lncRNA UCA1通过抑制miRNA-203a对乳腺癌细胞化疗耐药作用的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)尿路上皮癌相关1(UCA1)基因通过抑制微小RNA-203a(miR-NA-203a)对乳腺癌细胞化疗耐药性的影响.方法选取MCF7、MCF7/5-FU细胞,采用UCA1 siRNA对两种细胞进行转染,分为MCF7干扰组、MCF7未干扰组和MCF7/5-FU干扰组、MCF7/5-FU未干扰组;采用不同浓度奥沙利铂处理干扰后MCF7细胞,取最佳抑制浓度的奥沙利铂处理干扰后MCF7、MCF7/5-FU细胞,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF7、MCF7/5-FU细胞中lncRNA UCA1的表达情况及干扰后MCF7、MCF7/5-FU细胞中miRNA-203a的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测干扰后MCF7、MCF7/5-FU细胞的活力.结果 MCF7/5-FU细胞中lncRNA UCA1的相对表达量明显高于MCF7细胞(P﹤0.01);MCF7干扰组MCF7细胞的存活率明显低于MCF7未干扰组,miRNA-203a的相对表达量明显高于MCF7未干扰组(P﹤0.01);MCF7/5-FU干扰组MCF7/5-FU细胞的存活率明显低于MCF7/5-FU未干扰组,miRNA-203a的相对表达量明显高于MCF7/5-FU未干扰组(P﹤0.01).结论 LncRNA UCA1可通过抑制miRNA-203a表达增强乳腺癌细胞的化疗耐药性,增加乳腺癌细胞的活力.

miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵:抗炎及促进组织修复

背景:巨噬细胞M1/M2极化方向的调节在组织工程应用中尤为关键,及时调控可最大程度地减少促炎、促进抗炎或组织愈合反应。目的:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株复合胶原蛋白海绵回植入动物模型,据此检测免疫调节在体内环境中的相关表达水平等组织修复相关的指标,进一步阐明在体内环境中miRNA-378a是否促进巨噬细胞M2极化及其对免疫调节和组织修复的作用。方法:将慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞株、阴性对照病毒巨噬细胞株扩增、筛选,复苏培养巨噬细胞株后与胶原蛋白海绵共培养以此构成复合体,具体分组如下:①阳性组:过表达miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;②阴性组:阴性对照病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞-胶原蛋白海绵复合体;③对照组:巨噬细胞-胶原蛋白海绵;④空白对照组:胶原蛋白海绵。通过免疫荧光及扫描电镜观察各组细胞密度、表型、黏附情况,后回植入小鼠背部皮下模型,分别于造模后4,7 d处死小鼠,通过大体观察、苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化分析慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞胶原蛋白海绵复合体中巨噬细胞极化的方向及其对机体免疫调控、组织修复的作用。结果与结论:①免疫荧光镜下观察各组巨噬细胞株确实与胶原蛋白海绵形成复合体;②扫描电镜下慢病毒介导的miRNA-378a巨噬细胞(阳性组)较其他分组细胞密度增加,细胞出现球形、椭圆形及多边形分化,具有更多的伪足;③大体观察下总体7 d愈合好于4 d,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d愈合均好于其他分组;④苏木精-伊红染色、Masson染色下,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生;⑤免疫组化显示,慢病毒介导的miRNA-378a过表达巨噬细胞(阳性组)无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于其他分组;对照组及阴性组巨噬细胞无论4,7 d M2极化细胞阳性率均大于空白对照组,而对照组及阴性组之间无统计学差异;阳性组、阴性组、对照组无论4,7 d染色细胞数量均大于空白对照组,且阳性组>阴性组≈对照组>空白对照组;⑥提示在体内环境中miRNA-378a过表达巨噬细胞具有较多量的纤维细胞、毛细血管、成纤维细胞以及胶原纤维增生,对组织修复起到了正向作用,并且能促进巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化,从而有助于减少机体炎症反应。

