miRNA-135a对子宫内膜异位症HOXA10基因表达的调控的研究

目的:探讨miRNA-135a对子宫内膜异位症(EMs)中HOXA10基因表达的调控作用。方法:选取2013年1月到12月在天津市中心妇产科医院因EMs和单纯卵巢囊肿行腹腔镜手术的患者各80例。留取EMs患者的宫腔内膜组织(EMs在位内膜组)和异位内膜组织(EMs异位内膜组)以及单纯卵巢囊肿患者的宫腔内正常内膜组织。分别采用转染技术、实时荧光定量PCR技术检测miRNA-135a和HOXA10 mRNA的表达。结果:miRNA-135a和HOXA10 mRNA在不同月经周期表达水平不同。增殖期和分泌中期,EMs在位和异位内膜组织中miRNA-135a表达水平显著高于正常内膜,HOXA10 mRNA表达水平显著低于正常内膜,差异均有统计学意义(P<0.01);EMs在位和异位内膜组织比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。经miRNA-135a、miRNA-135a抑制剂转染后,子宫内膜间质细胞中HOXA10 mRNA表达水平显著下降和升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:EMs患者子宫内膜中HOXA10异常表达受miRNA-135a调控,miRNA-135a高表达抑制了HOXA10基因表达。

miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p在子痫前期发生中的作用及机制研究

目的探讨miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p在子痫前期发生中的作用及其机制。方法收集2018年7月—2019年8月海南省妇女儿童医学中心妇产科收治的子痫前期孕妇30例(观察组)和健康孕妇30例(对照组)的血清及胎盘组织,采用荧光定量PCR法检测2组血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达情况;采用免疫组织化学方法检测胎盘组织中E-钙黏蛋白(E-cad)的表达情况。结果观察组血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达明显高于对照组(t/P=198.035/0.000,216.658/0.000);观察组胎盘E-cad蛋白表达明显高于对照组(t=8.207,P=0.000)。经Pearson相关性分析显示,血清miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达与胎盘中E-cad表达均呈现正相关(r/P=0.531/0.001,0.543/0.004)。结论与健康孕妇相比,子痫前期孕妇血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p相对表达量较高,可能通过调控胎盘E-cad的表达参与子痫前期发病。

miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的表达及其临床诊断效能

目的探讨miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的表达情况及其临床诊断效能。方法选取82例乳腺癌患者(乳腺癌组)、43例乳腺增生患者(乳腺增生组)和40例体检健康者(健康对照组)。分别采集3组受试者的血清样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-135a-5p的相对表达量,比较不同基线特征的乳腺癌患者血清miRNA-135a-5p相对表达量,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miRNA-135a-5p在乳腺癌中的诊断效能。结果乳腺癌组患者、乳腺增生组患者、健康对照组受试者的血清miRNA-135a-5p相对表达量分别为2.396(1.042,4.363)、0.934(0.399,1.916)、0.919(0.188,1.402);乳腺癌组患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量高于乳腺增生组和健康对照组(P﹤0.05)。不同年龄、绝经状况、病理类型、肿瘤直径的乳腺癌患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);TNM分期为Ⅲ期、分化程度为低分化的乳腺癌患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为中高分化的患者(P﹤0.05)。采用ROC曲线评价血清miRNA-135a-5p在乳腺癌中的诊断效能,其曲线下面积为0.846(95%CI:0.608~0.972),诊断的灵敏度为81.52%,特异度为70.35%。结论与乳腺增生患者、健康体检者比较,miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的相对表达量较高,同时血清miRNA-135a-5p对乳腺癌诊断的灵敏度和特异度均较高,其可能成为乳腺癌临床诊断的生物学标志物之一。

