参地颗粒对C-BSA大鼠肾组织miRNA-193a和WT-1 mRNA表达的干预作用

目的观察参地颗粒对C-BSA大鼠肾组织中miRNA-193a和WT-1 mRNA的干预作用。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、参地颗粒组、缬沙坦组各10只。参地颗粒组给予参地颗粒水溶液4.0 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组给予缬沙坦胶囊混悬液20 mg/(kg·d)灌胃,正常组、模型组予生理盐水灌胃,每次3 mL,每天1次,连续给药8周后处理动物、留取尿液和肾脏标本。酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿白蛋白和尿肌酐浓度、尿Nephrin和Podocalyxin含量,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾组织中WT-1及miRNA-193a mRNA表达。透射电镜观察肾小球超微结构图,并计算肾小球基底膜(GBM)平均厚度(TGBM)。结果与正常组比较,模型组大鼠的尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)、尿Nephrin和Podocalyxin含量、肾组织miR-193a mRNA表达量、TGBM均显著升高,而WT-1 mRNA表达量显著减少(P<0.05)。与模型组比较,参地颗粒组和缬沙坦组大鼠的UACR、尿Nephrin和Podocalyxin含量、肾组织miR-193a mRNA表达量、TGBM均显著下降,WT-1 mRNA表达量显著增加(P<0.05);且参地颗粒组的UACR、尿Podocalyxin、miR-193a和WT-1 mRNA表达量、TGBM变化均显著优于缬沙坦组(P<0.05)。正常组肾小球足细胞结构正常,模型组足突可见大部分融合或消失,基底膜弥漫性增厚,上皮下可见大块电子致密物沉积。参地颗粒组和缬沙坦组的足细胞结构较模型组有所改善。结论参地颗粒可能通过抑制C-BSA大鼠肾组织中miR-193a表达,并上调WT-1表达,进而减轻足细胞损伤,发挥降低尿蛋白作用。

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系(NC为对照组),利用CCK-8(cell counting kit-8)实验、Transwell实验及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异有统计学意义(P<0.01):与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡:miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+空质粒组比较,miR-193a-3p+TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。

肺鳞癌组织miRNA-193a及miRNA-4286水平与预后的关系

目的探讨肺鳞癌患者肿瘤组织中微小RNA(miRNA)-193a和miRNA-4286的表达水平与预后的关系,为肺癌预后评价提供新方向。方法选取2016年5月—2019年4月上海交通大学医学院附属新华医院确诊且临床资料完整的126例肺鳞癌患者为研究对象,通过实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测肺鳞癌组织和癌旁组织miRNA-193a和miRNA-4286的表达水平,分析肺鳞癌组织miRNA-193a和miRNA-4286与临床资料和预后的关系。结果肺鳞癌组织中miRNA-193a相对表达量低于癌旁组织,miRNA-4286相对表达量高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.05);肺鳞癌组织内miRNA-193a和miRNA-4286水平与年龄、性别、吸烟史和家族史无关联,差异无统计学意义(P>0.05),与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和复发情况有关联,差异均有统计学意义(均P<0.05);肺鳞癌组织内miRNA-193a与分化程度无关联(P>0.05),而miRNA-4286与分化程度有关联(P<0.05)。肺鳞癌组织miRNA-193a低表达患者的中位生存期为36个月(95%CI:0.371~1.198),而高表达患者为54个月(95%CI:0.834~2.696),差异有统计学意义(P<0.05);肺鳞癌组织miRNA-4286低表达患者的中位生存期为51个月(95%CI:0.962~2.660),而高表达患者为39个月(95%CI:0.376~1.039),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺鳞癌组织miRNA-193a和miRNA-4286表达水平与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和复发情况有关联,且与患者预后有关,miRNA-193a和miRNA-4286可能成为评价肺鳞癌患者预后的指标。

