高分辨率溶解曲线分析miRNA-196a2基因多态性与肺癌相关性

目的探讨microRNA-196a2基因多态性（rs1614913）与中国人群肺癌发病相关性。方法应用高分辨率溶解曲线（high resolution melting,HRM）分析技术对32例肺癌患者、27例肺部良性肿瘤患者及84例健康个体的microRNA-196a2基因多态性进行分析,并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-restriction fragment length polymorphism,PCRRFLP）技术加以佐证。结果 micro-196a2在各组基因型分布均达到Hardy-Weinberg平衡。肺癌组C等位基因的分布频率高于对照组（P=0.0016）,OR=2.592（95%CI1.424～4.716）,说明C等位基因增加肺癌患病风险。结论 MicroRNA-196a2T/C（rs1614913）多态性增加肺癌的发病风险。MicroRNA-196a2基因多态性rs1614913可能是肺癌的一种有效的遗传标记物。

miRNA-196a2 rs116149131基因多态性与胃癌患病风险的Meta分析

目的探讨microRNA（miRNA）-196a2 rs116149131基因多态性与胃癌易感性的关系。方法计算机检索Pub Med、EMBASE、Cochrane library、中国知网、维普、万方及中国生物医学文献（CBD）等数据库中2016年3月1日之前关于miRNA-196a2 rs116149131基因多态性与胃癌易感性的相关研究。按纳入与排除标准筛选文献、提取资料并评价纳入研究的质量后,采用Stata 12.0软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%CI,并进行发表偏倚评估及敏感性分析。结果共纳入9篇文献,包括3992例患者和5699例对照。Meta分析结果显示,miRNA-196a2 rs116149131基因多态性与胃癌易感性无明显相关性。按种族进行亚组分析结果显示,rs116149131基因多态性在杂合子模型中显著增加高加索人种胃癌患病风险（CT vs.TT：OR=1.93,95%CI：1.35-2.75,P〈0.05）;而在亚洲人种中未发现该位点多态性与胃癌易感性有关。根据对照组人群的来源进行亚组分析结果显示,在以医院和以人群为基础的研究中均未发现有与胃癌易感性相关的等位基因或者基因型。在T〈C亚组中,显性基因模型（CT＋CC vs.TT：OR=1.40,95%CI：1.10-1.77,P=0.005）、纯合子模型（CC vs.TT：OR=1.59,95%CI：1.22-2.06,P=0.001）和杂合子模型（CT vs.TT：OR=1.33,95%CI：1.04-1.70,P=0.025）中发现rs116149131基因多态性与胃癌患病风险存在关联性;在等位基因模型和隐性基因模型中并未发现关联性。在T〉C组未发现rs116149131多态性与胃癌患病风险存在关联性。结论 miRNA-196a2 rs116149131基因多态性与胃癌患病风险无关联性,但存在种族差异。

miRNA-30b-3p靶向ZNRF1调控草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激的研究

目的探索miRNA-30b-3p靶向ZNRF1调控草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激的研究并探讨其作用机制。方法将0.2、0.6μmol/L的草酸钠处理HK-2细胞,miR-30b-3p mimic和miR-30b-3p inhibitor及其相对应的对照物转染到HK-2细胞,CCK-8、Transwell和划痕实验分别检测HK-2细胞的增殖、侵袭和迁移能力;流式细胞术测量细胞内ROS,ELISA法检测LDH、MDA、GSH活性,蛋白质印迹分析Bax、Bcl-2的表达情况;荧光素酶报告基因检测验证miRNA-30b-3p及ZNRF1之间的靶向关系;RNA免疫沉淀分析miRNA-30b-3p及ZNRF1之间的作用关系。结果草酸钠处理HK-2显著增加ROS,LDH和MDA水平,GSH含量明显降低(P<0.01),抑制HK-2细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,与草酸钠的浓度呈现剂量依赖关系,miR-30b-3p促进草酸钠诱导对HK-2细胞的影响;靶标预测和荧光素酶测定表明ZNRF1是HK-2细胞中miR-30b-3p的直接靶标,且沉默ZNRF1逆转miR-30b-3p对草酸钠诱导的HK-2细胞损伤的影响。结论miRNA-30b-3p靶向ZNRF1促进草酸钠诱导的HK-2细胞凋亡和氧化应激,抑制其增殖、侵袭和迁移。

