miRNA-132在癫痫大鼠模型中的作用及意义

[目的]探讨miRNA-132对颞叶癫痫大鼠脑组织海马神经元的凋亡及保护作用及其机制.[方法]选择雄性SD大鼠随机分为正常组、癫痫组、agomir-132组和antagomir-132组.建立模型前采用脑立体定位仪向大鼠海马区注射给予agomir-132和antagomir-132,正常组和癫痫组注射给予生理盐水.取脑及海马组织,HE染色观察各组海马组织的病理学变化,利用实时荧光定量PCR法检测各组海马组织中miRNA-132的含量,采用Western blot法及免疫组织化学染色法检测各组海马组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达水平.[结果]与正常组比较,癫痫大鼠miRNA-132含量均升高;与癫痫组比较,agomir-132组miRNA-132含量显著升高(P<0.01),而antagomir-132组miRNA-132含量明显降低(P<0.05).与正常组比较,癫痫组、agomir-132组及antagomir-132组海马组织中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3表达水平均显著升高;与癫痫组比较,agomir-132组Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3表达水平均显著升高,antagomir-132组Bcl-2表达水平显著升高,Bax、Caspase-3表达水平均显著降低;相比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).[结论] miRNA-132在癫痫大鼠海马组织中含量显著升高,antagomir-132可能通过调控癫痫大鼠海马中的凋亡因子而减弱神经元细胞的损伤,agomir-132通过使凋亡因子增多来加速神经元细胞的凋亡.

基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用

目的:基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用。方法:制备肝癌细胞转移瘤,将裸鼠分为空白组(不制备肝癌裸鼠模型)、模型组(肝癌小鼠模型组)、胡椒碱组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱干预组)、miR-132组(肝癌小鼠模型给予miR-132类似物组)、联合组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱联合miR-132类似物组)。比较各组裸鼠的瘤体积和肿瘤抑制率;比较肿瘤组织病理学变化;用ELISA检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量;比较微血管密度(MVD)数量;用蛋白质印迹法检测肝组织中miR-132、GP73表达。结果:和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠的瘤体积均显著降低,且联合组瘤体积较胡椒碱组和miR-132组降低更明显(P<0.05)。和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肿瘤生长抑制率显著增加(P<0.05);联合组裸鼠的肿瘤生长抑制率明显高于miR-132组和胡椒碱组(P<0.05)。模型组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量和空白组相比显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量均显著减少,且联合组血清中VEGF含量和MVD显著低于胡椒碱组(P<0.05)。和空白组相比,模型组裸鼠肝组织中miR-132表达显著降低,GP73蛋白表达显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肝组织中miR-132表达均明显增加,GP73蛋白表达均显著降低,且联合组中miR-132和GP73表达变化最大(P<0.05)。双荧光素酶检测报告结果显示,过表达miR-132可降低GP73活性(P<0.05)。结论:胡椒碱可通过调控miR-132负向调控GP73抑制肝癌血管形成,同时也能显著抑制肿瘤的生长。

miRNA-132通过靶向调控Bmi-1表达影响鼻咽癌细胞对放射治疗敏感性

目的研究miRNA-132对鼻咽癌细胞放射治疗敏感性的影响。方法使用miRNA芯片技术,对比5-8F(亲代细胞)和5-8F/R(放射治疗抵抗细胞)中miRNA表达水平差异,从中挑选差异最为明显的miRNA-132作后续研究。使用流式细胞仪检测miRNA-132对细胞凋亡的影响。使用双荧光报告素酶、蛋白免疫印迹法等方式验证miRNA-132的下游靶基因。结果 miRNA-132可以促进鼻咽癌5-8F/R细胞的凋亡,提高其对放射治疗的敏感性,还可以抑制其体内的生长能力。miRNA-132可以抑制Bmi-1信使RNA和蛋白质表达水平。结论 miRNA-132可通过抑制下游靶基因Bmi-1来发挥其放射治疗增敏功能。