非小细胞肺癌组织miRNA-203表达及其与预后的关系

目的:探讨miRNA-203在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测100例肺癌标本中miRNA-203的水平。分析miRNA-203表达与临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier法分析miRNA-203表达与非小细胞肺癌生存期(overall survival,OS)之间的关系。Cox风险比例模型分析各个协变量的联合效应。结果:miRNA-203的表达量与病理类型(P=0.026)相关,与性别(P=0.756)、年龄(P=0.280)及吸烟史(P=0.122)无明显关系;生存分析显示miRNA-203高表达组患者生存期显著低于低表达组(P=0.02)。Cox风险比例模型分析显示miRNA-203表达可作为非小细胞肺癌患者预后不良的标志。结论:miRNA-203的高表达提示非小细胞肺癌患者预后较差,是潜在的肺癌预后预测分子标志物。

血清miRNA-21和miRNA-203在上皮性卵巢癌中的表达及诊断价值

目的探讨微小核糖核酸21(miR-21)和微小核糖核酸203(miR-203)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达情况,及两者与血清糖类抗原125(CA125)在EOC诊断中的临床价值。方法采用QPCR检测40例EOC患者(EOC组)、40例上皮性卵巢良性肿瘤患者(良性组)和42例健康女性(正常对照组)血清miR-21和miR-203的表达情况;同时采用电化学发光法检测上述3组人群血清CA125的表达水平;分析miR-21和miR-203的表达与EOC临床病理特征的关系,用受试者工作特征曲线(ROC)评价两者的临床诊断价值并分别计算CA125、miR-21和miR-203单独和联合检测在EOC诊断中的灵敏度和特异度。结果 EOC组miR-21和miR-203的相对表达量分别为2.27±0.48和3.61±0.71,均高于良性组的1.20±0.22和1.47±0.38以及正常对照组的1.00±0.33和1.00±0.28,差异有统计学意义(P<0.05);而良性组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-21和miR-203表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、绝经状态、病理类型和CA125水平无关(P>0.05);CA125单独检测的特异度最高,为82.50%;CA125、miR-21和miR-201联合检测的灵敏度最高,达95.00%。结论 miR-21和miR-203可能在EOC的发生、发展中发挥原癌基因的作用;血清CA125、miR-21和miR-203三者联合检测可提高EOC诊断的灵敏度。

miRNA-203表达水平对结直肠癌患者预后的临床价值

目的:探讨miRNA-203表达水平对结直肠癌患者预后的预测价值。方法:回顾性选择2010年1月至2013年12月来我院接受手术切除治疗的结直肠癌患者120例,所有患者均经病理确认。根据结直肠癌组织中miRNA-203表达水平将患者分为miRNA-203低表达组(n=42)和miRNA-203高表达组(n=78)。分析结直肠癌组织中miRNA-203表达水平与临床病理特征的关系,应用单因素、多因素非条件Cox回归分析影响结直肠癌患者预后的危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制累积生存曲线。结果:结直肠癌患者组织中miRNA-203表达量与年龄、性别、吸烟史、嗜酒史、组织类型、肿瘤位置、肿瘤直径无关(P> 0. 05),与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管浸润有关(P <0. 05)。单因素、多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为高分化、TNM分期为IV期、组织中miRNA-203低表达是影响结直肠癌患者无进展生存率和总生存率的危险性因素(P <0. 05)。Kaplan-Meier法生存曲线结果显示,miRNA-203高表达组结直肠癌患者无进展生存率和总生存率显著高于低表达组(P <0. 05)。结论:miRNA-203表达水平可作为预测结直肠癌患者预后的指标。

miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系

目的 探讨miRNA-223、miRNA-21及miRNA-27a与冠心病冠脉病变的关系。方法 选取2021年1月至2022年12月商丘市第一人民医院收治的CHD患者86例为观察组,选取70名同期院内健康体检者作为对照组。对比两组血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;分析影响CHD冠脉病变的单因素,采用Logistic回归分析影响CHD冠脉病变的单因素、多因素;对比不同CHD冠脉病变类型的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平;对比不同CHD冠脉病变支数的血清miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a水平。结果 观察组miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic多因素分析显示,患有高血压、糖尿病以及miRNA-223>1.5、miRNA-21>6.0、miRNA-27a>5.5均是影响CHD冠脉病变的独立危险因素(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:急性心肌梗死>不稳定型心绞痛>稳定型心绞痛,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平:三支>双支>单支,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 不同冠脉病变CHD患者miRNA-223、miRNA-21、miRNA-27a表达水平不同,提示以上指标对判断CHD患者冠脉病变类型具有一定的临床价值。