Mfn2、miRNA-101调控转化生长因子-β1参与肝泡型包虫病肝纤维化的研究

目的 探讨Mfn2、miRNA-101通过TGF-β1调控肝泡型包虫病肝纤维化的潜在作用。方法 收集2020年7月-2020年10月青海省人民医院确诊的20例肝泡型包虫病患者术后切除的肝组织,采集距肝脏病灶边缘2 cm以外正常肝组织、距肝脏病灶边缘2 cm以内肝组织。行HE、Masson染色,将不同标本纤维化分级,通过免疫组化、RT-qPCR检测Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的表达。结果 Mfn2、TGF-β1、α-SMA、miRNA-101在不同级别纤维化组织中的差异表达均具有统计学意义(P<0.05)。Mfn2与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),miRNA-101与TGF-β1、α-SMA表达量均呈负相关(P<0.05),TGF-β1与α-SMA表达量呈正相关(P<0.05),Mfn2与miRNA-101表达量无显著相关性(P>0.05)。结论 Mfn2、miRNA-101可能抑制肝泡型包虫病肝纤维化,并且可能通过抑制TGF-β1发挥抗纤维化作用。

miRNA-21对结直肠癌耐药细胞ATM/CHK2/CDC25A信号通路的影响

目的 探讨miRNA-21在结直肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株HCT116/L-OHP中对毛细血管扩张性共济失调突变基因(ATM)/细胞周期检测点激酶(CHK)2/细胞分裂周期素(CDC)25A信号通路的影响。方法 应用细胞转染技术干扰HCT116/L-OHP细胞中miRNA-21的表达,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HCT116/L-OHP中ATM、CHK2、CDC25A和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2 mRNA表达,Western印迹检测该细胞株中miRNA-21表达变化后ATM、CHK2、CDC25A和CDK2蛋白表达。结果 转染miRNA-21 mimic使miRNA-21表达升高时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之升高,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05);转染miRNA-21 inhibitor使miRNA-21表达降低时,ATM、CHK2、CDC25A和CDK2 mRNA和蛋白的表达均随之降低,且与未转染组和阴性转染组相比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 在结直肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP中,miRNA-21对ATM/CHK2/CDC25A信号通路有调控作用,抑制miRNA-21的表达可阻断ATM/CHK2/CDC25A信号通路,进而抑制耐药细胞的无限增殖。

miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2表达的影响

背景与目的:BCR-ABL融合基因是慢性粒细胞白血病发病的分子病理基础,也是诊断慢性粒细胞白血病、观察疗效、评估预后等的有效指标。miRNA-196b在急性粒细胞白血病中低表达并对疾病的发展起主要作用。在慢性粒细胞白血病中miRNA-196b的靶基因为BCR-ABL,miRNA-196b过表达抑制BCR-ABL融合基因的表达。生存素(survivin)是BCR-ABL的一个下游基因,已在多种肿瘤中发现survivin与环氧化酶-2(Cox-2)协同调节细胞的增殖凋亡。本研究旨在探讨miRNA-196b过表达对K562细胞增殖、凋亡及survivin、Cox-2 mRNA表达的影响。方法:实验分为K562-196b组、空载K562-pLV组与K562组,采用CCK-8法检测细胞增殖;采用AnnexinⅤ-PE检测细胞凋亡;采用实时荧光定量PCR法检测Cox-2、survivin mRNA的表达情况。结果:miRNA-196b过表达可以明显抑制K562细胞增殖;K562-196b组细胞凋亡率显著高于K562组(P<0.05);miRNA-196b组中survivin基因显著低表达(P<0.05),Cox-2基因中无明显变化(P>0.05)。结论:miRNA-196b对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡有显著作用;miRNA-196b过表达可下调survivin基因的表达,为miRNA-196b作为慢性粒细胞性白血病的治疗靶点提供了依据。