利拉鲁肽对肥胖相关性高血压患者miRNA-132表达的影响及临床疗效

目的:探讨miRNA-132在肥胖相关性高血压患者中的表达及临床意义,分析利拉鲁肽治疗肥胖相关性高血压对miRNA-132表达的影响及临床疗效。方法:选取2021年1~10月医院收治的60岁及以上被确诊为肥胖相关性高血压患者50例为肥胖相关性高血压组和健康人群50例为健康人群组。采用实时荧光定量PCR方法检测血清miRNA-132水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-132对肥胖相关性高血压的诊断价值。再将50例肥胖相关性高血压患者随机分为对照组与观察组,各25例。对照组给予氨氯地平片治疗,观察组在对照组治疗基础上给予利拉鲁肽注射液治疗。比较肥胖相关性高血压组和健康人群组miRNA-132表达水平,对照组与观察组miRNA-132表达水平、体质量指数(BMI)、血压、生化指标及临床疗效。结果:肥胖相关性高血压组血清miRNA-132的表达水平显著低于健康人群组(P<0.05);ROC曲线分析显示,miRNA-132诊断肥胖相关性高血压的曲线下面积为0.945,灵敏度为94.0%,特异度为78.0%。治疗6个月后,观察组miRNA-132表达水平与对照组相比,明显升高(P<0.05);观察组BMI、血压、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、糖化血红蛋白及同型半胱氨酸浓度改善均优于对照组(P<0.05);观察组治疗总有效率为96.00%,高于对照组的68.00%(P<0.05);观察组药物不良反应发生率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-132在肥胖相关性高血压患者血清中表达降低,对其具有诊断价值;利拉鲁肽可显著增加肥胖相关性高血压患者miRNA-132的表达,具有减肥、降压及保护心血管效应。

mirna-132 在阿尔茨海默病中的调控作用及机制

探讨 mirna-132 对阿尔茨海默病发生和发展的影响及可能的调控机制。方法: 用 TargetScan 筛选潜在的基因,并用荧光素酶报告实验进一步确认。STRING 分析β-淀粉样前体蛋白与Cuererin 蛋白之间的相互作用网络。以 APPswe/PS1dE9双转基因小鼠和年龄匹配的野生型对照为研究模型, 实时定量 PCR 分析 APPswe/PS1ΔE9 转基因小鼠和同龄野生型小鼠脑组织中的 miR-132 和 CLU 的 mRNA 表达水平。免疫印迹进一步检测Clusterin 蛋白水平。用脂质体转染的方法建立阿尔兹海默病细胞系模型,同时分别进行miR-132 模拟和miR-132 抑制处理。进一步用 ELISA 分析 Clusterin 和 APP 的蛋白水平。结果:荧光素酶报告实验结果显示 miR-132 结合 CLU 基因的 3’-UTR 区。蛋白-蛋白相互作用网络分析结果提示 Clusterin 蛋白与β-淀粉样前体蛋白(APP ) 蛋白直接结合。实时定量 PCR分析APPswe/PS1ΔE9 转基因小鼠和同龄野生型小鼠脑组织样本,结果显示AD 组小鼠的脑组织中 miR-132 基因表达水平较对照组低,而 CLU 基因的表达水平显著增加。同时,AD 小鼠的大脑皮层组织中 CLU 蛋白水平增加。AD 细胞模型的结果显示,过表达 miR-132 或抑制 miR-132 的表达影响 CLU 和 APP 蛋白的表达水平。上述结果表明,CLU 和 APP 蛋白表达水平与 miR-132 的水平呈负相关。结论:过表达 miR-132 从而下调 CLU 的表达水平,可能改善阿尔兹海默病的症状。

ALS转基因小鼠脊髓中miRNA-132表达减少BDNF表达增加

目的研究miRNA-132和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化,探讨miRNA-132、BDNF在ALS发病中的作用。方法取SOD1-G93A ALS转基因鼠发病早期(95d)、中期(108d)和晚期(122d)脊髓组织,应用qRT-PCR及原位杂交(hybridization in situ, ISH)技术检测miRNA-132的表达及定位,应用qRT-PCR及Western blot技术检测BDNF在mRNA及蛋白水平变化,免疫荧光技术检测BDNF在脊髓中的表达及分布,以同窝野生型鼠作为对照。结果与野生型鼠比较,miRNA-132在ALS转基因鼠脊髓组织表达下降,miRNA-132阳性信号主要定位脊髓前角细胞胞体;在ALS转基因鼠脊髓组织BDNF mRNA及蛋白水平均增高,BDNF免疫阳性细胞主要表达于脊髓前角神经元,表达信号明显增强。结论 miRNA-132、BDNF可能在ALS发病过程中发挥了重要作用。

