在感染与非感染H5N1亚型禽流感病毒状态下SPF鸭miRNA-17a~*表达量检测及比较分析

为了探讨在H5N1亚型禽流感病毒感染状态下miRNA-17a*在水禽中的作用机制,试验应用茎环实时荧光定量PCR技术检测了miRNA-17a*在感染与非感染H5N1亚型禽流感病毒状态SPF鸭的不同组织中的相对表达。结果表明:在感染与非感染H5N1亚型禽流感病毒状态下SPF鸭的不同组织中均能检测到miRNA-17a*表达,在非感染状态下肺脏中相对表达量最高,感染状态下肌肉中相对表达量最高;感染H5N1亚型禽流感病毒后的SPF鸭与对照组SPF鸭相同组织间的相对比较分析显示,在感染状态下SPF鸭的气管中miRNA-17a*相对表达量是对照组SPF鸭的1.2倍,而在其他组织中其相对表达量低于对照组SPF鸭。

TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p在胃癌组织中的表达及与疾病演进的相关性

目的研究转谷氨酰胺酶2(transglutaminase,TGM2)、核富集转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript1,NEAT1)、miRNA-17-5p在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达及与疾病演进的相关性。方法选取病理科保存的GC组织标本74例,为研究组,另选取同一时间段病理科保存的正常胃黏膜(距离癌组织>5 cm)74例,为对照组,检测TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p表达水平,统计研究对象一般资料及GC患者与疾病演进的相关性。结果与对照组比较,研究组TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无淋巴转移比较,有淋巴转移患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与临床Ⅲ~Ⅳ期比较,Ⅰ~Ⅱ期患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与黏膜下层比较,TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p阳性表达率升高与发生GC独立相关(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p预测发生GC曲线下面积(AUC)分别为0.662、0.716、0.754。结论GC患者组织中TGM2、NEAT1阳性表达率增高,miRNA-17-5p阳性表达率降低,其阳性表达的高低与患者淋巴转移、临床分期、病灶深度显著相关,在临床诊断中具有重要意义。

外周血miRNA-17-3p的检测在结肠癌诊断中的临床意义

目的:外周血microRNA(miRNA)-17-3p对结肠癌的诊断意义及其与临床病理特征的相关性.方法:2012-01/2014-04在北京天坛医院接受住院治疗的结肠癌患者67例(观察组)资料,另选取50例健康体检者作为对照组.采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测miRNA-17-3p的表达量,分析两组外周血miRNA-17-3p、血癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平差异;并分析miRNA-17-3p与年龄、性别、临床分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系.并分别对miRNA-17-3p、CEA水平对结肠癌的诊断意义行ROC曲线分析.结果:观察组患者血清中的miRNA-17-3p的相对表达量明显高于正常对照组(P<0.05).其表达与淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关.受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析显示,miRNA-17-3p以相对表达量2.50为临界点时对结肠癌的诊断敏感性为87%,特异性为62%,曲线下面积0.910,优于CEA对结肠癌的诊断.术后外周血miRNA-17-3p水平明显低于术前,差异有统计学意义(P<0.05).结论:外周血miRNA-17-3p在结肠癌患者中的表达明显上调,对结肠癌的诊断价值优于CEA.

miRNA-17对靶基因整合素受体β_8的调控表达作用

目的探讨在HEK293T细胞中miRNA-17对其靶基因整合素受体β8(ITG-β8)调控作用,从而为治疗心血管疾病寻找新的靶点。方法通过实时定量PCR法检测转染重组表达载体pCDNA3.1+miRNA-17后成熟miR-NA-17的表达水平。应用生物信息学预测软件对miRNA-17的靶基因进行预测,将靶基因ITG-β8的3'UTR融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测miRNA-17对靶基因ITG-β8的3'UTR的调控作用。设计合成反义寡核苷酸序列(ASO-miRNA-17),通过ITG-β8转染于HEK293T细胞。结果双荧光素酶报告基因分析表明,miRNA-17能够作用于ITG-β8基因的3'UTR。反义寡核苷酸技术进一步证实,ASO-miRNA-17抑制性调控miR-NA-17的表达。结论 miRNA-17可以负性调节靶基因ITG-β8的表达。

