miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p在子痫前期发生中的作用及机制研究

目的探讨miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p在子痫前期发生中的作用及其机制。方法收集2018年7月—2019年8月海南省妇女儿童医学中心妇产科收治的子痫前期孕妇30例(观察组)和健康孕妇30例(对照组)的血清及胎盘组织,采用荧光定量PCR法检测2组血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达情况;采用免疫组织化学方法检测胎盘组织中E-钙黏蛋白(E-cad)的表达情况。结果观察组血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达明显高于对照组(t/P=198.035/0.000,216.658/0.000);观察组胎盘E-cad蛋白表达明显高于对照组(t=8.207,P=0.000)。经Pearson相关性分析显示,血清miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p表达与胎盘中E-cad表达均呈现正相关(r/P=0.531/0.001,0.543/0.004)。结论与健康孕妇相比,子痫前期孕妇血清中miRNA-26a-5p、miRNA-135a-5p相对表达量较高,可能通过调控胎盘E-cad的表达参与子痫前期发病。

miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的表达及其临床诊断效能

目的探讨miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的表达情况及其临床诊断效能。方法选取82例乳腺癌患者(乳腺癌组)、43例乳腺增生患者(乳腺增生组)和40例体检健康者(健康对照组)。分别采集3组受试者的血清样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-135a-5p的相对表达量,比较不同基线特征的乳腺癌患者血清miRNA-135a-5p相对表达量,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miRNA-135a-5p在乳腺癌中的诊断效能。结果乳腺癌组患者、乳腺增生组患者、健康对照组受试者的血清miRNA-135a-5p相对表达量分别为2.396(1.042,4.363)、0.934(0.399,1.916)、0.919(0.188,1.402);乳腺癌组患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量高于乳腺增生组和健康对照组(P﹤0.05)。不同年龄、绝经状况、病理类型、肿瘤直径的乳腺癌患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);TNM分期为Ⅲ期、分化程度为低分化的乳腺癌患者的血清miRNA-135a-5p相对表达量均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为中高分化的患者(P﹤0.05)。采用ROC曲线评价血清miRNA-135a-5p在乳腺癌中的诊断效能,其曲线下面积为0.846(95%CI:0.608~0.972),诊断的灵敏度为81.52%,特异度为70.35%。结论与乳腺增生患者、健康体检者比较,miRNA-135a-5p在乳腺癌患者血清中的相对表达量较高,同时血清miRNA-135a-5p对乳腺癌诊断的灵敏度和特异度均较高,其可能成为乳腺癌临床诊断的生物学标志物之一。

乳腺癌患者血清微小RNA-135b、微小RNA-148a-3p、微小RNA-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果相关性研究

目的:探讨乳腺癌患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平及其与新辅助化疗效果的相关性。方法:选取116例乳腺癌患者为病例组,均接受新辅助化疗,以21 d为1个周期,共化疗8个周期,根据化疗反应将患者分为耐药组(32例)和敏感组(84例),另选128例体检健康女性为对照组。比较病例组和对照组,耐药组和敏感组血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p表达水平。采用Pearson相关性分析血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p水平间的相关性。乳腺癌患者化疗效果的影响因素采用Logistic回归分析。血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p对乳腺癌患者化疗耐药的预测价值通过受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:与对照组比较,病例组miR-135b、miR-148a-3p水平升高,血清miR-186-5p水平降低(均P<0.05)。耐药组血清miR-135b、miR-148a-3p水平高于敏感组,血清miR-186-5p水平低于敏感组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-135b与miR-148a-3p呈正相关,与miR-186-5p呈负相关,血清miR-148a-3p与miR-186-5p呈负相关(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p是乳腺癌患者化疗效果的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-135b、miR-148a-3p、miR-186-5p联合预测化疗耐药的曲线下面积(AUC)高于三者单独预测AUC(均P<0.05)。结论:乳腺癌患者血清miR-135b、miR-148a-3p水平呈高表达,血清miR-186-5p水平呈低表达,三者水平变化与新辅助化疗效果有关,且三者联合检测对患者新辅助化疗耐药的预测价值更高。

