补肾益髓方对脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症模型miRNA-155信号通路相关因子的影响

目的观察补肾益髓方药物血清对小鼠小胶质细胞BV2神经炎症的影响,探讨其可能的作用机制。方法1μg/mL脂多糖(LPS)诱导建立BV2细胞炎症模型,将BV2细胞随机分为正常组、LPS组、补肾益髓方药物血清(5%、10%、20%)组和空白血清(5%、10%、20%)组,CCK-8法检测细胞活力;在此基础上,将细胞分为正常组、LPS组和20%补肾益髓方药物血清组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arginase-1)蛋白表达,RT-q PCR检测细胞内miRNA-155-5p表达;采用慢病毒转染制备miRNA-155-5p过表达模型,另设20%补肾益髓方药物血清组、阴性对照组和miRNA-155-5p过表达组,免疫荧光法和Western blot检测细胞内i NOS、Arginase-1及CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)蛋白表达。结果与正常组比较,LPS组细胞活力显著降低(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著升高(P<0.01),Arginase-1表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,20%补肾益髓方药物血清组细胞活力显著升高(P<0.01),iNOS和miRNA-155-5p水平显著降低(P<0.01),Arginase-1表达显著升高(P<0.01)。与20%补肾益髓方药物血清组比较,miRNA-155-5p过表达组i NOS表达显著升高(P<0.01),Arginase-1和C/EBPβ表达显著降低(P<0.01)。结论补肾益髓方可抑制LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其作用机制与提高细胞活力、上调Arginase-1表达、下调i NOS表达、抑制miRNA-155信号通路有关。

基于miR-155/JAK2/STAT3信号通路探讨仙茅苷减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用机制

目的探讨仙茅苷对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的改善作用及对微小RNA(miR)-155/Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活蛋白3(JAK2/STAT3)信号通路的调节作用。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、仙茅苷组、miR-155过表达组和miR-155过表达+仙茅苷组。除假手术组外,其余组大鼠采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌I/R模型,仙茅苷组和miR-155过表达+仙茅苷组大鼠于建模前6 d腹腔注射仙茅苷50 mg/kg,1次/d;miR-155过表达组和miR-155过表达+仙茅苷组大鼠于建模前在左心室上取3个位点注射miR-155 mimic。再灌注24 h后超声心动图检测心功能,TTC染色检测心肌梗死面积,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中miR-155表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌损伤病理表现,ELISA检测血清中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量。结果与模型组比较,仙茅苷组心肌组织miR-155水平降低,心肌梗死面积减小,左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(LVFS)升高,左室舒张末期内径(LVESD)和左室收缩末期内径(LVEDD)减小,血清中CK-MB、cTnT、LDH水平下降,心肌组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量升高,而miR-155过表达组以上各指标变化趋势相反(均P<0.05);与miR-155过表达+仙茅苷组比较,miR-155过表达组miR-155水平升高,心肌梗死面积增大,LVEF和LVFS降低,LVESD和LVEDD增大,血清中CK-MB、cTnT、LDH水平上升,p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量降低,而仙茅苷组以上各指标变化呈相反趋势(均P<0.05)。结论仙茅苷可减轻大鼠心肌I/R损伤,改善心功能,其可能通过抑制miR-155表达从而上调JAK2/STAT3信号通路发挥作用。

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

miRNA-126调控Wnt/β-catenin信号通路对子宫平滑肌肉瘤生物学功能的影响

目的研究miRNA-126在子宫平滑肌肉瘤(ULMS)组织中的表达水平及临床意义,探讨其通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞增殖和转移能力的作用机制。方法采用qRT-PCR检测miRNA-126在ULMS组织和子宫平滑肌瘤组织中的表达水平,并分析miRNA-126表达与ULMS患者临床病理参数、复发转移及生存率的关系。常规培养ULMS细胞SK-UT-1,随机分为NC对照组和miRNA-126 mimics实验组,分别转染NC mimics和miRNA-126 mimics,qRT-PCR检测各组细胞中miRNA-126的表达;CCK8实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;TOP/FOP Flash实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性;western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin在细胞核中的表达水平,及其相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1的表达。结果qRT-PCR检测结果显示,与子宫平滑肌瘤组织相比,miRNA-126在ULMS组织中的表达显著降低(P<0.05),且miRNA-126在肿瘤直径大和存在转移的ULMS患者中表达显著减少(P<0.05),miRNA-126表达对ULMS患者复发转移和生存率无明显影响(P>0.05)。与NC组相比,miRNA-126 mimics组SK-UT-1细胞中的miRNA-126表达水平显著增加(P<0.05),SK-UT-1细胞的增殖和转移能力显著降低(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin及相关蛋白Slug、Snail和CyclinD1表达均显著降低(P<0.05)。结论miRNA-126在ULMS组织中表达降低,miRNA-126可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制ULMS细胞的增殖和转移。

