基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用

目的:基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用。方法:制备肝癌细胞转移瘤,将裸鼠分为空白组(不制备肝癌裸鼠模型)、模型组(肝癌小鼠模型组)、胡椒碱组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱干预组)、miR-132组(肝癌小鼠模型给予miR-132类似物组)、联合组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱联合miR-132类似物组)。比较各组裸鼠的瘤体积和肿瘤抑制率;比较肿瘤组织病理学变化;用ELISA检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量;比较微血管密度(MVD)数量;用蛋白质印迹法检测肝组织中miR-132、GP73表达。结果:和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠的瘤体积均显著降低,且联合组瘤体积较胡椒碱组和miR-132组降低更明显(P<0.05)。和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肿瘤生长抑制率显著增加(P<0.05);联合组裸鼠的肿瘤生长抑制率明显高于miR-132组和胡椒碱组(P<0.05)。模型组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量和空白组相比显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量均显著减少,且联合组血清中VEGF含量和MVD显著低于胡椒碱组(P<0.05)。和空白组相比,模型组裸鼠肝组织中miR-132表达显著降低,GP73蛋白表达显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肝组织中miR-132表达均明显增加,GP73蛋白表达均显著降低,且联合组中miR-132和GP73表达变化最大(P<0.05)。双荧光素酶检测报告结果显示,过表达miR-132可降低GP73活性(P<0.05)。结论:胡椒碱可通过调控miR-132负向调控GP73抑制肝癌血管形成,同时也能显著抑制肿瘤的生长。

miRNA-126调控Wnt/β-catenin信号通路对子宫平滑肌肉瘤生物学功能的影响

目的研究miRNA-126在子宫平滑肌肉瘤(ULMS)组织中的表达水平及临床意义,探讨其通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞增殖和转移能力的作用机制。方法采用qRT-PCR检测miRNA-126在ULMS组织和子宫平滑肌瘤组织中的表达水平,并分析miRNA-126表达与ULMS患者临床病理参数、复发转移及生存率的关系。常规培养ULMS细胞SK-UT-1,随机分为NC对照组和miRNA-126 mimics实验组,分别转染NC mimics和miRNA-126 mimics,qRT-PCR检测各组细胞中miRNA-126的表达;CCK8实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;TOP/FOP Flash实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性;western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin在细胞核中的表达水平,及其相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1的表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与子宫平滑肌瘤组织相比,miRNA-126在ULMS组织中的表达显著降低(P<0.05),且miRNA-126在肿瘤直径大和存在转移的ULMS患者中表达显著减少(P<0.05),miRNA-126表达对ULMS患者复发转移和生存率无明显影响(P>0.05)。与NC组相比,miRNA-126 mimics组SK-UT-1细胞中的miRNA-126表达水平显著增加(P<0.05),SK-UT-1细胞的增殖和转移能力显著降低(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1表达均显著降低(P<0.05)。结论miRNA-126在ULMS组织中表达降低,miRNA-126可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞的增殖和转移。

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论乳腺癌细胞中miR-24表达升高,并且通过调控MEK/ERK信号通路促进乳腺癌的转移。

miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响

miRNA-21是miRNA家族中十分重要的一个基因,在多种恶性肿瘤中高表达。研究表明,miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控可影响相关靶点的表达情况,因此,miRNA-21可能为非小细胞肺癌临床诊断和疾病治疗提供新靶标。本文对miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响作一综述。

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞,将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-34a mimic组细胞中miR-34a的表达升高,细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-34a inhibitor组细胞中miR-34a的表达降低,细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,共转染miR-34a mimic和WT-SOX4的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而共转染miR-34a mimic和MUT-SOX4的细胞荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。与miR-34a mimic+Vector组比较,miR-34a mimic+pcDNA-SOX4组Raji细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:miR-34a通过靶向SOX4调控RAS/MAPK信号通路从而抑制PCNSL细胞增殖,促进细胞凋亡。

