血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

miRNA-133与冠心病的关系

microRNAs(微小RNAs,miRNA)是内源性非编码短的RNA分子,以特定顺序方式(与靶mRNA互补配对)通过抑制翻译或裂解RNA来调控基因表达。miRNA-133参与多种心血管疾病的发生发展,尤其是心肌重构和心律失常等。目前对miRNA-133的作用机制尚未完全明了,本文就近年来国内外关于miRNA-133的作用机制与冠心病的关系进行综述,展望其在缺血性心律失常治疗中的应用前景。

H_2S对大鼠心肌肥大与miRNA-133a和Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的影响

目的:研究硫化氢(H_2S)对心肌细胞肥大的负性调控作用与miRNA-133a介导Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的关系。方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大模型;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR检测脑钠尿肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、H_2S合酶(CSE)、miRNA-133a和钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达;Western blot检测CaN、活化T细胞核因子c4(NFATc4)蛋白表达;Elisa方法检测心肌细胞H_2S含量;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞钙离子浓度;细胞免疫荧光检测NFATc4核转位变化。结果:(1)心肌细胞肥大时,CSE/H_2S水平、miRNA-133a mRNA表达均显著下降。应用NaHS预处理,能上调心肌细胞CSE/H_2S水平,增加H_2S含量和miRNA-133a mRNA表达,并明显抑制心肌细胞肥大。(2)心肌细胞肥大时,细胞内钙离子浓度明显增加,CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位明显增强;应用NaHS预处理能明显抑制ISO诱导的上述效应。(3)应用antagomir-133a能逆转H_2S抑制心肌细胞肥大的作用,使心肌细胞内钙离子浓度、CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位增强。结论:H_2S通过负性调控作用抑制心肌细胞肥大,该作用可能与H_2S上调miRNA-133a的表达,抑制其下游的Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的激活有关。

慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异研究

目的探讨慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表达差异。方法 30只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组20只。正常组等容量生理盐水腹腔注射,模型组予阿霉素腹腔注射造模;采用心脏彩超检测心功能,采用生理记录仪记录血流动力学,心脏切片行Tunel染色检测细胞凋亡,采用Real-time PCR法检测miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA表达;采用Western blot及免疫组化法检测心肌组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。结果与正常组比,模型组大鼠左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVESD)、左心室终末舒张压(LVEDP)明显增大(P<0.05),而左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左心室平均压(LVAP)、左心室内压最大上升速率(dp/dtmax)及左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)下降(P<0.01),Tunel染色示心肌凋亡明显。miRNA-1、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达增加(P<0.01),miRNA-133表达下降(P<0.01)。结论 miRNA-1、Caspase-3、Caspase-9在心肌凋亡中表达增加,miRNA-133表达下降。

熊果酸通过调节miRNA-133a抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)是否通过调节miRNA-133a影响肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力。方法:MTT法检测细胞活力;real-time PCR法检测UA干预和转染miRNA-133a mimics及inhibitor后细胞中miRNA-133a的表达;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果:UA可显著抑制肺癌A549细胞的活力(P<0.05),随着给药剂量的增加,UA对肺癌细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,UA作用于肺癌A549细胞24 h后的IC50为31.04μmol/L。在不同浓度的UA作用下,肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01)。Real-time PCR实验结果显示,在10、20μmol/L UA作用24 h后,A549细胞内miRNA-133a的表达显著高于溶剂对照组(P<0.01);细胞瞬时转染miRNA-133a mimics后可上调A549细胞中miRNA-133a的表达,而转染miRNA-133a inhibitor后下调A549细胞中miRNA-133a的表达(P<0.01)。肺癌A549细胞转染miRNA-133a mimics后,细胞活力、迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);相反,转染miRNA-133a inhibitor后,细胞活力、迁移和侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论:UA能抑制肺癌A549细胞活力、迁移和侵袭,其作用机制可能是通过上调miRNA-133a介导来实现的。