血清miRNA-196a联合糖类抗原125、糖类抗原19-9对宫颈癌的诊断价值

目的探讨血清miRNA-196a联合糖类抗原19-9(CA19-9)及CA125诊断宫颈癌的临床价值。方法选取180例宫颈癌患者(宫颈癌组)、50例宫颈良性肿瘤患者(良性组)及50例健康体检者(对照组)为研究对象,比较不同临床分期宫颈癌患者血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平,比较3组研究对象血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-196a、CA125、CA19-9三者单独及联合检测对宫颈癌的诊断效能。结果Ⅲ~Ⅳ期宫颈癌患者血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平均高于Ⅱ期与Ⅰ期患者,Ⅱ期宫颈癌患者血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平均高于Ⅰ期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组患者血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平均高于良性组和对照组,良性组患者血清miRNA-196a、CA125、CA19-9水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。miRNA-196a、CA125、CA19-9诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)分别为0.793、0.791、0.857,三者的诊断截断值分别为3.17、54.18 U/ml、23.72 U/ml,三者联合检测的AUC为0.950,大于三者单独诊断(P﹤0.05)。结论血清miRNA-196a联合CA19-9、CA125能够显著提高诊断效能,有助于宫颈癌的早期筛查及诊疗。

miRNA-196b靶向抑制IGF2BP1对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miRNA-196b通过靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的机制。方法将miRNA-196b模拟物(mimics)和阴性对照转染至肝癌HepG2 细胞,分别作为阴性对照组和mimics-196b 组,未处理的细胞作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3 组肝癌HepG2 细胞miRNA-196b 和IGF2BP1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测IGF2BP1 和caspase 3 蛋白的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 mimics-196b组细胞miRNA-196b相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,IGF2BP1 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。mimics-196b 组细胞光密度(OD)值和IGF2BP1 蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,细胞凋亡率和caspase 3 蛋白相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。空白对照组和阴性对照组OD值、细胞凋亡率、IGF2BP1和caspase 3蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 miRNA-196b 可能通过靶向抑制IGF2BP1 的表达,抑制肝癌HepG2 细胞的增殖并促进其凋亡。

miRNA-196a-2基因多态位点rs11614913与胃癌易感性的关联研究

目的：探讨miRNA-196a-2的单核苷酸多态（single nucleotide polymorphisms，SNPs）位点rsll614913与胃癌易感性的关系。方法：采用病例一对照研究设计，研究对象为232例经组织学确诊的胃癌病例和250例按年龄、性别进行匹配的无肿瘤史的社区对照人群。采用探针法SNP基因分型技术检测miRNA-196a-2基因的C／T多态的基因型，计算rsll614913多态位点基因型在病例与对照中的分布情况，采用logistic回归计算校正相对危险度（oddsratio，OR）和95％置信区间（95％confidenceinterval，95％CI）．评价基因型对胃癌易感性的影响。结果：miRNA-196a-2基因多态位点rsll614913CC、CT和1Tr基因型在胃癌人群中的分布频率为44．0％、47．0％和9．0％，与对照组（28．8％，54．4％和16．8％）相比差异有统计学意义（均P〈0．05）；与CC基因型相比，携带1Tr或CT基因型的个体胃癌发病危险度降低（OR=0．369，95％CI：0．204～0．659；OR=0．564，95％CI：0．387～0．830）；携带突变T碱基（CT／TT）的胃癌患者发生淋巴结转移的危险度降低（OR=0．618，95％CI：0．438～0．795；P=0．010）。讨论：miRNA-196a-2基因的C／T多态性与中国汉族人群胃癌的遗传易感性相关。

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达;qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达;Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达;CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性(P<0.05),并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力(P<0.05),而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调(P<0.05),Sal可抑制二者表达(P<0.05)。与对照组比较,miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调(P<0.05),miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制(P<0.05),Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用(P<0.05)。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达,Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响NSCLC细胞的生物学行为,发挥抗癌作用。