miR-135a-5p通过调控CXCL12表达降低吗啡耐受

目的研究miR-135a-5p调控CXCL12对C57BL/6J小鼠吗啡耐受的影响。方法将64只小鼠随机分为:对照(NS)组、吗啡耐受(MT)组、CXCL12沉默(CXCL12-siRNA)组、沉默阴性对照(NC-siRNA)组、miR-135a-5p激动剂(miR-agomir)组、激动剂阴性对照(miR-NC)组、miR-135a-5p激动剂+CXCL12过表达(miR-agomir+LV-CXCL12)组、miR-135a-5p激动剂+过表达阴性对照(miR-agomir+LV-control)组。通过皮下注射给药建立吗啡镇痛耐受模型,采用温水甩尾法测定各组小鼠给药前和给药后的热甩尾时间(TL);造模结束后麻醉处死小鼠并取L4~L5脊髓组织,RT-qPCR检测miR-135a-5p及CXCL12 mRNA的表达,Western blot检测CXCL12蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-135a-5p、CXCL12的靶向关系。结果1)成功建立吗啡耐受小鼠模型,与NS组相比,MT组CXCL12 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-135a-5p显著下调(P<0.05)。2)沉默Cxcl12及过表达miR-135a-5p均提高吗啡耐受小鼠热痛阈值,显著减缓吗啡耐受的发生发展(P<0.05)。3)与miR-NC相比,miR-agomir组CXCL12 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05)。4)双荧光素酶报告基因实验显示miR-135a-5p靶向作用于Cxcl12。5)过表达CXCL12可逆转miR-135a-5p对吗啡耐受小鼠的热痛保护作用。结论miR-135a-5p通过靶向抑制CXCL12表达进而缓解吗啡耐受的形成。

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05),而转染miR-135a-5p mimics的作用与之相反;转染anti-miR-135a-5p可增强白山毛桃根提取物对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论 白山毛桃根提取物可通过降低miR-135a-5p表达使PI3K/Akt通路失活,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

血清miRNA-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1水平与脑胶质瘤患者术后复发的关系

目的检测脑胶质瘤患者的血清微小RNA(miRNA)-199a-5p、α-1-B-糖蛋白反义RNA1(A1BG-AS1)水平,并分析其与患者术后复发的关系。方法选取94例接受手术治疗的脑胶质瘤患者和84例健康体检者,分别作为研究组和对照组。术后所有脑胶质瘤患者均随访2年,依据是否复发分为复发组(n=71)和非复发组(n=23)。采用聚合酶链反应(PCR)检测血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平,比较研究组和对照组、复发组和非复发组的血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平。采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1单独及联合检测对脑胶质瘤患者术后复发的评估价值。结果研究组患者血清miRNA-199a-5p水平明显低于对照组,血清A1BG-AS1水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。复发组患者血清miRNA-199a-5p水平低于非复发组,血清A1BG-AS1水平高于非复发组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。血清miRNA-199a-5p水平与脑胶质瘤患者术后复发呈负相关(r=-0.382,P﹤0.05),血清A1BG-AS1水平与脑胶质瘤患者术后复发呈正相关(r=0.423,P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-199a-5p、A1BG-AS1联合检测评估脑胶质瘤患者术后复发的AUC和灵敏度均高于二者单独检测。结论脑胶质瘤患者血清miRNA-199a-5p水平降低,血清A1BG-AS1水平升高,且其表达水平与脑胶质瘤患者术后复发有关,联合检测对术后复发具有较好的评估价值。