抑制miRNA-376c-3p对肾透明细胞癌生长的影响

目的探究miRNA-376c-3对肾透明细胞癌(ccRCC)中肿瘤细胞生长的影响。方法以实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测人ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN及正常人近段肾小管上皮细胞系HKC中miRNA-376c-3p的表达。体外培养786-O细胞,随机分为对照组、miR-376c-3p inhibitor组(转染miR-376c-3p inhibitor)、miR-376c-3p mimics组(转染miR-376c-3p mimics)、阴性对照组(转染miR-376c-3p阴性对照),分组转染后以RT-PCR检测4组细胞miRNA-376c-3p表达;以Ki67免疫荧光染色、集落生成实验检测4组786-O细胞增殖;以TUNEL染色检测4组786-O细胞凋亡;以免疫荧光染色检测4组786-O细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达并比较其Bax/Bcl-2。于右腋窝皮下接种上述4组786-O细胞建立其裸鼠移植瘤模型,3周后测定其肿瘤体积与质量;以Ki67免疫荧光染色、TUNEL染色分别检测4组裸鼠肿瘤细胞增殖与凋亡。结果与HKC细胞比较,ccRCC细胞系786-O、Caki-1、SN12-PM6、ACHN中miR-376c-3p表达降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-376c-3p inhibitor组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比升高(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比降低(P<0.05);miR-376c-3p mimics组细胞增殖率与集落形成率、肿瘤体积与质量、裸鼠肿瘤组织Ki67阳性比降低(P<0.05),细胞miR-376c-3p相对表达、Bax/Bcl-2与凋亡率、裸鼠肿瘤组织TUNEL阳性比升高(P<0.05);阴性对照组各指标无明显变化(P>0.05)。结论抑制miRNA-376c-3p可削弱ccRCC细胞增殖及集落生成活性,促进其凋亡,并在裸鼠体内抑制其移植瘤生长。

小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定

目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到HEK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU.mL-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。

血清miR-203和壳多糖酶3样蛋白1联合检测对肝显著纤维化/肝硬化的诊断价值

目的探讨微小RNA(miR)-203和血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单独及联合诊断肝显著纤维化/肝硬化的价值。方法将该院2022年1月至2022年12月住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者80例纳入研究,同时选取体检健康者40例作为健康对照组。根据组织检查结果将纳入研究的CHB患者分为无/轻度纤维化组(50例)和肝显著纤维化/肝硬化组(30例)。检测各组血清miR-203和CHI3L1水平,肝纤维化4项[Ⅲ型前胶原(P-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、层粘连蛋白(LN),透明质酸酶(HA)]和生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)],计算天门冬氨酸氨基转移酶-血小板比值指数(APRI)、肝纤维化指数(FIB-4)。用非参数秩和检验进行组间各项指标的比较。用Spearman相关进行miR-203和CHI3L1与肝纤维化指标的相关性分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-203和CHI3L1单独和联合对肝显著纤维化/肝硬化的诊断效能。结果miR-203与C-Ⅳ、HA、FIB-4、ALT呈负相关(r=-0.282、-0.318、-0.238、-0.224,P<0.05),与血小板计数(PLT)呈正相关(r=0.298,P<0.05)。CHI3L1与C-Ⅳ、HA、LN、FIB-4、APRI、ALT呈正相关(r=0.296、0.467、0.254、0.284、0.300、0.316,P<0.05),与PLT呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。ROC曲线显示miR-203预测肝显著纤维化/肝硬化发生的曲线下面积(AUC)为0.820,CHI3L1预测疾病的AUC为0.873,均优于APRI和FIB-4(P<0.05),两者联合诊断的AUC为0.895;抗病毒治疗后miR-203和CHI3L1水平与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR-203和CHI3LI的检测可用于肝显著纤维化/肝硬化诊断和抗病毒疗效的评价,两者联合应用可提高诊断效能。