精神分裂症样小鼠血液中miRNA-132的表达分析

目的使用地卓西平马来酸盐(MK-801)腹腔注射制备精神分裂症小鼠模型,研究精神分裂症小鼠外周血中miRNA-132的异常表达情况。方法选取成年雄性昆明小鼠,随机分为注射生理盐水组(对照组)和注射MK-801组(实验组),观察小鼠的行为学改变,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各小鼠血液中miRNA-132的表达情况。结果 (1)实验组小鼠刻板行为评分与对照组比较有显著增高(P<0.05),自发活动增加显著,表现为直立数明显减少而走格数明显增多(P<0.05),符合精神分裂症模型小鼠的表现。(2)与对照组相比,实验组miRNA-132表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-132在精神分裂症小鼠血液中有异常表达。

miRNA-132抑制人骨肉瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的观察miRNA-132在不同骨肉瘤细胞系中的表达及对骨肉瘤细胞生物学行为的影响,探讨miRNA-132在人骨肉瘤发生发展中的作用。方法通过荧光定量PCR技术检测不同骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B中miRNA-132的表达情况,使用pRFP-miRNA-132-down质粒转染U2OS细胞、pRFP-miRNA-132-up质粒转染143B细胞,使用EdU检测肿瘤细胞增殖状态,Transwell小室检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。结果在3种骨肉瘤细胞系U2OS、MG63、143B中,miRNA-132的表达依次下降(U2OS>MG63>143B);降低miRNA-132在U2OS细胞中的表达促进细胞的增殖和侵袭能力,增加miRNA-132在143B细胞中的表达抑制细胞的增殖和侵袭能力。结论miRNA-132可能通过抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭调节骨肉瘤的发生发展。

miRNA-132靶向SCN2A调控对癫痫大鼠海马区细胞凋亡的影响

目的研究miRNA-132靶向SCN2A调控对癫痫大鼠海马区细胞凋亡的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠60只,随机分为模型组、过表达组、沉默组各10只。细胞转染,建立沉默组、过表达组。荧光定量检测miRNA-132、SCN2A表达,MTT检测细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt表达。结果沉默组SCN2A mRNA表达高于模型组和过表达组(P<0.05)。沉默组海马区细胞增殖率高于模型组和过表达组,细胞凋亡率低于模型组和过表达组(P<0.05)。沉默组在24,48,72 h细胞增殖率逐渐升高,过表达组相反(P<0.05)。沉默组在24,48,72 h细胞凋亡率逐渐降低,过表达组相反(P<0.05)。沉默组Bcl-2蛋白表达低于模型组和过表达组,Bax、Akt表达高于模型组和过表达组(P<0.05)。结论miRNA-132沉默能够增强SCN2A表达,miRNA-132通过靶向调控SCN2A,能促进癫痫大鼠海马区细胞增殖,抑制其凋亡。

miRNA-132通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的:探讨miRNA-132通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙周膜干细胞的成骨分化。方法:细胞培养,观察牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)形态。成骨诱导,检测成骨样分化情况。成脂诱导,检测成脂分化情况。将PDLSCs细胞分为3组,分别为对照组、miRNA-132模拟组和miRNA-132抑制剂组,采用八肽胆囊收缩素(Cholecystokinin octapeptide,CCK-8)检测PDLSCs细胞增殖,酶联免疫检测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase protein,ALP)活性,茜素红染色检测矿化结节沉积,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法检测成骨相关基因,采用Western blot检测Wnt/β-catenin相关通路蛋白。结果:miRNA-132模拟组的PDLSCs细胞增殖能力、ALP活性及矿化结节数量显著高于对照组,miRNA-132抑制剂组明显低于对照组和miRNA-132模拟组,差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-132模拟组中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相对表达明显高于对照组,miRNA-132抑制剂组显著低于对照组和miRNA-132模拟组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-132模拟组中的GSK3β和β-catenin蛋白的表达明显高于对照组,miRNA-132抑制剂组明显低于对照组和miRNA-132模拟组,差异有统计学意义(P<0.05)。XAV-939组中的ALP、Runx2、OCN和Osterix mRNA的相对表达明显低于对照组,miRNA-132模拟组表达高于对照组和XAV-939组,miRNA-132模拟组+XAV-939组表达高于XAV-939组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过表达miRNA-132可以促进牙周膜干细胞的成骨分化,抑制miRNA-132表达从而抑制了人牙周膜干细胞的成骨分化,miRNA-132调节牙周膜干细胞的成骨分化,其机制可能是通过Wnt/β-catenin信号通路来实现的。