血清microRNA-21、microRNA-193a-3p表达与结直肠癌患者手术预后的关系

目的探究血清microRNA-21(miR-21)、microRNA-193a-3p(miR-193a-3p)水平与结直肠癌患者手术预后的关系。方法回顾性分析2020年1月—2022年1月苏州大学附属第一医院收治112例结直肠癌患者的病历资料。患者均接受结直肠癌根治术,术后随访16个月,记录患者的预后生存结局,多因素逐步Logistic回归分析结直肠癌患者手术预后的影响因素,评估血清miR-21、miR-193a-3p对结直肠癌患者预后的预测效能。结果112例结直肠癌患者死亡22例,病死率为19.64%;生存90例,生存率为80.36%。死亡组术前血清miR-21 mRNA相对表达量、临床分期Ⅲ期占比、淋巴结转移率均高于生存组(P<0.05),血清miR-193a-3p m RNA相对表达量低于生存组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示,临床分期Ⅲ期[OR=3.777(95%CI:1.399,10.194)]、淋巴结转移[OR=5.099(95%CI:1.715,15.156)]、miR-21表达升高[OR=4.889(95%CI:1.645,14.533)]、miR-193a-3p表达降低[OR=4.402(95%CI:1.481,13.084)]均是直肠癌患者预后的影响因素(P<0.05)。受试者工作特性曲线分析结果显示,血清miR-21、miR-193a-3p单一及联合预测结直肠癌预后的敏感性分别为69.04%(95%CI:0.487,0.813)、72.73%(95%CI:0.495,0.884)、86.36%(95%CI:0.640,0.964),特异性分别为62.22%(95%CI:0.513,0.720)、68.89%(95%CI:0.581,0.780)、90.00%(95%CI:0.814,0.950),曲线下面积分别为0.782、0.731和0.901。结论结直肠癌患者术前miR-21、miR-193a-3p表达与术后预后密切相关,且在结直肠癌患者的预后结局中表现出良好的预测效能。

局部晚期食管癌患者血清miR-193b、miR-330-5p水平与新辅助放化疗疗效的关系

目的探讨局部晚期食管癌患者血清微小RNA-193b(miR-193b)、miR-330-5p水平与新辅助放化疗疗效的关系。方法选取局部晚期食管癌患者180例,qRT-PCR法检测患者血清miR-193b、miR-330-5p。于新辅助放化疗后评估放化疗疗效,将完全缓解+部分缓解患者定义为放化疗有效者,疾病进展+稳定患者定义为放化疗无效者。比较新辅助放化疗有效与无效的局部晚期食管癌患者临床资料,取有统计学差异的临床资料进一步纳入多因素Logistic回归分析。采用多因素Logistic回归分析局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的影响因素,并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-193b、miR-330-5p对局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的预测价值。结果180例局部晚期食管癌患者中行新辅助放化疗有效者84例、无效者96例,新辅助放化疗有效与无效的局部晚期食管癌患者肿瘤分化程度、肿瘤N分期、血清miR-193b、血清miR-330-5p比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,低血清miR-193b、低血清miR-330-5p是局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-193b、血清miR-330-5p预测局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的AUC依次为0.752、0.777,两项指标联合预测局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的AUC为0.829。结论行新辅助放化疗有效的局部晚期食管癌患者血清miR-193b、miR-330-5p水平高于放化疗无效的患者,血清miR-193b、miR-330-5p低水平是局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的独立危险因素,两者联合对局部晚期食管癌新辅助放化疗疗效具有一定预测价值。