多发性骨髓瘤患者血清微小RNA-625和微小RNA-203的水平及临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清微小RNA-625(miR-625)、血清微小RNA-203(miR-203)水平及临床意义。方法选取2021年6月—2023年8月本院治疗的103例确诊MM患者为观察组,根据多发性骨髓瘤国际分期体系(ISS)分为Ⅰ期(n=23)、Ⅱ期(n=31)和Ⅲ期(n=49)。按照诊疗情况将患者分为初诊组(n=75)和复发组(n=28);另选取103例同期本院体检健康者为对照组。采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定血清miR-625、miR-203水平;采用多因素Logistic回归模型分析MM的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-625、miR-203对MM患者的诊断价值。结果观察组M蛋白、血红蛋白、白蛋白、miR-625和miR-203水平均低于对照组,血肌酐、24 h尿蛋白、尿素氮、血清β_(2)微球蛋白和血清钙水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。初诊组MM患者血清miR-625、miR-203水平均高于复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅱ期、Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅰ期患者,Ⅲ期患者血清miR-625、miR-203水平均低于Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。溶骨性病变<2个的MM患者血清miR-203水平低于溶骨性病变≥2个的患者,差异有统计学意义(P<0.05);骨病分级为1~2级的MM患者血清miR-625水平高于骨病分级为3~4级的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-625、miR-203是MM发生的保护因素(P<0.05)。血清miR-625、miR-203诊断MM的曲线下面积(AUC)分别为0.808、0.866,二者联合诊断的AUC为0.919,二者联合诊断优于血清miR-625、miR-203各自单独诊断(Z_(二者联合-miR-625)=3.816、Z_(二者联合-miR-203)=2.157,P=0.001、0.031)。结论MM患者血清miR-625、miR-203水平下降,二者联合对MM具有较高的诊断价值。

血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行根治性前列腺切除术老年前列腺癌患者预后的评估价值

目的分析血清微小RNA(miRNA)-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行腹腔镜根治性前列腺切除术(LRP)的老年前列腺癌患者预后的评估价值。方法选取2014年1月至2018年9月该院收治的行LRP治疗的213例老年前列腺癌患者作为研究对象,根据5年随访结局将患者分为预后优良组(87例)和预后不良组(126例)。收集患者术前临床基线资料及血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平。采用Logistic回归分析筛选影响患者预后的因素,并以独立危险因素构建预后预测模型,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测价值。结果多因素Logistic回归分析结果显示,患者血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、切缘阳性、血清miRNA-21-5p与miRNA-5189-5p表达水平均为行LRP的老年前列腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),以独立危险因素构建联合预测模型,各因素单独预测行LRP的老年前列腺癌患者预后的曲线下面积均小于4项联合(P<0.05)。结论血清miRNA-21-5p、miRNA-5189-5p表达水平对行LRP的老年前列腺癌患者预后的预测具有较高价值。

胎衣不下奶牛miRNA-185靶向调控血管内皮生长因子A表达的研究

【目的】通过体内和体外试验检测miRNA-185及血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)在胎衣正常排出和胎衣不下(RFM)奶牛胎盘组织中的差异表达情况及VEGFA在奶牛母体胎盘组织中表达分布,验证及明确miRNA-185和VEGFA与奶牛胎衣不下发生密切相关并存在靶向调节关系,为深入研究miRNA-185在奶牛胎衣不下发生过程中的作用提供理论依据和试验基础。【方法】采用实时荧光定量PCR法检测胎衣正常排出及胎衣不下奶牛母体胎盘组织中miRNA-185及VEGFA基因表达情况,采用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFA在母体胎盘组织的表达分布及mRNA的差异表达情况;采用双荧光素酶明确miRNA-185与VEGFA的靶向调节关系,采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测体外转染miRNA185 mimics、miRNA-185 inhibitor及miRNA-185 NC后VEGFA mRNA及蛋白的差异表达情况。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,与胎衣正常排出奶牛相比,胎衣不下奶牛体内miRNA-185及VEGFA的表达水平均极显著下调(P<0.01);荧光原位杂交结果显示,VEGFA mRNA主要在奶牛子宫内膜上皮细胞中表达。VEGFA是miRNA-185的靶向调节蛋白。与阴性对照组相比,转染miRNA-185 mimics后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01),转染miRNA-185 inhibitor后VEGFA的mRNA及蛋白表达水平均极显著上调(P<0.01)。【结论】胎衣不下奶牛母体胎盘组织内miRNA-185及VEGFA表达显著降低,VRGFA主要在子宫内膜上皮细胞中表达,miRNA-185可通过靶向调控VEGFA的表达参与奶牛胎衣不下的发生发展。

