miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

目的探索miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响,并进一步探索其机制。方法体外培养胃癌AGS细胞,并将其分为空白对照组、阴性对照组及实验组。利用qPCR检测miRNA-299-3p的表达,将空载体质粒和miRNA-299-3p质粒分别转染入AGS细胞;利用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及活性氧水平变化情况;Transwell法检测细胞迁移和侵袭情况;Western blot检测相关蛋白表达量变化情况。结果CCK-8实验表明,miRNA-299-3p的高表达抑制AGS细胞增殖(P<0.05);流式细胞术及Western blot结果显示,miRNA-299-3p的高表达能够诱导AGS细胞凋亡,caspase-3和Bax表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05);同时,miRNA-299-3p过表达后,能够下调CDK1/2和Cyclin B1蛋白的表达量,将AGS细胞周期阻滞在G_(2)/M期;Transwell小室及Western blot实验结果表明,miRNA-299-3p过表达使N-cadherin蛋白表达量降低,E-cadherin蛋白表达量升高从而抑制AGS细胞迁移;另外,miRNA-299-3p过表达能够上调AGS细胞中活性氧水平。结论过表达miRNA-299-3能够通过上调细胞内活性氧水平,抑制AGS细胞的增殖、诱导AGS细胞发生凋亡、将细胞周期阻滞在G_(2)/M期、抑制迁移,为miRNA-299-3p在胃癌研究中提供一定的理论基础。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系

目的分析老年心力衰竭患者血微RNA(miRNA)-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与其心功能的关系。方法回顾性选取2022年1月至2023年11月三亚中心医院收治的老年心力衰竭患者68例作为观察组,选择同期收治的非心力衰竭老年患者20例作为对照组。对比两组临床资料[性别、年龄、体重指数、左心房内径(LAD)、左心室内径(LVD)、右心房内径(RAD)、右心室内径(RVD)、室间隔厚度(IVS)、左室射血分数(LVEF)、B型脑钠肽(BNP)、肌钙蛋白I(cTnI)、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、丙氨酸转氨酶(ALT)等]。经荧光聚合酶链反应定量分析法检测两组血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平;分析观察组中不同心功能分级患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平差异;Spearman相关分析法分析血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平与心功能分级的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析各参数预测老年心力衰竭患者心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的价值。结果两组的性别构成比、年龄、体重指数、RVD、总胆固醇、甘油三酯、LDL、HDL、WBC比较,差异均无统计学意义(P>0.05);观察组的LAD、LVD、RAD、IVS、BNP、cTnI、ALT均高于对照组,而LVEF、PLT均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组血miRNA-423-5p水平为1.08±0.12,高于对照组(0.54±0.06),而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平分别为1.14±0.13、1.08±0.11,均低于对照组(1.26±0.15、1.15±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。随老年心力衰竭患者心功能分级升高,其血miRNA-423-5p水平升高,而miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。老年心力衰竭患者miRNA-423-5p与心功能分级呈正相关(P<0.05),miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p与心功能分级呈负相关(P<0.05)。ROC曲线显示,血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p联合预测老年心力衰竭心功能分级Ⅲ~Ⅳ级的敏感度、特异度、曲线下面积分别为82.43%、81.85%、0.864,高于单独预测结果。结论老年心力衰竭患者血miRNA-423-5p、miRNA-532-3p、miRNA-29b-5p呈异常表达,且与患者心功能分级有密切关系,联合检测三者对判断心功能分级有较高预测价值。