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制

目的:探究miRNA-132(miR-132)通过Hedgehog信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法:用miR-132类似物转染人肝癌HepG2细胞,将样本分为空白组(无转染HepG2)、NC组(HepG2转染miR-132-NC)、YJ组(HepG2转染miR-132 mimic)。通过qRT-PCR检测miR-132在HepG2细胞中的表达量,采用CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh蛋白表达。结果:PCR检测结果显示,3组对比,YJ组HepG2细胞中miR-132表达量最高,说明转染成功;CCK-8检测结果显示,YJ组HepG2细胞增殖数量最低,空白组HepG2细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组比较,YJ组HepG2细胞凋亡数量最多;Transwell小室检测结果显示,YJ组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ组Shh蛋白相对表达量与空白组和NC组比明显降低。结论:过表达miR-132降低Hedgehog信号通路,可促进人肝癌HepG2细胞凋亡作用。

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

缺糖缺氧心肌细胞中miRNA-155对Notch信号通路及自噬和凋亡的影响

目的探讨miRNA-155在缺糖缺氧心肌细胞模型中对Notch信号通路及心肌细胞凋亡与自噬的影响。方法建立缺糖缺氧细胞(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,细胞分为正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155 inhibitor阴性对照组及OGD组+miRNA-155 inhibitor组。利用RT-qPCR检测模型组与正常对照组心肌细胞中miRNA-155的表达情况;利用Western blot检测正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155抑制剂阴性对照组及OGD组+miRNA-155抑制剂组中Notch1,HES1,Beclin1及Caspase-3的表达情况;利用CCK-8实验检测各组心肌细胞的活性。结果 RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比较,模型组心肌细胞中miRNA-155的表达显著升高;Western blot结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著升高缺糖缺氧心肌细胞中Notch1,HES1,Beclin1的表达,降低细胞中Caspase-3的表达;CCK-8实验结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著提高缺糖缺氧心肌细胞的活性。结论 MiRNA-155 inhibitor可通过提高Notch1及HES1的表达,促进Notch信号通路激活,促进细胞自噬,抑制细胞凋亡,提高心肌细胞的活性,从而发挥心肌保护作用。

天麻素通过调节miRNA-221/PI3K/Akt通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探索天麻素(gastrodin,GAS)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法将人肺泡上皮细胞A549分为正常对照组、LPS组、GAS组、miR-221 siRNA组、control siRNA组,采用RT-qPCR实验检测miRNA-221 mRNA的表达水平;ELISA实验检测细胞培养液中炎性因子的含量;MTT实验检测细胞活力;Western blot实验检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)及半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)蛋白的表达情况。结果与LPS组比较,GAS组中GAS可明显降低LPS诱导的A549细胞中miRNA-221 mRNA的表达,升高p-Akt蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,miRNA-221 siRNA组抑制miRNA-221的表达后,可促进LPS诱导的A549细胞中PI3K、p-Akt蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,miRNA-221 siRNA组与GAS组均可明显降低LPS诱导的A549细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6),白细胞介素1β(IL-1β)的含量,降低促凋亡蛋白Bax及Caspase-9的表达,促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);而miRNA-221 siRNA组与GAS组对细胞的作用比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GAS通过抑制miR-221的表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而减少炎性因子的释放,减少细胞凋亡,提高细胞活力,发挥细胞保护作用。