miRNA-135a在阿尔茨海默病患者血液标本及PC-12细胞乏外吐小体中的变化及临床意义

目的探讨miRNA-135a在阿尔茨海默病患者血液标本及PC-12细胞乏外吐小体中的变化及临床意义。方法选取轻度认知障碍患者(MCI)9例,痴呆期阿尔茨海默病(DAT)患者21例,健康对照者30例,检测受试者血清、血浆及培养基中miRNA-135a表达水平。结果在乏外吐小体培养基中miRNA-135a相对表达量低于普通培养基(P<0.05);健康对照组血浆中miRNA-135a相对表达量高于血清,也高于乏外吐小体培养基(P<0.05);MCI组、DAT组血清、血浆中miRNA-135a相对表达量均低于对照组(P<0.05)。结论认知障碍患者血miRNA-135a表达量低,检测miRNA-135a对临床诊断阿尔茨海默病有一定价值。

miRNA-135a靶向调控HOXA10蛋白对乳腺癌细胞生物学特性的影响研究

目的探究miRNA-135a靶向调控HOXA10蛋白对于乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法收集58例乳腺癌患者癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR检测miRNA-135a以及HOXA10在乳腺癌组织及相应的癌旁组织的表达情况;采用MCF-7乳腺癌细胞作为乳腺癌模型细胞,通过脂质体转染法转染乳腺癌细胞系MCF-7,从而构建miRNA-135a过表达细胞模型及空载体组MCF-7-NC,并以MCF-7细胞作为空白对照组;对于转染前后细胞的生物学特性进行研究,主要包括采用CCK-8法以及平板克隆的方法对转染前后细胞的增殖情况进行检测;采用划痕实验以及Transwell侵袭实验分别对于转染前后细胞的侵袭和迁移能力进行检测;使用生物信息学网站StarBase预测miRNA-135a可靶向调控的蛋白。采用qRT-PCR法检测转染前后HOXA10的mRNA表达水平;Western blot法检测细胞转染前后HOXA10蛋白的表达。结果qRT-PCR结果显示,乳腺癌组织中miRNA-135a的表达水平高于正常组织,且与患者肿瘤分化程度、浸润深度、Her2状态、肿瘤分期以及淋巴结转移密切相关,乳腺癌组织HOXA10表达水平低于正常组织(P<0.05);相比于未转染的空白对照组,转染miRNA-135a的细胞增殖、侵袭、迁移能力相比于空白对照组显著增强(P<0.05),空载体组相比于空白对照组差异无统计学意义。StarBase网站预测结果显示,miRNA-135a可与HOXA10互补结合;此外,与空白对照组相比,转染miRNA-135a的MCF-7乳腺癌细胞HOXA10的mRNA以及蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),空载体组的表达水平无显著变化。结论miRNA-135a在乳腺癌组织中高表达,可能通过靶向抑制HOXA10蛋白的表达,从而促进乳腺癌细胞的侵袭以及迁移能力。

miRNA-135a在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨mi RNA-135a(mi R-135a)在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平,并通过脂质体介导的方法将mi R-135a模拟物(mi R-135a mimics)转染肝癌细胞株Hep G2,采用实时荧光定量PCR测定转染后细胞中mi R-135a的表达水平;通过平板克隆实验和MTT法分别检测转染后细胞克隆形成率和存活率的变化,并对mi R-135a调控相关靶细胞的基因表达水平进行检测,观察mi R-135a在肝癌细胞维持正常功能中的作用。结果通过对20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平进行检测,结果 mi RNA-135a的表达在正常组织中相对更高,且两组之间存在显著性差异(P<0.05);与阴性对照组比较,转染mi R-135a mimics后Hep G2细胞中mi R-135a表达水平显著提高(P<0.05),而形成单克隆能力和细胞存活率均显著下降(P<0.05),同时转染组细胞中与mi R-135a细胞调控相关靶基因FOS、PI3、Jak2、Stat3的m RNA表达量相较于NC组均显著降低(P<0.05),表明mi R-135a表达提高后抑制细胞形成单克隆能力并降低存活率。结论 mi R-135a在正常组织和肝癌组织中差异表达,同时当mi R-135a表达提高时抑制肝癌细胞形成单克隆能力和降低细胞存活率,表明mi R-135a可能通过一些相关靶基因直接或间接调控Hep G2肝癌细胞的存活,在肝癌的发生过程中可能起到作用,mi R-135a可能成为临床治疗肝癌和预后的重要靶点。