血清miRNA-107、miR-18a-5p对胃癌和癌前病变的鉴别诊断价值

目的:探究在胃癌和癌前病变中血清miRNA-107、miR-18a-5p的鉴别诊断价值。方法:选取2020年6月至2023年6月我院收治的60例胃癌患者作为胃癌组,50例癌前病变患者作为癌前病变组,另选取在我院进行体检的健康人群30例作为健康对照组。比较三组受检者血清miRNA-107、miR-18a-5p水平,探讨其表达水平在临床诊断价值。结果:三组受检者性别、年龄无统计学差异(P>0.05);与健康对照组相比,胃癌组与癌前病变组血清miRNA-107、miR-18a-5p指标较高(P<0.05);与癌前病变组相比,胃癌组血清miRNA-107、miR-18a-5p指标较高(P<0.05)。本次研究中以病理结果为“金标准”发现,本次研究中联合miRNA-107与miR-18a-5p阳性例数高于单独血清检测阳性例数,统计学有差异性(P<0.05)。与血清miRNA-107、miR-18a-5p相比,二项联合灵敏度、特异度和准确度均较高,统计学有差异性(P<0.05)。结论:血清miRNA-107、miR-18a-5p在胃癌和癌前病变患者均存在高表达,说明其在胃癌和癌前病变中具有较高的鉴别诊断价值。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

半夏白术天麻汤对癫痫大鼠海马miRNA-146a-5p表达的影响及生物信息学分析

目的通过对癫痫大鼠海马miRNA-146a-5p进行靶基因预测及信号通路生物信息学分析,为探讨癫痫的可能发病机制及半夏白术天麻汤抗癫痫作用机制的研究奠定基础。方法采用氯化锂-匹鲁卡品诱导制作癫痫发作大鼠模型。将实验大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组20只。使用miRNA芯片技术分析检测大鼠海马神经元细胞miRNA表达谱。实时荧光定量PCR检测miRNA-146a-5p表达。利用miRDB对miRNA-146a-5p进行靶基因预测,并运用miRTar Base、DAVID进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析。结果行为学观察显示,中药组大鼠发作次数和级别均较模型组明显降低。miRNA芯片结果显示,模型组miRNA-146a-5p表达水平是正常组的2.107倍(P<0.05),经半夏白术天麻汤治疗后其表达量降至1.377倍(P<0.05)。RT-PCR结果与芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146a-5p靶基因预测结果共有140个靶基因,GO注释共得到14个GO生物学过程注释信息(P<0.05),9个细胞组分注释信息(P<0.05),11个分子功能注释信息(P<0.05)。KEGG生物通路富集显示,其140个靶基因显著富集于EB病毒感染信号通路,以及甲状腺激素信号通路上(P<0.05)。结论 miRNA-146a-5p与癫痫发生后的炎症反应密切相关,半夏白术天麻汤可能通过控制癫痫发生后的炎症反应发挥抗癫痫的效应。

miR-135a-5p抑制胆囊癌细胞增殖的研究

目的:探讨miR-135a-5p对胆囊癌的作用及其机制。方法:采用实时PCR检测miR-135a-5p和VLDLR在23对胆囊癌与癌旁组织的表达。采用miR-135a-5p模拟物转染胆囊癌细胞,通过细胞增殖(CCK-8)曲线、单克隆集落形成实验和细胞周期实验(流式细胞仪),检测miR-135a-5p对胆囊癌细胞增殖的影响。用Western印迹和Luciferase双荧光素酶报告系统验证和VLDLR受miR-135a-5p的调控。结果:在23对胆囊癌与癌旁组织中,癌组织的miR-135a-5p表达水平低于癌旁组织。体外实验证实miR-135a-5p通过G1期阻滞抑制胆囊癌细胞的增殖,且可通过作用于VLDLR mRNA降低其蛋白质水平。结论:miR-135a-5p抑制胆囊癌的增殖,可能是胆囊癌治疗靶点。

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P <0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P <0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P <0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P <0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P <0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。

宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义

目的探讨宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义。方法选取2016年6月-2018年7月在医院行宫颈癌手术切除的存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位>5cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各90例作为研究对象。采用免疫组化法检测宫颈癌组织中STAT3的表达,实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测miR-365、miR-135a-5p表达水平,分析miR-365、miR-135a-5p及STAT3与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。结果miR-365在宫颈癌组织中的相对表达量低于癌旁组织,miR-135a-5p的相对表达量、STAT3的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移、高分化、直径≥5cm的宫颈癌组织中miR-365相对表达量分别高于FIGO分期I~II期、未合并淋巴结转移、低分化、直径<5cm的宫颈癌组织(P<0.05);FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-135a-5p相对表达量分别高于FIGO分期I~II期、未合并淋巴结转移的癌组织(P<0.05)。宫颈癌组织中miR-135a-5p的表达与STAT3呈显著正相关(r=0.388,P<0.05)。90例宫颈癌患者2年总生存率为66.67%(60/90),ROC曲线分析显示miR-365、miR-135a-5p及STAT3的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.735、0.549。结论miR-365、miR-135a-5p的表达水平均与临床分期、淋巴结转移相关,miR-365还与肿瘤大小、分化程度有关,miR-135a-5p的表达与STAT3具有显著相关性;其中miR-365、miR-135a-5p对患者预后的预测价值较高。

血清外泌体miRNA-30a-5p在人脑胶质瘤诊断及预后评价中的作用

目的探讨胶质瘤病人血清外泌体miRNA-30a-5p的表达水平,及其在胶质瘤诊断及预后评估中的价值。方法选取2014年1月至2015年12月收治的胶质瘤60例为研究对象,另选取健康体检者40例为对照。RT-PCR检测血清外泌体miRNA-30a-5p表达水平。用受试者工作特性(ROC)曲线分析miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的价值。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用log-rank检验;多因素Cox比例风险回归模型分析预后危险因素。结果胶质瘤病人血清外泌体miRNA-30a-5p表达水平明显高于健康人(P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清外泌体miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的曲线下面积为0.901(95%CI0.812~0.986),最佳截断值为0.601,此时miRNA-30a-5p诊断胶质瘤的灵敏度和特异度分别为78.05%和93.55%。术后60例均得到有效随访,随访时间平均(28.39±3.25)个月。Kaplan-Meier分析结果显示,血清外泌体miRNA-30a-5p低表达病人总体生存时间高于高表达病人(P<0.001)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示血清外泌体miRNA-30a-5p高表达是胶质瘤病人不良预后的独立影响因素(P<0.05)。结论血清外泌体miRNA-30a-5p对胶质瘤的诊断和预后评价均有一定价值。

miRNA-199a-5p对骨肉瘤细胞增殖及自噬的影响

目的探讨mi RNA-199a-5p对人骨肉瘤细胞株U2OS增殖及自噬的影响及其可能的作用机制。方法实时定量PCR法检测32例骨肉瘤患者的病理组织标本及配对癌旁正常组织中mi RNA-199a-5p的表达水平。将mi RNA-199a-5p mimics转染入U2OS细胞,使其过表达mi RNA-199a-5p,采用CCK-8法和流式细胞仪检测细胞增殖及周期的变化;Western blot检测周期相关蛋白(cyclin D1、P27、p Rb)及自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ)表达水平。结果 mi RNA-199a-5p在骨肉瘤组织及癌细胞U2OS中低表达,且表达水平与肿块大小、远距转移、Enneking临床分期及病理分级密切相关。过表达mi RNA-199a-5p后,U2OS细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),同时cyclin D1、p Rb表达水平显著下降,而P27、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的表达水平显著增加(P<0.05)。结论 mi RNA-199a-5p能够抑制人骨肉瘤细胞株U2OS的增殖并激活细胞自噬;其作用机制可能与下调cyclin D1、上调P27、抑制p Rb蛋白的磷酸化、造成细胞周期G1/S阻滞有关。提示mi RNA-199a-5p可以作为骨肉瘤临床治疗的潜在作用位点。