运动心脏重塑过程中miRNA-350/JNK信号通路的动态变化

目的:通过递增负荷跑台运动建立运动性心肌肥大模型,观察miRNA-350及其靶基因在8周递增负荷运动诱导的心脏重塑中的动态变化,以探讨运动心脏重塑的可能机制。方法:96只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组)和递增负荷运动组(ILT组)。正式训练的第7周末,用超声心动图检测各组小鼠心脏结构和功能参数;用qRT-PCR检测运动心脏重塑过程中不同时相(0d、3d、7d、15d、29d和57d)miRNA-350的动态变化;分别用qRT-PCR和Western Blotting技术检测JNK mRNA和JNK蛋白的动态变化。结果:ILT组小鼠PWTS、PWTD、LVEDD、IVSTD和IVSTS等指标显著高于C组,EF无显著性差异;在运动心脏重塑过程中,ILT组小鼠心脏中miRNA-350的表达水平先快速增高再急剧下降,然后缓慢下降到与C组相当的水平;在递增负荷运动的0d、3d和7d,miRNA-350的靶基因JNK mRNA的表达水平没有显著变化,此后,JNK mRNA的表达水平呈上升趋势;在运动心脏重塑的初期,JNK蛋白的表达水平先显著下降再缓慢上升。结论:持续8周递增负荷跑台运动成功的诱导了小鼠心肌肥大;运动心脏重塑过程中miRNA-350、JNK mRNA和JNK蛋白呈动态变化,提示miRNA-350/JNK信号通路可能参与运动心脏重塑的调节。

Ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎miRNA-146a调控DNMTs中的作用及温化蠲痹方干预作用研究

目的研究ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)调控中的作用,以及温化蠲痹方干预作用。方法提取RA患者、健康受试者PBMCs进行体外培养研究。将18例健康受试者随机分为6组,每组均为3例,分别为正常组,正常转染miRNA-146a组(转染组),正常转染miRNA-146a加中药组(中药1组),正常转染miRNA-146a加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断1组)、SB203580组(阻断2组)、SP600125组(阻断3组)。将符合中医辨证为寒热错杂、痰瘀痹阻型的活动期RA患者15例,随机分为5组,每组3例,分别为RA组,RA加中药组(中药2组),RA加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断4组)、SB203580组(阻断5组)、SP600125组(阻断6组)。对受试者PBMCs进行体外培养、转染、加通路阻断剂以及含药血清,运用实时定量PCR检测PBMC中miRNA-146a、DNMTs、RASGRP1的表达。结果阻断1~6组miRNA-146a表达降低,DNMTs表达升高,RASGRP1表达降低(均P<0.05)。中药1、2组RSAGRP1表达降低(均P<0.05)。结论ras-MAPKs信号通路可能参与了RA患者miRNA-146a对DNMTs的调控。中药温化蠲痹方可能通过下调RA患者RASGRP1表达作用于ras-MAPKs信号通路,影响miRNA-146a对DNMTs进行调控,达到治疗RA作用。

地塞米松对小鼠急性胰腺炎中miRNA-155及NF-κB信号通路的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠模型胰腺组织中miRNA-155及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法利用蛙皮素建立小鼠AP动物模型,实验分组为对照组、模型组、地塞米松组(DEX组),分别连续3次予生理盐水、蛙皮素(10μg/mL浓度按50μg/kg)、蛙皮素(剂量同模型组)+DEX(1 mL/kg)腹腔注射.利用ELISA法检测各组动物胰腺组织及血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组动物胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达情况.结果ELISA检测结果显示,与模型组比较,DEX组动物胰腺组织及血清中IL-1β、TNF-α与IL-6的含量显著降低,对照组最低.RT-qPCR结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达显著降低,对照组最低.Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达均显著降低.结论DEX可能通过抑制miRNA-155的表达,进而抑制p65及IκBα蛋白的磷酸化,从而抑制NF-κB信号通路的活化,减少炎症因子如IL-1β、TNF-α与IL-6等的合成与释放,对胰腺腺泡细胞起到保护作用.

miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎新生大鼠中的作用

目的探讨miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠中的作用。方法选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是对照组(A组)、模型组(B组)、阴性对照组(C组)、miRNA-146a agomir组(D组)。采用HE染色,光镜下观察各组大鼠肠组织病理形态学改变;ELISA检测各组大鼠回盲部肠组织中TNF-α、IL-1β表达水平;qRT-PCR检测各组大鼠回盲部肠组织中miRNA-146a、STAT3、IL-6;Western blot检测各组大鼠回盲部肠组织中STAT3、p-STAT3、IL-6。结果光镜结果显示,A组肠组织结构清晰,上皮完整,腺体排列规则、黏膜层及黏膜下层无充血水肿且无炎症细胞浸润;B组和C组肠组织坏死严重,腺体排列紊乱,部分绒毛坏死、脱落,黏膜下层重度水肿,存在大量炎症细胞浸润;D组肠黏膜及黏膜下层可见轻度水肿,有少量炎症细胞浸润,肠组织结构坏死情况减轻,腺体排列稍紊乱。与A组相比,B组、C组大鼠肠组织miRNA-146a表达水平降低而D组miRNA-146a表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);B组、C组大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);过表达miRNA-146a agomir后,大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论NEC大鼠IL-6/STAT3信号通路激活,炎症水平升高,肠组织损伤严重;过表达miRNA-146a可减轻NEC炎症水平,改善肠组织损伤情况,其机制可能与miRNA-146a抑制IL-6/STAT3信号通路活化有关。

miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭（英文）

目的研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因。方法real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量。用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null的生长速率的变化。使用稳定株细胞H1299检测miR-132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响。用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H1299-pEGP-miR-null细胞在72h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证。运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证。在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用。H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)能力明显高于对照组。在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1siRNA后细胞增殖能力升高(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P<0.05)。Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍)。结论 miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭。它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节。

芍药舒筋片通过miRNA-140对骨关节炎大鼠软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的:研究芍药舒筋片通过miRNA-140对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨芍药舒筋片对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞的保护作用。方法:取SD大鼠45只,随机分为假手术组、OA对照组、OA治疗组,每组各15只。OA对照组和OA治疗组采用改良Hulth造模法建模,假手术组和OA对照组在建模2周后开始生理盐水灌胃,OA治疗组等量芍药舒筋片灌胃。采用CCK-8溶液检测药物对细胞增殖的影响;软骨组织学采用Mankin评分;检测各组软骨细胞miRNA-140、Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达。结果:OA对照组中软骨细胞的增殖速率、miRNA-140相对表达量均明显低于假手术组,而OA治疗组均明显高于OA对照组(P<0.05)。OA对照组中Mankin评分、细胞Wnt-3a、β-catenin、GSK-3βmiRNA和蛋白表达水平均明显高于假手术组,而OA治疗组均明显低于OA对照组(P<0.05)。结论:芍药舒筋片能够增加OA大鼠软骨细胞中miRNA-140的相对表达量和软骨细胞的增殖速率,降低Mankin评分,且能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路活性来发挥其对关节软骨细胞的保护作用。

补肾益髓方对脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症模型miRNA-155信号通路相关因子的影响

目的观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制。方法1μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5%、10%、20%)组和空白血清(5%、10%、20%)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20%补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-q PCR检测细胞内miRNA-155-5p表达;采用慢病毒转染制备miRNA-155-5p过表达模型,另设20%补肾益髓方药物血清组、阴性对照组和miRNA-155-5p过表达组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内i NOS、Arginase-1及CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)蛋白表达。结果与正常组比较,LPS组细胞活力显著降低(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著升高(P<0.01),Arginase-1表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,20%补肾益髓方药物血清组细胞活力显著升高(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著降低(P<0.01),Arginase-1表达显著升高(P<0.01)。与20%补肾益髓方药物血清组比较,miRNA-155-5p过表达组i NOS表达显著升高(P<0.01),Arginase-1和C/EBPβ表达显著降低(P<0.01)。结论补肾益髓方可抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其作用机制与提高细胞活力、上调Arginase-1表达、下调i NOS表达、抑制miRNA-155信号通路有关。