miRNA-135a、TGF-α在晚期非小细胞肺癌中的表达水平及其与患者预后的关系

目的分析晚期非小细胞肺癌患者血清中微小核糖核酸-135a(miRNA-135a)、转化生长因子-α(TGF-α)表达水平及其与患者中位无疾病进展生存期的关系。方法选取87例晚期非小细胞肺癌患者和同期33例健康体检者分别为晚期非小细胞肺癌组和对照组。比较两组受试者血清中miRNA-135a、TGF-α的表达水平及其与患者临床特征的关系,采用Cox比例风险回归模型分析晚期非小细胞肺癌患者预后的影响因素。结果晚期非小细胞肺癌组患者血清中miRNA-135a的表达水平明显低于对照组患者,TGF-α的表达水平明显高于对照组患者(P﹤0.01)。Cox比例风险回归模型分析结果显示,分化程度为低分化、TNM分期为Ⅳ期、有淋巴结转移和TGF-α高表达为晚期非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素,miRNA-135a高表达为晚期非小细胞肺癌患者预后的独立保护因素。miRNA-135a低表达患者的中位无疾病进展生存期短于miRNA-135a高表达患者,TGF-α高表达患者的中位无疾病进展生存期短于TGF-α低表达患者(P﹤0.05)。结论血清miRNA-135a、TGF-α水平与晚期非小细胞肺癌患者的无疾病进展生存期有关,可作为晚期非小细胞肺癌患者预后评估的参考指标。

血清miRNA-135、miRNA-141与PSA对前列腺癌的诊断及预后的研究进展

前列腺癌是老年男性的常见恶性肿瘤,我国患者在治疗时多属于中晚期,总体预后不佳。如何提高疾病早期诊断率,是其治疗关键。目前PSA和直肠指诊是前列腺癌筛查的主要手段,而如何在前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)灰区时,提高诊断的灵敏度和特异性及避免不必要的前列腺穿刺活检是目前研究的热点。近年的实验研究中,发现了一些蛋白质标志物、分子标志物和微小RNA (microRNA, miRNA)等。且研究也证实了这些指标可以提高前列腺癌诊断灵敏度和准确性,本文将对此类国内外关于血清miRNA-135、miRNA-141与PSA对前列腺癌的诊断及预后的研究情况进行综述。Prostate cancer is a common malignant tumor in elderly men. Most patients in our country are in the middle and late stages of treatment, and the overall prognosis is poor. How to improve the early diagnosis rate of the disease is the key to its treatment. At present, PSA and digital rectal examination are the main means of prostate cancer screening, and how to improve the sensitivity and specificity of diagnosis and avoid unnecessary prostate biopsy in the gray area of prostate specific antigen (PSA) is a current research hotspot. In recent years, some protein markers, molecular markers and microRNA (microRNA, miRNA) have been discovered in experimental studies. And studies have also confirmed that these indicators can improve the sensitivity and accuracy of prostate cancer diagnosis. This article will review the research on the diagnosis and prognosis of serum miRNA-135, miRNA-141 and PSA for prostate cancer at home and abroad.

miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵:抗炎及促进组织修复

背景:巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键,及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型,据此检测免疫调节在体内环境中的相关表达水平等组织修复相关的指标,进一步阐明在体内环境中miRNA-378a是否促进巨噬细胞M2极化及其对免疫调节和组织修复的作用。方法:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株、阴性对照病毒巨噬细胞株扩增、筛选,复苏培养巨噬细胞株后与胶原蛋白海绵共培养以此构成复合体,具体分组如下:①阳性组:过表达miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;②阴性组:阴性对照病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;③对照组:巨噬细胞-胶原蛋白海绵;④空白对照组:胶原蛋白海绵。通过免疫荧光及扫描电镜观察各组细胞密度、表型、黏附情况,后回植入小鼠背部皮下模型,分别于造模后4,7 d处死小鼠,通过大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化分析慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞胶原蛋白海绵复合体中巨噬细胞极化的方向及其对机体免疫调控、组织修复的作用。结果与结论:①免疫荧光镜下观察各组巨噬细胞株确实与胶原蛋白海绵形成复合体;②扫描电镜下慢病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞(阳性组)较其他分组细胞密度增加,细胞出现球形、椭圆形及多边形分化,具有更多的伪足;③大体观察下总体7 d愈合好于4 d,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d愈合均好于其他分组;④苏木精-伊红染色、Masson染色下,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生;⑤免疫组化显示,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于其他分组;对照组及阴性组巨噬细胞无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于空白对照组,而对照组及阴性组之间无统计学差异;阳性组、阴性组、对照组无论4,7 d染色细胞数量均大于空白对照组,且阳性组>阴性组≈对照组>空白对照组;⑥提示在体内环境中miRNA-378a过表达巨噬细胞具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生,对组织修复起到了正向作用,并且能促进巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化,从而有助于减少机体炎症反应。

miRNA-99b、LL-37、IP-10在耐多药肺结核患者中表达及早期疗效预测价值

目的 分析微小RNA-99b(miRNA-99b)、抗菌肽LL-37、干扰素-γ诱导蛋白10(IP-10)在耐多药肺结核(MDR-PTB)患者中表达及早期疗效预测价值。方法 研究纳入医院2022年11月-2024年2月临床收治MDR-PTB患者108例为MDR-PTB组,Bandim TBscore评分法将其划分为轻度组(n=71)与中-重度组(n=37);纳入同期非耐药肺结核患者(DS-PTB)87例为DS-PTB组,健康体检志愿者90例为健康对照组,检测、评估组间miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平及治疗8周后临床疗效,采用Pearson评估miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平与MDR-PTB患者临床疗效相关性,指标预测价值行多因素Logistic回归,作ROC曲线分析模型预测价值。结果 MDR-PTB组miRNA-99b、LL-37、IP-10均高于DS-PTB组与健康对照组(P<0.05),且DS-PTB组miRNA-99b、LL-37、IP-10高于健康对照组(P<0.05);MDR-PTB组内,中-重度组miRNA-99b、LL-37、IP-10表达水平均高于轻度组(P<0.05);治疗4周、治疗8周后,MDR-PTB患者miRNA-99b、LL-37、IP-10均低于治疗前(P<0.05);108例MDR-PTB患者经8周治疗后临床有效率为88.89%;miRNA-99b、LL-37、IP-10均与有效率呈负相关关系(r=-0.693、-0.706、-0.497,P<0.05);miRNA-99b、LL-37、IP-10高水平表达为MDR-PTB发生发展独立危险因素,有统计学意义(P<0.05),ROC曲线分析显示,miRNA-99b、LL-37、IP-10联合检测AUC为0.937(95%CI:0.863~0.974)高于单一检测结果(Z=7.691、7.069、8.068,P均<0.001);且联合检测敏感度(96.91%)与特异度(96.34%)均最高。结论 miRNA-99b、LL-37、IP-10高水平表达参与MDR-PTB发生与发展,三项联合在MDR-PTB患者早期疗效预测中应用价值高。

