miRNA-186靶向Twist-1促胃癌侵袭、迁移的机制研究

目的检测miRNA-186在胃癌中的表达情况,观察miRNA-186表达改变对人胃癌细胞株侵袭、迁移能力的影响并分析可能的分子机制。方法 RT-PCR法检测40例胃癌患者胃癌及配对的正常胃黏膜组织中miRNA-186的表达水平,同时检测miRNA-186在胃癌细胞株和正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平。在胃癌细胞中分别转染miRNA-186模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)以上调、下调miRNA-186的表达,应用Transwell试验观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响。应用生物信息学软件预测miRNA-186可能的靶基因,并经双荧光素酶试验及Western blot试验验证靶基因,分析其促转移的分子机制。结果胃癌组织相较于正常胃黏膜组织、胃癌细胞株相较于正常胃黏膜上皮细胞株的miRNA-186表达水平均降低(均P<0.05)。在胃癌细胞中,分别上调、下调miRNA-186的表达水平,能够抑制、促进胃癌细胞的侵袭、迁移能力。miRNA-186与Twist-1之间存在反向调控的关系,Twist-1是miRNA-186的靶基因。同时发现,下调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调,而当上调miRNA-186的表达时,Twist-1和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调。结论在胃癌组织中miRNA-186的表达水平降低,可能通过靶向调控Twist-1的表达,改变E-cadherin和N-cadherin的表达水平,导致胃癌细胞上皮间质转化,进而促进胃癌细胞的侵袭、迁移。

miRNA-186上调Dicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制研究

目的探讨miRNA-186上调Dicer1的表达影响胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制。方法取40例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织;将转染pLVTHM-mimic-miRNA-186和pLVTHM-mimic-NC的慢病毒感染液分别转染BGC-823细胞,得到过表达BGC-823-mimics-miRNA-186细胞、阴性对照BGC-823-mimics-NC细胞。定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同组织和细胞中miRNA-186的相对表达量;Transwell小室检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;间接免疫荧光法(IFA)检测Dicer1相关分子神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的阳性表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-186和Dicer1的靶向关系,Western blot检测各细胞Dicer1的相对表达量。结果胃癌组织中miRNA-186的相对表达量明显低于癌旁组织(P﹤0.01)。胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中miRNA-186的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中miRNA-186的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823及BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。BGC-823-mimics-miRNA-186细胞侵袭数目少于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,细胞迁移率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。过表达miRNA-186的BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中N-cadherin阳性表达率低于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC(P﹤0.05)。mimics-miRNA-186能明显抑制野生型psi-CHECK-Dicer1-wild的荧光素酶活性,而对突变型psi-CHECK-Dicer1-mutant的荧光素酶活性无明显影响。胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC中Dicer1蛋白的相对表达量均明显低于正常胃黏膜上皮细胞RGM-1,且BGC-823-mimics-miRNA-186细胞中Dicer1的相对表达量明显高于胃癌细胞BGC-823和BGC-823-mimics-NC,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论miRNA-186通过靶向正调控Dicer1的表达,下调N-cadherin的表达可抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力。

恶性黑色素瘤组织中miRNA-186和miRNA-146a表达及与病理特征和预后的关系研究

目的探讨恶性黑色素瘤组织中微小RNA(miRNA)-186和miRNA-146a表达水平及与病理特征和预后的关系。方法收集2017年1月—2021年1月浙江金华广福肿瘤医院行手术切除的93例恶性黑色素瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定miRNA-186和miRNA-146a表达。所有患者均随访至2022年1月,评估患者预后情况。比较肿瘤组织与瘤旁组织中miRNA-186和miRNA-146a相对表达量;比较不同病理特征肿瘤组织中miRNA-186和miRNA-146a相对表达量;分析miRNA-186和miRNA-146a表达水平与预后的关系;采用多因素logistic回归分析影响恶性黑色素瘤患者预后的危险因素。结果肿瘤组织中miRNA-186相对表达量高于瘤旁组织,miRNA-146a低于瘤旁组织(均P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤部位和Clark分级患者miRNA-186和miRNA-146a相对表达量比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);IV期患者miRNA-186相对表达量高于II期和III期患者,淋巴结转移患者miRNA-186相对表达量高于无淋巴结转移患者(均P<0.05);IV期患者miRNA-146a相对表达量低于II期和III期患者,淋巴结转移患者miRNA-146a相对表达量低于无淋巴结转移患者(均P<0.05)。随访至2022年1月,93例患者中,生存74例,死亡19例。死亡组患者肿瘤组织miRNA-186相对表达量高于生存组,miRNA-146a相对表达量低于生存组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,临床分期、淋巴结转移、miRNA-186表达和miRNA-146a表达是影响恶性黑色素瘤患者预后的危险因素。结论恶性黑色素瘤组织中miRNA-186高表达、miRNA-146a低表达,miRNA-186和miRNA-146a表达水平与临床分期、淋巴结转移和患者预后密切相关。

miRNA-186-3p对子宫颈癌CaSki细胞功能影响及与转化生长因子β-Smad信号通路关系的研究

目的探讨miRNA-186-3p(miR-186-3p)对子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及与转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的关系。方法将载有miR-186-3p抑制基因、miR-186-3p模拟物的质粒分别转染至子宫颈癌CaSki细胞,分别为miR-186-3p-I组、miR-186-3p-M组;另将转染空载质粒的CaSki细胞作为对照,为miR-186-3p-C组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹法检测各组细胞TGF-β-Smad信号通路相关蛋白表达水平;采用Starbase软件预测miR-186-3p靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果miR-186-3p-M组细胞凋亡率均低于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(7.5±3.2)%比(13.9±0.7)%、(12.7±0.6)%,均P<0.05]。miR-186-3p-M组迁移细胞数[(218±25)个比(168±13)个、(175±13)个,均P<0.001]和侵袭细胞数均多于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(165±21)个比(130±11)个、(142±12)个,均P<0.001]。miR-186-3p-M组TGF-β、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白相对表达量均最低,与另两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。采用Starbase软件预测miR-186-3p与XIST RNA互补结合;双荧光素酶报告基因实验显示,XIST野生型载体+miR-186-3p模拟物质粒共转染的细胞相对荧光素酶活性低于XIST野生型载体+miR-186-3p空载质粒共转染的细胞(P<0.001)。结论miR-186-3p可能直接与XIST RNA结合而下调TGF-β-Smad信号通路活性,进而增强子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭活性。

miR-186-5p通过抑制Twist1诱导人皮肤成纤维细胞衰老

目的探讨miR-186-5p对人皮肤成纤维细胞衰老的影响及其机制。方法采用实时定量PCR方法检测miR-186-5p的表达,应用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色、CCK-8和EdU等方法研究miR-186-5p对人真皮成纤维细胞(HDFs)衰老的作用。通过生物信息学分析、荧光素酶报告试验、实时定量PCR、Western blot和免疫组化法证实miR-186-5p的下游靶基因。结果首次发现miR-186-5p在传代衰老的HDFs和老年人皮肤真皮组织中表达上调。miR-186-5p的过表达抑制了HDFs细胞的增殖,同时增强了衰老相关指标p16、p21和SA-β-gal的表达。双荧光素酶报告分析显示Twist1是miR-186-5p的下游靶基因。结论miR-186-5p可通过抑制Twist1诱导HDFs衰老,其可能成为干预皮肤老化的潜在靶点。