迁移及侵袭能力;下调HIF-1α和E-cadherin蛋白表达水平,上调Sirt7、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平。然而,联合Sirt7抑制剂97491处理可逆转miR-130a-3p低表达对低氧细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的促进作用。结论miR-130a-3p在低氧诱导的滋养细胞中高表达,抑制miR-130a-3p表达可促进低氧条件下HTR-8/SVneo细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化,其可能通过靶向Sirt7调控HIF-1α实现的。

基于TCGA数据库分析miRNA-151a-3p在食管癌中的表达及与免疫细胞浸润的相关性

目的:采用生物信息学数据库癌症基因组图谱(TCGA)分析miRNA-151a-3p在食管癌(ESCA)中的表达情况及临床意义,研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性。方法:样本下载:从TCGA数据库下载182例ESCA组织(肿瘤组)与16例癌旁组织(癌旁对照组)miRNAseq以及对应的临床数据;分析miRNA-151a-3p在ESCA中的表达情况;使用R软件中的pROC包制作受试者工作特征曲线(ROC)评价miRNA-151a-3p诊断ESCA的特异性和敏感性,并使用R软件中的survminer包绘制K-M生存曲线研究miRNA-151a-3p的表达水平对ESCA患者预后的影响。通过R软件中的GSVA包ssGSEA算法研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性。运用Targetscan数据库对miRNA-151a-3p靶基因进行预测并通过DAVID在线分析工具对预测得到的靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:miRNA-151a-3p在ESCA肿瘤组中的表达水平显著高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.001);K-M生存曲线分析差异无统计学意义(P>0.05),表明miRNA-151a-3p的表达水平与ESCA患者的预后无关;分析ROC曲线得出其曲线下面积(AUC)为0.814,在ESCA的诊断中具有良好的特异性和敏感性;研究miRNA-151a-3p在ESCA中与免疫细胞浸润的相关性,表明miRNA-151a-3p与树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞、NK细胞、Tcm细胞、Th1细胞的浸润水平呈负相关性。GO分析结果显示miRNA-151a-3p靶基因主要参与RNA聚合酶Ⅱ转录的正负调节、细胞凋亡、蛋白质结合等生物学进程(P<0.05)。KEGG分析结果显示miRNA-151a-3p靶基因显著富集于MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤中枢碳代谢等信号通路上(P<0.05)。结论:miRNA-151a-3p在ESCA的诊断中具有较高的特异性和敏感性。对miRNA-151a-3p靶基因富集分析,结果显示其富集的信号通路均与肿瘤密切相关,并且其可能通过树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞、NK细胞、Tcm细胞、Th1细胞影响肿瘤免疫微环境进而促进ESCA的发生、发展,因此miRNA-151a-3p有望成为ESCA患者诊疗的新分子标志物。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

mir-130a-3p及smad 4在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的考察mir-130a-3p及靶基因smad 4在肝细胞癌(HCC)组织中表达及相关性,并分析两者表达与肝癌临床病理特征和预后的关系。方法从石蜡组织包埋的51例肝癌组织及相应癌旁组织中提取总RNA,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测mir-130a-3p的表达,并采用免疫组织化学Eli Vision(IHC)法测定肝癌组织及癌旁组织中smad 4表达,分析两者相关性、与临床病理参数及总生存时间(OS)之间的关系。结果 mir-130a-3p在肝癌组织中的表达水平(1.38±0.15)显著低于癌旁组织(2.48±0.16)(P<0.001)。在肝癌组织中,smad 4阳性表达率为72.5%(37/51),明显高于癌旁组织51.0%(26/51)(P<0.05)。mir-130a-3p和smad 4在肝癌组织中的表达呈负相关性(rs=-0.431,P<0.05)。mir-130a-3p和smad 4的表达水平与肝癌患者TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、有无淋巴结转移、有无脉管癌栓及病理分级无关。肝癌组织中mir-130a-3p高表达患者中位OS(25.6个月)较低表达组(23.1个月)延长,但差异无统计意义;smad 4阴性表达组中位OS(26.7个月)较阳性表达组(20.0个月)显著延长(P<0.05)。结论 mir-130a-3p在肝癌组织中表达下调,可能通过调控smad 4的表达参与了肝癌的发生发展,mir-130a-3p有望成为肝癌潜在的治疗靶点及预后判断因子。