阻断白介素-17A对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及miRNA-21表达的影响

目的探讨阻断白细胞介素-17A(interleukin-17,IL-17)对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及miRNA-21表达的影响。方法 80只小鼠随机分为假手术组、模型组、同型抗体对照组(IgG2A组)、IL-17A抗体干预组各20只。模型组、IgG2A组、IL-17A抗体干预组小鼠气管内注射博来霉素(bleomycin,BLM)致急性肺损伤诱导肺纤维化形成,假手术组给予等量生理盐水。造模后第4、9、14、19、22天IL-17A抗体干预组尾静脉注射IL-17A中和抗体,IgG2A组注射同型对照抗体IgG2A;模型组和假手术组注射等量生理盐水。造模后培养第7、14、28天4组小鼠分批处死。比较各组小鼠在不同时间点肺组织病理学变化积分、肺系数、miRNA-21表达水平的变化。结果与模型组比较,IL-17A抗体干预组在各时间点肺组织病理学变化积分、肺系数、miRNA-21表达水平均有显著改变,差异具有统计学意义(P<0.05);IgG2A组在各时间点上述指标与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论阻断IL-17A可通过降低miRNA-21的表达延缓肺纤维化进程。

miRNA-17/92a基因簇、P1NP和β-CTX在诊断绝经后骨质疏松症中的应用价值

目的探讨血清miRNA-17/92a基因簇、骨Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)测定在绝经后骨质疏松症(PMOP)中的应用价值。方法选取150例绝经后女性作为研究对象,根据骨密度T值将全部研究对象分为OP组、骨量降低组和对照组。检测全部研究对象的miRNA-17/92a基因簇表达水平和骨代谢指标P1NP、β-CTX的变化。比较OP组、骨量降低组和对照组的血清miRNA-17/92a、P1NP和β-CTX水平。分析血清miRNA-17/92a与患者年龄、绝经后时间、BMI、P1NP、β-CTX的相关性。通过ROC曲线分析血浆中miRNA-17/92a基因簇含量、P1NP、β-CTX对PMOP的诊断灵敏度和特异度。结果 OP组的血清miRNA-17/92a基因簇含量显著低于骨量降低组和对照组,OP组的血清P1NP、β-CTX水平显著高于骨量降低组和对照组。miRNA-17/92a基因簇含量与年龄、绝经后时间、P1NP和β-CTX呈显著负相关关系(P <0. 05),与BMI无显著相关性。血清miRNA-17/92a、P1NP、β-CTX指标联合诊断PMOP效果最佳,AUC、灵敏度和特异度分别为0. 85、93. 5%和90. 2%。结论 miRNA-17/92a、P1NP、β-CTX三者联合检测对PMOP的诊断价值高于单独检测。

miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中中的表达及诊断价值研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p在急性缺血性脑卒中(AIS)中的表达及临床诊断价值。方法分别收集该院50例非脑卒中患者和50例AIS患者的血清标本作为对照组和病例组。采用实时荧光定量PCR法检测血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的表达水平,同时将血清中miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p的水平与研究对象的临床诊断价值进行对比分析。结果病例组血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p表达水平均显著高于对照组(P<0.001)。AIS患者血清miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p与美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分呈显著正相关(r=0.605、0.667、0.710,均P<0.05)。miRNA-17-5p、miRNA-103-3p、miRNA-144-3p及三者联合区分AIS患者与非AIS的受试者工作特征曲线下面积分别为0.846(95%CI:0.757~0.935,P<0.001)、0.866(95%CI:0.788~0.945,P<0.001)、0.935(95%CI:0.888~0.982,P<0.001)和0.976(95%CI:0.953~0.999,P=0.000);灵敏度和特异度分别为84%和92%、84%和88%、92%和86%、92%和94%。结论miRNA-17-5p、miRNA-103-3p及miRNA-144-3p是AIS诊断的潜在标志物。

miRNA-17核酸适配体阻断致癌性非编码RNA突变抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨miRNA-17(miR-17)核酸适配体对神经胶质瘤的潜在治疗作用。方法设计合成miR-17核酸适配体(miR-17-apt)并转染12h后检测其对miR-17的阻断作用。采用神经胶质瘤细胞株U251、 SGH44、H4及BT-325作为体外模型,转染miR-17-apt 48h后用噻唑蓝实验检测细胞增殖。结果 400nmol/L的miR-17-apt可显著抑制miR-17基因的表达水平并具有广谱的抑制多种神经胶质瘤细胞增殖的作用。结论 miR-17-apt可被进一步开发为抗神经胶质瘤基因治疗的潜在载体。

