五虎汤通过调控miRNA-146a改善幼龄哮喘大鼠气道重塑

目的探讨五虎汤通过调控miRNA-146a对幼龄哮喘大鼠气道重塑的影响。方法SPF级幼龄雌性SD大鼠80只,先随机将20只作为空白组,60只作为造模组。造模组采用卵清白蛋白联合氢氧化铝五点注射法致敏以及卵清白蛋白雾化激发哮喘。两组各随机抽取10只检测气道反应性,评判造模是否成功。造模成功后,剩下的10只空白组大鼠作为正常组,50只造模组大鼠随机分为5组(模型组、五虎汤低剂量组、五虎汤中剂量组、五虎汤高剂量组、地塞米松组),每组10只。五虎汤高、中、低剂量组分别灌胃五虎汤4.428、2.214、1.107 g/kg,地塞米松组灌胃地塞米松0.075 mg/kg,正常组及模型组灌胃等容积生理盐水,1次/d,连续2周后处理大鼠。气道反应性检测大鼠气道阻力;HE、PAS及Masson染色法分别观察大鼠肺组织气道炎症细胞浸润、气道黏液储备和气道胶原沉积情况;Western blot法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1,TIMP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平;qPCR法检测miRNA-146a及MMP-9、TIMP-1 mRNA含量,并对miRNA-146a与MMP-9、TIMP-1 mRNA进行相关性分析。结果与空白组比较,造模组气道阻力显著升高(P<0.01),提示造模成功。与正常组比较,模型组大鼠肺组织周围炎性细胞浸润,上皮细胞化生,炎性黏液较多,气道壁增厚,气道胶原广泛沉积;肺组织α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,五虎汤高、中、低剂量组及地塞米松组气道阻力明显降低(P<0.01),肺组织病理情况明显缓解,且五虎汤高剂量组及地塞米松组改善更加明显;α-SMA、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均显著下降(P<0.01)。五虎汤中、低剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤低剂量组TIMP-1显著高于地塞米松组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高、中剂量组α-SMA、TIMP-1、miRNA-146a、MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA及五虎汤高剂量组TGF-β1低于五虎汤低剂量组(P<0.05、P<0.01);五虎汤高剂量组α-SMA、TGF-β1、miRNA-146a、TIMP-1 mRNA低于五虎汤中剂量组(P<0.05、P<0.01)。Pearson相关性分析显示,大鼠肺组织miRNA-146a与MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA均有极强正相关性(r分别为0.956、0.973,P<0.01)。结论五虎汤能够有效改善哮喘大鼠气道重塑,这可能与五虎汤抑制miRNA-146a表达,降低MMP-9、TIMP-1及其mRNA,以及减少α-SMA、TGF-β1相关。

基于miRNA-146a研究体外冲击波穴位刺激通过miRNA信号系统对KOA关节软骨的调节机制

目的:采用体外冲击波穴位刺激作为干预措施治疗兔模型膝骨关节炎(KOA),探讨体外冲击波穴位刺激通过miRNA信号系统对KOA关节软骨的调节机制。方法:将新西兰大白兔30只随机分为正常组和造模组,采用石膏连续固定的方法造模,造模完成后造模组膝骨关节炎兔随机分为模型组,低、中、高能量冲击波穴位刺激组以及普通针刺组(穴位选取血海、梁丘、足三里、内膝眼、外膝眼、阴陵泉、阳陵泉),分别给与相应的治疗后对兔关节面大体情况进行观察及等级评分、ELISA检测血清及关节液中IL-1β和RANTES、RT-PCR检测关节软骨组织miRNA-146a的表达量,对观察及检测的结果进行数据统计,并得出相应的结论。结果:高能量冲击波穴位刺激干预后模型组兔血清及关节液IL-1β、RANTES含量明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组兔关节软骨组织miRNA-146a的表达量显著降低(P<0.01),经过冲击波穴位刺激或针刺干预后表达上升(P<0.05),其中以高能量冲击波穴位刺激组上升最为显著(P<0.01),较普通针刺组上升更为显著(P<0.05)。结论:冲击波穴位刺激可有效改善KOA模型兔的关节面的形态、降低血清及关节液中IL-1β和RANTES含量;KOA模型兔的关节软骨组织中miRNA-146a表达降低,通过冲击波穴位刺激治疗后可提高KOA模型兔关节软骨miRNA-146a的表达量。