胎衣不下奶牛miRNA-185靶向调控血管内皮生长因子A表达的研究

【目的】通过体内和体外试验检测miRNA-185及血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在胎衣正常排出和胎衣不下(RFM)奶牛胎盘组织中的差异表达情况及VEGFA在奶牛母体胎盘组织中表达分布,验证及明确miRNA-185和VEGFA与奶牛胎衣不下发生密切相关并存在靶向调节关系,为深入研究miRNA-185在奶牛胎衣不下发生过程中的作用提供理论依据和试验基础。【方法】采用实时荧光定量PCR法检测胎衣正常排出及胎衣不下奶牛母体胎盘组织中miRNA-185及VEGFA基因表达情况,采用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFA在母体胎盘组织的表达分布及mRNA的差异表达情况;采用双荧光素酶明确miRNA-185与VEGFA的靶向调节关系,采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测体外转染miRNA185 mimics、miRNA-185 inhibitor及miRNA-185 NC后VEGFA mRNA及蛋白的差异表达情况。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,与胎衣正常排出奶牛相比,胎衣不下奶牛体内miRNA-185及VEGFA的表达水平均极显著下调(P<0.01);荧光原位杂交结果显示,VEGFA mRNA主要在奶牛子宫内膜上皮细胞中表达。VEGFA是miRNA-185的靶向调节蛋白。与阴性对照组相比,转染miRNA-185 mimics后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),转染miRNA-185 inhibitor后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01)。【结论】胎衣不下奶牛母体胎盘组织内miRNA-185及VEGFA表达显著降低,VRGFA主要在子宫内膜上皮细胞中表达,miRNA-185可通过靶向调控VEGFA的表达参与奶牛胎衣不下的发生发展。

胃癌根治性切除患者术前血清外泌体miR-193a和miR-208b水平表达及其对预后预测价值研究

目的探究胃癌(gastric cancer,GC)患者在根治性手术前血清外泌体微小核糖核酸(micro RNA,miR)-193a和微小核糖核酸(microRNA,miR)-208b水平表达及其预后预测价值。方法以新疆医科大学第一附属医院2018年3月~2020年3月收治的132例GC根治性切除术前患者为GC组,同期132例体检健康者为对照组。收集对比患者临床病理资料。血清外泌体miR-193a和miR-208b相对表达水平的检测采用实时荧光定量PCR(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)法,Pearson法分析miR-193a和miR-208b的相关性。GC患者术前血清外泌体miR-193a,miR-208b表达与术后患者预后相关性采用Kaplan-Meier法分析;单因素及多因素COX回归分析患者预后的影响因素。结果GC组外泌体miR-208b表达水平较对照组明显升高(1.77±0.14 vs 1.02±0.01),miR-193a表达水平明显降低(0.52±0.06 vs 1.01±0.01),差异具有统计学意义(t=92.551,61.392,均P<0.05)。GC患者术前miR-193a与miR-208b的表达水平呈负相关(r=-0.409,P<0.05)。患者中TNM分期为I+II期、无淋巴结转移、无远处转移的miR-193a低表达比例和miR-208b高表达比例明显低于TNM分期为III+IV、有淋巴结转移、有远处转移患者,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.008,4.397;7.142,4.688;4.407,5.189,均P<0.05)。miR-193a低表达患者三年累积生存率(30.43%)显著低于高表达(60.32%)患者(χ^(2)=17.861,P<0.001),miR-208b高表达患者三年累积生存率(27.14%)低于低表达(64.52%)患者(χ^(2)=16.340,P<0.001)。血清外泌体miR-193a(HR=0.493,95%CI:0.323~0.753)和miR-208b水平(HR=2.697,95%CI:1.382~5.262)是患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论术前血清外泌体miR-193a水平降低,miR-208b水平升高,两者表达水平与GC根治性切除术患者的预后有关。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察微小RNA(miRNA)-5582对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法采用加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)数据库分析miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床分期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞株A2780、HO-8910、OC3、SK-OV-3和正常卵巢上皮细胞株IOSE80中miRNA-5582的表达,miRNA-5582表达最低的SK-OV-3细胞株分为对照组和miRNA-5582组,分别转染miR-NC模拟物和miRNA-5582模拟物。MTS法和Transwell实验分别检测SK-OV-3细胞增殖及侵袭。以microRNA.org和miRWalk3.0数据库检索miRNA-5582的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-5582的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因表达。结果miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.01)。miRNA-5582表达水平与卵巢癌患者的临床分期呈负相关(P<0.01)。miRNA-5582在卵巢癌细胞株中表达均显著低于IOSE80细胞(P<0.05),SK-OV-3细胞中miRNA-5582表达最低(P<0.01)。对照组和miRNA-5582组的miRNA-5582相对表达量为1.42±0.73和10.46±0.91,转染体系构建成功(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞活性在第3、第4和第5天显著低于对照组(P<0.05)。对照组和miRNA-5582组侵袭细胞数分别为(49.48±3.78)和(15.77±3.40)个,miRNA-5582组细胞侵袭数量显著少于对照组(P<0.01)。miRNA-5582的靶基因是丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(SRSF3)(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞SRSF3基因表达显著低于对照组(P<0.01)。结论miRNA-5582在卵巢癌组织和细胞株中低表达,上调miRNA-5582通过抑制SRSF3基因表达降低卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力,miRNA-5582可能为卵巢癌的防治提供新的靶点。