miRNA-200c/SOX2轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用研究

目的:探讨miRNA-200c/转录因子Y框蛋白2(SOX2)轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、miRNA-200c组和联合组。模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠分别给予慢病毒空载体、miRNA-200c慢病毒过表达载体及miRNA-200c和SOX2慢病毒过表达载体。以牙龈卟啉单胞菌涂抹模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠口腔建立慢性牙周炎模型。检测各组牙周组织miRNA-200c和SOX2表达水平、牙龈指数、釉牙骨质界(CEJ)到牙槽嵴顶(ABC)距离。HE染色分析小鼠牙周组织病理形态学变化。qPCR检测小鼠牙周组织中miRNA-200c和SOX2表达水平。Western blotting检测小鼠牙周组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体因子(RANK)蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠牙周组织中miRNA-200c表达水平降低(P<0.05),SOX2表达水平升高(P<0.05);miRNA-200c组牙周组织中miRNA-200c表达水平高于空白组和模型组,SOX2表达水平低于模型组(P<0.05);联合组牙周组织中miRNA-200c及SOX2表达水平均高于空白组和模型组(P<0.05)。模型组、miRNA-200c组及联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组牙龈指数及CEJ至ABC距离均低于模型组(P<0.05),联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离均高于miRNA-200c组(P<0.05)。Western blotting结果显示,模型组、miRNA-200c组及联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均低于模型组(P<0.05),联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于miRNA-200c组(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组小鼠牙周组织出现明显大量炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂,而miRNA-200c组小鼠这些症状相比于模型组得到显著缓解,但是联合组小鼠相比于miRNA-200c组小鼠也出现了显著的炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂现象。荧光素酶活性检测显示,miRNA-200c mimic能明显降低SOX2野生型荧光素酶活性(P<0.01),而对SOX2突变型荧光素酶活性影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-200c能改善小鼠牙周炎炎症反应及牙槽骨吸收情况,可能与SOX2调控的RANKL/RANK/OPG轴有关。

miRNA-196a-2 rs11614913单核苷酸多态性与中国人群中原发性肝细胞肝癌发病风险的Meta分析

目的系统评价miRNA-196a-2 rs11614913单核苷酸多态性(SNP)与中国人群原发性肝细胞肝癌(HCC)发病风险的关系。方法计算机检索中国知网(CNKI)、维普(VIP)、万方、PubMed、EMBASE、Elsevier数据库,检索时间为从建库到2017年12月,收集miRNA-196a-2 rs11614913 SNP与中国人群原发性HCC发病风险的病例对照研究。采用RevMan 5.3和Stata 11.0软件进行Meta分析。结果共纳入9篇文献,包括3634例原发性HCC患者和5003例对照者。Meta分析结果显示,在显性模型、隐性模型、共显性模型TT/CC基因型中,整体效应差异均有统计学意义(显性模型:OR=0.79,95%CI:0.63~0.99;隐性模型:OR=1.26,95%CI:1.01~1.58;共显性模型TT/CC基因型:OR=0.65,95%CI:0.50~0.83,P﹤0.05);而在共显性模型TT/TC基因型中,整体效应差异无统计学意义(OR=0.92,95%CI:0.83~1.02,P=0.13)。性别、吸烟、饮酒、乙型肝炎病毒(HBV)感染对罹患HCC风险的Meta分析结果显示:男性罹患HCC的风险高于女性(OR=1.43,95%CI:1.15~1.78,P﹤0.01),吸烟、饮酒及HBV感染均能增加罹患HCC的风险(吸烟:OR=1.28,95%CI:1.16~1.42;饮酒:OR=1.36,95%CI:1.13~1.65;HBV感染:OR=11.12,95%CI:7.82~15.90,P﹤0.01)。结论miRNA-196a-2 rs11614913基因多态性与中国人群HCC发病风险有关,携带CC基因型能够增加罹患HCC的风险,此外,男性罹患HCC的风险高于女性,吸烟、饮酒、HBV感染也能增加HCC的发病风险。

miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制

目的探讨miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制。方法取对数生长期人淋巴瘤Jurkat细胞,分别向培养基中加入5 ml生理盐水配制的浓度为0、0.5、1.0、1.5μg/ml的多柔比星,取健康体检者(对照组)的单个核细胞。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-106a以及视网膜母细胞瘤1(RB1)、E2F转录因子1(E2F1)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA的表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测RB1、E2F1、caspase 3蛋白的表达水平。结果0μg/ml多柔比星干预人淋巴瘤Jurkat细胞miRNA-106a的表达水平明显高于对照组单个核细胞(P﹤0.01)。随多柔比星浓度升高、作用时间延长,miRNA-106a表达水平逐渐降低,光密度(OD)值逐渐降低,细胞增殖抑制率(IR)和凋亡率均逐渐升高,RB1、caspase 3 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐升高,E2F1 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,miRNA-106a与RB1、caspase 3的表达均呈负相关(P﹤0.01),与E2F1的表达呈正相关(P﹤0.01)。结论miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中高表达,其可能通过调控RB/E2F1通路相关蛋白的表达来调节淋巴瘤进展。