基于microRNA155-SOCS1信号通路探讨“心受气于脾”理论对高脂血症脾虚痰浊大鼠血管内皮的保护机制

目的基于microRNA155-SOCS1信号通路探讨“心受气于脾”理论对高脂血症(HLP)脾虚痰浊大鼠血管内皮的保护机制。方法SPF级雄性SD大鼠60只按随机数字表法随机分为正常组,模型组,阿托伐他汀组和健脾祛痰中药低、中、高剂量组。正常组予普通饲料喂饲,模型组、健脾祛痰中药组和阿托伐他汀组均予高脂饲料喂饲联合腹腔注射维生素D3,活动受限,建立高脂血症脾虚痰浊大鼠模型,同时进行药物干预,健脾祛痰中药各组以及阿托伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,空白组与模型组给予等量的生理盐水,共计12周。12周后采用紫外分光光度法检测主动脉ATP含量,采用ABTS法检测主动脉总抗氧化能力(T-AOC),采用ELISA法检测各组大鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量以及氧化低密度脂蛋白(oxidation low lipoprotein,ox-LDL)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、大鼠γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平。HE染色法检测主动脉脂质沉积;实时荧光定量PCR检测主动脉及斑块内microRNA155、细胞因子信号抑制蛋白1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组TC、TG、LDL-C、ox-LDL、MDA、ICAM-1、TNF-α、IFN-γ、microRNA155水平显著升高(P<0.01);ATP、T-AOC、GSH-PX、CAT、SOD,SOCS1 mRNA水平显著降低(P<0.01);HE染色主动脉壁明显增厚,内膜不光滑不完整,形成纤维增生性纤维斑块。与模型组比较,健脾祛痰各组大鼠TC、LDL-C、ox-LDL、MDA、ICAM-1、TNF-α、IFN-γ、microRNA155水平降低(P<0.01),ATP、T-AOC、GSH-PX、CAT、SOD、SOCS1 mRNA水平上升(P<0.01),健脾祛痰中、高剂量组TG水平降低(P<0.01)。结论健脾祛痰中药具有良好的保护血管内皮功能的作用,其机制可能是通过激活microRNA155-SOCS1轴信号通路实现的。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

MicroRNA-155调节Notch信号通路对TLCs诱导的急性胰腺炎腺泡细胞的影响

目的研究miRNA-155对TLCs诱导的胰腺AR42J细胞损伤的作用及其可能的分子机制。方法利用TLCs诱导AR42J细胞建立急性胰腺炎细胞模型,细胞分为6组:正常对照组,TLCs模型组,TLCs+microRNA-155 inhibitor组,TLCs+microRNA-155 negative control组,TLCs+microRNA-155 inhibitor+pcDNA negative control组,TLCs+microRNA-155 inhibitor+pcDNA-Nocth1组。利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-155与Notch1mRNA的表达,利用western blot检测细胞中Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,caspase-3的表达,用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子IL-6,IL-32,IL-1β及TNF-α的含量。结果结果显示,与正常对照组相比较,模型组细胞中miRNA-155与Notch1 mRNA的表达均显著升高;与模型组相比较,抑制miRNA-155的表达后,TLCs+miRNA-155 inhibitor组细胞中Notch1的表达显著降低,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著下降,凋亡蛋白Bax与Caspase-3的表达显著升高,炎性因子IL-6,IL-32,IL-1β及TNF-α的含量显著降低;与TLCs+miRNA-155 inhibitor相比较,TLCs+microRNA-155 inhibitor+pcDNA-Notch1组,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著升高,凋亡蛋白Bax与Caspase-3的表达显著降低,炎性因子IL-6,IL-32,IL-1β及TNF-α的含量显著升高。结论通过抑制miRNA-155的表达可抑制Notch信号通路的激活,促进细胞凋亡,抑制炎性因子的释放,减轻细胞损伤,进而发挥细胞保护作用。