长链非编码RNA GAS5通过miR-135b-5p/APC轴抑制胶质瘤进展

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性5(growth arrest-specific 5,GAS5)与miR-135b-5p和腺瘤性结肠息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)轴之间的相互作用,以阐明其在胶质瘤增殖、转移、侵袭中的生物学功能。方法通过CGGA数据库分析GAS5表达水平与胶质瘤患者的生存率的关系;通过qRT-PCR检测GAS5在胶质瘤组织和细胞系中的表达水平;人类神经胶质瘤T98和A172细胞系分别用于过表达和敲低实验。通过转染来过表达或者沉默GAS5、miR-135b-5p和APC;通过Western blot与qRT‑PCR技术检测GAS5、miR-135b-5p、APC的表达水平;利用CCK-8实验检测胶质瘤细胞活力,通过Transwell和划痕实验分析肿瘤细胞运动活性;通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-5p与GAS5或APC的靶向关系。结果CGGA数据库分析显示GAS5低表达的胶质瘤患者的生存率显著降低(P<0.001)。Western blot与qRT‑PCR检测结果显示,分别与癌旁组织和正常人星形胶质瘤细胞系比较,GAS5在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中的表达下调(P<0.01);CCK-8、Transwell和划痕实验分析表明,与vector组比较,GAS5过表达抑制了胶质瘤细胞活力、侵袭和迁移(P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证明,GAS5和miR-135b-5p之间存在结合位点,且二者mRNA表达水平呈负相关(P=0.019)。CCK-8、Transwell和划痕实验显示,GAS5对胶质瘤细胞生物学功能的影响是通过靶向miR-135b-5p完成的,APC过表达逆转了miR-135b-5p对胶质瘤细胞的促进作用(P<0.01);Western blot结果显示,与mimic_NC比较,miR-135b-5p升高能够抑制APC的表达(P<0.001),GAS5通过靶向miR-135b-5p上调APC的表达(P<0.01)。结论GAS5通过miR-135b-5p/APC轴共同抑制肿瘤发展,揭示了GAS5/miR-135b-5p/APC在胶质瘤发展中的分子调控机制。

miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制

目的探索miRNA-299-3p对胃癌AGS细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响,并进一步探索其机制。方法体外培养胃癌AGS细胞,并将其分为空白对照组、阴性对照组及实验组。利用qPCR检测miRNA-299-3p的表达,将空载体质粒和miRNA-299-3p质粒分别转染入AGS细胞;利用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期及活性氧水平变化情况;Transwell法检测细胞迁移和侵袭情况;Western blot检测相关蛋白表达量变化情况。结果CCK-8实验表明,miRNA-299-3p的高表达抑制AGS细胞增殖(P<0.05);流式细胞术及Western blot结果显示,miRNA-299-3p的高表达能够诱导AGS细胞凋亡,caspase-3和Bax表达量升高,Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05);同时,miRNA-299-3p过表达后,能够下调CDK1/2和Cyclin B1蛋白的表达量,将AGS细胞周期阻滞在G_(2)/M期;Transwell小室及Western blot实验结果表明,miRNA-299-3p过表达使N-cadherin蛋白表达量降低,E-cadherin蛋白表达量升高从而抑制AGS细胞迁移;另外,miRNA-299-3p过表达能够上调AGS细胞中活性氧水平。结论过表达miRNA-299-3能够通过上调细胞内活性氧水平,抑制AGS细胞的增殖、诱导AGS细胞发生凋亡、将细胞周期阻滞在G_(2)/M期、抑制迁移,为miRNA-299-3p在胃癌研究中提供一定的理论基础。

miRNA-135b对鼻咽癌细胞侵袭和转移的促进作用

目的研究mi RNA-135b对鼻咽癌CNE1细胞系侵袭和转移的影响和作用机制。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi RNA-135b在鼻咽癌CNE1细胞系中的表达,分别在鼻咽癌CNE1细胞系中过表达和下调mi RNA-135b,通过微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell^(TM))检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,采用Western blotting检测大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)的表达。结果 miRNA-135b在鼻咽癌CNE1细胞系中高表达,通过增强mi RNA-135b表达,鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力有所提升;通过靶向mi RNA-135b干扰载体,下调mi RNA-135b表达,鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力有所下降。增强miRNA-135b表达,LATS2活性和表达下降,而下调miRNA-135b表达,LATS2活性和表达上升。结论miRNA-135b过表达会提升鼻咽癌CNE1细胞的侵袭和转移能力,下调miRNA-135b表达可有效抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。miRNA-135b的表达可能通过影响LATS2活性影响鼻咽癌细胞的生长。

