CircRNA-100395基因通过启动子区甲基化调控miRNA-136-5p/Smad3轴促进前列腺癌细胞增殖及侵袭的机制研究

目的 检测前列腺癌细胞中环状核糖核酸(circular RNAs,CircRNA)100395基因启动子区甲基化状态及其表达水平,研究CircRNA-100395基因去甲基化对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制。方法 选择人正常前列腺上皮细胞(RWPE)和前列腺癌细胞系(LNCap,PC3和DU145)进行研究。采用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测CircRNA-100395基因启动子区甲基化状态。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测上述细胞中CircRNA-100395 mRNA表达水平。应用去甲基药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(AZA)处理LNCap细胞,检测AZA去甲基化处理前后细胞中CircRNA-100395表达水平。采用CCK-8和Transwell实验检测CircRNA-100395基因去甲基化前后LNCap细胞增殖和侵袭能力。构建CircRNA-100395野生型和突变型质粒,通过双荧光素酶报告分析CircRNA-10039与miRNA-136-5p之间的靶向关系;利用qRT-PCR检测CircRNA-10039与miRNA-136-5p表达水平,验证其调控关系。采用Westernblot法检测AZA去甲基化和miRNA-136-5p过表达对Smad3,p-Smad3蛋白表达的影响。结果 前列腺癌细胞中CircRNA-100395呈高甲基化状态;LNCap,PC3及DU145细胞中CircRNA-100395相对表达水平分别为0.39±0.08,0.65±0.14,0.62±0.10,显著低于RWPE(1.12±0.15)细胞中表达水平,差异有统计学意义(F=42.076,P<0.001)。经AZA去甲基化处理后,LNCap细胞中CircRNA-100395表达水平为1.02±0.17,较未处理LNCap细胞(0.42±0.05)明显升高,差异有统计学意义(t=5.808,P<0.01)。AZA去甲基化处理显著抑制了LNCap细胞的增殖能力(t=8.764~12.970,均P<0.001)、迁移能力(t=6.092,P<0.01)。miRNA-136-5可能是CircRNA-100395的下游靶基因。未经AZA处理前LNCap细胞中CircRNA-100395,miRNA-136-5p表达水平分别为0.39±0.08,0.87±0.15,AZA处理后两者表达水平分别为1.02±0.17,0.35±0.08,差异有统计学意义(t=5.808,5.298,均P<0.01)。AZA处理后Smad3和p-Smad3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(t=7.394,11.889,均P<0.01);miRNA-136-5p过表达抑制了Smad3和p-Smad3蛋白表达,差异有统计学意义(t=4.996,5.422,均P<0.01)。结论 CircRNA-100395基因启动子区的高甲基化状态可以抑制CircRNA-100395在前列腺癌细胞中的表达水平,去甲基化处理后CircRNA-100395表达恢复,并抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与CircRNA-100395靶向调控miRNA-136-5p/Smad3轴有关。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞侵袭数明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞TGF-β1、Smad3蛋白相对表达量明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-590-5p表达,可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭以及抑制细胞凋亡,可能与通过TGF-β1/Smad3通路调控有关。

百令胶囊上调miR-145-5p逆转TGF-β_(1)/Smad3通路机制初探

目的探讨百令胶囊(BLC)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺损伤的改善作用,以及对香烟烟雾提取物(CSE)作用下人支气管上皮细胞BEAS-2B生长的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组(A组,灌胃生理盐水2 mL),模型组(B组,灌胃生理盐水2 mL),BLC组(C组,灌胃BLC 5.5 mg/kg),miR-145-5p inhibitorNC组(D组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitorNC 6μL),miR-145-5p inhibitor组(E组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitor 6μL),各12只。以香烟烟雾吸入法复制大鼠COPD模型。建模成功后灌胃相应药物或生理盐水(每日1次),尾静脉注射相应药物(每周1次),连续8周。以0(空白对照),3%,5%,10%,20%CSE,以及加5%,10%,20%,40%的BLC药物血清(BLC-S)孵育细胞48 h。检测大鼠潮气量(TV)、呼气峰流量(PEF)、分钟通气量(MV)、用力肺活量(FVC)和第0.3秒用力呼气容积(FEV_(0.3));观察肺组织病理形态;免疫组化法检测Smad3表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定转化生长因子(TGF)-β_(1)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-145-5p mRNA表达水平。采用CCK-8法检测细胞活力。结果与B组比较,C组及D组大鼠TV,PEF,MV,FVC,FEV0.3均显著升高;与D组比较,E组大鼠上述指标均显著降低(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织病理形态显著改善,平均肺泡数显著增加,肺泡直径显著减小;与D组比较,E组大鼠肺组织病理形态未改善,且平均肺泡数显著减少,肺泡直径显著增长(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下的细胞活力显著增强(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与D组比较,E组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著升高,miR-145-5p mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下细胞Smad3和TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与5%CSE+20%BLC-S+inhibitor NC条件比较,同水平inhibitor条件下细胞Smad3及TGF-β_(1)表达水平均显著升高(P<0.05)。结论BLC在体内和体外均显示出对香烟诱导COPD的保护作用,其机制可能与上调miR-145-5p水平逆转香烟暴露激活的TGF-β_(1)/Smad3信号通路有关。