肺结核患儿外周血单个核细胞miRNA-31、miRNA-146a表达水平检测价值

目的分析肺结核(PTB)患儿外周血单个核细胞(PBMC)miRNA-31、miRNA-146a表达水平,以及上述指标与细胞免疫和炎症因子的相关性。方法选取该院2019年2月至2022年2月收治的75例PTB患儿作为观察组,另选取同期健康体检儿童70例作为对照组。比较两组PBMC miRNA-31、miRNA-146a表达水平,外周血T淋巴细胞亚群、血清炎症因子水平。采用Pearson相关分析PBMC miRNA-31、miRNA-146a表达水平与T淋巴细胞亚群、炎症因子的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-31、miRNA-146a联合检测诊断儿童PTB的效能。结果观察组PBMC miRNA-31、miRNA-146a表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值低于对照组,而CD8^(+)比例高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-8水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析发现,PTB患儿PBMC miRNA-31、miRNA-146a表达水平与CD3^(+)、CD4^(+)比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值均呈负相关(P<0.05),与CD8^(+)比例及IL-2、IL-6、IL-8水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,PBMC miRNA-31、miRNA-146a表达水平联合检测诊断儿童PTB的曲线下面积均大于单项检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论儿童PTB PBMC miRNA-31、miRNA-146a均存在异常高表达,与细胞免疫、炎症因子均密切相关。

前列腺小体miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路在EAP大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的研究

背景目前对慢性前列腺炎(CP)的治疗未达到预期的疗效,亟需寻找新的治疗药物,本课题组前期研究发现大火草〔Anemone tomentosa(Maxim.)Péi〕对CP有较好的疗效,但具体作用机制还有待进一步研究。目的探讨前列腺小体源性微小RNA-146a(miRNA-146a)调控Toll样受体4(TLR-4)/核转录因子κB(NF-κB)通路在自身免疫性前列腺炎(EAP)大鼠慢性炎症中的作用及大火草干预的可能机制。方法2021年12月—2022年6月,将42只Wistar大鼠采用随机数字表法分正常组、模型组、大火草低剂量组、大火草中剂量组、大火草高剂量组、miRNA-146a激动剂(mimics)组、miRNA-146a抑制剂(inhibitor)组,每组6只。药物干预后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA,采用蛋白质印迹法检测TLR-4、细胞内抑制性蛋白κB(IκB)、磷酸化细胞内抑制性蛋白κB(p-IκB)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6),酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测炎症因子。结果与正常组比较,各组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均下调(P<0.01)。与模型组比较,大火草中、高剂量组,miRNA-146a mimics组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达均上调(P<0.01);miRNA-146a inhibitor组前列腺小体miRNA-146a-5p mRNA表达下调(P<0.01)。大火草和miRNA-146a mimics可以显著降低前列腺组织TLR-4、p-IκBα、TRAF6蛋白表达(P<0.01);促进前列腺组织IκBα蛋白表达上调(P<0.01);降低大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、干扰素γ(IFN-γ)水平(P<0.05)。大火草和miRNA-146a mimics可以减轻前列腺组织炎症细胞浸润,改善前列腺组织病理损伤。结论前列腺小体源性miRNA-146a可以调节TLR-4/NF-κB通路参与EAP大鼠前列腺局部病理变化。大火草抗EAP大鼠慢性炎症的作用机制可能与其调控前列腺小体源性miRNA-146a/TLR-4/NF-κB通路有关。