缺糖缺氧心肌细胞中miRNA-155对Notch信号通路及自噬和凋亡的影响

目的探讨miRNA-155在缺糖缺氧心肌细胞模型中对Notch信号通路及心肌细胞凋亡与自噬的影响。方法建立缺糖缺氧细胞(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,细胞分为正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155 inhibitor阴性对照组及OGD组+miRNA-155 inhibitor组。利用RT-qPCR检测模型组与正常对照组心肌细胞中miRNA-155的表达情况;利用Western blot检测正常对照组,OGD组,OGD组+miRNA-155抑制剂阴性对照组及OGD组+miRNA-155抑制剂组中Notch1,HES1,Beclin1及Caspase-3的表达情况;利用CCK-8实验检测各组心肌细胞的活性。结果 RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比较,模型组心肌细胞中miRNA-155的表达显著升高;Western blot结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著升高缺糖缺氧心肌细胞中Notch1,HES1,Beclin1的表达,降低细胞中Caspase-3的表达;CCK-8实验结果显示,抑制miRNA-155的表达后,可显著提高缺糖缺氧心肌细胞的活性。结论 MiRNA-155 inhibitor可通过提高Notch1及HES1的表达,促进Notch信号通路激活,促进细胞自噬,抑制细胞凋亡,提高心肌细胞的活性,从而发挥心肌保护作用。

地塞米松对小鼠急性胰腺炎中miRNA-155及NF-κB信号通路的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)小鼠模型胰腺组织中miRNA-155及核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法利用蛙皮素建立小鼠AP动物模型,实验分组为对照组、模型组、地塞米松组(DEX组),分别连续3次予生理盐水、蛙皮素(10μg/mL浓度按50μg/kg)、蛙皮素(剂量同模型组)+DEX(1 mL/kg)腹腔注射.利用ELISA法检测各组动物胰腺组织及血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组动物胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达情况.结果ELISA检测结果显示,与模型组比较,DEX组动物胰腺组织及血清中IL-1β、TNF-α与IL-6的含量显著降低,对照组最低.RT-qPCR结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中miRNA-155 mRNA的表达显著降低,对照组最低.Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中磷酸化p65及IκBα蛋白的表达均显著降低.结论DEX可能通过抑制miRNA-155的表达,进而抑制p65及IκBα蛋白的磷酸化,从而抑制NF-κB信号通路的活化,减少炎症因子如IL-1β、TNF-α与IL-6等的合成与释放,对胰腺腺泡细胞起到保护作用.

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论乳腺癌细胞中miR-24表达升高,并且通过调控MEK/ERK信号通路促进乳腺癌的转移。

miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响

miRNA-21是miRNA家族中十分重要的一个基因,在多种恶性肿瘤中高表达。研究表明,miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控可影响相关靶点的表达情况,因此,miRNA-21可能为非小细胞肺癌临床诊断和疾病治疗提供新靶标。本文对miRNA-21对PI3K/Akt信号通路的调控及其对非小细胞肺癌预后的影响作一综述。

