miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

miR-132-3p靶向调控PTEN/Akt信号通路对缺氧/复氧诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响

目的研究miR-132-3p靶向调控第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧/复氧(H/R)诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响。方法体外培养HT22细胞并随机分为对照组、H/R组、阴性对照(miR-132-3p mimics阴性对照+空载质粒)组、miR-132-3p mimics组(miR-132-3p mimics)、PTEN敲低组(PTEN siRNA质粒)、miR-132-3p mimics+PTEN过表达组(miR-132-3p mimics+PTEN过表达质粒),除对照组外,其余各组进行H/R处理,同时进行分组转染,然后采用qRT-PCR实验、免疫印迹法检测各组细胞miR-132-3p与PTEN/Akt通路相关蛋白表达;采用MTT法、TUNEL染色分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;采用试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p对HT22细胞PTEN的靶向调控。结果与对照组相比,H/R组细胞miR-132-3p表达、p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与H/R组相比,miR-132-3p mimics组、PTEN敲低组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与miR-132-3p mimics相比,miR-132-3p mimics+PTEN过表达组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-132-3p可靶向下调HT22细胞PTEN表达。结论miR-132-3p可通过靶向下调PTEN表达而激活Akt信号,进而抑制H/R诱导的HT22细胞炎症与凋亡,缓解其细胞损伤。

在抑郁症大鼠模型中MiRNA-103-3p调控Rab10促进神经细胞自噬

目的探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制。方法选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组。CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行。对照组大鼠始终不进行任何刺激。利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态。构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力。通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用。在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量。结果病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05)。生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05)。过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05)。结论miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤。

Circ-SMG6调节miR-132-3p/BTG2轴对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨Circ-SMG6对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及对miR-132-3p/BTG2轴的调节作用。方法心肌H9c2细胞分为:NC组(不做任何处理)、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组、缺氧/复氧+si-CircSMG6组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-NC组、缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+anti-miR-132-3p组。RT-qPCR检测miR-132-3p、Circ-SMG6表达;Western blot检测BTG2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平;ELISA法检测SOD、MDA以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平CCK8法测定心肌细胞增殖;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;双荧光素酶验证Circ-SMG6与miR-132-3p,miR-132-3p与BTG2靶向关系。结果与NC组相比,缺氧/复氧组、缺氧/复氧+si-NC组BTG2 mRNA及蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleavedCaspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与缺氧/复氧组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组BTG2蛋白、Circ-SMG6水平、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.01)。与缺氧/复氧+si-Circ-SMG6组相比,缺氧/复氧+si-Circ-SMG6+antimiR-132-3p组BTG2蛋白、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、凋亡率及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0.01),miR-132-3p水平、SOD含量、72 h的细胞活力、Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论敲低CircSMG6可能通过调节miR-132-3p/BTG2轴减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

荜茇酰胺通过miR-132-3p调控FOXO1改善脓毒症肾损伤机制研究

目的探究荜茇酰胺(PPL)对脓毒症肾损伤的作用及其可能机制。方法24只雄性C57BL/6小鼠随机数字表法分为四组:Sham组、盲肠结扎穿刺(CLP)组、CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组,每组6只。使用CLP法构建脓毒症小鼠模型,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠分别按5、10 mg/kg剂量灌胃PPL溶液,CLP组和Sham组小鼠灌胃等量生理盐水。随后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)表达情况以评估模型构建,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织形态。使用脂多糖(LPS)刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2)构建体外脓毒症细胞模型,随后使用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞活性和凋亡水平,qRT-PCR检测miR-132-3p表达量,蛋白免疫印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白的表达情况。使用双荧光素酶实验检测miR-132-3p与FOXO1靶向结合关系。结果小鼠体内实验中,与Sham组比较,CLP组小鼠TNF-α[(13.26±2.15)ng/mL比(2.61±0.33)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(6.56±0.84)ng/mL比(1.20±0.13)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(55.35±5.13)ng/mL比(20.85±2.09)ng/mL,P<0.01]表达上升,病理显示肾损伤显著,miR-132-3p表达显著上升[(2.84±0.24)比(1.00±0.03),P<0.01],FOXO1蛋白表达下降;与CLP组比较,CLP+PPL-L组和CLP+PPL-H组小鼠TNF-α[(9.55±0.57)ng/mL、(6.69±1.13)ng/mL比(13.26±2.15)ng/mL,P<0.01]、IL-6[(4.79±0.35)ng/mL、(3.24±0.35)ng/mL比(6.56±0.84)ng/mL,P<0.01]、MCP-1[(44.68±3.80)ng/mL、(29.79±4.10)ng/mL比(55.35±5.13)ng/mL,P<0.01]表达下降,病理显示肾损伤有所缓解,miR-132-3p表达显著下降[(2.36±0.28)、(1.44±0.18)比(2.84±0.24),P<0.05或P<0.01],FOXO1蛋白表达上升。在体外细胞模型中,PPL能显著提高LPS刺激下肾小管细胞活性[(67.11±3.48)%、(88.53±4.42)%比(50.23±4.44)%,P<0.05或P<0.01],抑制凋亡水平,并且过表达miR-132-3p会抑制PPL对LPS刺激下细胞的影响。同时,在体外细胞中证实了miR-132-3p对FOXO1的靶向调控作用。结论PPL可能通过miR-132-3p调控FOXO1的表达从而缓解脓毒症肾损伤。

miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇耐药的关系

目的 探讨miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇(PTX)耐药的关系。方法 选取80例乳腺癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-455-3p的相对表达量及PTX耐药和PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p、自噬相关蛋白(ATG12)mRNA的相对表达量。将miRNA-NC、miRNA-455-3p mimics分别转染至乳腺癌耐药MCF-7/PTX细胞,分别作为miRNA-NC组、miRNA-455-3p组,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡情况以及P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白的相对表达量。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于PTX耐药患者,ATG12 m RNA相对表达量明显低于PTX耐药患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-455-3p组细胞凋亡率明显高于miRNA-NC组,P-gp、GST-π蛋白相对表达量均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌组织中miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关(r=-0.697,P﹤0.01)。结论 乳腺癌组织miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关,通过靶向抑制ATG12的表达降低耐药乳腺癌细胞的自噬活性,促进细胞凋亡,有助于改善乳腺癌细胞对PTX药物的敏感性。

miRNA-128-3p通过下调KLHDC8A的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

目的探讨miRNA-128-3p在胶质瘤细胞中的作用,并确定其是否能够调控KLHDC8A介导恶性生物学行为,为寻找胶质瘤患者潜在的分子生物标志物和治疗靶点提供理论支持。方法采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blotting实验验证miRNA-128-3p与KLHDC8A的调控关系。通过Edu实验、流式细胞术、Transwell和划痕实验验证miRNA-128-3p和KLHDC8A对胶质瘤细胞恶性行为的影响。利用挽救实验验证miRNA-128-3p靶向KLHDC8A调控胶质瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果KLHDC8A在高级别胶质瘤组织中的表达水平显著升高,与恶性胶质瘤患者的生存状况密切相关。功能验证实验表明,高表达KLHDC8A可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,而miRNA-128-3p高表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。miRNA-128-3p靶向调节胶质瘤细胞中KLHDC8A的表达,miRNA-128-3p高表达通过靶向KLHDC8A抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。结论miRNA-128-3p负向调控其下游靶基因KLHDC8A的表达,抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为,因此miRNA-128-3p/KLHDC8A是判断胶质瘤预后及治疗的分子靶点。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

lncRNA SNHG5和miR-132-3p在子痫前期病人胎盘组织中的表达关系研究

目的:观察长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5(lncRNA SNHG5)和miR-132-3p在子痫前期(PE)病人胎盘组织中的表达,分析二者的相关性及对PE的诊断价值。方法:选取112例PE病人作为研究对象,根据PE严重程度分为重度组58例和轻度组54例,另外选取同期健康妊娠孕妇60例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测胎盘组织中lncRNA SNHG5和miR-132-3p表达;Pearson相关分析观察PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p的相关性,及lncRNA SNHG5、miR-132-3p与临床指标的相关性;ROC曲线分析lncRNA SNHG5和miR-132-3p水平对PE的诊断价值。结果:轻度组和重度组PE病人24 h尿蛋白、收缩压以及舒张压水平均高于对照组(P<0.05);重度组收缩压、舒张压均高于轻度组(P<0.05)。轻度组、重度组lncRNA SNHG5水平低于对照组(P<0.05),miR-132-3p水平高于对照组(P<0.05);重度组lncRNA SNHG5水平低于轻度组(P<0.05)。胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p表达与PE病人24 h尿蛋白、收缩压和舒张压均有相关关系(P<0.05~P<0.01),与年龄、孕周和体质量指数无明显相关关系(P>0.05)。PE病人胎盘组组织中lncRNA SNHG5与miR-132-3p表达呈负相关关系(r=-0.509,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,胎盘组织中lncRNA SNHG5、miR-132-3p诊断PE的曲线下面积分别为0.865、0.883,截断值分别为0.93、1.44,敏感度分别为87.9%、79.3%,特异性分别为71.7%、83.3%;二者联合诊断PE的曲线下面积为0.921,敏感度和特异性分别为89.7%、81.7%。结论:PE病人胎盘组织中lncRNA SNHG5呈低表达,miR-132-3p呈高表达,且二者呈负相关关系,为PE的诊断和靶向治疗提供了新的思路。