半夏白术天麻汤对癫痫大鼠海马miRNA-146a-5p表达的影响及生物信息学分析

目的通过对癫痫大鼠海马miRNA-146a-5p进行靶基因预测及信号通路生物信息学分析,为探讨癫痫的可能发病机制及半夏白术天麻汤抗癫痫作用机制的研究奠定基础。方法采用氯化锂-匹鲁卡品诱导制作癫痫发作大鼠模型。将实验大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组20只。使用miRNA芯片技术分析检测大鼠海马神经元细胞miRNA表达谱。实时荧光定量PCR检测miRNA-146a-5p表达。利用miRDB对miRNA-146a-5p进行靶基因预测,并运用miRTar Base、DAVID进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析。结果行为学观察显示,中药组大鼠发作次数和级别均较模型组明显降低。miRNA芯片结果显示,模型组miRNA-146a-5p表达水平是正常组的2.107倍(P<0.05),经半夏白术天麻汤治疗后其表达量降至1.377倍(P<0.05)。RT-PCR结果与芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA-146a-5p靶基因预测结果共有140个靶基因,GO注释共得到14个GO生物学过程注释信息(P<0.05),9个细胞组分注释信息(P<0.05),11个分子功能注释信息(P<0.05)。KEGG生物通路富集显示,其140个靶基因显著富集于EB病毒感染信号通路,以及甲状腺激素信号通路上(P<0.05)。结论 miRNA-146a-5p与癫痫发生后的炎症反应密切相关,半夏白术天麻汤可能通过控制癫痫发生后的炎症反应发挥抗癫痫的效应。

miRNA-146a在脓毒症引起的急性肺损伤中的作用机制

目的探讨miRNA-146a在脓毒症(sepsis)引起的急性肺损伤(ALI)中的表达及其对炎症的干预作用。方法选取脓毒症引起的ALI患者及健康志愿者,采用q RT-PCR检测其外周血miRNA-146a的相对表达量。建立脓毒症引起的ALI小鼠模型,注入miRNA-146a模拟物,miRNA-146a对照剂和miRNA-146a抑制剂进行干预。24h后测定小鼠肺组织miRNA-146a及外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、环氧化酶2(COX-2)等炎性因子的m RNA表达水平。结果脓毒症引起的ALI患者外周血miRNA-146a表达量明显高于健康对照组(P<0.05)。动物实验发现,与miRNA-146对照组比较,miRNA-146a组小鼠TNF-α、IL-1β和COX-2表达量均明显降低,而miRNA-146a抑制组小鼠TNF-α、IL-1β和COX-2表达量明显上升(P<0.05)。miRNA-146a+COX-2共同抑制组肺部TNF-α、IL-1β表达量明显低于miRNA-146a单独抑制组(P<0.05)。结论 miRNA-146a可通过靶向COX-2有效降低脓毒症引起的炎性反应。

miRNA-146a在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义

目的探讨miRNA-146a在鼻咽炎症和癌症病变组织中的表达及意义。方法 SYBR Green实时定量PCR方法定量检测miRNA-146a在13例鼻咽黏膜慢性炎症患者和16例鼻咽癌患者病变组织中的表达,比较miR-NA-146a表达在鼻咽炎症与癌症组织中以及鼻咽癌不同临床病理特征的组间差异。结果鼻咽癌组织中miRNA-146a表达水平明显高于鼻咽黏膜慢性炎症组织(P<0.01);miRNA-146a在鼻咽癌淋巴结转移组中的表达水平高于无淋巴结转移组(P<0.05);miRNA-146a表达水平在不同年龄及临床分期比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论人鼻咽癌组织中miRNA-146a呈高表达,可能促进鼻咽癌淋巴道转移。