体外反搏治疗对急性心肌梗死患者血浆miRNA-133水平的影响

目的观察急性心肌梗死患者血浆miRNA-133(miR-133)表达情况和体外反搏治疗(ECP)对其水平的影响。方法将60例急性心肌梗死经皮冠状动脉介入(PCI)术后患者随机分为治疗组和对照组各30例,并选择同期门诊健康体检者30例作为空白组。所有受试者均于入院时抽血,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血浆miR-133水平。治疗组和对照组给予常规冠心病二级预防药物治疗,治疗组在PCI术后第3周加用ECP,1 h/(次·d),每周5次,为期7周;2组均于治疗9周后分别测定患者血浆miR-133表达水平,评估心绞痛症状改善情况,同时观察超声心动图心功能各项指标变化情况。结果与空白组比较,治疗组急性心肌梗死患者血浆miR-133表达水平明显升高(P<0.05);治疗9周后,治疗组血浆miR-133含量明显低于对照组(P<0.05),心绞痛症状缓解情况及左室射血分数(LVEF)、收缩末体积(ESV)、舒张末体积(EDV)改善情况均明显优于对照组(P均<0.05)。结论血浆miR-133水平可作为急性心肌梗死患者发病和病情进展的一项新型标志物;ECP治疗可降低急性心肌梗死患者血浆miR-133表达水平,明显改善患者心功能。

儿童支气管哮喘患者血浆中miRNA-125b及miRNA-133b的表达及临床意义

目的探讨miRNA-125b和miRNA-133b在支气管哮喘患儿中表达水平及其辅助诊断价值。方法纳入2016年1月~11月常州市儿童医院、高邮市中医医院30例哮喘患儿,分别收集其急性发作期和稳定期血液标本(AP组,SP组)。同期匹配30例变应性鼻炎患儿(AR组)及30例健康儿童为对照(NC组)。应用实时荧光定量PCR检测miRNA在各组中的表达水平并相互比较。应用ROC曲线及AUC(95%CI)评估其作为哮喘诊断指标的诊断效能。结果 miRNA-125b在AP组及SP组中的表达量较AR组升高,差异有统计学意义(t=3.913,3.120,P值均<0.01)。miRNA-133b在AP组及AR组中的表达量较高,与NC组相比差异有统计学意义(t=4.426,4.720,P值均<0.01)。miRNA-125b在哮喘诊断中最佳临界值为1.998,敏感度为64.52%,特异度为92.67%,AUC为0·798 9,95%CI为0.7111~0.886 4;miRNA-133b在哮喘急性期及变应性鼻炎等气道炎症性疾病发作期中诊断最佳临界值为1.667,敏感度为58.06%,特异度为86.67%,AUC为0.727 4,95%CI为0.5865~0.8630。结论哮喘患儿中miRNA-125b表达量较NC组及AR组升高,miRNA-125b可作为哮喘辅助诊断指标,miRNA-133b可用于气道炎症性疾病发作期的辅助诊断。

加味真武汤对阳虚水泛型冠心病心衰心室重构以及miRNA-133a和miRNA-21的影响

目的探讨加味真武汤对阳虚水泛型冠心病心衰心室重构以及miRNA-133a和miRNA-21的影响。方法选取2018年1月至2018年12月广州市中医医院心内科收治的阳虚水泛型冠心病心力衰竭患者60例进行临床研究,以随机数字表法(RNTM)原则将其分为对照组和治疗组,各30例。对照组予以西药治疗,治疗组在对照组的基础上予以加味真武汤治疗,比较两组治疗前后及随访阶段的中医证候、心功能、心肌缺血、miRNA-133a、miRNA-21等指标的变化和两组治疗效果。结果两组治疗前LVEDD、LVEF、BNP、ALD与LVEDV、LVESV、LVDd、LVDs比较差异无统计学意义;治疗组治疗后LVEDD、BNP、ALD均低于对照组,LVEF高于对照组,治疗后LVEDV、LVDd均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后LVESV、LVDs差异无统计学意义;治疗后LVEF、BNP、LVEDV、LVDd与miRNA-133a表达有相关性,LVEF、LVEDV、LVDd与miRNA-21表达有相关性。结论在阳虚水泛型冠心病心衰心室重构中予以加味真武汤效果较好,不仅可抑制心室重构,同时由于在阳虚水泛型冠心病心衰过程中miRNA-133a和miRNA-21均下调,故上调miRNA-133a和miRNA-21表达量可阻止阳虚水泛型冠心病心衰心室重构,起到保护心脏功能的目的。