血浆MicroRNA-17-5p和microRNA-20水平与肺动脉高压预后的相关性研究

目的:探讨患者血浆MicroRNA-17-5p和microRNA-20水平与与肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)严重程度、预后的相关性。方法:采用微阵列法筛选112例PAH患者和100例健康对照者的血浆总RNA,采用实时定量聚合酶链反应测定miRNA-17-5p和miRNA-20a含量,测量PAH患者血浆中miRNA-17-5p、miRNA-20a的浓度。结果:在血浆miRNA浓度测定中,总共有58例miRNA血浆浓度在病例组和对照组中差异具有显著性。在PAH组中,miRNA-17-5p和miRNA-20a上调最为明显。ROC曲线分析显示血浆miRNA-17-5p、miRNA-20a的浓度与PAH患者两年生存率相关。Cox回归分析证实miRNA-17-5p和miRNA-20a水平是PAH生存率的重要预测因素。年龄、心脏指数、WHO分级、6min步行距离、疾病持续时间、红细胞分布宽度也可作为生存率的预测因子,加入这些协变量的多变量模型验证miRNA-17-5p和miRNA-20a水平是PAH两年生存率的独立预测因子。结论:血浆中miRNA-17-5p和miRNA-20a水平的增加与PAH患者的不良预后有关。

实时荧光定量PCR检测miR-17和miR-20a在胃癌细胞中的表达

目的研究miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞、正常胃黏膜上皮永生化细胞中的表达,探讨miRNA-17和miRNA-20a对胃癌发生发展的调控作用。方法培养两种胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮细胞,提取细胞中的总的Small RNA,采用Real-time PCR法检测miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞的表达,分析miRNA-17和miRNA-20a的表达与细胞分化程度、细胞增殖的关系。结果 Realtime PCR法证实miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞中均表达下调,差异具有统计学意义。miRNA-17和miRNA-20a的低表达与细胞分化程度有关。结论 miRNA-17和miRNA-20a在胃癌细胞中的表达明显下调,可能发挥抑癌基因的作用参与胃癌的发生、发展。

血必净注射液对体外循环后急性肺损伤大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡相关微RNA表达的影响

目的研究血必净注射液对体外循环后急性肺损伤大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡相关微RNA(miRNA)表达的影响。方法采用生物信息学技术筛选与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡相关的候选miRNA;30只雄性SD大鼠(20~22周龄,体重450~500 g)按随机数字表法将其分为假手术组、体外循环组和血必净组,假手术组不建立体外循环模型,体外循环组和血必净组建立体外循环模型。假手术组于血管穿刺前2 h、体外循环组于体外循环前2 h经腹腔注射4 ml/kg的生理盐水。血必净组于体外循环前2 h经腹腔注射血必净注射液4 ml/kg,体外循环结束后4 h放血处死大鼠,取肺组织标本,采用大鼠肺湿/干重比(W/D)和肺泡损伤数定量评价指标(IQA)评价肺损伤程度;rT-PCR观察血必净对体外循环后急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞中候选miRNA表达的影响。结果通过生物信息学分析筛选得到与大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡相关的候选miRNAs 5条:rno-miR-17-5p、rno-miR-34a-5p、rno-miR-26a-5p、rno-miR-21a-5p和rno-miR-375-3p。与假手术组比较,体外循环组W/D和IQA升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与体外循环组比较,血必净组W/D、IQA下降,差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,体外循环组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞miRNA-17-5p表达下调,而miRNA-34a-5p表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与体外循环组比较,血必净组肺泡Ⅱ型上皮细胞miRNA-17-5p表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),而miR-34a-5p表达下调,差异无统计学意义(P>0.05),rno-miR-26a-5p、rno-miR-21a-5p和rno-miR-375-3p在三组中差异无统计学意义(P>0.05)。结论血必净注射液可能通过上调miRNA-17-5p对体外循环后急性肺损伤起到治疗作用,初步揭示血必净注射液治疗体外循环后急性肺损伤的分子机制。