miRNA-141通过调节TLR4信号通路抑制大鼠血栓形成

目的研究微小RNA(miR)-141对血栓模型大鼠血栓形成、血小板聚集及血浆中一氧化氮(NO)、环磷酸鸟苷(cGMP)和前列环素(PGI2)的影响。方法90只SD雄性大鼠随机进行分组,10只为正常对照组;模型组使用5 g/L的CMC-Na建立大鼠动静脉旁路血栓模型(20只);治疗组在CMC-Na基础上分别静脉注射100 mg/kg阿司匹林(Asp)作为阳性对照(10只)、miR-141的拟似物mimic(20只)、mimic阴性对照mimic-NC(10只)、mimic联合Toll样受体4(TLR4)过表达重组质粒pcDNA3.1-TLR4(mimic+pcDNA3.1-TLR4)(20只),连续4周。观察各组血栓形成的影响,比浊法观察ADP诱导的血小板聚集变化,试剂盒法检测各组血浆中NO,cGMP,PGI2的水平;蛋白免疫印迹法检测TLR4、NF-κB、Rac1、IL-1β的蛋白水平。结果miR-141-mimic可显著抑制血栓形成和血小板聚集率(P<0.05),升高血浆中NO(P<0.05)、cGMP(P<0.05)、PGI2(P<0.05)浓度,miR-141-mimic组效果优于阿司匹林组(P<0.05)。miR-141-mimic可显著抑制NF-κB(P<0.05),Rac1(P<0.05),IL-1β(P<0.05)的蛋白水平。mimic+pcDNA3.1-TLR4组的逆转miR-141-mimic组的效果(P<0.05)。结论miR-141通过抑制TLR4信号通路发挥抗血栓作用。

miR-10b-5p靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力

目的探讨miR-10b-5p靶向Jumonji富含AT结合结构域2(JARID2)及磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调控人乳腺癌M.D.Anderson和MB代表转移性乳腺癌-231(MDA-MB-231)细胞增殖和迁移的影响。方法培养人正常乳腺细胞密歇根癌症基金会-10A(MCF-10A)及人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Real-time聚合酶链式反应(PCR)法检测两种细胞中miR-10b-5p表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组(Lip2000处理后正常培养细胞)、上调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物mimic转染)、上调转染组(Lip2000+mimic-miR-10b-5p共转染)、下调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物inhibitor转染)、下调转染组(Lip2000+inhibitor-miR-10b-5p共转染)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞迁移能力,Western blot法检测各组中JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路蛋白表达。结果MDA-MB-231细胞中miR-10b-5p表达量高于MCF-10A细胞(P<0.05)。上调转染组增殖抑制率低于对照组,下调转染组增殖抑制率高于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义。上调转染组细胞数量少于对照组,下调转染组细胞数量多于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组与对照组细胞数量比较差异无统计学意义。上调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均高于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P<0.05);下调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均低于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论miR-10b-5p可靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路表达,影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的:研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用,并探讨其作用机制。方法:收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本,采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组,采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化,采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。结果:与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比,显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组细胞增殖能力相比,miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组189.667±14.742相比,miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614,差异具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%,差异具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达,抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion,E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。

miRNA-21过表达对乳鼠星形胶质细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨miRNA-21(miR-21)过表达对乳鼠星形胶质细胞(AS)凋亡及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。方法:AS分为3组,空白对照组、H_2O_2组(400μmol/L的H_2O_2处理AS 24 h)和miR-21+H_2O_2组(miR-21 mimics转染AS 24 h后用400μmol/L的H_2O_2处理细胞24 h)。采用qRT-PCR检测3组细胞miR-21的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测β-catenin、c-myc和Bax蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,H_2O_2组miR-21表达降低,细胞凋亡率升高,β-catenin和c-myc表达降低,Bax表达升高(P <0. 05);与H_2O_2组比较,miR-21+H_2O_2组miR-21表达升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和c-myc蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:过表达miR-21可降低AS凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。