抑制miRNA-376c-3p对肾透明细胞癌生长的影响

目的探究miRNA-376c-3对肾透明细胞癌(ccRCC)中肿瘤细胞生长的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC中miRNA-376c-3p的表达。体外培养786-O细胞,随机分为对照组、miR-376c-3p inhibitor组(转染miR-376c-3p inhibitor)、miR-376c-3p mimics组(转染miR-376c-3p mimics)、阴性对照组(转染miR-376c-3p阴性对照),分组转染后以RT-PCR检测4组细胞miRNA-376c-3p表达;以Ki67免疫荧光染色、集落生成实验检测4组786-O细胞增殖;以TUNEL染色检测4组786-O细胞凋亡;以免疫荧光染色检测4组786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达并比较其Bax/Bcl-2。于右腋窝皮下接种上述4组786-O细胞建立其裸鼠移植瘤模型,3周后测定其肿瘤体积与质量;以Ki67免疫荧光染色、TUNEL染色分别检测4组裸鼠肿瘤细胞增殖与凋亡。结果与HKC细胞比较,ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN中miR-376c-3p表达降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-376c-3p inhibitor组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比升高(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比降低(P<0.05);miR-376c-3p mimics组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比降低(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比升高(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05)。结论抑制miRNA-376c-3p可削弱ccRCC细胞增殖及集落生成活性,促进其凋亡,并在裸鼠体内抑制其移植瘤生长。

超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC颈部淋巴结转移的临床价值

目的 研究超声及血清细胞角蛋白19(CK-19)、半乳糖凝集素3(Galectin-3)及微小核糖核酸-363(miRNA-363)联合诊断甲状腺微小乳头状癌(PTMC)颈部淋巴结转移(CLNM)的临床价值。方法 回顾性选取2021年7月至2023年6月在天津市环湖医院诊断的PTMC患者92例纳入研究组,选择同期本院收治的结节性微小甲状腺肿患者92例纳入对照组。观察两组病灶情况及超声特点;比较两组血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平,研究组是否发生CLNM患者病灶超声特点及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平。分析PTMC~CLNM超声特点与血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平的相关性。结果 研究组多枚病灶、病灶>0.5 mm、病灶纵横比≥1、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、病灶低回声、淋巴结肿大占比分别为70.65%、71.74%、82.61%、61.96%、72.83%、80.43%、84.78%、70.65%,均大于对照组(31.52%、52.17%、27.17%、25.00%、19.57%、15.22%、66.30%、22.83%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组血清CK-19、Galectin-3水平分别为(30.45±3.31)、(4.68±0.48)μg/L,均高于对照组[(7.05±0.73)、(1.72±0.19)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.89±0.30) fmol/L,低于对照组[(4.30±0.46) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、淋巴结肿大占比分别为90.91%、86.36%、95.45%、100.00%、90.91%,均大于未发生CLNM患者(64.29%、54.29%、0、25.00%、64.29%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者血清CK-19、Galectin-3水平(41.20±4.42)、(5.94±0.62)μg/L,均高于未发生CLNM患者[(24.36±2.71)、(3.25±0.34)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.14±0.23) fmol/L,低于未发生CLNM患者[(3.46±0.36) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、淋巴结肿大及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平均与CLNM呈正相关(P<0.05)。结论 超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC~CLNM具有较高的临床价值。