miR-24-3p、Smad5与骨质疏松性脊柱骨折患者PVP术后骨折愈合的相关性

目的探讨miR-24-3p、Smad5与骨质疏松性脊柱骨折患者经皮椎体成形术(percutaneous vertebro plasty,PVP)术后骨折愈合的相关性。方法选取2019年10月~2021年10月中国人民解放军陆军第七十二集团军医院收治的骨质疏松性脊柱骨折且接受PVP治疗的患者98例作为研究对象,并依照术后3个月骨折愈合情况将患者分为延迟组(n=26)和愈合组(n=72)。比较两组患者的miR-24-3p、Smad5 mRNA表达水平、骨密度(bone mineral density,BMD)情况以及骨折愈合相关指标,并进行相关性分析。结果两组患者术后3个月的miR-24-3p表达水平明显低于术后3天,且愈合组明显低于延迟组(P<0.05);两组患者术后3个月的Smad5 mRNA表达水平明显高于术后3天,且愈合组明显高于延迟组(P<0.05)。与愈合组比较,延迟组患者术后3个月腰椎BMD、股骨颈BMD、椎体前缘高度明显降低,而Cobb角变化、Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI)、视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分均明显升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者PVP术后3个月miR-24-3p与腰椎BMD、股骨颈BMD呈负相关,与Cobb角、ODI、VAS评分呈正相关(P<0.05);而Smad5 mRNA与腰椎BMD、股骨颈BMD、椎体前缘高度恢复率呈正相关,与Cobb角、ODI、VAS评分呈负相关(P<0.05)。miR-24-3p、Smad5mRNA ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.885、0.881。结论骨质疏松性脊柱骨折患者PVP术后发生骨折延迟愈合,可能与血清中miR-24-3p呈高表达、Smad5mRNA呈低表达有关。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

CircTRAF3调节miR-136-5p/NMT1轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨CircTRAF3调节miR-136-5p/NMT1轴对鼻咽癌(NPC)细胞恶性生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测人NPC细胞系5-8F、HONE-1、CNE-2、HNE-1以及鼻咽上皮细胞系NP69中CircTRAF3、miR-136-5p表达及NMT1蛋白表达;将HONE-1分为NC组、si-NC组、si-CircTRAF3组、si-CircTRAF3+inhibitor NC组、si-CircTRAF3+miR-136-5p inhibitor组。双荧光素酶报告基因实验检测CircTRAF3、miR-136-5p、NMT1关系;qRT-PCR检测各组HONE-1细胞中CircTRAF3、miR-136-5p表达;Western blot检测各组HONE-1细胞中NMT1蛋白表达;MTT法检测HONE-1细胞增殖;流式细胞术检测HONE-1细胞凋亡;Transwell检测HONE-1细胞侵袭、迁移能力;荷瘤小鼠模型验证CircTRAF3对HONE-1移植瘤的影响。结果CircTRAF3靶向调控miR-136-5p/NMT1轴;在HONE-1、CNE-2、HNE-1、5-8F中CircTRAF3、NMT1高表达,miR-136-5p低表达,且HONE-1差异最显著,因此,以HONE-1为研究对象。与NC组、si-NC组相比,si-CircTRAF3组CircTRAF3、NMT1水平、OD490值、迁移、侵袭细胞数量显著下调(P<0.05),miR-136-5p表达量、HONE-1细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与si-CircTRAF3组、si-CircTRAF3+inhibitor NC组相比较,si-CircTRAF3+miR-136-5p inhibitor组NMT1水平、OD490值、迁移、侵袭细胞数量显著上升(P<0.05),miR-136-5p表达量、HONE-1细胞凋亡率显著下降(P<0.05);NC组、si-NC组小鼠肿瘤细胞排列密集,边界清晰;与NC组、si-NC组相比,si-TRAF3组肿瘤重量降低(P<0.05),肿瘤细胞排列疏松,胞核固缩,细胞碎片增多;与si-TRAF3组、si-TRAF3+anti-NC组相比,si-TRAF3+anti-miR-136-5p组肿瘤重量增加(P<0.05)。结论沉默CircTRAF3可能通过上调miR-136-5p来抑制NMT1表达,进而抑制HONE-1细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡。