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P<0.01,P<0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均<0.05)和凋亡诱导作用(P均<0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。

miR-130a-3p对膀胱癌细胞侵袭、迁移和凋亡的影响及对SPOCK1的调控作用

目的:探讨微小RNA-130a-3p(miR-130a-3p)对膀胱癌细胞侵袭、迁移和凋亡的影响及其分子机制。方法:采用qRT-PCR和Western blot法检测膀胱癌组织、癌旁正常组织以及人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1、膀胱癌细胞5637中miR-130a-3p和细胞外基质蛋白多糖(SPOCK1)mRNA及蛋白的表达。取5637细胞,分别转染miR-130a-3p mimics或si-SPOCK1,同时设阴性对照和空白对照,用MTT法检测细胞存活,Transwell小室法测定细胞侵袭和迁移,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测MMP-2和Caspase-3蛋白的表达;用生物学信息预测和双荧光素酶报告实验分析miR-130a-3p和SPOCK1的靶向关系。结果:与癌旁组织和SV-HUC-1细胞相比,膀胱癌组织和细胞中miR-130a-3p的表达下调,SPOCK1 mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05)。转染miR-130a-3p或沉默SPOCK1均可抑制膀胱癌细胞存活、侵袭和迁移,诱导其凋亡,并抑制MMP-2蛋白表达,促进Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。经验证SPOCK1是miR-130a-3p的靶基因。结论:miR-130a-3p可能通过靶向调控SPOCK1的表达来抑制膀胱癌细胞侵袭、迁移,诱导其凋亡。

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7侵袭

目的:探究miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法:收集承德医学院附属医院2018年1月至10月收治的22例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-453)和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用q PCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752(MET小分子抑制剂)转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor组,然后采用CCK-8法和Transwell实验分别检测MCF-7细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p与MET之间的靶向关系。结果:miR-130a-3p在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p可抑制MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论:miR-130a-3p通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7细胞EMT过程,进而抑制MCF-7细胞侵袭转移。

miRNA-520a-3p调控MAP3K2表达对肺癌干细胞凋亡的影响

背景:有研究证实,miRNA-520a-3p在肺癌干细胞中有一定调节作用,但具体功能和作用机制尚不明确。目的:探索miRNA-520a-3p对肺癌干细胞凋亡的影响,并对其作用机制进行初步研究。方法:采用免疫磁珠法从肺腺癌细胞株A549中分离出CD133^+肺癌干细胞。实时荧光定量PCR检测miRNA-520a-3p在CD133^+肺癌干细胞中的表达。采用脂质体转染法增加CD133^+肺癌干细胞中miRNA-520a-3p表达水平,流式细胞术检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-520a-3p对MAP3K2基因的调控作用。Western Blotting检测过表达miRNA-520a-3p对CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响。结果与结论:(1)在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p表达水平显著低于CD133-肺癌细胞(P<0.05);(2)过表达miRNA-520a-3p后,显著增加了CD133^+肺癌干细胞凋亡百分比(P<0.05);(3)抑制miRNA-520a-3p表达能够显著增强含有MAP3K2基因3’-非翻译区(3’-UTR)报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05),增加miRNA-520a-3p表达能够显著降低含有MAP3K2基因3’-UTR报告质粒的荧光素酶活性(P<0.05);(4)过表达miRNA-520a-3p后,CD133^+肺癌干细胞中MAP3K2,Bcl-2蛋白表达降低(P均<0.05),而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);(5)结果表明,在CD133^+肺癌干细胞中,miRNA-520a-3p呈低表达状态。miRNA-520a-3p可能通过调控MAP3K2基因表达,诱导CD133^+肺癌干细胞凋亡。

miRNA-130b-3p促进血管钙化的机制研究

为了确定miRNA-130b-3p在血管钙化中的作用,文章通过使用维生素D_(3)(VD_(3))诱导野生型(WT)雄鼠中膜钙化,收集小鼠全主动脉和肾脏分析钙化进程、miRNA-130b-3p以及成骨转录因子的表达,并在体外向人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMCs)转染miRNA-130b-3p mimic和antagomir,使用高磷酸盐(3.0 mmol/L)诱导钙化,通过Western Blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、免疫荧光来确定相关基因表达变化。从WT小鼠分离主动脉并剪成5 mm小段,转染miRNA-130b-3p分析钙化水平,通过流式细胞荧光分选技术(fluorescence activated cell sorting,FACS)分析钙化时HASMCs凋亡。结果发现,miRNA-130b-3p在钙化时表达显著上升并且miRNA-130b-3p的表达与钙化进程显著相关,当过表达时miRNA-130b-3p促进钙化,相反的抑制miRNA-130b-3p则可以抑制钙化,进一步发现miRNA-130b-3p通过介导重组人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)通路和Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达来影响钙化,并且通过促进细胞凋亡来进一步影响钙化。结果表明miRNA-130b-3p作为钙化上游信号促进血管钙化。

miR-130a-3p通过抑制CXCL12抑制鼻咽癌细胞增殖与侵袭

目的探讨miR-130a-3p对人鼻咽癌细胞CNE-1功能的影响及其可能的靶向基因。方法采用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物(实验组)或对照模拟物(对照组)转染CNE-1细胞,分别用CCK-8法和Transwell试验检测细胞增殖侵袭和迁移能力变化,Western Blot检测趋化因子CXCL12蛋白表达。结果相较对照组,实验组CNE-1细胞的增殖,侵袭和迁移能力增强(P<0.05),细胞中CXCL12蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论 miR-130a-3p可能通过调节CXCL12蛋白表达抑制人鼻咽癌细胞CNE-1细胞的增殖、侵袭和迁移。