miRNA-195在腹主动脉瘤血管平滑肌细胞中作用机制探讨

目的探讨miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤中表达及对血管平滑肌细胞的作用。方法建立大鼠腹主动脉瘤模型,实时荧光定量PCR检测miRNA-195在腹主动脉瘤组织中的表达量;血管平滑肌细胞中转染miRNA抑制物,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测MMP-2、MMP-9和OPN蛋白表达。结果miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤组织中呈高表达;血管平滑肌细胞中转染miRNA-195抑制物后,转染组细胞的增殖能力在48 h、72 h和96 h比对照组提高40.5%(P<0.05)、39.7%(P<0.01)、36.1%(P<0.001),且转染组细胞凋亡率比对照组降低35.6%(P<0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白和OPN蛋白在转染组中表达量分别比对照组降低45.4%、36.8%和48.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-195表达升高导致血管平滑肌细胞数量减少,并可能通过上调MMP-2和MMP-9蛋白表达致细胞外基质发生降解,从而促进腹主动脉瘤的形成和发展。

结合图自动编码器和结构化注意力机制的miRNA-疾病关联预测方法

MicroRNA(miRNA)-疾病关联预测的研究有助于人类进行疾病预防、诊断和治疗等,许多研究人员开发出了基于图自动编码器的miRNA-疾病关联预测方法,然而大多数编码器方法在对中心节点编码的时候并没有考虑到邻居节点之间的差异。因此,本文提出一种结合图自动编码器和结构化注意力机制的miRNA-疾病关联预测方法(SAAE)。SAAE模型使用基于图神经网络的编码器,该编码器采用多个编码层堆叠的方式以探索多阶邻居的信息。为了将中心节点与邻居节点不同权重的特征信息进行融合并捕获节点在图中的高阶结构信息,引进结构化注意力机制对图节点的原始信息进行编码,以生成新的特征信息。随后,通过解码器进行解码,解码后的特征信息使用随机森林算法挖掘miRNA和疾病节点之间的潜在联系。实验结果表明,SAAE在5倍交叉验证的曲线下的平均面积为94.53%。此外,本文还进行了关于肾脏肿瘤和肺部肿瘤的2个案例研究,验证了SAAE预测的有效性。

miRNA-21、白细胞介素-17、缺氧诱导因子-1α在多发性骨髓瘤患者中的表达水平及临床意义

目的探讨微小RNA-21(miRNA-21)、白细胞介素-17(IL-17)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义。方法选取78例多发性骨髓瘤患者和64例健康体检者,分别作为研究组和对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测两组受试者miRNA-21水平,酶联免疫吸附试验检测两组受试者血清IL-17、HIF-1α水平。比较两组受试者、不同预后情况多发性骨髓瘤患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平。采用Pearson相关分析法分析多发性骨髓瘤患者miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平的相关性。采用Cox风险比例回归模型分析多发性骨髓瘤患者预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA-21、IL-17、HIF-1α单独及联合检测对多发性骨髓瘤的诊断价值及对预后的预测价值。比较不同miRNA-21、IL-17、HIF-1α表达情况多发性骨髓瘤患者的生存情况。结果研究组患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良多发性骨髓瘤患者miRNA-21、IL-17、HIF-1α水平均明显高于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多发性骨髓瘤患者miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平均呈正相关(r=0.447、0.462,P﹤0.05)。miRNA-21、IL-17、HIF-1α均是多发性骨髓瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-21、IL-17、HIF-1α联合检测诊断多发性骨髓瘤的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于三者单独检测;miRNA-21、IL-17、HIF-1α联合检测预测多发性骨髓瘤患者预后的AUC、灵敏度、阴性预测值均高于三者单独检测。miRNA-21、IL-17、HIF-1α高表达组多发性骨髓瘤患者的2年累积生存率分别低于miRNA-21、IL-17、HIF-1α低表达组患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论多发性骨髓瘤患者中miRNA-21、IL-17、HIF-1α均高表达,且miRNA-21与IL-17、HIF-1α水平均呈正相关,三者联合检测可较好地诊断多发性骨髓瘤及预测预后,有助于临床及早采取有效的防治措施,改善多发性骨髓瘤患者的预后情况。

miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系

目的 探讨miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系。方法 选取2021年1月至2022年12月商丘市第一人民医院收治的CHD患者86例为观察组,选取70名同期院内健康体检者作为对照组。对比两组血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;分析影响CHD冠脉病变的单因素,采用Logistic回归分析影响CHD冠脉病变的单因素、多因素;对比不同CHD冠脉病变类型的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;对比不同CHD冠脉病变支数的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平。结果 观察组miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素分析显示,患有高血压、糖尿病以及miRNA-223>1.5、miRNA-21>6.0、miRNA-27a>5.5均是影响CHD冠脉病变的独立危险因素(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:急性心肌梗死>不稳定型心绞痛>稳定型心绞痛,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:三支>双支>单支,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同冠脉病变CHD患者miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平不同,提示以上指标对判断CHD患者冠脉病变类型具有一定的临床价值。

温阳复元方通过调控miRNA-137/线粒体铁死亡通路保护大鼠脑缺血再灌注损伤机制研究

目的探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制。方法线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组。采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平。结果(1)NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P<0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P<0.05),而WYFY组在24 h和3 d的NFS明显降低(P<0.05或P<0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P<0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P<0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P<0.05)。(2)TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P<0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P<0.05或P<0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P<0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P<0.05),而WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P<0.05)。(3)miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137mRNA的表达较SO组显著下降(P<0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P<0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P<0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P<0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P<0.01)。(4)FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P<0.01),WYFY组能显著增加其表达(P<0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P<0.05或P<0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P<0.01)。(5)DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P<0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P<0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P<0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3 d时均降低(P<0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P<0.01)。结论温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤。

MiRNA-122在运动改善非酒精性脂肪肝中的作用

背景:近年来,随着人们生活水平的提高,非酒精性脂肪肝有逐渐增多的趋势。miRNA-122是肝脏中最丰富的miRNA之一,在维持肝脏内环境稳定和分化中起重要作用。运动训练是非酒精性脂肪肝的非药物治疗手段,运动可能通过调节肝脏miRNA-122的表达改善肝脏脂代谢等过程。目的:综述miRNA-122对非酒精性脂肪肝相关病理因素的影响,以及运动对miRNA-122表达和非酒精性脂肪肝发生发展的影响。方法:第一作者检索中国知网、万方数据库和维普数据库、PubMed、Geenmedical、EBSCO、Medline、Web of Science和Elsevier数据库,以“non-alcoholic fatty liver disease,microRNA,microRNA-122,lipid metabolism,inflammatory response,insulin resistance,exercise,physical exercise,exercise training”为英文检索词,以“非酒精性脂肪肝,microRNA,microRNA-122,脂代谢,炎症反应,胰岛素抵抗,运动,体育活动”为中文检索词,检索2022-06-05前发表的所有相关文献,并对其进行了筛选、归纳、分析、总结,最后纳入68篇文献进行综述。结果与结论:①与健康对照组相比,非酒精性脂肪肝患者循环miRNA-122表达升高,miRNA-122在非酒精性脂肪肝的不同阶段表现出不同的表达情况。②miRNA-122可通过靶向mRNA上的碱基互补配对位点或直接作为某些RNA受体的生理配体调控下游相关蛋白的表达,影响非酒精性脂肪肝脂代谢、炎症反应和胰岛素抵抗等致病因素。③不同的运动方式对非酒精性脂肪肝均有改善作用,对于非酒精性脂肪肝患者,每周需要完成至少120 min的中等强度运动才可产生积极作用;对于能够耐受各种运动的非酒精性脂肪肝患者,应优先考虑每周进行四五次有氧和抗阻运动结合的训练。运动强度应为最大心率的50%-70%,并持续>3个月;而对于耐受力较差的非酒精性脂肪肝患者,抗阻运动可能比有氧运动更可行;此外,非酒精性脂肪肝患者还可根据自身的疾病情况(如肝酶、脂质水平)选择运动方式。④运动可作为防治非酒精性脂肪肝、减轻肝脂肪变性、降低肝脏炎症反应和胰岛素抵抗的可行策略。⑤运动训练可调控机体miRNA-122的表达,但在非酒精性脂肪肝患者中,运动对miRNA-122及其相关信号通路的影响还有待研究。