miRNA-9调控TAB2参与老年动脉瘤患者术后耐甲氧西林革兰阳性菌致颅内感染的机制

目的探讨miRNA-9调控TAB2参与老年动脉瘤患者术后耐甲氧西林革兰阳性菌所致颅内感染的机制。方法回顾性分析行动脉瘤术后耐甲氧西林革兰阳性菌致颅内感染的老年患者79例作为颅内感染组,同期选择健康体检人员79例作为对照组,采用Target Scan预测miRNA-9与TAB2是否有结合位点;qPCR检测两组miRNA-9和TAB2 mRNA表达量;受试者工作特征(ROC)曲线进行分析特异性诊断;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测相关细胞因子白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、S-100b、干扰素(IFN)-γ、C反应蛋白(CRP)在血清中的表达。结果Target Scan软件预测TAB23′UTR中存在miRNA-9的结合位点;两组外周血白细胞分别通过qRT-PCR分析显示miRNA-9和TAB2 mRNA均有表达,但颅内感染组miRNA-9、TAB2 mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05);ROC曲线显示miRNA-9和TAB2 mRNA诊断动脉瘤术后患者耐甲氧西林革兰阳性菌所致颅内感染的曲线下面积为0.845(95%CI:0.804~0.945)、0.783(95%CI:0.702~0.923),特异性为88.325%和78.56%,敏感度为66.455%和65.31%。结论老年动脉瘤患者术后耐甲氧西林阳性菌致颅内感染时,高表达的miRNA-9使TAB2 mRNA表达增加,同时炎性相关因子表达也被促进,这对术后颅内感染发生发展及防治奠定理论基础。

利用质粒介导的miRNA-1-2抑制H9C2中Hand2蛋白的表达

目的构建人miRNA-1-2的真核表达载体,并检测其对大鼠成肌细胞H9C2中Hand2蛋白表达的抑制作用。方法用PCR法体外合成miRNA-1-2前体序列的DNA模板,并定向插入到发夹RNA(hairpin RNA)表达载体pSilencer-4.1-neo上。用脂质体法将构建正确的重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2瞬时转染H9C2细胞,检测miRNA-1-2前体转录本(pre-miRNA-1-2)和miRNA-1靶基因Hand2(heart and neural crest derivatives expressed transcript 2)的表达。结果DNA测序表明重组质粒pSilencer-4.1/miRNA-1-2构建正确。pSilencer-4.1/miRNA-1-2转染的H9C2细胞中,pre-miRNA-1-2被有效表达,Hand2 mRNA表达无变化,Hand2蛋白表达被抑制。结论成功构建了miRNA-1-2的真核表达载体,由表达载体介导的miRNA-1能有效抑制Hand2蛋白的表达。

miRNA-20a在膀胱癌中的表达及其机制研究

目的:探讨miRNA-20a在膀胱癌组织中的表达及其机制。方法:收集2014年1月至2015年1月昆明医科大学第二附属医院96例患者的组织标本,运用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)方法检测miRNA-20a在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;生物信息学方法预测miRNA-20a的靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;q RT-PCR、Western blot以及细胞免疫荧光分别检测人膀胱癌细胞系T24和J82细胞转染miRNA-20a模拟物或阴性对照后对靶基因mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8、Transwell侵袭小室和划痕实验检测过表达miRNA-20a后T24细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且与肿瘤的病理分级、临床分期、转移以及复发密切相关(P<0.001);双荧光素酶报告基因实验证实miRNA-20a与人源性长寿保障基因2(Homo sapiens longevity assurance homologue 2,LASS2)的3'-UTR直接靶向结合;转染miRNA-20a模拟物可显著下调膀胱癌细胞中LASS2 m RNA和蛋白的表达(P<0.01),增强膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01)。结论:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且miRNA-20a可通过靶向抑制LASS2促进膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,与膀胱癌的发生发展相关。