基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用

目的:基于miRNA-132信号通路探究胡椒碱对肝癌血管形成及肿瘤抑制作用。方法:制备肝癌细胞转移瘤,将裸鼠分为空白组(不制备肝癌裸鼠模型)、模型组(肝癌小鼠模型组)、胡椒碱组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱干预组)、miR-132组(肝癌小鼠模型给予miR-132类似物组)、联合组(肝癌小鼠模型给予胡椒碱联合miR-132类似物组)。比较各组裸鼠的瘤体积和肿瘤抑制率;比较肿瘤组织病理学变化;用ELISA检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量;比较微血管密度(MVD)数量;用蛋白质印迹法检测肝组织中miR-132、GP73表达。结果:和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠的瘤体积均显著降低,且联合组瘤体积较胡椒碱组和miR-132组降低更明显(P<0.05)。和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肿瘤生长抑制率显著增加(P<0.05);联合组裸鼠的肿瘤生长抑制率明显高于miR-132组和胡椒碱组(P<0.05)。模型组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量和空白组相比显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠血清中VEGF含量和MVD数量均显著减少,且联合组血清中VEGF含量和MVD显著低于胡椒碱组(P<0.05)。和空白组相比,模型组裸鼠肝组织中miR-132表达显著降低,GP73蛋白表达显著增加(P<0.05);和模型组相比,miR-132组、胡椒碱组和联合组裸鼠肝组织中miR-132表达均明显增加,GP73蛋白表达均显著降低,且联合组中miR-132和GP73表达变化最大(P<0.05)。双荧光素酶检测报告结果显示,过表达miR-132可降低GP73活性(P<0.05)。结论:胡椒碱可通过调控miR-132负向调控GP73抑制肝癌血管形成,同时也能显著抑制肿瘤的生长。

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞,将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较,miR-34a mimic组细胞中miR-34a的表达升高,细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-34a inhibitor组细胞中miR-34a的表达降低,细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。与NC mimic组比较,共转染miR-34a mimic和WT-SOX4的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而共转染miR-34a mimic和MUT-SOX4的细胞荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。与miR-34a mimic+Vector组比较,miR-34a mimic+pcDNA-SOX4组Raji细胞增殖能力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ras、p-Raf-1、p-MEK蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:miR-34a通过靶向SOX4调控RAS/MAPK信号通路从而抑制PCNSL细胞增殖,促进细胞凋亡。

circ_0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/YAP信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖迁移和侵袭

目的:探究circ-0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/Yap信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:RT-PCR检测HIOEC、Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414表达。将未转染任何质粒的SCC-9细胞设为Control组;将分别转染pcDNA-circ-0086414、pcDNA-NC、miR-155-5p inhibitor、miR-NC inhibito质粒的SCC-9细胞中,并设为pcDNA-circ-0086414组、pcDNA-NC组、miR-155-5p组、miR-NC组;将pcDNA-circ-0086414质粒转染于SCC-9细胞中,同时在培养基中加入5μmoL/L Verteporfin共同培养,设为Verteporfin组。RT-PCR检测细胞中circ-0086414、miR-155-5p表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测细胞中Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验验证circ-0086414和miR-155-5p的靶向关系。结果:和人永生化口腔上皮细胞HIOECcirc-0086414(1.00±0.10)、miR-155-5p(1.00±0.09)相比,口腔鳞癌细胞株Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414(0.73±0.07)、(0.51±0.05)、(0.36±0.03)表达明显降低,miR-155-5p(1.36±0.11)、(1.57±0.13)、(1.89±0.15)表达明显升高(P<0.05);且SCC-9细胞中circ-0086414表达和miR-155-5p表达变化最显著(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中circ-0086414表达(1.26±0.12)明显升高,miR-155-5p组细胞中miR-155-5p表达(0.73±0.07)明显降低(P<0.001)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞增殖、侵袭(123.56±5.87)和迁移(16.90±1.62)能力均明显降低(P<0.05);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增加(P<0.05)。和Control组相比,pcDNA-circ-0086414组细胞中Last1(1.12±0.10)、p-Last1(1.49±0.12)、p-YAP(1.41±0.11)蛋白表达明显增加,YAP蛋白(0.45±0.04)表达明显降低(P<0.001);和pcDNA-circ-0086414组相比,Verteporfin组细胞中Last1(0.61±0.06)、p-Last1(0.82±0.08)、p-YAP蛋白(0.58±0.05)表达明显降低,YAP蛋白(0.93±0.09)表达明显升高(P<0.001)。野生型circ-0086414(circ-0086414-WT)miR-155-5p组(0.26±0.03)荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05)。结论:过表达circ-0086414可抑制口腔鳞癌SCC-9细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制和抑制miR-155-5p表达,激活Hippo-Yap信号通路相关。