基于miRNA-29c/白血病抑制因子轴探讨针刺调节脾虚大鼠肠道炎症机制研究

目的观察针刺调节miRNA-29c/白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)轴改善脾虚大鼠结肠炎症机制,探讨“健脾益气”针刺疗法改善脾虚便溏症状现代作用机理。方法将60只SD雄性大鼠以随机数字表法分为正常组、模型组、非经非穴组、针刺组,每组15只。除正常组外,其余3组采用劳倦过度和不规律饮食复合方法建立脾虚证大鼠模型。造模成功后,针刺组电针“足三里”穴及“脾俞”穴干预治疗,非经非穴组给予电针尾尖作为对照干预,每日1次/20 min,共治疗14 d。治疗结束后,取大鼠结肠组织及全血。qPCR检测大鼠结肠组织miRNA-29/LIF轴相关基因的表达;Western blot检测大鼠白介素-6(interleukin6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)的表达;ELISA检测结肠组织中白介素-1β(interleukin1β,IL-1β)、白介素-18(interleukin18,IL-18)的含量;HE染色法观察大鼠结肠组织病理形态变化;TUNEL染色观察各组结肠组织凋亡情况;流式细胞术观察外周血单个核细胞(PBMC)凋亡状况。结果与正常组相比,模型组大鼠结肠组织LIF的表达水平明显下降(P<0.05),miRNA-29、IL-1β、IL-6、白介素-8(interleukin18,IL-8)、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所升高(P<0.05);与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织LIF表达水平明显升高(P<0.05),miRNA-29c、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达以及IL-6、TNF-α蛋白表达水平有所降低(P<0.05),非经非穴组差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,模型组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18表达水平明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠结肠组织中促炎因子IL-1β、IL-18的表达水平有所降低(P<0.05)。另外HE染色结果显示,针刺治疗可有效减轻结肠黏膜组织中炎症细胞浸润和杯状细胞的损失;TUNEL染色结果显示,针刺可以抑制miRNA-29c/LIF轴,改善脾虚大鼠结肠炎症,抑制结肠黏膜细胞凋亡;流式细胞术结果显示与正常组相比,模型组、非经非穴组大鼠PBMC凋亡率明显升高(P<0.05),与模型组相比,针刺组大鼠PBMC细胞凋亡率有所降低(P<0.05)。结论电针“足三里”“脾俞”穴可以调节miRNA-29c/LIF轴,抑制肠道炎症和促炎症介质的表达,进而抑制血液、结肠黏膜细胞凋亡,提高机体免疫力,从而改善脾虚便溏症状。