CO_2浸渍法酿造两性花毛葡萄NW196葡萄酒的研究

为研究CO2浸渍法对两性花毛葡萄NW196葡萄酒品质的影响,试验采用高效液相色谱等方法测定了传统工艺和CO2浸渍工艺酿造的NW196葡萄酒中化学成分的含量。结果表明,和传统工艺相比,CO2浸渍工艺酿造的NW196葡萄酒中总酸、单宁、花色素苷和主要单体酚等成分的含量较低,这为改善该葡萄酒品质提供了新的思路。

miRNA-223-3p调控JAK2/STAT3信号通路对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨miRNA-223-3p对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK2/STAT3信号通路表达的影响。方法:RT-PCR检测40例胃癌组织及相应癌旁组织中miRNA-223-3p表达。培养人胃癌细胞株MKN-28,分别将miRNA-223-3p对照和miRNA-223-3p抑制物转染到细胞中,RT-PCR检测2组细胞中miRNA-223-3p的表达;CCK8法检测转染24、48、72 h后细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染48 h后细胞凋亡率;Transwell小室法检测转染48 h后细胞的迁移数;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达情况。结果:miRNA-223-3p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P=0.001);转染miRNA-223-3p抑制物后miRNA-223-3p表达明显低于miRNA-223-3p对照组(P<0.001);miRNA-223-3p抑制组与miRNA-223-3p对照组比较,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低,Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高,JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达降低(P <0. 05)。结论:miRNA-223-3p在胃癌组织中高表达,下调miRNA-223-3p表达能抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路的调节有关。

利拉鲁肽对2型糖尿病骨质疏松大鼠miRNA-19a、miRNA-144及骨密度的影响

目的分析利拉鲁肽对2型糖尿病骨质疏松(DOP)大鼠miRNA-19a、miRNA-144及骨密度的影响。方法采用随机数表法将50只大鼠随机分为正常组、去势对照组、模型组及给药组,模型组及给药组构建2型DOP大鼠模型;去势对照组摘除双侧卵巢,后正常组、去势对照组及模型组使用生理盐水干预,给药组使用利拉鲁肽治疗;治疗结束后采集大鼠血液样本,检测血糖、胰岛素、Cad-11、IRS1、miRNA-19a及miRNA-144水平;使用双能X线骨密度检测仪检测腰椎、全身、骨盆及股骨骨密度。结果给药组血糖、miRNA-19a、miRNA-144、Cad-11及IRS1水平均明显优于模型组及去势对照组;给药组大鼠各部位骨密度明显高于去势对照组和模型组。结论利拉鲁肽可抑制糖尿病大鼠骨密度的降低,其作用可能与降低2型DOP大鼠miRNA-19a、miRNA-144水平有关。

H_2S对大鼠心肌肥大与miRNA-133a和Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的影响

目的:研究硫化氢(H_2S)对心肌细胞肥大的负性调控作用与miRNA-133a介导Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的关系。方法:异丙肾上腺素(ISO)诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大模型;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR检测脑钠尿肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、H_2S合酶(CSE)、miRNA-133a和钙调神经磷酸酶(CaN)mRNA表达;Western blot检测CaN、活化T细胞核因子c4(NFATc4)蛋白表达;Elisa方法检测心肌细胞H_2S含量;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞钙离子浓度;细胞免疫荧光检测NFATc4核转位变化。结果:(1)心肌细胞肥大时,CSE/H_2S水平、miRNA-133a mRNA表达均显著下降。应用NaHS预处理,能上调心肌细胞CSE/H_2S水平,增加H_2S含量和miRNA-133a mRNA表达,并明显抑制心肌细胞肥大。(2)心肌细胞肥大时,细胞内钙离子浓度明显增加,CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位明显增强;应用NaHS预处理能明显抑制ISO诱导的上述效应。(3)应用antagomir-133a能逆转H_2S抑制心肌细胞肥大的作用,使心肌细胞内钙离子浓度、CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位增强。结论:H_2S通过负性调控作用抑制心肌细胞肥大,该作用可能与H_2S上调miRNA-133a的表达,抑制其下游的Ca^(2+)/CaN/NFATc4信号通路的激活有关。