miR-132-3p靶向调节Ptch1减轻慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛

背景:神经病理性疼痛的发病机制复杂,病理过程繁多,miR-132在神经病理性疼痛传导通路中异常表达,影响疼痛的发生、发展过程。目的:探讨miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中所发挥的作用及机制。方法:①小鼠小胶质细胞BV2经100μg/L脂多糖刺激建立活化模型,采用Western blot检测小胶质细胞激活标记物IBA1的表达,RT-qPCR检测miR-132-3p的表达。将miR-132-3p mimic或inhibitor分别转染至BV2细胞,采用Western blot检测IBA1以及P2X4R的表达。预测并验证miR-132-3p的靶向调节作用,将Ptch1表达载体pcDNA-Ptch1或si-Ptch1转染BV2细胞24 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测IBA1、P2X4R以及Shh信号通路标记蛋白的表达。BV2细胞共转染miR-132-3p-mimic和pcDNA-Ptch124 h后用脂多糖刺激培养24 h,采用Western blot检测上述蛋白的表达。②30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=6),假手术组(n=6),模型组(n=6),NC-mimic组(n=6),miR-132-3p-mimic组(n=6),后两组经鞘内注射NC-mimic和miR-132-3p-mimic,检测各组小鼠机械缩足反射阈值和热阈值,行为学检测后取背根神经节,采用RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测Ptch1、P2X4R和Shh通路标记蛋白的表达,进一步验证miR-132-3p在慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛中发挥的作用及机制。结果与结论:①与对照组比较,脂多糖刺激促进BV2细胞的激活(P<0.05),下调miR-132-3p的表达(P<0.05);②miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,并进一步抑制BV2细胞的激活以及P2X4R的表达,过表达Ptch1可以逆转miR-132-3p-mimic的作用(P<0.05);③成功建立慢性压迫性神经损伤模型,与注射NC-mimic组相比,鞘内注射miR-132-3p-mimic下调Ptch1的表达(P<0.05),抑制Shh信号通路的激活(P<0.05),减少P2X4R的表达(P<0.05),并显著提高慢性压迫性神经损伤小鼠的机械缩足反射阈值和热阈值(P<0.01);④结果表明,miR-132-3p通过靶向调节Ptch1抑制Shh信号通路的激活,减轻慢性压迫性神经损伤小鼠的神经性疼痛。

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达;qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达;Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达;CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性(P<0.05),并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力(P<0.05),而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调(P<0.05),Sal可抑制二者表达(P<0.05)。与对照组比较,miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调(P<0.05),miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制(P<0.05),Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用(P<0.05)。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达,Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响NSCLC细胞的生物学行为,发挥抗癌作用。

精神分裂症患者血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达水平与认知功能以及诊断的相关性研究

目的探讨血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-132-3p,miR-34a-5p表达与精神分裂症患者认知功能的关系,分析其诊断精神分裂症的价值。方法选择2019年2月~2021年10月武汉钢铁(集团)公司第二职工医院收治的208例精神分裂症患者(精神分裂症组)和同期71例健康体检者(对照组)。检测血清miR-132-3p和miR-34a-5p表达,Pearson相关性分析其与精神分裂症患者阳性和阴性症状量表(positive and negative symptom scale,PANSS)、精神分裂症认知功能成套测验(采用MATRICS consensus cognitive battery,MCCB)、Stroop色词测验评分相关性。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的价值。结果精神分裂症组血清miR-132-3p(3.26±0.84),miR-34a-5p(5.02±1.39)表达均高于对照组(1.05±0.33,1.62±0.5),差异有统计学意义(t=21.782,20.276,均P<0.05);精神分裂症组MCCB,Stroop色词测验评分均低于对照组(t=6.651~16.778,均P<0.05)。精神分裂症患者血清miR-132-3p,miR-34a-5p表达与PANSS总分呈正相关(r=0.502,0.477,均P<0.05),与连线测验、持续操作测验、语言记忆、Stroop单词测验评分呈负相关(r_(miR-132-3p)=-0.501~-0.368,r_(miR-34a-5p)=-0.483~-0.317,均P<0.05)。miR-132-3p,miR-34a-5p诊断精神分裂症的最佳截断值为2.16,3.35,曲线下面积为0.694,0.712,联合miR-132-3p和miR-34a-5p诊断精神分裂症的曲线下面积为0.895,大于单独miR-132-3p,miR-34a-5p诊断(Z=5.747,5.665,均P<0.05)。结论miR-132-3p和miR-34a-5p表达上调,与精神分裂症症状加重以及认知功能受损有关,miR-132-3p和miR-34a-5p联合检测在精神分裂症诊断中具有较高价值。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