非小细胞肺癌血清lncRNA XIST、miR-126-3p表达与根治术后复发的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清长链非编码RNA X无活性特异性转录物(lncRNA XIST)、微小RNA-126-3p(miR-126-3p)表达及其与根治术后复发的关系。方法 选取2019年2月至2020年10月中国人民解放军南部战区总医院收治的108例行根治术的NSCLC患者作为NSCLC组,选取同期在该院体检的健康志愿者52例作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清lncRNA XIST、miR-126-3p相对表达水平;Pearson法分析血清lncRNA XIST与miR-126-3p表达的相关性;Logistic回归分析NSCLC患者术后复发的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清lncRNA XIST、miR-126-3p对患者术后复发的预测价值。结果 NSCLC组患者血清lncRNA XIST表达水平高于对照组(P<0.05),miR-126-3p表达水平则低于对照组(P<0.05)。血清lncRNA XIST、miR-126-3p表达水平与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。生物信息学网站预测显示,lncRNA XIST与miR-126-3p存在靶向结合位点,且血清lncRNA XIST与miR-126-3p表达呈负相关(r=-0.579,P<0.05)。与未复发组相比,复发组患者血清lncRNA XIST表达水平升高(P<0.05),miR-126-3p表达水平降低(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,lncRNA XIST、miR-126-3p、淋巴结转移、TNM分期是NSCLC患者术后复发的影响因素(P<0.05);血清lncRNA XIST、miR-126-3p及二者联合预测NSCLC患者术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.750、0.886、0.933,二者联合预测优于单独预测(Z二者联合vs. lncRNA XIST=4.076、Z二者联合vs. miR-126-3p=2.065,P<0.05)。结论 NSCLC患者血清lncRNA XIST表达升高,miR-126-3p表达降低,两者对于患者根治术后复发具有一定的预测价值。

过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

miR-132-3p靶向调控PTEN/Akt信号通路对缺氧/复氧诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响

目的研究miR-132-3p靶向调控第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧/复氧(H/R)诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响。方法体外培养HT22细胞并随机分为对照组、H/R组、阴性对照(miR-132-3p mimics阴性对照+空载质粒)组、miR-132-3p mimics组(miR-132-3p mimics)、PTEN敲低组(PTEN siRNA质粒)、miR-132-3p mimics+PTEN过表达组(miR-132-3p mimics+PTEN过表达质粒),除对照组外,其余各组进行H/R处理,同时进行分组转染,然后采用qRT-PCR实验、免疫印迹法检测各组细胞miR-132-3p与PTEN/Akt通路相关蛋白表达;采用MTT法、TUNEL染色分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;采用试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p对HT22细胞PTEN的靶向调控。结果与对照组相比,H/R组细胞miR-132-3p表达、p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与H/R组相比,miR-132-3p mimics组、PTEN敲低组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与miR-132-3p mimics相比,miR-132-3p mimics+PTEN过表达组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-132-3p可靶向下调HT22细胞PTEN表达。结论miR-132-3p可通过靶向下调PTEN表达而激活Akt信号,进而抑制H/R诱导的HT22细胞炎症与凋亡,缓解其细胞损伤。

在抑郁症大鼠模型中MiRNA-103-3p调控Rab10促进神经细胞自噬

目的探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制。方法选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组。CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行。对照组大鼠始终不进行任何刺激。利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态。构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力。通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用。在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量。结果病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05)。生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05)。过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05)。结论miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤。

Circ-SMG6调节miR-132-3p/BTG2轴对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨Circ-SMG6对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及对miR-132-3p/BTG2轴的调节作用。方法心肌H9c2细胞分为:NC组(不做任何处理)、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组、缺氧/复氧+si-CircSMG6组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-NC组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-miR-132-3p组。RT-qPCR检测miR-132-3p、Circ-SMG6表达;Western blot检测BTG2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平;ELISA法检测SOD、MDA以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平CCK8法测定心肌细胞增殖;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;双荧光素酶验证Circ-SMG6与miR-132-3p,miR-132-3p与BTG2靶向关系。结果与NC组相比,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组BTG2 mRNA及蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleavedCaspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组BTG2蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.01)。与缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+antimiR-132-3p组BTG2蛋白、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论敲低CircSMG6可能通过调节miR-132-3p/BTG2轴减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