LncRNA XIST调节miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞增殖、迁移及成骨分化的影响

目的探讨长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)调控miR-545-3p/SMAD5轴对人成骨细胞(hOB)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法将hOB细胞分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-XIST组、pcDNA-XIST+miR-NC组、pcDNA-XIST+miR-545-3p mimic组;qRT-PCR检测细胞中XIST、miR-545-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞中SMAD5、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)蛋白及细胞核中p-SMAD5蛋白表达;茜素红S染色检测矿化结节形成;双荧光素酶报告基因实验分别验证XIST和miR-545-3p、miR-545-3p和SMAD5的关系。结果与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-XIST组hOB细胞中XIST表达、OD_(450)值(48、72 h)、划痕愈合率、SMAD5、ALP、Runx2、OCN蛋白及核p-SMAD5蛋白表达升高,miR-545-3p表达降低,矿化结节形成增多(P<0.05);上调miR-545-3p减弱了过表达XIST对hOB细胞增殖、迁移及成骨分化的促进作用;XIST靶向负调控miR-545-3p表达,miR-545-3p靶向调控SMAD5表达。结论过表达XIST可能通过海绵化miR-545-3p来上调SMAD5表达,进而促进hOB细胞增殖、迁移及成骨分化。

miRNA-136-5p对急性脊髓损伤模型大鼠炎症因子的作用

背景:miRNA-136-5p对脊髓损伤后病理改变、炎症反应和再生修复产生重要的调节作用。目的:观察miR NA-136-5p对大鼠脊髓损伤后血清细胞炎性因子、脊髓组织NF-κB蛋白的影响,探讨其作用分子机制。方法:SPF级雄性SD大鼠36只,购买于广西医科大学动物实验中心。制备慢病毒载体系统转染脊髓损伤大鼠。改良Allen’s法成功建立36只大鼠脊髓损伤模型,对大鼠进行Basso Beattie Brenham(BBB)评分,随机分成正常对照组、模型组(LV-ctrl+脊髓损伤组)、过表达组(脊髓损伤+LV-miRNA-136-5p)、抑制组(脊髓损伤+LV-sponge抑制组),每组9只。手术前7 d及手术当天过表达组、抑制组在损伤区连续注射慢病毒悬液,正常对照组、模型组注射等量生理盐水。各组在第1,3,7天分别处死3只大鼠,取血、脊髓组织。ELISA测定大鼠血清白细胞介素1β,白细胞介素6和干扰素α表达水平;Western Blot和双重免疫荧光检测NF-κB蛋白的表达。结果与结论:①术前BBB评分结果无显著差异(P> 0.05);脊髓损伤模型组大鼠活动表现为俯卧位缓慢行走,出现不同程度的尿潴留,双后肢的运动、感觉功能完全丧失,肌肉力量为0,出现脊髓休克;②与正常对照组相比,其他3组炎症因子水平均有升高(P <0.05),过表达组各种炎症因子水平升高更加明显;各组炎症因子水平分别按过表达组、模型组、抑制组顺序逐渐递减;③Western Blot、双重免疫荧光检测NF-κB蛋白表达水平,模型组、过表达组、抑制组均高于正常对照组(P <0.05),其中过表达组表达水平最高;④结果提示,miRNA-136-5p对急性脊髓损伤大鼠炎症因子、NF-κB可产生影响。

夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p对肺结核模型大鼠的干预效果及作用机制

目的研究夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p对肺结核模型大鼠的干预效果及作用机制。方法50只大鼠随机选取10只为正常组,其余40只建立肺结核模型,喂养4 w后每组随机抽样2只,取肺组织苏木素-伊红(HE)染色,发现肺组织可见大量炎性细胞浸润为建模成功。建模成功后将建模成功的38只大鼠分为模型组(14只)、低剂量组(12只)、高剂量组(12只)。低剂量组给予夏枯草硫酸多糖60 mg/kg,高剂量组给予夏枯草硫酸多糖100 mg/kg,均4 d/1次,共3次。正常组、模型组给予生理盐水。各组均连续灌胃2 w。对比分析各组miR-886-5p、氨基转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平及转化生长因子(TGF)-β1/Smad3通路蛋白表达量。结果相比与正常组,模型组、低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组miR-886-5p、ALT、AST、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,低剂量组、高剂量组TGF-β1、Smad3表达量显著降低(P<0.05)。结论肺结核模型大鼠通过夏枯草硫酸多糖下调miR-886-5p表达后可减轻肺结核组织病变,降低炎症反应,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad3通路有关。

血清miRNA-155-5p和miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值

目的利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p表达对脓毒症心肌损伤的诊断价值.方法前瞻性收集江苏大学附属医院收治的脓毒症患者,根据心脏超声分为对照组(n=48例)和心肌损伤组(n=40例).检测88例脓毒症患者血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达量,采用ROC曲线评价血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p对脓毒症心肌损伤的诊断价值.结果与对照组比较,脓毒症心肌损伤组患者的miRNA-155-5p[(2.02-±0.45)vs.(2.89-±0.37)]和miRNA-133a-3p[(1.93±0.37)vs.(2.42±0.22)]表达量均明显增高(P<0.05).ROC曲线分析提示,miRNA-155-5p(AUC=0.92,95%CI 0.86~0.97,P=0.028,敏感度97.50%,特异度72.92%)和miRNA-133a-3p(AUC=0.87,95%CI0.80~0.95,P=0.040,敏感度95.00%,特异度70.00%)对脓毒症患者心肌损伤有较高的诊断价值.结论血清miRNA-155-5p及miRNA-133a-3p的表达有助于诊断脓毒症心肌损伤.

MicroRNA-136-5p靶向STAT3调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响

目的研究microRNA-136-5p(miR-136-5p)靶向信号转导和转录激活子3(STAT3)调控对脊髓损伤大鼠炎症因子的影响。方法选取60只SD健康大鼠,随机分为对照组、脊髓损伤组、沉默组及过表达组,每组15只。将脊髓损伤组、沉默组、过表达组大鼠复制脊髓损伤模型,对照组在模型复制期间不做任何处理。无菌环境下将10μlmiR-136-5p慢病毒悬液(病毒滴度为108 TU/ml)注射于沉默组、过表达组大鼠脊髓损伤区。对照组、脊髓损伤组大鼠注射等量的生理盐水。使用BBB评分、联合行为评分法(CBS)对4组大鼠运动功能、脊髓神经功能进行评价,检测4组大鼠脊髓组织白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素-23(IL-23)表达水平及STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白相对表达量,以及IL-17 mRNA表达水平。结果沉默组大鼠BBB评分高于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05);沉默组大鼠CBS评分低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织IL-6、IL-21、IL-23表达水平低于脊髓损伤组和过表达组(P<0.05)。沉默组大鼠脊髓组织STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量、IL-17 mRNA表达水平均低于对照组、脊髓损伤组及过表达组(P<0.05)。结论脊髓损伤后miR-136-5p沉默可抑制STAT3的表达,进而抑制炎症因子的过度表达,最终抑制脊髓炎症反应。

miRNA-196a-5p调控Smad4表达对胃癌干细胞特性的影响

背景:miRNA-196a是新近发现的与乳腺癌、宫颈癌等多种肿瘤相关的microRNAs生物靶分子。研究证实,miRNA-196a-5p在胃癌细胞株和胃癌组织中均表达增加,然而,关于miRNA-196a-5p在胃癌干细胞中的功能和机制研究甚少。目的:分析miRNA-196a-5p在胃癌干细胞侵袭中的作用及机制。方法:流式细胞术分选胃癌BGC-823细胞株中的CD44^+细胞(即胃癌干细胞),qRT-PCR检测miRNA-196a-5p表达,Transwell实验检测细胞侵袭能力;参照Lipofectamine 2000转染试剂说明书的操作步骤,将miRNA-196a-5p inhibitor(即miRNA-196a-5p INH)转染至细胞中;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-196a-5p对Smad4基因的调控作用;Western blotting实验检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)和Smad4蛋白表达。结果与结论:(1)miRNA-196a-5p在胃癌干细胞中表达增加(P<0.05);(2)抑制miRNA-196a-5p表达后,能够降低胃癌干细胞的侵袭能力(P<0.05),增加E-cadherin蛋白表达(P<0.05),降低N-cadherin和Vimentin蛋白表达(P均<0.05),增加Smad4蛋白表达(P<0.05);(3)结果表明,miRNA-196a-5p通过调控Smad4表达在胃癌干细胞上皮-间质转化和侵袭过程中发挥重要作用,miRNA-196a-5p具有作为胃癌治疗靶标的潜能。

miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中中的表达及诊断价值研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中(AIS)中的表达及临床诊断价值。方法分别收集该院50例非脑卒中患者和50例AIS患者的血清标本作为对照组和病例组。采用实时荧光定量PCR法检测血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的表达水平,同时将血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的水平与研究对象的临床诊断价值进行对比分析。结果病例组血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。AIS患者血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p与美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分呈显著正相关(r=0.605、0.667、0.710,均P<0.05)。miRNA-17-5p、miRNA-103-3p、miRNA-144-3p及三者联合区分AIS患者与非AIS的受试者工作特征曲线下面积分别为0.846(95%CI:0.757~0.935,P<0.001)、0.866(95%CI:0.788~0.945,P<0.001)、0.935(95%CI:0.888~0.982,P<0.001)和0.976(95%CI:0.953~0.999,P=0.000);灵敏度和特异度分别为84%和92%、84%和88%、92%和86%、92%和94%。结论miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p是AIS诊断的潜在标志物。

miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及临床意义。方法:提取100例MM患者(病例组)和100名健康人群(对照组)血清RNA。实时荧光定量PCR测定血清miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p表达水平,分析其表达量与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法分析三种不同基因相对表达量与患者预后的关系。结果:病例组血清miRNA-720、miR-17-3p相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-215-5p相对表达量低于对照组(P<0.05);血清miR-17-3p相对表达量与ISS分期有统计学差异(P<0.05),血清miR-215-5p相对表达量与血红蛋白水平有统计学差异(P<0.05);血清miRNA-720高表达患者初次化疗有效率低于低表达患者(P<0.05),血清miR-215-5p低表达患者初次化疗有效率低于高表达患者(P<0.05);miRNA-720及miR-17-3p低表达和miR-215-5p高表达患者生存情况较好(P<0.05)。结论:miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p可能与MM密切相关,可作为MM诊断、治疗及预后的评估指标。

miRNA-191-5p与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1在脓毒症急性肺损伤中的相关性

目的:探究脓毒症急性肺损伤患者miRNA-191-5p表达量与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达量的相关性。方法:收集2017年1月~2019年5月收治的80例确诊脓毒症急性肺损伤患者空腹血清,提取RNA,逆转录后应用荧光定量PCR检测脓毒症急性肺损伤患者miRNA-191-5p、微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达水平,分析miRNA-191-5p表达量与微管相关蛋白1轻链3及Beclin-1表达量的相关性。结果:miRNA-191-5p高表达组和低表达组在年龄、性别、体质指数、心率、呼吸及体温方面比较,无显著差异(P>0.05);miRNA-191-5p高表达组微管相关蛋白1轻链3、Beclin-1表达量均高于miRNA-191-5p低表达组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:miRNA-191-5p可能与MAPLC3及Beclin-1在脓毒症急性肺损伤患者中的表达水平呈正相关。

长链非编码 RNA FGD5-AS1通过miR-542-3p/GTPBP4对肝癌细胞放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对肝癌细胞放射敏感性的影响及其分子机制.方法:运用qRT-PCR检测FGD5-AS1、miR-542-3p和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达情况;采用克隆形成实验和流式细胞仪分析FGD5-AS1和GTPBP4表达变化对肝癌细胞系放射敏感性的影响.利用基因沉默、qRT-PCR和Western blot检测FGD5-AS1对miR-542-3p及其靶基因GTPBP4表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析lncRNA FGD5-AS1对miR-542-3p/GTPBP4表达的调控作用.结果:FGD5-AS1和GTPBP4在肝癌组织和肝癌细胞系中表达上调,miR-542-3p在肝癌组织和肝癌细胞系中表达下调.沉默FGD5-AS1可增强肝癌细胞Huh7和PLC5的放射敏感性.沉默GTPBP4可以抑制Huh7和PLC5细胞的克隆形成,促进Huh7和PLC5细胞的凋亡,增强Huh7和PLC5细胞的放射敏感性.GTPBP4是miR-542-3p的下游靶基因,miR-542-3p可以负向调控GTPBP4的表达水平;而FGD5-AS1可负向调控miR-542-3p的表达,并正向调控GTPBP4的表达水平;FGD5-AS1对HCC细胞放射敏感性的影响又依赖于miR-542-3p.结论:FGD5-AS1作为miR-542-3p的“分子海绵”竞争性上调GTPBP4的表达进而影响肝癌细胞的放射敏感性.