从miRNA-146a调控TLR-4/NF-κB通路探讨升降散保护大鼠脓毒症心肌机制的研究

目的 从miRNA-146a调控Toll样受体4（TLR-4）/活化的核因子-κB（NF-κB）通路探讨升降散保护大鼠脓毒症心肌的机制.方法 采取盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型,miRNA-146a抑制剂组于手术前24h鼠尾静脉内注射miRNA-146a antagomir;miRNA-146a激动剂组于手术前24 h尾静脉内注射miRNA-146a agomir;升降散组于术后12 h用2.0g/kg剂量升降散灌胃.采用光镜研究心脏超微形态;观察24h、48 h、72 h各组大鼠肌钙蛋白I （cTnI）、脑钠肽前体（BNP）、TLR-4、NF-κB、miRNA-146a、TNF-α mRNA的表达情况.结果 模型组大鼠心肌miRNA-146a表达升高,48 h至峰值,随后降落,与空白组比较差异有统计学意义（P ＜0.001）.抑制剂组心肌miRNA-146a表达较模型组表达各时间节点均下降（P＜0.001）.激动剂组心肌miRNA-146a表达较模型组表达24 h、72 h上升（P＜0.001）.升降散组较模型组miRNA-146a表达48 h下降（P＜0.001）,72 h上升（P ＜0.001）.模型组大鼠TLR-4表达逐渐升高,72 h达到峰值,与空白组比较,3个时间点均存在统计学差异（P＜0.001）.与模型组比较,抑制剂组大鼠TLR-4水平各时间节点均有所上升（P ＜0.001）,激动剂组大鼠TLR-4水平各时间节点均有所下降（P ＜0.001）,升降散组大鼠TLR-4水平各时间节点均有所下降（P＜0.001）.模型组大鼠NF-κB表达逐渐升高,72 h达到峰值,与空白组比较,3个时间节点均差异有统计学意义（P＜0.001）.与模型组比较,抑制剂组大鼠NF-κB水平各时间节点均有所升高（P ＜0.001）,激动剂组大鼠NF-κB水平各时间节点均有所下降（P＜0.001）,升降散组大鼠NF-κB水平各时间节点均有所降低（P ＜0.001）.结论 miRNA-146a通过负反馈机制调控TLR-4/NF-κB信号通路及下游炎症因子TNF-α,是脓毒症心肌抑制（sepsis myocardial dysfunction,SMD）发病的重要信号转导机制和关键调节通路.升降散通过miRNA-146a调控TLR-4/NF-κB信号通路中某些效应分子,可以起到保护大鼠脓毒症心肌的作用.

MiRNA-145与miRNA-146a在缺血性脑卒中的表达研究

目的研究miRNA-145和miRNA-146a在缺血性脑卒中患者血清中的表达变化,探讨其与缺血性脑卒中的发生及发展的相关性。方法根据实验要求,选择2017年1月-2017年6月在我科住院治疗的缺血性脑卒中患者100例作为病例组,同期来我院门诊体检的40岁以上非缺血性脑卒中病史的健康体检者50例作为对照组。血液学检测的收集包括血清葡萄糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(HCY)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等项目在内的研究资料。实验方法是荧光定量多聚核苷酸链式反应(实时荧光定量PCR)技术,对miRNA-145和miRNA-146a在病例组和对照组血清中的表达水平进行检测。收集好全部数据后进行统计分析。结果 (1)病例组血清中miRNA-145的表达水平要明显高于对照组血清中miRNA-145的表达水平(P <0. 05);(2)病例组血清中miRNA-146a的表达水平要明显低于对照组血清中miRNA-146a的表达水平(P> 0. 05)。结论 (1)缺血性脑卒中患者血清中miRNA-145的表达水平升高;(2)缺血性脑卒中患者血清中miRNA-146a的表达水平降低。

外周血miRNA-146a、miRNA-26a在重症急性胰腺炎预后中的价值探讨

目的 探究外周血微小RNA-146a(miR-146a)、微小RNA-26a(miR-26a)在重症急性胰腺炎预后中的价值。方法 选择器工业五二一医院2019年4月—2021年3月收治的119例重症急性胰腺炎患者作为研究对象,根据临床病历资料收集患者的临床一般资料,于患者入院24 h内对患者外周血miRNA-146a、miRNA-26a相对表达量及血常规指标进行检测。根据患者治疗28 d内病情转归情况将其分为生存组和死亡组。通过Logistic多因素回归分析影响重症急性胰腺炎患者预后的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积评估外周血miR-146a及miR-26a水平对患者临床预后的预测价值。结果 死亡组胰周感染所占比例及APACHEⅡ评分、miR-146a相对表达量、miR-26a相对表达量均高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示,胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高均为重症急性胰腺炎患者预后死亡的危险因素(P<0.05)。ROC分析显示,外周血miR-146a、miR-26a水平单一及联合对重症急性胰腺炎患者预后死亡的ROC预测的曲线下面积(AUC)分别为0.793、0.780、0.883,且外周血miR-146a、miR-26a水平对重症急性胰腺炎患者死亡预后的单一预测效能低于两者联合(P<0.05)。结论 合并胰周感染、APACHEⅡ评分、外周血miR-146a及miR-26a相对表达水平偏高的重症急性胰腺患者死亡率较高,外周血miR-146a、miR-26a相对表达水平均可有效预测重症急性胰腺炎患者的死亡预后。

Ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎miRNA-146a调控DNMTs中的作用及温化蠲痹方干预作用研究

目的研究ras-MAPKs信号通路在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)对DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)调控中的作用,以及温化蠲痹方干预作用。方法提取RA患者、健康受试者PBMCs进行体外培养研究。将18例健康受试者随机分为6组,每组均为3例,分别为正常组,正常转染miRNA-146a组(转染组),正常转染miRNA-146a加中药组(中药1组),正常转染miRNA-146a加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断1组)、SB203580组(阻断2组)、SP600125组(阻断3组)。将符合中医辨证为寒热错杂、痰瘀痹阻型的活动期RA患者15例,随机分为5组,每组3例,分别为RA组,RA加中药组(中药2组),RA加MAPKs特异性阻断剂PD98059组(阻断4组)、SB203580组(阻断5组)、SP600125组(阻断6组)。对受试者PBMCs进行体外培养、转染、加通路阻断剂以及含药血清,运用实时定量PCR检测PBMC中miRNA-146a、DNMTs、RASGRP1的表达。结果阻断1~6组miRNA-146a表达降低,DNMTs表达升高,RASGRP1表达降低(均P<0.05)。中药1、2组RSAGRP1表达降低(均P<0.05)。结论ras-MAPKs信号通路可能参与了RA患者miRNA-146a对DNMTs的调控。中药温化蠲痹方可能通过下调RA患者RASGRP1表达作用于ras-MAPKs信号通路,影响miRNA-146a对DNMTs进行调控,达到治疗RA作用。

miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223在类风湿关节炎患者外周血中检测的临床意义

目的研究miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达水平与健康人群的差异,探讨这3项指标的临床意义。方法收集68例RA确诊患者(RA组)及20例健康志愿者(健康对照组)的空腹静脉血,采用实时荧光定量PCR技术检测研究对象外周血中miRNA-16、miRNA-146a、miR-223的相对表达水平;比较RA患者与健康志愿者外周血中miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223的相对表达水平差异,Pearson分析RA患者血清这3项指标与类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、DAS28评分的相关性;构建miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223的ROC曲线并计算曲线下面积(AUC),进而比较各指标单独及联合检测的灵敏度和特异度。结果 RA组患者外周血中miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223的相对表达水平显著高于健康对照组(P<0.05)。根据DAS28评分,进一步将RA患者分为缓解组和活动组,发现活动组患者外周血中miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223相对表达水平高于缓解组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-16的表达水平与CRP、DAS28呈正相关(r=0.470、0.446,P<0.05),miRNA-146a的表达水平与CRP、DAS28呈正相关(r=0.408、0.407,P<0.05)。miRNA-223的表达水平与RF、CRP呈正相关(r=0.527、0.518,P<0.05)。miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223的AUC分别为0.63、0.75、0.89,灵敏度分别为68.70%、85.24%、87.63%,特异度分别为55.39%、63.57%、90.35%。三者联合使用作为RA标志物作ROC曲线,得到AUC为0.91,灵敏度为89.34%,特异度为91.56%。结论 miRNA-16、miRNA-146a、miRNA-223与RA发生、发展存在密切关系,联合检测具有更高的灵敏度和特异度,适用于临床早期诊断RA。

加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织miRNA-146a表达的影响

目的:检测加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织的病理和miRNA-146a表达的影响。方法:加味四逆散治疗二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠后,通过HE染色观察治疗前后肝组织病理变化,并通过RT-PCR技术检测miRNA-146a的表达。结果:与模型组比较,加味四逆散治疗组大鼠肝组织汇管区可见轻度炎症,纤维结缔组织增生程度较治疗前减轻,有显著性差异(P≤0.05)。治疗后的大鼠肝组织中miRNA-146a的表达明显升高。结论:加味四逆散科通过调节miRNA-146a的表达实现对肝纤维化的逆转。

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P <0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P <0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P <0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P <0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P <0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。