miRNA-133b在胃癌组织中的表达及临床意义

目的分析miRNA-133b表达水平的改变与胃癌临床病理特征之间的关系,探讨miRNA-133b在胃组织中表达的意义。方法选择手术治疗的胃癌患者肿瘤组织63例为研究对象,取切缘正常胃黏膜为对照,设计针对miRNA-133b的特异性引物,应用定量PCR方法检测胃癌组织中miRNA-133b表达水平的变化。结合临床病理资料对miRNA-133b的表达水平与肿瘤病理类型及临床病理分期之间的关系进行分析。检测胃癌细胞株中miRNA-133b的表达水平变化。结果 miRNA-133b在胃癌组织中表达水平明显低于正常胃黏膜组织[△Ct:(-6.94±3.319)vs(-4.98±2.846),P<0.001]。其中45例miRNA-133b下调≥2.0倍,占71%;6例上调≥2.0倍,占10%;12例无明显变化,占19%。miRNA-133b与肿瘤病理类型、肿瘤TNM分期无明显相关性(P>0.05)。与正常胃黏膜细胞相比,在胃癌细胞株中miRNA-133b表达明显下调(P<0.05)。结论在胃癌组织及胃癌细胞中,miRNA-133b的表达水平均有不同程度的降低,但其下降程度和比例与临床特征无明显相关性。miRNA-133b的表达水平下调可能与促进肿瘤细胞增殖有关。

miRNA-133b-3p对PC12细胞P2rx4的表达调控及细胞钙活动的实验观察

目的:从离体细胞水平观察miRNA-133b-3p调控P2rx4表达对神经元钙活动的影响。方法:用转染试剂将miRNA-133b-3p mimic和miRNA-133b-3p inhibitor转入PC12细胞中。转染48 h后,用荧光定量PCR的方法检测PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量,P2rx4 mRNA的表达变化;用免疫印迹的方法检测P2rx4受体蛋白的表达变化;用胞内钙成像技术检测ATP孵育后细胞中钙离子浓度的变化。结果:转染48 h后,与阴性对照组相比,加入miRNA-133b-3p mimic后PC12细胞中miRNA-133b-3p的含量明显增加,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达减少,ATP孵育后细胞中钙离子浓度的升高明显减弱。转染inhibitor后,细胞内miRNA-133b-3p的含量明显减少,P2rx4 mRNA和P2rx4蛋白的表达增加,ATP孵育后胞内钙离子浓度的升高明显增强。结论:miRNA-133b-3p通过负向调控P2rx4的表达来影响细胞钙活动。

miRNA-133b在胃癌中的表达及预后价值分析

目的探讨微小RNA133b(miRNA-133b)在胃癌中的表达及其对人胃癌细胞MKN-1增殖能力的影响,分析其与胃癌患者临床特征和预后的关系。方法收集80例同一胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜上皮组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测3种组织以及人胃癌细胞MKN-1和人正常胃黏膜细胞GES-1中miRNA-133b的表达情况。将转染miRNA-133b模拟物(miRNA-133b mimics)和miRNA-133b阴性对照(miRNA-133b NC)的人胃癌细胞MKN-1分别作为miRNA-133b mimics组和miRNA-133b NC组,将仅加入LipofectamineTM2000的人胃癌细胞MKN-1作为对照组。采用qRT-PCR法检测转染效果,CCK-8法检测上调miRNA-133b表达对人胃癌细胞MKN-1增殖情况的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测上调miRNA-133b表达后人胃癌细胞MKN-1中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(BAX)、cleaved胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)的表达情况。分析胃癌组织中miRNA-133b的表达与患者临床特征及预后的关系。结果miRNA-133b在人胃癌细胞MKN-1中的相对表达量明显低于人正常胃黏膜细胞GES-1(P﹤0.01)。miRNA-133b在胃癌组织中的相对表达量低于癌旁组织和胃黏膜上皮组织(P﹤0.05)。转染后,miRNA-133b mimics组人胃癌细胞MKN-1中miRNA-133b的相对表达量高于miRNA-133b NC组和对照组,相对细胞存活比例低于miRNA-133b NC组和对照组,Bcl-2蛋白的相对表达量低于对照组和miRNA-133b NC组,BAX和cleaved caspase 3的相对表达量高于对照组和miRNA-133b NC组(P﹤0.05)。不同肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移数量和TNM分期胃癌患者胃癌组织中miRNA-133b的表达水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-133b高表达胃癌患者的中位生存时间长于miRNA-133b低表达胃癌患者(P﹤0.05)。结论miRNA-133b可调控胃癌细胞的增殖过程,影响凋亡相关蛋白的表达,其表达的下调提示胃癌患者预后不良,miRNA-133b具有成为胃癌患者预后预测分子标志物的潜力。

miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞心肌分化的影响

目的探讨miRNA-1和miRNA-133过表达对诱导性多能干细胞(iPSC)心肌分化的影响。方法取2周龄美国国家癌症研究所(ICR)孕鼠的胚胎,0.5 g/L胰酶消化接种,传至3代后采用丝裂霉素进行处理,37℃孵育培养小鼠诱导性多能干细胞(miPSC),将生长于胚胎成纤维细胞上的miPSC消化传代;更换培养基,加入对照miRNA (U6)(10 nmol/L,记为对照组),miRNA-1 (10 nmol/L,记为miRNA-1组)、miRNA-133 (10 nmol/L,记为miRNA-133组)、miRNA-1和miRNA-133(分别为10 nmol/L,记为miRNA-1+133组)转染24 h后PBS洗涤,加入miPSC分化培养基,观察每日变化并计算细胞搏动率以表示分化效率。RT-PCR检测miRNA-1、miRNA-133及心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果未分化的miPSC中较少表达cTnT,与分化0 d时比较,分化5 d后miRNA-1组及miRNA-133组内cTnT的表达水平明显升高(P <0.05),分化10 d时升高更明显(P <0.01)。分化10 d时,miRNA-1+133组cTnT表达水平较miRNA-1组及miRNA-133组更高(P <0.01)。与对照组比较,miRNA-1组及miRNA-133组细胞搏动率无变化(P> 0.05),但miRNA-1+133组搏动率显著提升(P <0.01)。结论单独应用miRNA-1或miRNA-133对心肌的分化无促进作用,共表达miRNA-1、miRNA-133可显著提高miPSC向心肌细胞定向分化的效率。

芪黄疽愈方对ASO大鼠血液流变学和血脂指标及miR-133a、TNF-α表达的影响

目的探讨芪黄疽愈方改善肢体动脉硬化闭塞症(ASO)大鼠血液流变学和血脂指标及miR-133a、TNF-α表达的影响。方法雄性SD大鼠96只饲养1 w,随机选择18只作为空白组,剩余78只采用高脂饮食喂饲联合隐动脉内膜损伤的方法建立大鼠ASO模型,造模成功后随机分为模型组18只,西药组、芪黄疽愈方(中药高、中、低浓度组)各15只,分别给予生理盐水(1 ml/100 g大鼠)、西洛他唑片灌胃治疗(18 mg/kg,1次/d)、芪黄疽愈方相应浓度中药灌胃(1.0、0.5、0.1 ml/100 g体质量),观察一般情况并检测血脂、血流变、miR-133a、炎症细胞因子指标,并进行病理分析。结果空白组毛色光泽,饮食、饮水量正常;与中药组比较,模型组精神萎靡,饮食、饮水量相对减少。中药组随着用药剂量的增加,大鼠恢复正常越显著。空白组内皮细胞层完整,平滑肌层以平滑肌细胞和弹力纤维为主;模型组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,空泡细胞、脂质沉积。中药各浓度组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,空泡细胞、脂质沉积随着中药浓度增加而减少。西药组纤维母细胞大量代替内皮细胞,内膜增厚、部分管腔闭塞,有少量空泡细胞、脂质沉积较少。治疗后,与空白组比较,模型组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、红细胞聚集指数、低切指数、高切指数显著升高,HDL显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,高浓度组血清TC、TG、红细胞聚集指数、低切指数、高切指数显著下降(P<0.05,P<0.01)。治疗后模型组TNF-α含量、miR-133a、TNF-αmRNA及蛋白表达水平明显高于空白组(P<0.05,P<0.01),中药高浓度组以上指标显著低于模型组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-133a与血脂指标(TC、TG、LDL-C),血流变学指标(红细胞聚集指数、低切指数、高切指数及动脉脂肪沉积量)呈正相关(r=0.633、0.732、0.573、0.749、0.764、0.832、0.583;P=0.016、0.002、0.025、0.011、0.003、0.001、0.020)。结论芪黄疽愈方在大鼠ASO模型中具有调节脂质代谢与降低血液黏稠度的作用,从而抑制炎症细胞因子TNF-α表达,也能抑制miR-133a mRNA及蛋白表达,从而起到保护动脉内皮、干预ASO发展进程的作用。