男性不育患者精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平检测的价值

目的探讨精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p表达特征及其在男性不育患者精浆中变化和价值。方法选取2019年1月至2021年12月于江苏省中医院检验科留存的血清、晨尿、胸水、脑脊液和精浆标本各30例;进一步选取2010年至2019年江苏省中医院和南京大学医学院附属金陵医院冻存的非梗阻性无精子症患者精浆标本、弱精子症患者精浆标本及正常对照精浆标本各54例。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同体液、不育患者精浆和正常对照精浆中miR-135a-5p和miR-135b-5p表达。ROC曲线分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平区分男性不育患者及对照的ROC曲线下面积(AUC^(ROC));相关性分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平与精液参数的相关性。结果5种不同体液间miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=64.88,P<0.01和H=64.7,P<0.01),二者在血清和精浆中水平均最高,在尿液中水平均最低。无精子症组、弱精子症组及正常对照组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=32.14,P<0.01;H=21.37,P<0.01)。与正常对照组相比,无精子症组2种miRNA水平均显著降低(U=687,P<0.01;U=843,P<0.01);弱精子症组与正常对照组差异无统计学意义(P均>0.05);无精子症组与弱精子症组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平具有显著差异(U=635,P<0.01;U=779,P<0.01)。精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p区分无精子症与正常对照及弱精子症患者AUCROC分别为0.764(95%CI:0.675~0.854),0.711(95%CI:0.612~0.810)和0.782(95%CI:0.695~0.869),0.733(95%CI:0.637~0.829)。相关性分析结果显示,精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平与精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率和非前向运动精子百分率均呈正相关(P均<0.01)。结论miR-135a-5p和miR-135b-5p为精浆高表达miRNA,在无精子症患者中显著降低,二者与男性不育发生关系密切。

Circ_HECTD1调节miR-135a-5p/TP53INP1轴对OGD/R诱导的海马神经元损伤的影响

目的通过进行体外氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导海马神经元损伤,观察环状RNA含HECT结构域的E3泛素连接酶1(Circ_HECTD1)对HT22细胞增殖、凋亡的影响以及对微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(TP53INP1)轴的调控机制。方法常规培养HT22细胞,将细胞分为Con组、OGD/R组、si-NC组、si-Circ_HECTD1组、miR-NC组、miR-135a-5p组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-NC组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-135a-5p组。qRT-PCR法检测Circ_HECTD1、miR-135a-5p、TP53INP1 mRNA表达;MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验验证Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、TP53INP1蛋白表达。结果OGD/R诱导后HT22细胞中Circ_HECTD1与TP53INP1表达上调,miR-135a-5p表达下调,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达显著下降,凋亡率和Bax蛋白表达显著升高(均P<0.05)。沉默Circ_HECTD1表达能够显著上调OGD/R诱导的HT22细胞中miR-135a-5p表达,下调TP53INP1表达,提高细胞存活率和Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达(均P<0.05)。Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1之间均存在靶向关系。过表达miR-135a-5p能够显著下调TP53INP1表达,提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达(均P<0.05)。而抑制miR-135a-5p表达能够部分逆转沉默Circ_HECTD1对HT22细胞损伤的保护作用。结论沉默Circ_HECTD1可通过调节miR-135a-5p/TP53INP1轴,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,保护OGD/R诱导的海马神经元损伤。

猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定

本研究旨在鉴定猪miR-135a-5p靶向脂肪发育的相关基因。首先,利用生物信息学软件分析发现,结肠腺瘤性息肉病(APC)基因的3′非翻译区(3′UTR)具有两个与猪miR-135a-5p结合的潜在位点。其次,构建APC基因野生型(APC3′UTR)和突变型(APC3′UTR m1、APC3′UTR m2、APC3′UTR m3)3′UTR双荧光素酶载体,并分别将其与miR-135a-5p mimics、阴性对照(NC)共转染PK-15细胞后检测荧光活性。结果显示:miR-135a-5p mimics显著降低APC3′UTR和APC3′UTR m2载体的荧光活性(P<0.05),而APC3′UTR m1和APC3′UTR m3载体的荧光活性得到完全恢复,表明miR-135a-5p主要结合在预测的第一个位点。进一步的分析表明,miR-135a-5p抑制猪前体脂肪细胞内源APC基因的mRNA和蛋白质表达水平。研究结果证实,猪miR-135a-5p靶向APC基因,且调控其表达。本试验为深入研究猪miR-135a-5p的生物学功能及其调控脂肪形成的作用机制提供了基础。

沉默miR-135a-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响,重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组,对照组不做处理,过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体,沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体。使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量;四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平;Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平。结果 与对照组比较,过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高,宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);与对照组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P<0.05);与过表达组比较,沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低,凋亡能力明显升高(P<0.05)。结论 miR-135a-5p作为一种促癌RNA,临床可通过沉默miR-135a-5p表达量来改变宫颈癌的治疗效率,为治疗宫颈癌提供借鉴指导,其可在宫颈癌诊断效能中起到重要意义。

胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨胃癌组织中微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)、细胞分裂周期相关基因8(CDCA8)的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集胃癌组织、正常胃组织各82份。实时荧光定量PCR法检测组织中miR-135a-5p、CDCA8 mRNA表达,免疫组化法检测组织中CDCA8蛋白表达。术后随访,统计患者3年的生存情况。Pearson相关法分析胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达的关系;用Kaplan-Meier法分析miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者生存期、3年总生存率的关系;Cox回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果胃癌组织中miR-135a-5p表达低于正常胃组织(P<0.05),CDCA8 mRNA表达及蛋白阳性表达率均高于正常胃组织(P均<0.05)。基于ENCORI数据库预测miR-135a-5p与CDCA8的关系,结果显示,miR-135a-5p与CDCA8存在结合位点;胃癌组织中miR-135a-5p与CDCA8 mRNA表达呈负相关(r=-0.580,P<0.05)。胃癌组织中miR-135a-5p、CDCA8蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤最大径及分化程度无关(P均>0.05),与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P均<0.05)。随访3年,生存59例。miR-135a-5p低表达者生存时间及3年总生存率低于miR-135a-5p高表达者(P均<0.05);CDCA8蛋白阳性表达者生存时间及3年总生存率低于CDCA8蛋白阴性表达者(P均<0.05)。淋巴结转移、miR-135a-5p低表达及CDCA8蛋白阳性表达是胃癌患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论胃癌组织中miR-135a-5p低表达,CDCA8高表达;二者与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关,可作为评估胃癌预后的指标。

多囊卵巢综合征患者外周血miRNA-15a-5p升高及其影响因素

目的探讨初诊多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血白细胞中miRNA-15a-5p水平与PCOS关系。方法采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PCOS患者外周血白细胞中miRNA-15a-5p表达水平,采用Pearson或者Spearman rank方法分析miRNA-15a-5p与PCOS等一系列变量间的相关性。结果PCOS组患者中miRNA-15a-5p的表达明显高于健康对照组,纠正年龄以及体重指数(BMI)混杂因素后,PCOS组患者miRNA-15a-5p水平与腰围(waist circumference,WC)、胰岛素稳态模型(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、餐后2h血糖(2hblood glucose,2hBG)呈正相关,miRNA-15a-5p是PCOS独立影响因素。ROC曲线分析结果提示miRNA-15a-5p可作为PCOS潜在的诊断标志物。结论miRNA-15a-5p与PCOS相关,miRNA-15a-5p可能通过胰岛素抵抗参与PCOS的发生以及发展,miRNA-15a-5p可作为PCOS患者糖代谢紊乱早期阶段潜在的分子标志物。