miRNA-155靶向Wnt5a调控转录激活子3信号通路在支气管哮喘发生发展中的作用

目的 miRNA-155在支气管哮喘中的作用及其机制研究较少,文章拟探讨miRNA-155通过靶向Wnt5a调控转录激活子3(STAT3)信号通路在大鼠支气管哮喘发生发展中的作用。方法将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、阴性对照组和miRNA-155表达抑制组,每组12只,正常对照组大鼠腹腔注射等渗盐水,阴性对照组大鼠在支气管哮喘模型建立后转染NC拮抗物;miRNA-155表达抑制组大鼠在支气管哮喘模型建立后转染miRNA-155拮抗物;分别于转染后7 d麻醉处死,采用HE染色法观察肺组织损伤情况;采用qRT-PCR法检测各组大鼠肺组织miRNA-155、Wnt5a mRNA表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-155与Wnt5a的靶向关系;采用Western blot法检测各组大鼠肺组织Wnt5a、STAT3、p-STAT3的蛋白表达水平;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆IL-6、TNF-α表达水平。结果与正常对照组比较,阴性对照组大鼠肺功能指标FVC、FEV1及PEF均降低而FEV1/FVC升高(P<0.05),且miRNA-155表达水平升高,Wnt5a基因mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miRNA-155表达抑制组大鼠肺功能均有不同程度的提高(P<0.05),miRNA-155表达水平降低(P<0.05),Wnt5a基因mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,miRNA-155和Wnt5a能够靶向结合;与正常对照组大鼠肺组织STAT3、p-STAT3的蛋白表达水平[(0.20±0.05)、(0.22±0.05)]相比,阴性对照组[(1.35±0.05)和(1.11±0.05)]和miRNA-155表达抑制组大鼠[(1.01±0.06)、(0.52±0.07)]均升高(P<0.05),miRNA-155表达抑制组大鼠肺组织STAT3、p-STAT3蛋白表达水平较阴性对照组降低(P<0.05);与正常对照组大鼠肺组织IL-6、TNF-α表达水平[(95.92±8.78)、(88.99±8.12)pg/mL]相比,阴性对照组[(206.11±18.63)、(177.54±13.12)pg/mL]和miRNA-155表达抑制组[(156.17±9.55)、(131.94±9.25)pg/mL]均升高(P<0.05);与阴性对照组相比,miRNA-155表达抑制组大鼠肺组织IL-6、TNF-α表达水平降低(P<0.05)。结论 miRNA-155通过靶向Wnt5a激活STAT3信号通路促进支气管哮喘的发生发展。

新风胶囊通过抑制miR-155/NF-κB信号通路改善强直性脊柱炎活动期患者高凝状态

目的新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)活动期患者miR-155、核因子κB(NF-κB)信号通路、高凝状态的影响,探讨其可能的机制。方法采用随机数字表法将56例AS活动期患者分为新风胶囊组(XFC组)和柳氮磺吡啶组(SASP组)。实时荧光定量PCR检测miR-155。反转录PCR检测核因子κB激活蛋白1(Act1)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶β(IKKβ)、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA的水平,Western blot法检测NF-κB P65、NF-κB P50蛋白表达,ELISA检测血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列环素F1(6-keto-PGF1)、血小板颗粒膜蛋白(GMP140)、血小板活化因子(PAF)、纤溶酶原激活抑制剂(PAI-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-17。同时评价XFC对AS患者临床疗效。结果 XFC组Bath AS疾病活动指数50%达标率(BASDAI50)显著高于SASP组。与SASP组治疗后相比,XFC组治疗后血小板(PLT)、纤维蛋白原(FBG)、D-D二聚体(D-D)、TXB2、GMP140、PAF、PAI-2、IL-17、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、视觉模拟评分(VAS)、Bath AS疾病活动指数(BASDAI)、Bath AS功能指数(BASFI)、Bath AS总体指数(BAS-G)降低更明显,且其可明显升高6-keto-PGF1、IL-4、IL-10;与SASP治疗后相比,XFC治疗后IKKβ、IκBα、NF-κB p65、NF-κB p50 mRNA及NF-κB P65、NF-κB P50蛋白、miR-155表达水平更低。结论 XFC能有效改善AS活动期患者的高凝状态,可能与抑制miR-155、抑制NF-κB信号通路活化有关。

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞MALAT1表达降低、 hsa-miR155-3p表达增加并参与Notch信号通路调节