miRNA-17~92基因簇、线粒体融合蛋白2在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-17~92(miR-17~92)基因簇及线粒体融合蛋白2(MFN2)蛋白在子宫内膜癌(EC)中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2014年12月山东第一医科大学第二附属医院72例EC、36例子宫内膜非典型增生患者子宫内膜病变组织及22例因子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级行全子宫切除术的正常子宫内膜组织;同时收集所有患者蜡块组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组织中miR-17~92表达水平,免疫组织化学SP法检测各蜡块组织中MFN2蛋白定位及表达水平。分析miR-17~92、MFN2蛋白与EC患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制miR-17~92、MFN2不同水平患者生存曲线,并行log-rank检验;应用Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析。结果miR-17~92在EC、非典型增生及正常子宫内膜组织中相对表达量分别为1.49±0.46、1.01±0.30、0.69±0.20;EC组织中miR-17~92的表达水平高于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。MFN2蛋白在EC、非典型增生、正常子宫内膜组织中的高表达率分别为20.8%(15/72)、39.4%(13/33)、85.0%(17/20);EC组织中MFN2蛋白高表达率低于其他子宫内膜组织,差异均有统计学意义(均P<0.0125)。EC患者中,组织学类型Ⅱ型患者miR-17~92相对表达量高于Ⅰ型患者(P<0.05),肌层浸润深度≥1/2患者miR-17~92相对表达量高于浸润深度<1/2患者(P<0.05);组织学类型Ⅰ型患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ型患者(P<0.05),国际妇产科联盟(FIGO)分级Ⅰ级患者MFN2蛋白高表达率高于Ⅱ、Ⅲ级患者(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,按EC患者miR-17~92中位相对表达量(1.421)分组时,低表达组(36例)中位总生存(OS)时间未达到,高表达组(36例)为36个月(95%CI 32~42个月),两组间OS差异有统计学意义(P=0.049);MFN2蛋白高表达组(15例)中位OS时间未达到,低表达组(57例)为38个月(95%CI 33~41个月),两组间OS差异有统计学意义(P=0.046)。多因素Cox回归分析显示,miR-17~92、MFN2表达水平为EC患者生存的独立影响因素(HR=3.10,95%CI 1.36~7.07,P=0.007;HR=0.30,95%CI 0.09~0.99,P=0.048)。结论EC组织中miR-17~92高表达、MFN2蛋白低表达,二者可能参与了EC的发生、发展,可作为判断EC患者预后的指标。

妊娠性高血压患者血清miRNA-17、miRNA-181b的水平与血压及妊娠结局关系的研究

目的探讨妊娠性高血压患者血清miRNA-17、miRNA-181b的水平与血压及妊娠结局关系。方法选择2016年2月-2019年2月邢台医学高等专科学校第二附属医院产科住院的患者200例,根据第8版妇产科教材诊断标准将入选者分A组:早期产妇39例,B组:晚期产妇41例,C组:妊娠高血压产妇49例,D组:轻度子痫前期产妇41例,E组:重度子痫前期产妇30例。检测各组患者血清中miRNA-17、miRNA-181b表达量,并对各组血压、新生儿体重不良妊娠结局进行统计。结果E组在收缩压、舒张压、尿蛋白、miRNA-17水平、miRNA-181b水平均明显高于其余四组(P<0.05);D组收缩压、舒张压、尿蛋白、miRNA-17水平、miRNA-181b水平均明显高于C组、B组、A组(P<0.05);C组收缩压、舒张压、尿蛋白、miRNA-17水平、miRNA-181b水平均明显高于B组、A组(P<0.05)。E组羊水污染、子痫、胎儿死亡、新生儿窒息、胎儿宫内窘迫比例明显高于其余四组(P<0.05)。E新生儿出生体重比例明显低于其余四组(P<0.05)。妊娠性高血压患者血清miRNA-17水平、miRNA-181b水平与血压呈正相关(P<0.05),与新生儿出生体重呈负相关(P<0.05)。结论妊娠性高血压患者血清miRNA-17水平、miRNA-181b水平与血压显著正相关,与新生儿出生体重显著负相关,两指标可作为妊娠性高血压患者血压升高及新生儿出生体重降低的重要预测指标。

miRNA-17~92基因簇在多囊卵巢综合征发生发展中的作用研究进展

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄妇女最常见的内分泌紊乱疾病,以卵巢的多囊样改变、雄激素过多和排卵障碍为主要临床特征。已有大量研究证实,miRNAs在PCOS的病理生理学中发挥重要作用。miRNA-17~92基因簇是一个包含多顺反子簇的miRNA家族,最初被认为是癌基因,后来被证实可触发多种生理和病理过程。新近研究显示,miRNA-17~92基因簇可通过调控卵巢颗粒细胞的功能而在PCOS的发生发展过程中发挥重要作用。本文就miRNA-17~92基因簇在PCOS发生发展中的作用及其分子途径进行综述。