MiR-671-5p通过负向调控SMAD抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-671-5p影响骨肉瘤的迁移侵袭的相关机制。方法通过NCBI在线数据库筛选骨肉瘤中差异表达的微小RNA(miRNA)、预测miRNA的靶蛋白并进行功能分析;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)用于检测转染过表达miR-671-5p质粒后con组和miR-671-5p组骨肉瘤细胞中miR-671-5p的表达情况;通过Transwell实验检测转染质粒后骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力;Western blot实验检测相关蛋白在骨肉瘤细胞中的表达情况;荧光素酶报告基因检测重组人SMAD家族成员3(SMAD3)的3’UTR中是否含有miR-671-5p的结合位点。结果MiR-671-5p在骨肉瘤组织和细胞中表达下调(P<0.05)。qRT-PCR证明转染过表达miR-671-5p质粒后,细胞转染成功(P<0.05)。过表达骨肉瘤细胞中的miR-671-5p后细胞的迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05),并且miR-671-5p能够抑制骨肉瘤细胞的上皮间质转化(EMT)(P<0.05);Western blot结果显示SMAD3在骨肉瘤细胞中表达上调(P<0.05);荧光素酶报告基因检测证实miR-671-5p与SMAD3的3’UTR之间存在结合位点(P<0.05);Western blot结果显示转染过表达SMAD3质粒后,SMAD3表达明显升高(P<0.05),而miR-671-5p能明显抑制SMAD3的表达(P<0.05);Transwell实验证明SMAD3能够促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),而miR-671-5p则能够逆转这种促进作用(P<0.05)。结论MiR-671-5p能够通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力。

miR-98-5p靶向调控STAT3抑制甲状腺癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探索微小RNA-98-5p(miR-98-5p)靶向信号转导子和转录激活子3(STAT3)对甲状腺瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:检测甲状腺瘤及瘤旁组织中miR-98-5p和STAT3的mRNA表达水平。将SW-579细胞分为对照组(Control组)、miR-98-5p阴性对照(NC)组、miR-98-5p模拟物(mimic)组和miR-98-5p mimic+STAT3过表达(pC-STAT3)组。对照组不处理,其余3组分别转染mimic NC、miR-98-5p mimic和miR-98-5p mimic+pC-STAT3。检测各组SW-579细胞中miR-98-5p和STAT3 mRNA表达水平。通过miRNA靶基因预测软件和双荧光素酶报告基因实验检测miR-98-5p对STAT3的靶向作用。检测各组细胞侵袭和迁移情况。Western blotting检测p-STAT3、STAT3、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白水平。结果:甲状腺瘤组织中miR-98-5p表达水平显著低于癌旁组织,STAT3mRNA表达水平显著高于癌旁组织(均P<0.01),且miR-98-5p和STAT3呈负相关关系(r=-0.862,P=0.0001)。miR-98-5p mimic组miR-98-5p表达量显著高于Control组,STAT3表达量显著低于Control组(均P<0.01)。靶基因预测软件发现STAT3可能是miR-98-5p的靶基因,共转染miR-98-5p mimics和STAT3 WT细胞的荧光素酶活性显著低于共转染mimic NC和STAT3 WT细胞(P<0.01)。与mimic NC组相比,miR-98-5p mimic组SW-579细胞侵袭率和迁移率均显著降低(P<0.01);与miR-98-5p mimic组相比,miR-98-5p mimic+pC-STAT3组SW-579细胞的侵袭率和迁移率均显著升高(P<0.01)。与mimic NC组相比,miR-98-5p mimic组p-STAT3、STAT3、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01);与miR-98-5p mimic组相比,miR-98-5p mimic+pC-STAT3组p-STAT3、STAT3、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:miR-98-5p靶向抑制STAT3调控细胞侵袭及上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,抑制甲状腺癌细胞SW-579细胞侵袭及迁移能力。