结直肠癌组织LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达及与预后的关系

目的分析结直肠癌组织长链非编码RNA(LncRNA)LINC00342、微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)表达水平与患者术后5年内预后的关系。方法采集133例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达;术后随访5年记录患者生存和死亡情况。比较不同情况下LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达及临床病理参数。分析结直肠癌组织中LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达的相关性、与预后的关系及对预后的预测价值。结果结直肠癌组织中LncRNA LINC00342表达水平高于癌旁组织,miR-203a-3p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中LncRNA LINC00342与miR-203a-3p表达水平呈负相关(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例分别高于LncRNA LINC00342低表达组和miR-203a-3p高表达组(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组术后5年总生存率更低(P<0.05)。死亡组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例、LncRNA LINC00342表达水平高于存活组,miR-203a-3p表达水平低于存活组(P<0.05)。肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移、LncRNA LINC00342高表达、miR-203a-3p低表达是影响患者术后5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。LncRNA LINC00342和miR-203a-3p联合对预后的预测价值高于单独预测。结论结直肠癌组织中LncRNA LINC00342呈高表达,miR-203a-3p呈低表达,二者联合检测有望成为预测术后生存的临床评估指标。

外周血miR-203a-3p、TLR4与慢性肾脏病患儿肾功能的相关性

目的探讨慢性肾脏病(CKD)患儿外周血微小RNA(miR)-203a-3p、Toll样受体4(TLR4)水平与肾功能和发生不良心血管事件的关系。方法选取2017年2月至2021年6月该院收治的106例CKD患儿作为研究组,按是否发生不良心血管事件将研究组又分为发生组和未发生组;另选取同期该院100例健康体检儿童作为对照组。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应检测各组外周血miR-203a-3p、TLR4水平;采用全自动生化仪检测各组肾功能指标(尿素氮、24 h尿蛋白、24 h肌酐清除率);采用Pearson相关分析CKD患儿miR-203a-3p、TLR4水平与肾功能指标水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析CHD患儿发生心血管不良事件的影响因素。结果研究组尿素氮、24 h尿蛋白、TLR4水平均明显高于对照组,24 h肌酐清除率及miR-203a-3p水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ期45例,Ⅱ期33例,Ⅲ期14例,Ⅳ期10例,Ⅴ期4例。随着病情加重,CKD患儿miR-203a-3p水平逐渐降低,TLR4水平逐渐升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。发生组29例,未发生组77例。发生组24 h尿蛋白、TLR4水平均高于未发生组,24 h肌酐清除率及miR-203a-3p水平均低于未发生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,CKD患儿miR-203a-3p水平与尿素氮、24 h尿蛋白、TLR4水平均呈负相关(P<0.05),与24 h肌酐清除率呈正相关(P<0.05);TLR4水平与尿素氮、24 h尿蛋白水平均呈正相关(P<0.05),与24 h肌酐清除率呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,24 h肌酐清除率及miR-203a-3p、TLR4水平均为CKD患儿发生不良心血管事件的影响因素(P<0.05)。结论CKD患儿miR-203a-3p水平下调,TLR4水平上调,二者与CKD患儿肾功能指标均有一定相关性,二者均为CKD患儿发生不良心血管事件的影响因素。

miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察微小RNA(miRNA)-5582对卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响并探讨其可能的机制。方法采用加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)数据库分析miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床分期的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞株A2780、HO-8910、OC3、SK-OV-3和正常卵巢上皮细胞株IOSE80中miRNA-5582的表达,miRNA-5582表达最低的SK-OV-3细胞株分为对照组和miRNA-5582组,分别转染miR-NC模拟物和miRNA-5582模拟物。MTS法和Transwell实验分别检测SK-OV-3细胞增殖及侵袭。以microRNA.org和miRWalk3.0数据库检索miRNA-5582的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-5582的靶基因。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因表达。结果miRNA-5582在卵巢癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.01)。miRNA-5582表达水平与卵巢癌患者的临床分期呈负相关(P<0.01)。miRNA-5582在卵巢癌细胞株中表达均显著低于IOSE80细胞(P<0.05),SK-OV-3细胞中miRNA-5582表达最低(P<0.01)。对照组和miRNA-5582组的miRNA-5582相对表达量为1.42±0.73和10.46±0.91,转染体系构建成功(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞活性在第3、第4和第5天显著低于对照组(P<0.05)。对照组和miRNA-5582组侵袭细胞数分别为(49.48±3.78)和(15.77±3.40)个,miRNA-5582组细胞侵袭数量显著少于对照组(P<0.01)。miRNA-5582的靶基因是丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(SRSF3)(P<0.01)。miRNA-5582组SK-OV-3细胞SRSF3基因表达显著低于对照组(P<0.01)。结论miRNA-5582在卵巢癌组织和细胞株中低表达,上调miRNA-5582通过抑制SRSF3基因表达降低卵巢癌SK-OV-3细胞的增殖和侵袭能力,miRNA-5582可能为卵巢癌的防治提供新的靶点。

超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC颈部淋巴结转移的临床价值

目的 研究超声及血清细胞角蛋白19(CK-19)、半乳糖凝集素3(Galectin-3)及微小核糖核酸-363(miRNA-363)联合诊断甲状腺微小乳头状癌(PTMC)颈部淋巴结转移(CLNM)的临床价值。方法 回顾性选取2021年7月至2023年6月在天津市环湖医院诊断的PTMC患者92例纳入研究组,选择同期本院收治的结节性微小甲状腺肿患者92例纳入对照组。观察两组病灶情况及超声特点;比较两组血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平,研究组是否发生CLNM患者病灶超声特点及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平。分析PTMC~CLNM超声特点与血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平的相关性。结果 研究组多枚病灶、病灶>0.5 mm、病灶纵横比≥1、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、病灶低回声、淋巴结肿大占比分别为70.65%、71.74%、82.61%、61.96%、72.83%、80.43%、84.78%、70.65%,均大于对照组(31.52%、52.17%、27.17%、25.00%、19.57%、15.22%、66.30%、22.83%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组血清CK-19、Galectin-3水平分别为(30.45±3.31)、(4.68±0.48)μg/L,均高于对照组[(7.05±0.73)、(1.72±0.19)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.89±0.30) fmol/L,低于对照组[(4.30±0.46) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、病灶微钙化、淋巴结肿大占比分别为90.91%、86.36%、95.45%、100.00%、90.91%,均大于未发生CLNM患者(64.29%、54.29%、0、25.00%、64.29%),差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组发生CLNM患者血清CK-19、Galectin-3水平(41.20±4.42)、(5.94±0.62)μg/L,均高于未发生CLNM患者[(24.36±2.71)、(3.25±0.34)μg/L],血清miRNA-363水平为(2.14±0.23) fmol/L,低于未发生CLNM患者[(3.46±0.36) fmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析,CLNM患者多枚病灶、病灶形态不规则、病灶边缘模糊、淋巴结肿大及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363水平均与CLNM呈正相关(P<0.05)。结论 超声及血清CK-19、Galectin-3、miRNA-363联合诊断PTMC~CLNM具有较高的临床价值。