血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平对早期肝细胞癌的诊断价值

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤医院2020年3月至2022年3月收治的HCC患者186例(HCC组)、肝硬化患者120例(肝硬化组)、接受体检的健康人员120例(对照组)为研究对象。比较各组血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,并比较HCC组不同病理特征患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3对早期HCC的诊断价值。结果HCC组、肝硬化组和对照组患者血清miRNA-574-5p(1.09±0.33比0.84±0.27比0.61±0.18)、miRNA-106b(1.22±0.39比0.71±0.22比0.56±0.19)、hs-AFP-L3[(23.08±4.36)μg/L比(2.61±0.79)μg/L比(0.47±0.14)μg/L]水平差异有统计学意义,HCC组患者各项指标均显著高于肝硬化组和对照组,肝硬化组患者各项指标均显著高于对照组(P均<0.05)。HCC肿瘤个数为多发、肿瘤最大径≥5 cm、中晚期、有远处转移、有静脉瘤栓患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平分别高于单发[miRNA-574-5p:1.24±0.43比0.83±0.27;miRNA-106b:1.46±0.45比0.97±0.31;hs-AFP-L3:(25.73±5.21)μg/L比(19.15±4.25)μg/L]、肿瘤最大径<5 cm[miRNA-574-5p:1.29±0.46比0.82±0.24;miRNA-106b:1.51±0.44比0.95±0.29;hs-AFP-L3:(26.82±5.03)μg/L比(19.12±3.99)μg/L]、早期[miRNA-574-5p:1.31±0.44比0.90±0.28;miRNA-106b:1.49±0.51比0.99±0.32;(26.60±4.98)μg/L比(18.94±4.02)μg/L]、无远处转移[miRNA-574-5p:1.36±0.46比0.88±0.25;1.45±0.41比0.96±0.32;hs-AFP-L3:(26.79±5.44)μg/L比(19.04±3.83)μg/L]、无静脉瘤栓患者[miRNA-574-5p:1.39±0.43比0.92±0.31;miRNA-106b:1.43±0.39比1.0±0.34;hs-AFP-L3:(26.41±4.54)μg/L比(20.11±4.01)μg/L](P<0.05);肝功能Child-Pugh分级A级、B级、C级患者血清miRNA-574-5p(0.85±0.26比1.08±0.37比1.27±0.40)、miRNA-106b(0.92±0.29比1.15±0.35比1.41±0.38)、hs-AFP-L3[(18.69±3.72)μg/L比(23.17±4.88)μg/L比(26.45±5.32)μg/L]含量逐渐增加(P均<0.05)。miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测诊断早期HCC的曲线下面积为0.919(95%CI为0.873~0.980),敏感度和特异度分别为0.882、0.901。结论miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测对早期HCC的诊断具有较高的临床价值。

前列腺癌患者miRNA-218表达水平与临床-病理特征及预后的关系

目的探讨前列腺癌患者微小RNA(miRNA)-218表达水平与临床-病理特征及预后的相关性。方法选取2019年1月至12月于新乡医学院第一附属医院泌尿外科就诊的98例前列腺癌患者(前列腺癌组)、40例前列腺增生患者(前列腺增生组)及40例健康体检者(对照组)作为研究对象,分析并比较三组miRNA-218表达水平的差异。单因素分析前列腺癌患者miRNA-218表达水平与临床-病理特征的关系。对所有患者随访12~36个月,其中发生骨转移、远处转移及局部复发定义为预后不良,前列腺癌患者预后不良的影响因素采用Logistic回归分析,miRNA-218表达水平预测前列腺癌预后不良的效能采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果对照组、前列腺增生组和前列腺癌组miRNA-218表达水平依次为4.03±0.46、3.99±0.65和2.75±0.32,三组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);前列腺癌组miRNA-218表达水平显著低于对照组和前列腺增生组,差异具有统计学意义(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、Gleason评分≥8分的前列腺癌患者miRNA-218表达水平分别低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、Gleason评分<8分患者(P<0.05)。经随访,患者发生骨转移19例,局部复发31例,远处转移26例。与前列腺癌无骨转移、无局部复发及无远处转移患者比较,miRNA-218表达水平在有骨转移、存在局部复发及远处转移患者中显著降低(P<0.05)。Logistic回归分析证实,TNM分期(OR=1.393)和Gleason评分(OR=1.555)是影响前列腺癌患者预后不良的危险因素,miRNA-218表达水平(OR=0.654)是前列腺癌患者预后不良的保护因素。ROC曲线显示,miRNA-218表达水平预测前列腺癌患者出现预后不良的AUC为0.874,当截断值为2.82,诊断灵敏度和特异度分别95.33%和94.12%。结论miRNA-218在前列腺癌患者血浆中低表达可能与前列腺癌的发生发展及预后有关,有望成为预测前列腺癌预后的生物学标志物。