miRNA-132上调p75ECD和Trk A抑制Aβ对大鼠海马CAI区神经元毒性作用

目的探讨miRNA-132调控p75ECD和TrkA抑制Aβ对大鼠海马CAI区神经元损伤的机制。方法将60只健康大鼠分为对照组、Aβ组和miR-132组,每组20只。用免疫组化检测大鼠海马区Trk A的阳性细胞数量;CCK8检测神经细胞活力;TUNEL检测神经细胞凋亡程度;Western blot检测p75ECD、Trk蛋白表达,比较各组差异性。结果 Aβ组海马CAI区Trk A细胞数与对照组相比明显减少,而miR-132组与Aβ组相比明显增多;Aβ组较对照组神经元活性减弱,神经元损伤严重,修复能力缓慢,miR-132组较Aβ组神经元活性增强,神经元损伤程度下降;Aβ组与对照组相比神经元凋亡程度严重,miR-132组较Aβ组神经元凋亡程度减轻;Aβ组与对照组相比神经元中p75ECD、Trk A蛋白表明下降,miR-132组较Aβ组神经元中p75ECD、Trk A蛋白水平上升。结论 miRNA-132过表达可激活p75ECD和Trk A,降低Aβ对神经元的损伤。

微小RNA-132对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的研究miRNA-132对白血病细胞株K562增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法应用Lipofectami-ne TM 2000转染K562细胞,实时荧光定量PCR检测转染后miRNA-132的表达。CCK-8及流式细胞术检测转染后对K562细胞增殖及凋亡的影响。Western Blot法分别检测SRIT1及P53的表达量变化。结果 miRNA-132在正常细胞中的表达明显低于在K562细胞株中的表达,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组miRNA-132的表达量明显升高。转染miRNA-132 mim-ics后,K562细胞增殖能力减弱,凋亡率明显增加。与空白对照组和miRNA-132-NC组相比,miRNA-132高表达后,转染组的SIRT1蛋白表达量明显降低,P53蛋白表达量明显升高。结论高表达的miRNA-132对白血病K562细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与其增强SIRT1、P53的活性有关。

miR-132在人脐静脉内皮细胞中的生物学功能

目的:探讨动脉粥样硬化组织中miRNA-132的表达及其对内皮细胞增殖、凋亡及脂代谢的影响.方法:用Real-time PCR法检测48例动脉粥样硬化患者组织与正常动脉组织的表达量;培养人脐静脉内皮细胞,分别转染miR-132 inhibitor及阴性对照,检测细胞的增殖、凋亡;利用Western blot检测相关基因表达变化.结果:抑制miR-132表达,内皮细胞的增殖增强,凋亡减少;增殖相关基因PCNA和KLF5升高及凋亡相关基因表达降低.结论:miR-132抑制HUVEC细胞的增殖,并在体外诱导细胞凋亡,miR-132可能抑制动脉粥样硬化的形成,其抑制功能可能通过下游PCNA和KFLs而实现.

MiR-132抑制肿瘤转移

肿瘤转移是造成癌症难以根治的重要原因之一.近年来越来越多的研究发现,miRNA在肿瘤转移过程中发挥了直接或间接的作用.本研究的目标是找到一种特异性的肿瘤转移相关miRNA,能够作为抑制肿瘤转移的潜在靶标.miR-132是一类与炎症、血管生长、中枢神经系统相关的miRNA,至今还没有研究证明其与肿瘤转移相关.为了验证miR-132与肿瘤迁移的相关性,本研究将miR-132转染入高迁移乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中,检测细胞迁移率的变化.实验发现miR-132能够抑制MDA-MB-231细胞的迁移.为了进一步揭示miR-132抑制细胞迁移的可能机制,本研究通过生物信息学手段寻找并鉴定了3种可能与肿瘤转移相关的miR-132的靶基因,它们分别是CHIP(STUB1)、G3BP1、G3BP2.分别比对MCF7与MDA-MB-231细胞,及转染miR-132和对照组MDA-MB-231细胞中以上3种基因的表达差异,我们发现G3BP1、G3BP2可能参与miR-132对肿瘤转移的调控.本研究首次报道miR-132与肿瘤转移的关系,并揭示了miR-132调节肿瘤转移的可能机制,说明了miR-132具有作为特异性抑制肿瘤转移靶标的潜力,为抑制肿瘤转移提供一个新的靶点.