miRNA-106a和miRNA-20a与新生儿呼吸窘迫综合征严重程度及预后的关系

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-106a和miRNA-20a水平与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)严重程度及预后的相关性。方法选取2021年3月至2024年4月在西安交通大学附属红会医院就诊的156例NRDS患儿为NRDS组,其中男77例,女79例,出生胎龄(33.87±2.01)周。根据NRDS患儿胸部影像检查结果将其分为轻度组(50例)、中度组(74例)和重度组(32例)。根据NRDS患儿结局将其分为预后良好组132例和预后不良组24例。另选取同期在西安交通大学附属红会医院体检的健康早产儿150例作为对照组,其中男77例,女73例,出生胎龄(34.05±1.83)周。采用定量聚合酶链式反应(qPCR)测定血清miRNA-106a和miRNA-20a水平;采用Pearson相关分析NRDS患儿血清miRNA-106a和miRNA-20a水平与新生儿急性生理评分(SNAPPE-Ⅱ)、1 min Apgar评分的相关性;采用受试者操作特征曲线(ROC)评价血清miRNA-106a和miRNA-20a水平预测NRDS患儿预后的价值。采用t检验、χ^(2)检验。结果NRDS组患儿血清miRNA-106a和miRNA-20a水平低于对照组[(0.97±0.30)比(1.70±0.53)、(0.88±0.32)比(1.57±0.55)],差异均有统计学意义(t=14.750、13.346,均P<0.05)。重度组、中度组、轻度组血清miRNA-106a和miRNA-20a水平及1 min Apgar评分比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。预后不良组NRDS患儿血清miRNA-106a和miRNA-20a水平低于预后良好组[(0.40±0.19)比(1.07±0.36)、(0.39±0.17)比(0.97±0.34)],SNAPPE-Ⅱ评分高于预后良好组[(34.25±6.50)分比(18.10±3.58)分],差异均有统计学意义(t=13.438、12.718、11.850,均P<0.05)。血清miRNA-106a和miRNA-20a水平与SNAPPE-Ⅱ评分呈负相关(均P<0.05),与1 min Apgar评分呈正相关(均P<0.05)。miRNA-106a、miRNA-20a预测NRDS患儿预后不良的灵敏度分别为95.8%、91.7%,特异度分别为93.2%、89.4%,曲线下面积(AUC)分别为0.961(95%CI 0.929~0.992)、0.938(95%CI 0.900~0.976),表明这些生物标志物预测NRDS患儿预后准确度较高。miRNA-106a联合miRNA-20a的灵敏度和特异度分别为91.7%、97.7%,AUC为0.984(95%CI 0.967~1.000),表明联合检测具有更高的预测效能。结论血清miRNA-106a和miRNA-20a水平在NRDS患儿中降低,且其水平随NRDS患儿严重程度加重而逐渐降低,二者在预测NRDS患儿预后中具有重要价值。

miRNA-195在腹主动脉瘤血管平滑肌细胞中作用机制探讨

目的探讨miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤中表达及对血管平滑肌细胞的作用。方法建立大鼠腹主动脉瘤模型,实时荧光定量PCR检测miRNA-195在腹主动脉瘤组织中的表达量;血管平滑肌细胞中转染miRNA抑制物,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测MMP-2、MMP-9和OPN蛋白表达。结果miRNA-195在大鼠腹主动脉瘤组织中呈高表达;血管平滑肌细胞中转染miRNA-195抑制物后,转染组细胞的增殖能力在48 h、72 h和96 h比对照组提高40.5%(P<0.05)、39.7%(P<0.01)、36.1%(P<0.001),且转染组细胞凋亡率比对照组降低35.6%(P<0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白和OPN蛋白在转染组中表达量分别比对照组降低45.4%、36.8%和48.8%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-195表达升高导致血管平滑肌细胞数量减少,并可能通过上调MMP-2和MMP-9蛋白表达致细胞外基质发生降解,从而促进腹主动脉瘤的形成和发展。

结合图自动编码器和结构化注意力机制的miRNA-疾病关联预测方法

MicroRNA(miRNA)-疾病关联预测的研究有助于人类进行疾病预防、诊断和治疗等,许多研究人员开发出了基于图自动编码器的miRNA-疾病关联预测方法,然而大多数编码器方法在对中心节点编码的时候并没有考虑到邻居节点之间的差异。因此,本文提出一种结合图自动编码器和结构化注意力机制的miRNA-疾病关联预测方法(SAAE)。SAAE模型使用基于图神经网络的编码器,该编码器采用多个编码层堆叠的方式以探索多阶邻居的信息。为了将中心节点与邻居节点不同权重的特征信息进行融合并捕获节点在图中的高阶结构信息,引进结构化注意力机制对图节点的原始信息进行编码,以生成新的特征信息。随后,通过解码器进行解码,解码后的特征信息使用随机森林算法挖掘miRNA和疾病节点之间的潜在联系。实验结果表明,SAAE在5倍交叉验证的曲线下的平均面积为94.53%。此外,本文还进行了关于肾脏肿瘤和肺部肿瘤的2个案例研究,验证了SAAE预测的有效性。