荜茇酰胺通过miR-132-3p调控FOXO1改善脓毒症肾损伤机制研究

目的探究荜茇酰胺(PPL)对脓毒症肾损伤的作用及其可能机制。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为四组:Sham组、盲肠结扎穿刺(CLP)组、CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组,每组6只。使用CLP法构建脓毒症小鼠模型,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠分别按5、10 mg/kg剂量灌胃PPL溶液,CLP组和Sham组小鼠灌胃等量生理盐水。随后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)表达情况以评估模型构建,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织形态。使用脂多糖(LPS)刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)构建体外脓毒症细胞模型,随后使用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞活性和凋亡水平,qRT-PCR检测miR-132-3p表达量,蛋白免疫印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白的表达情况。使用双荧光素酶实验检测miR-132-3p与FOXO1靶向结合关系。结果小鼠体内实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠TNF-α[(13.26±2.15)ng/mL比(2.61±0.33)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(6.56±0.84)ng/mL比(1.20±0.13)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(55.35±5.13)ng/mL比(20.85±2.09)ng/mL,P<0.01]表达上升,病理显示肾损伤显著,miR-132-3p表达显著上升[(2.84±0.24)比(1.00±0.03),P<0.01],FOXO1蛋白表达下降;与CLP组比较,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠TNF-α[(9.55±0.57)ng/mL、(6.69±1.13)ng/mL比(13.26±2.15)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(4.79±0.35)ng/mL、(3.24±0.35)ng/mL比(6.56±0.84)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(44.68±3.80)ng/mL、(29.79±4.10)ng/mL比(55.35±5.13)ng/mL,P<0.01]表达下降,病理显示肾损伤有所缓解,miR-132-3p表达显著下降[(2.36±0.28)、(1.44±0.18)比(2.84±0.24),P<0.05或P<0.01],FOXO1蛋白表达上升。在体外细胞模型中,PPL能显著提高LPS刺激下肾小管细胞活性[(67.11±3.48)%、(88.53±4.42)%比(50.23±4.44)%,P<0.05或P<0.01],抑制凋亡水平,并且过表达miR-132-3p会抑制PPL对LPS刺激下细胞的影响。同时,在体外细胞中证实了miR-132-3p对FOXO1的靶向调控作用。结论PPL可能通过miR-132-3p调控FOXO1的表达从而缓解脓毒症肾损伤。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用

目的探讨miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达以及在血管生成中的作用及可能机制。方法选取57例不明原因复发性流产患者,其中,流产2~3次36例,≥4次21例,同期,选取正常早孕行人工流产术患者42例作为对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miRNA-223-3p、Rps6kb1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫组化法检测绒毛组织中微血管密度(MVD)。结果不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量高于对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量均低于对照组,≥4次不明原因复发性流产患者miRNA-223-3p表达量高于2~3次和对照组,而Rps6kb1 mRNA、HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量低于2~3次和对照组,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD为(23.3±6.1)个,远低于对照组的(41.6±5.3)个,≥4次不明原因复发性流产患者绒毛组织中MVD低于2~3次,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,不明原因复发性流产患者绒毛组织中miRNA-223-3p表达量与HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达量及MVD均呈负相关(r=-0.496、-0.638和-0.597,P<0.001),HIF-1αmRNA表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈正相关(r=0.584、0.439,P<0.001);VEGF mRNA表达量与MVD呈正相关(r=0.600,P<0.001)。结论 miRNA-223-3p在不明原因复发性流产患者绒毛组织中表达上调,可能与Rps6kb1/HIF-1α信号通路有关。

miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β影响结直肠癌SW480细胞的奥沙利铂敏感性

目的:探讨miRNA-490-3p调控Smad2/TGF-β对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法:选取100例结直肠癌(colorectal cancer,CRC)根治性手术后奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)同种联合化疗患者作为研究对象,根据化疗情况分为耐药组(n=40)和非耐药组(n=60),用q PCR检测两组外周血miRNA-490-3p水平;选取人CRC细胞株SW480和CRC奥沙利铂(OXA)耐药型细胞株OXA-SW480进行研究,先用q PCR检测两种细胞株中miRNA-490-3p表达水平;后将miRNA-490-3p过表达载体转染OXA-SW480(过表达组),并设立空载体组(空载体转染OXA-SW480)和空白对照组(OXA-SW480未经任何处理)。用CCK-8检测各组细胞增殖能力,同时用不同浓度OXA处理各组细胞,计算其半数抑制浓度(IC50);用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用WB检测各组Smad2和TGF-β蛋白表达水平。结果:在CRC患者中,耐药组外周血miR-490-3p水平显著低于非耐药组,在CRC细胞株中,OXA-SW480耐药株细胞miR-490-3p水平显著低于正常株SW480细胞(P<0.05)。与空载体组和空白对照组相比,过表达组miR-490-3p水平显著降低(均P<0.05),增殖抑制率显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率显著升高(均P<0.01),Smad2蛋白水平显著降低(均P<0.05),TGF-β蛋白水平显著升高(均P<0.05)。经OXA处理后,过表达组的IC50显著低于空载体组和空白对照组(均P<0.05)。经Pearson相关法分析,miR-490-3p与Smad2的表达呈负相关(r=–0.943,P<0.01),miR-490-3p与TGF-β的表达呈正相关(r=0.961,P<0.01)。结论:过表达miRNA-490-3p可增加CRC SW480细胞的OXA敏感性,此作用Smad2/TGF-β信号通路有关。