microRNA-132和Mecp2在甲基苯丙胺依赖中的作用

目的探讨miRNA-132及相关蛋白Mecp2、CREB在甲基苯丙胺(methamphetamine, MA)神经毒性中的作用。方法大鼠腹腔注射MA(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))建立1、2、4周3个不同依赖时程的MA依赖模型。取额叶皮质、海马,RT-qPCR检测miRNA-132、Mecp2 mRNA,Western blot检测Mecp2、p-Mecp2、CREB和p-CREB。结果在额叶皮质,miRNA-132、Mecp2 mRNA在MA依赖1、2、4周组表达均升高(P<0.05和P<0.01),Mecp2表达明显降低(P<0.01),Mecp2磷酸化水平则明显升高。在海马,miRNA-132呈降低趋势,在2、4周组明显降低(P<0.01);Mecp2 mRNA表达则明显升高(P<0.01);Mecp2在1周组表达升高(P<0.05),之后呈降低趋势,在4周组表达明显降低(P<0.05);Mecp2磷酸化水平在1周组降低(P<0.01),之后呈升高趋势,在2周组明显升高(P<0.01)。结论 MA可诱导miRNA-132异常表达。在额叶皮质,miRNA-132可能通过抑制mRNA的翻译,致Mecp2表达降低而发挥作用;但在海马,miRNA-132与Mecp2表达趋势未呈现反向对应关系,miRNA-132调节并不依赖于Mecp2。

脑源性神经生长因子对齿状回miR-132表达及抑制性电流的影响

目的:探讨脑源性神经生长因子(BDNF)对海马mi R-132的表达及齿状回颗粒细胞抑制性突触后电流(sIPSCs)的影响,明确BDNF对颞叶内侧癫痫(MTLE)发病机制的作用。方法:选取哈医大一院神经外科2008年4月-2010年10月手术治疗的MTLE患者12例海马组织。RT-pcr技术检测BDNF孵育后mir-132表达,脑片膜片钳技术检测BDNF对sIPSCs的影响。结果:BDNF升高了颞叶癫痫海马mi RNA-132的表达(P<0.01),减弱了颗粒细胞sIPSCs的频率和幅度(P<0.01)。结论:BDNF升高了海马mir-132的表达,减弱颗粒细胞sIPSCs的频率和幅度,可能对MTLE的发展有促进作用。

MiR-132-3p介导FOXO1对内皮祖细胞增殖的调控作用

目的探讨miR-132-3p对内皮祖细胞增殖的影响及调控机制，为深静脉血栓的治疗提供新的理论依据。方法随机（随机数字法）挑选血栓患者22例，健康志愿者27例，采集静脉血，分离血浆和内皮祖细胞，实时定量PCR检测miR-132-3p在血浆及内皮祖细胞中的表达；实时定量PCR检测常氧和低氧条件下内皮祖细胞中miR-132-3p的表达；用电转法将miR-132-3p的模拟物（实验组）与特异性siRNA（对照组）分别转染入内皮祖细胞，MMT和CCK-8法检测miR-132-3p对内皮祖细胞增殖的影响；利用萤光素酶实验和免疫印迹实验分析miR-132-3p对内皮细胞中FOXO1表达的影响。结果血栓患者血浆中miR-132-3p平均水平为健康志愿者的（0．45±0．05）倍（P〈0．05）；低氧条件下内皮祖细胞中miR-132-3p表达水平为常氧状态下的（0．23±0．13）倍（P〈0．05）；实验组中miR-132-3p的表达水平是对照组的（15．72±2．06）倍，MMT法检测结果显示在低氧条件下，实验组细胞增殖是对照组的（7．79±1．37）倍（P〈0．01），CCK-8法检测结果表明实验组的细胞增殖是对照组的（6．46±0．38）倍（P〈0．01）；软件分析显示FOXO1为miR-132-3p的直接靶标，在低氧条件下miR-132-3p模拟物mimic转染的内皮祖细胞中荧光素酶活性是siRNA处理组的0．47倍，免疫印迹结果显示在低氧条件下miR-132-3p模拟物mimic转染的内皮祖细胞中FOXO1蛋白表达水平是siRNA处理组的0．18倍。结论与健康志愿者相比，血栓患者miR-132-3p表达明显降低，结果促进了FOXO1的表达，抑制了内皮祖细胞的增殖，这可能与静脉血栓的形成密切相关。