阿尔茨海默病患者血液标本外吐小体中miRNA-135a的检测

目的:提取轻度认知障碍(MCI)、阿尔茨海默型痴呆(DAT)患者血液标本以及PC-12细胞培养基标本中的外吐小体并检测其中miRNA-135a含量。方法:使用超速离心法分离7例MCI、18例DAT患者、健康对照组的血清和血浆及PC-12细胞培养基中的外吐小体,使用实时定量PCR检测外吐小体中miRNA-135a的含量。结果:在PC-12细胞培养基、血清和血浆标本外吐小体中检出了miRNA-135a。MCI和DAT患者血清、血浆外吐小体miRNA-135a水平显著低于健康对照组(P<0.05),但MCI患者血清、血浆外吐小体miRNA-135a水平与DAT患者相比无显著性差异(P>0.05)。MCI、DAT和健康对照三者的血清和血浆标本外吐小体miRNA-135a水平均无相关性(P>0.05)。结论:本研究证实了血液和脑脊液标本外吐小体中存在miRNA-135a,对将外吐小体miRNA作为AD诊疗潜在标志物提供了证据。

基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒调控线粒体自噬抑制肝星状细胞活化的机制

目的基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒通过调控线粒体自噬来抑制肝星状细胞活化与增殖的影响及其机制。方法HSC-T6分为空白组、H_(2)O_(2)组、miR-135a-NC组、miR-135a-mimic组、miR-135a-in-hibitor-NC+H 2 O2组、miR-135a-inhibitor+H_(2)O_(2)组、柔肝化纤颗粒含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清组、H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-NC组及H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-mimic组。分别采用Real-time PCR、Western Blot、ELISA及流式细胞术检测miR-135a、FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Smad2、p-Smad2、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、NF-κB p65、p-NF-κB p65、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TNF-α表达及线粒体膜电位、活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果给予H_(2)O_(2)及过表达miR-135a可显著上调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);下调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒及抑制miR-135a表达可显著下调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒同时过表达miR-135a可抑制柔肝化纤颗粒对HSC-T6的影响(P<0.01)。结论线粒体自噬可抑制HSC-T6活化,其机制与线粒体自噬抑制ROS生成,进而抑制TGF-β1/Smad2通路及炎症反应有关;柔肝化纤颗粒亦可抑制HSC-T6活化,其机制与柔肝化纤颗粒抑制miR-135a表达,活化FOXO1/PINK1通路,从而促进线粒体自噬有关。

miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系

目的 探讨miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系。方法 选取2021年1月至2022年12月商丘市第一人民医院收治的CHD患者86例为观察组,选取70名同期院内健康体检者作为对照组。对比两组血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;分析影响CHD冠脉病变的单因素,采用Logistic回归分析影响CHD冠脉病变的单因素、多因素;对比不同CHD冠脉病变类型的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;对比不同CHD冠脉病变支数的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平。结果 观察组miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素分析显示,患有高血压、糖尿病以及miRNA-223>1.5、miRNA-21>6.0、miRNA-27a>5.5均是影响CHD冠脉病变的独立危险因素(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:急性心肌梗死>不稳定型心绞痛>稳定型心绞痛,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:三支>双支>单支,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同冠脉病变CHD患者miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平不同,提示以上指标对判断CHD患者冠脉病变类型具有一定的临床价值。