miRNA-126-3p与先天性心脏病肺动脉高压发病机制相关性的临床研究

目的探讨miRNA-126-3p与肺动脉高压(以下简称肺高压)发病机制的相关性。方法选取25例先天性心脏病患者,其中,肺高压患者11例,对照组14例,采用qRT-PCR法检测其肺组织miRNA-126-3p的表达,并采用starBase进行靶基因预测,并从mRNA水平和蛋白水平进行验证。结果肺高压患者与对照组在年龄、性别、生化指标检查等方面比较差异无统计学意义(P>0.05);肺高压患者miRNA-126-3p表达水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);生物信息学预测发现miRNA-126-3p的生物学功能主要与结合蛋白、信号转导、细胞分化、调控细胞形态、调控MAPK和胰岛素受体信号通路等有关,其靶基因主要有VEGFA、SPRED1、PIK3R2等;肺高压组的VEGFA表达在mRNA水平和蛋白水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);miRNA-126-3p与VEGFA呈现正相关(P<0.01)。结论 miRNA-126-3p可能通过调控VEGFA参与先天性心脏病相关性肺动脉高压发病。

益气活血中药对急性心肌梗死病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响

目的观察益气活血中药对急性心肌梗死(AMI)病人血浆miR-223-3p、miR-132-5p表达的影响。方法将AMI病人30例随机分为治疗组和对照组各15例,治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗,对照组予常规西药治疗,疗程2周。健康志愿者10名为健康组。健康志愿者于入组时,AMI病人于入院后1 h、第3天、第7天、第14天分别抽取肘静脉血,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测miR-2 2 3-3 p、miR-1 3 2-5 p的表达情况。结果AMI病人入院早期miR-2 2 3-3 p出现高表达、miR-132-5p出现低表达,与健康志愿者比较差异有统计学意义(P<0.01);与miR-132-5p及肌钙蛋白I(c Tn I)比较,miR-223-3p显示出高表达、高敏感性的特点。与对照组比较,治疗组治疗后病人血浆miR-223-3p表达降低、miR-132-5p表达上调更显著,差异有统计学意义(P<0.01);c Tn I于24 h上升和第3天下降更为明显(P<0.05)。结论益气活血中药联合常规西药治疗AMI较单纯常规西药治疗临床疗效较好,可能与调节miR-223-3p、miR-132-5p的表达有关,miR-223-3p有望成为新的AMI早期诊断标志物。

miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞HT22凋亡的影响

目的:研究miRNA-210-3p对缺氧诱导海马神经细胞凋亡的影响及机制。方法:将海马神经元HT22细胞分成4组,分别为对照组、缺氧组、阴性对照+缺氧组、miRNA-210-3p+缺氧组,采用qRT-PCR方法检测HT22细胞中miRNA-210-3p的表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平,用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,用二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH-Px活性,用水溶性四唑盐法检测SOD活性。结果:转染miRNA-210-3p模拟物的HT22细胞经缺氧处理后,细胞中miRNA-210-3p表达水平升高(P <0. 05)。缺氧处理后的HT22细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平升高,GSH-Px、SOD活性降低,MDA含量升高(P <0. 05);上调miRNA-210-3p表达可拮抗缺氧诱导的HT22细胞凋亡和活化型Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,提高细胞中GSH-Px、SOD活性,降低细胞中MDA含量(P <0. 05)。结论:上调miRNA-210-3p能够抑制缺氧诱导的海马神经细胞凋亡,其作用机制可能与降低氧化应激有关。