上调miRNA-133a表达对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察上调miRNA．133a表达是否可改善缺血再灌注损伤后心肌损害及心脏功能。方法建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。将实验动物随机分为5组：（1）空白对照组（Sham组）；（2）缺血再灌注损伤组（I／R组）；（3）缺血再灌注损伤＋miRNA．133a模拟物agomiR-133a组（I／R＋agomiR-133a组）；（4）缺血再灌注损伤＋阴性对照序列组（I／R＋scramble组）；（5）缺血再灌注损伤组＋生理盐水组（I／R＋Ns组）。于再灌注24h分别使用实时定量聚合酶链反应（Real．TimePCR）法检查心肌内miRNA-133a表达水平；经胸超声心动检查大鼠心脏功能；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（Trc）染色检测心肌梗死以及TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。结果I／R＋agomiR-133a组心肌内miRNA表达水平显著高于I／R组（P〈0．01）。上调miRNA-133a表达水平可显著减少再灌注后心肌梗死面积[（37．0±3．1）％比（58．0±4．4）％，P〈0．01]，抑制心肌细胞凋亡（38．4±6．0比15．7±5．2，P〈0．01），并改善心脏功能[LVEF：（64．8±2．9）％~L（52．8±4．0）％，LVFS：（31．1±1．2）％tk（25．2±0．8）％，P〈0．01]。NS与scramble对再灌注后心肌损伤及心脏功能无显著影响。结论上调心肌内miRNA-133a表达水平可显著减轻缺血再灌注损伤24h后心肌损害，并改善心脏功能。

miRNA-133与高血压左心室肥厚的相关性及预测价值

目的 先前国内外实验研究均表明miRNA-133 可通过调控RhoA 蛋白、细胞分化周期蛋白-42、参与心脏发生的核因子基因和结缔组织生长因子的表达而影响高血压左心室肥厚,但是上述实验并没有在临床上验证miRNA-133 对高血压左心室肥厚的预测价值,因此本研究旨在验证miRNA-133 对高血压左心室肥厚的预测价值.方法 收集未服用降压药物且发生左心室肥厚的单纯高血压患者和年龄性别相匹配的正常人外周血浆-80 ℃保存,采用RT-PCR 技术验证差异表达miRNA 的稳定性;组间比较用t 检验,采用受试者工作特征（ROC）曲线验证miRNA-133 对高血压左心室肥厚的预测价值.结果 66 例高血压左心室肥厚和33 例正常人入选,血压和左心室质量指数有统计学差异（P〈0.05）,而年龄、血脂等基线资料无统计学差异（P〉0.05）;RT-PCR 结果显示miRNA-133 在正常人和高血压左心室肥厚组相对表达量分别为0.04±0.005、0.30±0.44,差异有统计学意义（P〈0.05）;调整年龄、性别和体质量指数后,miRNA-133 表达水平与左心室肥厚具有相关性（ORs=1.654,95% CI 1.273～2.146,P〈0.05）;miRNA-133 对高血压心肌肥厚预测的ROC曲线下面积（AUC）为0.860（P=0.000）,95% CI 0.786～0.934（P〈0.05）.结论 miRNA-133 对高血压左心室肥厚有较好的预测价值.