高通量连续性血液滤过技术对脓毒症患者外周血单个核细胞miRNA-146a表达的影响

目的前瞻性观察高通量连续性血液滤过（HVHF）治疗对严重脓毒症患者免疫功能及其外周血单个核细胞中miRNA-146a表达的影响。方法选择严重脓毒症患者30例，分为HVHF组及对照组。①在两组治疗过程的0、6、12、24、48h时相点，分离外周血单个核细胞，提取总RNA，荧光定量PCR法检测miRNA-146a表达量的变化；②两组患者治疗24h后分离出外周血单个核细胞于体外培养，以LPS刺激，在4、8、12、24、48h时相点检测单个核细胞中miRNA-146a表达量的变化；ELISA法检测单个核细胞培养液中TNF-仅、IL-6、IL-10水平。结果①两组患者miRNA-146a表达量较治疗前均有所下调，但HVHF组较对照组下调明显（P〈0．05）；②HVHF组孵育的细胞在LPS刺激下各个时相TNF-OL、IL-6的分泌水平均明显高于对照组（P〈0．05）；HVHF组TNF—ol、IL-6在12h分泌达高峰，对照组在8h即达高峰；两组细胞IL-10分泌水平均持续升高，两组间各时相点IL-10分泌水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）；③HVHF组孵育的细胞在LPS刺激下miRNA-146a表达量较孵育前有所升高，在12h升高最明显（P〈0．05），对照组在4、8h时miRNA-146a表达都处于高水平状态，明显高于同时相的HVHF组（P〈0．05）。结论HVHF通过大量清除脓毒症患者血循环中的炎症因子及促炎介质，从而下调部分miRNA-146a的表达水平，减轻严重脓毒症患者外周血单个核细胞的免疫抑制状态，使部分免疫功能得到恢复，可能是HVHF参与机体免疫内稳状态重建的作用机制之-。

miRNA-146a与脓毒症

MicroRNAs通过作用于基因转录后水平，广泛参与和调控机体固有免疫与适应性免疫的各个环节。特别是miRNA-146a，不仅对类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）和系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus，SLE）等免疫系统疾病有调节作用，而且参与了脓毒症的发生、发展及其炎症反应的负反馈调节过程。本文就脓毒症的发病机制及miRNA～146a对脓毒症可能的调控作用及其作为靶点对脓毒症治疗的前景做一综述。

miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎新生大鼠中的作用

目的探讨miRNA-146a调控STAT3信号通路在坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠中的作用。方法选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是对照组(A组)、模型组(B组)、阴性对照组(C组)、miRNA-146a agomir组(D组)。采用HE染色,光镜下观察各组大鼠肠组织病理形态学改变;ELISA检测各组大鼠回盲部肠组织中TNF-α、IL-1β表达水平;qRT-PCR检测各组大鼠回盲部肠组织中miRNA-146a、STAT3、IL-6;Western blot检测各组大鼠回盲部肠组织中STAT3、p-STAT3、IL-6。结果光镜结果显示,A组肠组织结构清晰,上皮完整,腺体排列规则、黏膜层及黏膜下层无充血水肿且无炎症细胞浸润;B组和C组肠组织坏死严重,腺体排列紊乱,部分绒毛坏死、脱落,黏膜下层重度水肿,存在大量炎症细胞浸润;D组肠黏膜及黏膜下层可见轻度水肿,有少量炎症细胞浸润,肠组织结构坏死情况减轻,腺体排列稍紊乱。与A组相比,B组、C组大鼠肠组织miRNA-146a表达水平降低而D组miRNA-146a表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);B组、C组大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);过表达miRNA-146a agomir后,大鼠肠组织TNF-α、IL-1β含量、STAT3、IL-6 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论NEC大鼠IL-6/STAT3信号通路激活,炎症水平升高,肠组织损伤严重;过表达miRNA-146a可减轻NEC炎症水平,改善肠组织损伤情况,其机制可能与miRNA-146a抑制IL-6/STAT3信号通路活化有关。

miRNA-146a基因多态性与长江以南女性汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的病例对照研究