血清miRNA-27a-3p、miRNA-210水平与ACI患者神经功能改善的关系

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者神经功能与miRNA-572和miRNA-218表达水平的关系。方法选择2020年5月至2020年11月在承德医学院附属医院神经内科就诊的ACI患者82例为ACI组,另选择同时期健康体检者82例作为对照组。采用RT-qPCR检测两组血清中miRNA-27a-3p和miRNA-210水平,全自动生化分析仪检测两组血清中TG、LDL-C和HDL-C的值,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评价患者入院前神经功能缺损情况;改良Rankin量表(mRS量表)评价ACI患者预后情况。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估各指标对ACI预后的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨预后影响因素。结果两组年龄、性别、吸烟、糖尿病、冠心病、高血压、TG、LDL-C和HDL-C比较差异无统计学意义(均P> 0.05);与对照组比较,ACI组血清miRNA-27a-3p显著降低,miRNA-210显著升高(P<0.05);与轻度组比较,中度组和重度组ACI患者miRNA-27a-3p显著降低、miRNA-210显著升高(P<0.05);与中度组比较,重度组ACI患者血清miRNA-27a-3p显著降低、血清miRNA-210显著升高(P<0.05)。预后不良患者血清miRNA-27a-3p低表达率和miRNA-210高表达率显著高于预后良好患者(P <0.05);ROC曲线结果显示,miRNA-27a-3p和miRNA-210的曲线下面积分别为0.892和0.704,预测ACI预后的灵敏度分别为90.82%和74.5%,特异度分别为87.7%和71.6%。预后多因素Logistic回归分析显示,年龄> 65岁[OR及95%CI:2.21 (1.06~3.57)]、miRNA-27a-3p <3.13[OR及95%CI:4.17 (1.86~9.32)]、miRNA-210≥6.91[OR及95%CI:3.82 (1.84~7.94)]为ACI患者预后危险因素(P<0.05)。结论 miRNA-27a-3p表达降低、miRNA-210表达升高与ACI患者的神经功能缺损及预后不良密切相关,两者对ACI患者预后具有较高的预测价值,有望作为急性脑梗死临床有效生物标志物。

长非编码RNA ILF3-AS1通过调控miR-130a-3p/PTEN轴抑制宫颈癌细胞的增殖

ILF3反义RNA 1(ILF3 antisense RNA 1,ILF3-AS1)是一条定位于染色体19p13.2的lncRNA,它是白介素增强子结合因子3(interleukin enhancer binding factor 3,ILF3)的反义RNA。ILF3-AS1在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但其在宫颈癌中的作用尚无研究探讨。本文利用TCGA及GTEx数据库进行生物信息学分析提示,ILF3-AS1在宫颈癌组织中低表达(P<0.001)并与良好预后相关(P=0.045)。qRT-PCR结果显示,ILF3-AS1在宫颈癌组织及SiHa、HeLa、CaSki宫颈癌细胞系中表达较对照组均呈下降趋势。过表达ILF3-AS1可明显抑制宫颈癌细胞增殖活力及促进宫颈癌细胞凋亡。Star Base v3.0数据库分析提示,ILF3-AS1可靶向吸附miR-130a-3p;而miR-130a-3p可靶向结合PTEN。qRT-PCR检测显示,miR-130a-3p在宫颈癌中的表达量明显高于正常宫颈组织(P<0.01)。荧光素酶报告基因结果显示,ILF3-AS1可以与miR-130a-3p特异性结合(P<0.01)。HeLa细胞过表达ILF3-AS1后,miR-130a-3p表达量明显下调(P<0.01);在过表达ILF3-AS1细胞中,同时转染miR-130a-3p mimics,能部分逆转LF3-AS1对于细胞增殖的抑制作用(P<0.001)。HeLa细胞在过表达ILF3-AS1后,磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)mRNA(P<0.001)及蛋白质(P<0.001)表达量显著升高;当同时转染miR-130a-3p mimics,PTEN的mRNA(P<0.001)及蛋白质(P<0.001)的表达升高被明显抑制。综上,ILF3-AS1可以作为miR-130a-3p的吸附海绵靶向调控PTEN表达,从而抑制宫颈癌细胞的增殖。