miRNA-133b和miRNA-150对非小细胞肺癌的诊断价值

目的:探讨miRNA-133b(miR-133b)和miRNA-150(miR-150)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达情况及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月连云港市第一人民医院手术并经病理确诊的30例NSCLC患者,收集患者术前清晨空腹外周血10 ml以及术后新鲜癌组织、癌旁组织(距离癌组织≤3 cm)、正常肺组织(距离癌组织>5 cm)。以30名同期健康体检者作为健康对照组,收集清晨空腹外周血10 ml。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组受试者血清及NSCLC患者各组织中miR-133b、miR-150的相对表达量。分析NSCLC患者血清miR-133b、miR-150水平与临床病理特征的关系;以病理诊断为金标准,应用受试者工作特征(ROC)曲线判断miR-133b、miR-150诊断NSCLC的效能。结果:NSCLC患者中,miR-133b在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为0.55±0.17、0.68±0.11、0.69±0.12,癌组织中miR-133b表达水平低于癌旁组织和正常肺组织(均P<0.01);miR-150在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为1.19±0.14、1.13±0.13、1.09±0.12,癌组织与癌旁组织间miR-150表达水平差异无统计学意义(t=1.98,P=0.051),癌组织中miR-150表达水平高于正常肺组织(t=3.06,P=0.003)。NSCLC患者血清miR-133b相对表达量较健康对照组低(0.43±0.11比0.55±0.16,t=3.68,P<0.05),miR-150相对表达量较健康对照组高(1.14±0.13比1.04±0.12,t=-3.18,P<0.05)。NSCLC患者血清中miR-133b的表达水平与淋巴结转移有关(P=0.003),而与患者的性别、年龄、病理分型、TNM分期均不相关(均P>0.05)。NSCLC患者血清中miR-150表达水平与各项临床病理特征均不相关(均P>0.05)。根据ROC曲线,NSCLC患者血清中miR-133b、miR-150的曲线下面积分别为0.732、0.726,二者联合检测的曲线下面积为0.811。结论:NSCLC患者癌组织和血清中miR-133b表达水平均降低,miR-150表达水平均升高,二者在NSCLC患者的癌组织与血清中的表达趋势一致。miR-133b可能与NSCLC的恶性程度和侵袭、转移有关。miR-133b、miR-150可能成为诊断NSCLC的分子标志物,二者联合检测的诊断效能更高。

孕哺期至成年前氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织中miRNA-133a及血清骨源性碱性磷酸酶水平的影响

目的了解妊娠期、哺乳期至成年前饮水氟铝联合暴露对子代大鼠骨组织中mi RNA-133a及血清骨特异性碱性磷酸酶(B-ALP)水平的影响。方法将36只健康清洁级SD妊娠大鼠随机分为9组,分别为对照(自来水)组和氟化钠(60、240 mg/L)、氯化铝(600、1 000 mg/L)染毒组以及氟化钠+氯化铝染毒组,每组4只。采用自由饮水方式染毒,母鼠染毒时间为妊娠第0天至仔鼠出生后第21天(断乳);断乳后,从每组随机选取8只仔鼠(雌雄各半),继续以同组浓度和方式染毒至出生后第90天。测定尿、骨中氟、铝的水平及血清B-ALP水平以及骨组织中mi RNA-133a的表达水平。结果与对照组比较,除单独氯化铝染毒组和60 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠的尿氟浓度均升高(P<0.05),氟铝联合染毒对不同性别仔鼠尿氟浓度的影响在各浓度Na F+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P<0.05);除单独Na F染毒组和240 mg/L Na F+600 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠的尿铝浓度均升高(P<0.05),氟铝联合染毒对尿铝浓度的影响在60 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组表现为协同作用,在其余各浓度Na F+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P<0.05);除单独氯化铝染毒组和60 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组外,其余染毒组仔鼠骨氟含量均升高(P<0.05),氟铝联合染毒对不同性别仔鼠骨氟含量的影响在各浓度Na F+氯化铝联合染毒组中均表现为拮抗作用(P<0.05);单独氯化铝染毒组和240 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组仔鼠的骨铝含量均升高,氟铝联合染毒对骨铝含量的影响在各浓度Na F+氯化铝联合染毒组中未见交互作用(P>0.05)。与对照组比较,1 000 mg/L氯化铝染毒组和60 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组、240 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组仔鼠血清中B-ALP的水平均降低(P<0.05),氟铝联合染毒对血清中B-ALP水平的交互作用以拮抗为主(P<0.05);60 mg/L Na F染毒组、600 mg/L氯化铝染毒组和60 mg/L Na F+600 mg/L氯化铝染毒组、60 mg/L Na F+1 000 mg/L氯化铝染毒组、240 mg/L Na F+600 mg/L氯化铝染毒组仔鼠骨组织中mi R-133a的表达水平均升高(P<0.05),氟铝联合染毒对骨组织中mi R-133a表达水平的交互作用以拮抗为主(P<0.05)。结论氟铝联合暴露可能通过升高骨组织中mi R-133a表达和降低血清中B-ALP水平,从而抑制妊娠期、哺乳期至子代大鼠成年前仔鼠骨组织中成骨细胞的活性。