miRNA-135在调控前列腺癌细胞增殖中的应用及机制

目的观察miRNA-135在调控激素非依赖性前列腺癌细胞增殖能力中的作用及其机制。方法利用微小核糖核酸(miRNA)基因芯片检测激素非依赖性前列腺癌和激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达差异。经过体外转染miRNA-135后对DU145和PC3细胞进行MTT检测,了解细胞的增殖情况。利用miRNA-135靶基因预测软件miRwalk和miRanda预测,初筛miRNA-135调控的基因和相关通路。结果 miRNA基因芯片结果显示,激素依赖性前列腺癌组织中miRNA-135的表达量高于激素非依赖性前列腺癌组织(P﹤0.05);miRNA-135可以抑制DU145和PC3细胞的生长,尤其在第48 h和第72 h以后(P﹤0.05);转染miRNA-135后,前列腺癌细胞株DU145和PC3中STAT6的表达水平较转染NC的细胞株明显下调。结论 miRNA-135能够抑制激素非依赖性前列腺细胞DU145和PC3的增殖能力,有望成为前列腺癌治疗的新靶标。

抑制miRNA-376c-3p对肾透明细胞癌生长的影响

目的探究miRNA-376c-3对肾透明细胞癌(ccRCC)中肿瘤细胞生长的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC中miRNA-376c-3p的表达。体外培养786-O细胞,随机分为对照组、miR-376c-3p inhibitor组(转染miR-376c-3p inhibitor)、miR-376c-3p mimics组(转染miR-376c-3p mimics)、阴性对照组(转染miR-376c-3p阴性对照),分组转染后以RT-PCR检测4组细胞miRNA-376c-3p表达;以Ki67免疫荧光染色、集落生成实验检测4组786-O细胞增殖;以TUNEL染色检测4组786-O细胞凋亡;以免疫荧光染色检测4组786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达并比较其Bax/Bcl-2。于右腋窝皮下接种上述4组786-O细胞建立其裸鼠移植瘤模型,3周后测定其肿瘤体积与质量;以Ki67免疫荧光染色、TUNEL染色分别检测4组裸鼠肿瘤细胞增殖与凋亡。结果与HKC细胞比较,ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN中miR-376c-3p表达降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-376c-3p inhibitor组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比升高(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比降低(P<0.05);miR-376c-3p mimics组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比降低(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比升高(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05)。结论抑制miRNA-376c-3p可削弱ccRCC细胞增殖及集落生成活性,促进其凋亡,并在裸鼠体内抑制其移植瘤生长。

超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC颈部淋巴结转移的临床价值

目的 研究超声及血清细胞角蛋白19(CK-19)、半乳糖凝集素3(Galectin-3)及微小核糖核酸-363(miRNA-363)联合诊断甲状腺微小乳头状癌(PTMC)颈部淋巴结转移(CLNM)的临床价值。方法 回顾性选取2021年7月至2023年6月在天津市环湖医院诊断的PTMC患者92例纳入研究组,选择同期本院收治的结节性微小甲状腺肿患者92例纳入对照组。观察两组病灶情况及超声特点;比较两组血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平,研究组是否发生CLNM患者病灶超声特点及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平。分析PTMC~CLNM超声特点与血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平的相关性。结果 研究组多枚病灶、病灶>0.5 mm、病灶纵横比≥1、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、病灶低回声、淋巴结肿大占比分别为70.65%、71.74%、82.61%、61.96%、72.83%、80.43%、84.78%、70.65%,均大于对照组(31.52%、52.17%、27.17%、25.00%、19.57%、15.22%、66.30%、22.83%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组血清CK-19、Galectin-3水平分别为(30.45±3.31)、(4.68±0.48)μg/L,均高于对照组[(7.05±0.73)、(1.72±0.19)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.89±0.30) fmol/L,低于对照组[(4.30±0.46) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、淋巴结肿大占比分别为90.91%、86.36%、95.45%、100.00%、90.91%,均大于未发生CLNM患者(64.29%、54.29%、0、25.00%、64.29%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者血清CK-19、Galectin-3水平(41.20±4.42)、(5.94±0.62)μg/L,均高于未发生CLNM患者[(24.36±2.71)、(3.25±0.34)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.14±0.23) fmol/L,低于未发生CLNM患者[(3.46±0.36) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、淋巴结肿大及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平均与CLNM呈正相关(P<0.05)。结论 超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC~CLNM具有较高的临床价值。

miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。