子宫内膜癌组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的表达及与病理参数和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA X非活性特异性转录本(lncRNA XIST)、微RNA-132-3p(miR-132-3p)的表达及与病理参数和预后的关系。方法选取2016年2月至2019年12月江苏省南通市第六人民医院及江苏省南通市肿瘤医院收治的100例EC患者,采用q PCR检测癌组织与癌旁正常组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达。Star Base数据库预测lncRNA XIST与miR-132-3p的关系,Pearson相关性分析lncRNA XIST与miR-132-3p的相关性。随访3年,根据EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p的平均表达量将患者分为高表达组和低表达组,采用K-M法绘制不同lncRNA XIST、miR-132-3p表达患者的生存曲线。结果癌组织中lncRNA XIST表达高于癌旁正常组织,miR-132-3p表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。lncRNA XIST与miR-132-3p存在互补序列,lncRNA XIST与miR-132-3p表达呈负相关(r=-0.694,P<0.01)。不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、脉管侵犯和淋巴结转移EC组织中lncRNA XIST、miR-132-3p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA XIST高表达组3年累积生存率低于lncRNA XIST低表达组,miR-132-3p高表达组3年累积生存率高于miR-132-3p低表达组(P<0.05)。结论EC组织中lncRNA XIST高表达和miR-132-3p低表达,两者与分化程度、FIGO分期、脉管侵犯、淋巴结转移及预后有关。

糖类抗原125、人附睾蛋白4、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素分析

目的 探讨糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素。方法 选取60例卵巢癌患者,术后给予化疗,根据化疗效果将其分为有效组和无效组,比较两组患者的CA125、HE4、miRNA-144-3p水平。卵巢癌患者化疗疗效的影响因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CA125、HE4、miRNA-144-3p单独及联合检测对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值。结果 化疗后,治疗有效39例,治疗无效21例,分别作为有效组和无效组。化疗前,有效组患者血清CA125、HE4水平均明显低于无效组,miRNA-144-3p水平明显高于无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,化疗前CA125水平≥35 U/ml、化疗前HE4水平≥140 pmol/L、化疗前miRNA-144-3p水平﹤3、肿瘤直径﹥5 cm均是卵巢癌患者化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测预测卵巢癌患者化疗疗效的AUC为0.965(95%CI:0.924~0.999),此时的灵敏度为89.74%,特异度为95.24%,准确度为91.67%。结论化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测卵巢癌患者化疗疗效具有较高的预测价值,较低的化疗前CA125、HE4水平和较高的miRNA-144-3p水平提示卵巢癌患者的化疗疗效较好。

circ-BRWD1靶向调控作用miR-132-3p介导FOXO1成骨

目的:环状RNA-BRWD1(circ-BRWD1)是否靶向调控miR-132-3p介导FOXO1成骨。方法:PMOP组和对照组分别取骨,建立BMSCs的体外培养体系后,鉴定BMSCs,以检测BMSCs成骨能力,检测对照组和PMOP组BMSCs的circ-BRWD1、miR-132-3p、FOXO1相对表达值,网上找到circ-BRWD1与miR-132-3p、miR-132-3p与FOXO1的结合靶点,荧光素酶报告基因实验进一步验证。将pc-circ-BRWD1与agomiR-132-3p(模拟物)共转染入BMSCs后检测FOXO1的表达水平:RT-qPCR分析检测各组中FOXO1的相对表达。将pc-circ-BRWD1与agomiR-132-3p或sh-FOXO1共转染BMSCs后检测特异性成骨分化相关因子Runx2的表达水平。结果:ARS、ALP逐渐升高。对照组和PMOP组BMSCs的相对表达值:circ-BRWD1、FOXO1降低,miR-132-3p升高。荧光素酶报告基因示miR-132-3p可显著抑制pMIR-circ-BRWD1-WT的荧光素酶活性,miR-132-3p可显著抑制pMIR-FOXO1-WT的荧光素酶活性,过表达miR-132-3p显著下调FOXO1表达,而过表达circ-BRWD1则上调FOXO1表达。Runx2的表达水平在过表达circ-BRWD1中升高,在共转染过表达circ-BRWD1+miR-132-3p中降低,在共转染过表达circ-BRWD1+敲除FOXO1中降低。结论:circ-BRWD1可以靶向调控miR-132-3p并增强FOXO1的表达,从而增强成骨,预防骨质疏松症。