目的观察类风湿性关节炎(RA)患者长链非编码RNA(lncRNA)转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)、hsa-miR155-3p表达及其与Notch信号通路关系,探讨RA可能发病机制。方法采取RA患者(RA组)、健康对照者(NC组)外周血,采用高通量基因测序筛选差异表达的lncRNA和mRNA。利用反转录PCR检测筛选的lncRNA MALAT1和hsa-miR155-3p及Notch信号通路受体配体表达。结果通过lncRNA测序分析发现,共有9158条差异表达的lncRNA。基因本体(GO)功能分类注释得出差异表达的mRNA参与免疫炎症反应、细胞转录调节等。通过通路(pathway)分析显示差异表达的mRNA与免疫炎症、应激、Notch通路等功能基因变化有关。经顺式(Cis)和反式(Trans)预测,Jagged1/2、Delta1/2、Notch1/2可能与RA发生密切相关。与NC组相比,RA组MALAT1降低,hsa-miR155-3p明显升高;Notch通路配体Delta1、Delta2、Jagged1、Jagged2及受体Notch1、Notch2表达升高。相关性分析显示,hsa-miR155-3p与MALAT1呈负相关,hsa-miR155-3p与Notch通路Delta1、Jagged1呈正相关,MALAT1与Jagged2呈负相关。结论RA患者lncRNA MALAT1降低、hsa-miR155-3p增加,共同调节Notch信号通路变化。

天麻素通过调节miRNA-221/PI3K/Akt通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探索天麻素(gastrodin,GAS)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法将人肺泡上皮细胞A549分为正常对照组、LPS组、GAS组、miR-221 siRNA组、control siRNA组,采用RT-qPCR实验检测miRNA-221 mRNA的表达水平;ELISA实验检测细胞培养液中炎性因子的含量;MTT实验检测细胞活力;Western blot实验检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)及半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)蛋白的表达情况。结果与LPS组比较,GAS组中GAS可明显降低LPS诱导的A549细胞中miRNA-221 mRNA的表达,升高p-Akt蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,miRNA-221 siRNA组抑制miRNA-221的表达后,可促进LPS诱导的A549细胞中PI3K、p-Akt蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,miRNA-221 siRNA组与GAS组均可明显降低LPS诱导的A549细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6),白细胞介素1β(IL-1β)的含量,降低促凋亡蛋白Bax及Caspase-9的表达,促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);而miRNA-221 siRNA组与GAS组对细胞的作用比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论GAS通过抑制miR-221的表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而减少炎性因子的释放,减少细胞凋亡,提高细胞活力,发挥细胞保护作用。

运动心脏重塑过程中miRNA-350/JNK信号通路的动态变化

目的:通过递增负荷跑台运动建立运动性心肌肥大模型,观察miRNA-350及其靶基因在8周递增负荷运动诱导的心脏重塑中的动态变化,以探讨运动心脏重塑的可能机制。方法:96只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(C组)和递增负荷运动组(ILT组)。正式训练的第7周末,用超声心动图检测各组小鼠心脏结构和功能参数;用qRT-PCR检测运动心脏重塑过程中不同时相(0d、3d、7d、15d、29d和57d)miRNA-350的动态变化;分别用qRT-PCR和Western Blotting技术检测JNK mRNA和JNK蛋白的动态变化。结果:ILT组小鼠PWTS、PWTD、LVEDD、IVSTD和IVSTS等指标显著高于C组,EF无显著性差异;在运动心脏重塑过程中,ILT组小鼠心脏中miRNA-350的表达水平先快速增高再急剧下降,然后缓慢下降到与C组相当的水平;在递增负荷运动的0d、3d和7d,miRNA-350的靶基因JNK mRNA的表达水平没有显著变化,此后,JNK mRNA的表达水平呈上升趋势;在运动心脏重塑的初期,JNK蛋白的表达水平先显著下降再缓慢上升。结论:持续8周递增负荷跑台运动成功的诱导了小鼠心肌肥大;运动心脏重塑过程中miRNA-350、JNK mRNA和JNK蛋白呈动态变化,提示miRNA-350/JNK信号通路可能参与运动心脏重塑的调节。