目的研究miRNA-146a（microRNA-146a）基因rs2910164、rs57095329、rs6864584多态性与中国长江以南汉族女性人群系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）易感性间的关系。方法采用病例-对照研究设计纳入病例和对照各179例,应用限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）等分子生物学技术分型,利用单因素及多因素Logistic回归,在多个遗传模型（加性、隐性、显性）下,研究miRNA-146a基因多态性与SLE的关系,用χ2检验分析基因多态与临床表型的关系。结果 miRNA-146a基因rs2910164等位基因G相对于C可能增加SLE的患病风险（P=0.003,OR=1.572,95%CI：1.169~2.114）;多因素Logistic回归提示rs57095329在3个模型下均与SLE相关（加性：P=0.007,OR=1.849,95%CI：1.182~2.893;显性：P=0.031,OR=3.478,95%CI：1.121~10.792,隐性：P=0.010,OR=2.081,95%CI：1.189~3.642）,且相对于AA基因型来说,AG、GG基因型的个体患SLE的风险增加。单纯病例设计中,表型研究提示,rs2910164等位基因G相对于C增加肾脏损害风险及抗SM异常;rs57095329位点A相对于G等位基因降低肾脏、关节、神经系统损害风险;而AA基因型携带者抗RNP异常风险下降。结论 miRNA-146a基因rs2910164位点与rs57095329位点多态在长江以南汉族女性人群中与SLE易感性存在相关性,且与临床表型（如肾损伤）和免疫学指标（抗RNP）存在相关,但是rs6864584位点多态性可能与SLE的易感性无关。

miRNA-146a rs2910164G/C基因多态性与晚期胃癌铂类化疗疗效相关研究

目的探讨mi RNA-146a rs2910164 G/C基因多态性与晚期胃癌铂类化疗敏感性的关系。方法收集我院经组织学或细胞学证实的无法切除的局部晚期及转移性胃癌患者69例。所有入组患者治疗前抽取抗凝外周血5ml,采用Sequenom实验方法进行rs2910164 SNP分型检测,按照RECIST 1.1标准评价其化疗疗效,CR+PR为有效组,SD+PD为无效组,分析mi RNA-146a SNP与化疗疗效的关系。结果 mi RNA-146a rs2910164 G/C基因多态性与奥沙利铂联合氟尿嘧啶化疗方案的疗效相关,与GG基因型相比,携带mi RNA-146a rs2910164 CG基因型患者的临床疗效更好,OR为8.726,95%CI为1.112-68.454(P=0.039)。COX多因素预后分析结果显示分化程度是胃癌独立的预后因素(P=0.002,0R:7.363,95%CI:2.129-25.461)。结论 mi RNA-146a rs2910164 G/C基因多态性可能与晚期胃癌铂类化疗疗效有相关。

血清miRNA-146a在多囊卵巢综合征患者中的表达水平及临床意义

目的探究miRNA-146a在多囊卵巢综合征（PCOS）患者中的临床诊疗意义。方法选择在本院妇产科检查的PCOS患者50例作为观察组，所有患者均符合鹿特丹PCOS诊断标准；另外，采用随机数字表法选取50例经诊断无雄激素过多或排卵功能异常的健康女性作为对照组。所有入组的患者均检测睾酮、催乳素、黄体生成素、卵泡刺激素、雌激素、葡萄糖和胰岛素生化指标。qRT—PCR检测血清miRNA-146a的表达水平。结果观察组患者睾酮、黄体生成素、雌激素、葡萄糖、胰岛素和催乳素的水平分别为（0．8±0．2）ng／ml、（9．8±3．1）U／L、（75．5±16．4）pg／ml、（5．9±1．2）mmol／ml、（17．4±4．5）μU／ml和（33．7±10．8）ng／ml，均显著高于对照组的（0．4±0．1）ng／ml、（6．9±2．0）U／L、（32．4±9．8）pg／ml、（4．1±0．9）mmol／ml、（6．1±1．2）μU／ml和（10．6±3．2）ng／ml；同时，观察组卵泡刺激素水平（4．1±2．3）U／L明显低于对照组的（7．7±3．4）U／L；观察组患者miRNA-146a血清表达水平为（2．53±0．78），明显高于对照组的（0．59±0．30）；上述指标比较，两组差异均有统计学意义；血清中miRNA-146a表达水平和睾酮浓度呈显著的负相关性（R^2=0．798；P〈0．001）。结论PCOS患者血清miRNA-146a表达水平升高，且其与睾酮呈负相关的作用，可作为一种快速、方便和有效诊断PCOS疾病的指标之一，在PCOS患者的疾病发展过程中起到重要的作用。