非小细胞肺癌患者血清miR-133b表达变化及其意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清miR-133b相对表达量的变化并探讨其临床意义。方法选择2012年1月~2015年5月我院收治的92例NSCLC患者为观察组,同期100名健康体检者为对照组。采用qRT-PCR法检测两组患者血清miR-133b相对表达量,分析观察组NSCLC患者血清miR-133b相对表达量与NSCLC患者临床病理参数和预后的关系。结果观察组、对照组血清miR-133b相对表达量分别为(0.95±1.56)、(1.92±1.61),两组相比,P<0.05。NSCLC患者血清miR-133b表达水平与患者吸烟史、肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC患者中,血清miR-133b高表达者1年生存率为76.79%(43/56),血清miR-133b低表达者1年生存率为52.78%(19/36),二者1年生存率相比,P<0.05。结论 NSCLC患者血清miR-133b相对表达量低于健康成年人。检测NSCLC患者血清miR-133b相对表达量有助于NSCLC的诊断、病情判断及预后评估。

MicroRNA-133对心肌细胞内钙的调节机制

目的研究微小RNA133(microRNA-133,miRNA-133)对乳鼠心肌细胞内钙浓度的调节机制。方法利用lipofectamine2000将miRNA-133转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,采用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA-133对L型钙通道蛋白表达的影响,并采用激光共聚焦显微镜检测miRNA-133对心肌细胞内钙浓度的影响。结果与对照组相比,转染miRNA-133的乳鼠心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著降低,细胞内钙荧光强度也明显降低(P<0.05),转染AMO133(miRNA-133的反义链,可特异性阻断miRNA-133)的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著增强,细胞内钙荧光强度也明显增加(P<0.05),miRNA-133和AMO133共转染的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度和细胞内钙荧光强度与对照组相比无明显变化。结论MiRNA-133通过抑制L型钙通道蛋白的表达而降低心肌细胞内的钙浓度。

miR-133b对骨肉瘤细胞MG-63增殖的抑制作用及其机制

目的探讨miR-133b是否通过下调KLF4抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖。方法将MG-63细胞分为对照组、miR-NC组和miR-133bmimic组,对照组不做干预,miR-NC组转染miR-NC,miR-133bmimic组转染miR-133bmimic。24 h后,Western blotting法检测MG-63细胞中与细胞增殖相关的蛋白p21、p27、PCNA、Ki-67以及KLF4的表达,12、24、48 h后,MTT法观察细胞增殖活力,利用荧光素酶试验验证KLF4是miR-133b的靶基因;将MG-63细胞随机分为miR-133b组、miR-133b+KLF4组、miR-133b+空质粒组,分别转染miR-133bmimic、miR-133bmimic+KLF4过表达质粒、miR-133bmimic+空质粒。检测MG-63细胞中p21、p27、PCNA、Ki-67、KLF4的表达,并观察细胞增殖情况。结果相比于miR-NC组,miR-133bmimic组中,24、48 h MG-63细胞的增殖活力降低(P均<0.01),PCNA、Ki-67、KLF4的表达减少,p21、p27表达增加(P均<0.05或<0.01)。荧光素酶试验结果显示,miR-133b能够显著降低KLF4-3'-UTR质粒的荧光素活性(P<0.05);相比于miR-133b+空质粒组,miR-133+KLF4组MG-63细胞中PCNA、Ki-67表达增加(P均<0.05),p21、p27表达减少(P均<0.01),细胞增殖率升高(P<0.01)。结论miR-133b通过下调KLF4表达从而抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖。