糖通饮经miRNA-21/TGF-β1/Smad信号转导对糖尿病肾病大鼠肾脏功能的保护作用

目的基于miRNA-21/TGF-β_(1)/Smad信号转导探讨糖通饮(黄芪、生地黄、山药、山萸肉等)对糖尿病肾病(DN)大鼠的肾脏保护作用及机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组(13.5 mg·kg^(-1))及糖通饮低、中、高剂量组(6.21、12.42、24.84 g·kg^(-1)),每组10只。采用高脂高糖饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素制备DN大鼠模型。模型复制成功后开始灌胃给药,每日1次,连续8周。采用考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白;全自动生化分析仪检测血清空腹血糖、血尿素氮、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯水平;HE及PAS染色法观察肾组织病理改变;RT-PCR法检测肾组织miRNA-21、转化生长因子(TGF)-β_(1)、Smad2、Smad3、Col-ⅢmRNA表达水平;Western Blot法检测肾组织TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Col-Ⅲ蛋白表达。结果与正常组比较,模型组的空腹血糖、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯水平均明显升高(P<0.05);肾小球系膜细胞增生,基底膜增厚,肾小管萎缩,小管间质间均可见有炎性细胞的浸润,肾小球系膜区可见明显PAS阳性染色物质沉积;大鼠肾组织miRNA-21、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Col-ⅢmRNA表达及TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Col-Ⅲ蛋白表达均明显上调(P<0.05)。与模型组比较,糖通饮各剂量组的空腹血糖、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐、总胆固醇、甘油三酯水平均明显降低(P<0.05);肾小球和肾小管病变程度均出现减轻,PAS阳性染色物质均有不同程度减少;糖通饮中、高剂量组大鼠肾组织miRNA-21、TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Col-ⅢmRNA表达及TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Col-Ⅲ蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论糖通饮可能通过下调miRNA-21的表达,抑制TGF-β_(1)/Samd信号转导,从而有效降低细胞外基质进行性累积,从而改善DN大鼠的肾脏损伤,保护其肾脏功能。

基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

TGF-β_1/Smads信号转导通路在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

TGF-β1/Smads通路对呼吸系统疾病有重要影响,可引发一系列与气道重塑相关的病理反应。慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生、发展与气道重塑密切相关,成纤维细胞增生、杯状细胞增生、胶原与氨基聚糖沉积、黏液腺增生及肥大均与COPD的气道重塑相关,TGF-β1参与并调节了这些病理过程。Smad2、Smad3、Smad4也参与了COPD的气道重塑过程。目前国内关于TGF-β1/Smads与COPD相关性的实验研究较少,尚未见临床观察。TGF-β1/Smads信号转导通路在COPD发生、发展中的作用还有待进一步阐明,中医药在COPD临床与实验研究中显示良好作用及应用前景,但目前研究主要还集中在单一因子或单一作用环节,对TGF-β1/Smads等其他信号转导通路作用的研究尚少。

糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞TGF-β_1/Smad7信号转导通路影响的研究

目的:观察糖肾平胶囊对高糖环境下脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激足细胞转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad7信号转导通路的影响,并探讨其作用机制。方法:以高糖、LPS刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖+LPS组、厄贝沙坦组、糖肾平小、中、大剂量组和抑制剂组。采用Western-Blotting方法检测足细胞中TGF-β1、Smad7、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)的表达。结果:与正常组比,高糖组和高糖+LPS组足细胞TGF-β1、NF-κB表达明显升高(P<0.01),Smad7表达明显降低(P<0.01);抑制剂组足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),厄贝沙坦组TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组降低(P<0.05),NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),糖肾平胶囊大、中、小剂量组足细胞中TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),大剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),中、小剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),糖肾平胶囊大、小剂量组Smad7蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显升高(P<0.01)。结论:糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白的表达,增加Smad7蛋白表达,通过干预TGF-β1-smad7-NF-κB信号转导通路减少糖尿病肾病足细胞凋亡,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。

芪参健脾汤对自发性高血压大鼠大鼠心肌组织TGF-β_1/Smad信号转导途径的影响

目的观察芪参健脾汤(白术、茯苓、黄芪、丹参、泽泻和甘草)对自发性高血压大鼠的降压作用,并探讨其对大鼠心肌组织内血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad 2和Smad 3表达的影响。方法采用随机对照法将60只24周龄的自发性高血压大鼠分为模型组,培哚普利组,芪参健脾汤高剂量组、中、低剂量组,培哚普利联合芪参健脾汤组,以同龄同种系的京都种大鼠10只作为正常组。治疗6周后处死大鼠,采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌组织中AngⅡ和TGF-β1的mRNA表达,采用Western免疫印迹法测定各组大鼠心肌组织中AngⅡ、TGF-β1、Smad2和Smad3的蛋白表达。结果与模型组比较,培哚普利组、培哚普利联合芪参健脾汤组血压明显降低(P<0.01);培哚普利组、培哚普利联合芪参健脾汤组和芪参健脾汤高剂量组中TGF-β1、AngII mRNA的表达量显著下降(P<0.05);培哚普利联合芪参健脾汤组,培哚普利组,芪参健脾汤高、中、低各剂量组TGF-β1蛋白的表达显著降低(P<0.01,P<0.05);培哚普利联合芪参健脾汤组,培哚普利组,芪参健脾汤高剂量组AngⅡ蛋白和Smad3蛋白的表达量明显下降(P<0.01,P<0.05);培哚普利联合芪参健脾汤组,培哚普利组Smad2蛋白的表达量也显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论芪参健脾汤可通过调节TGF-β1/Smad信号转导途径内各因子的水平,改善自发性高血压大鼠心肌功能,这可能是其抑制自发性高血压大鼠的心肌纤维化有关。

TGF-β_1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响

肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同通路,以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征。

中药对TGF-β_1/Smads信号转导通路的干预机制

中药或其提取物可从TGF-β1、TβR、Smads乃至效应因子等多层次多靶点影响TGF-β1/Smads信号转导通路而拮抗脏器纤维化发生。许多中药可从转录和翻译水平抑制信号分子表达,还可通过抑制磷酸化、影响核转位等干预信号转导。多点性、多效性、重叠性和平衡性是其作用特点,但还需在靶点作用的深入性、通路之间的交互性及转导系统的全面性等方面进一步探索其机制。

黄芪总黄酮对特发性肺纤维化miRNA-21、let-7 d及TGF-β/smad信号干预作用

目的：研究黄芪总黄酮对BLM诱导的肺纤维化模型miRNA-21、let-7 d表达水平和TGF-β1/smad信号干预作用。方法：C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪总黄酮组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素（10 mg/kg）,假手术组予等量生理盐水,造模后治疗组予黄芪总黄酮（43 mg/kg）灌胃,假手术组和模型组与等量生理盐水灌胃。第28天取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,realtime-PCR分析miRNA-21、let-7 d表达变化,Western-Bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果：BLM诱导肺纤维化miRNA-21明显上调,而let-7 d下调,在此过程中信号蛋白smad7表达增强mad3磷酸化水平减弱,EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少,黄芪总黄酮对上述改变具有逆转作用,但对let-7 d表达无影响。结论：黄芪总黄酮可通过抑制miRNA-21,增加smad7表达,使TGF-β1/smad激活能力下降,抑制肺纤维化EMT作用。

TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路的影响

目的 :探讨人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路在TGF β1致腹膜纤维化过程中是否发挥作用。方法 :取健康成年人大网膜进行人腹膜间皮细胞原代培养 ,经鉴定 95 %以上为人腹膜间皮细胞。用 5ng/mlTGF β1刺激第三代培养细胞 ,采用免疫组织化学染色、Westernblotting ,ELISA以及RT PCR等方法 ,分别观察人腹膜间皮细胞内磷酸化Smad2 / 3(p Smad2 / 3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移 ;细胞内Smad7的蛋白和mRNA表达 ;细胞外纤维连接蛋白 (FN)的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内I型胶原 (COL1 )的蛋白和mRNA表达。结果 :人腹膜间皮细胞内 p Smad2 / 3的蛋白表达在TGF β1刺激后 1 5min即开始显著增加 ,此时p Smad2 / 3的阳性细胞率为 2 9% ,细胞着色主要分散在细胞质中 ,30min阳性细胞率 81 %至 1h阳性细胞率 84 %增加最明显 ,细胞着色加深且集中在细胞核及周边 ,2h蛋白表达明显回落 ,此时阳性细胞率为 37% ,细胞着色转淡并又分散至细胞质中 ;细胞内Smad7的蛋白表达在TGF β1刺激后 2 4h明显增加 ,4 8h时达高峰 ,mRNA表达呈时间依从性增强 ;细胞外FN的蛋白、细胞内FN的mRNA以及细胞内COL1的蛋白和mRNA表达从TGF β1刺激后 2 4h起均明显增加 ,且均显示一定的时间依从性。结论 :人腹膜间皮细胞内Smad信号转导通路能?

肾衰泻浊丸对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的:通过实验研究观察肾衰泻浊丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的TGF-β1/Smads信号转导通路的影响,探讨肾衰泻浊丸抗肾间质纤维化的机理。方法:采用腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠模型,观察治疗后实验大鼠肾间质纤维化情况;采用免疫组织化学法分别检测肾组织中的TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达,采用Western Blot法检测肾组织内的Smad2/3蛋白的表达,采用半定量RT-PCR检测肾组织内的TGF-β1mRNA的表达水平。结果:肾衰泻浊丸能够减少肾间质纤维化面积;能够降低肾间质纤维化大鼠肾组织中TGF-β1,Smad2/3蛋白的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);能够下调肾组织中TGF-β1mRNA的表达,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:肾衰泻浊丸可能是通过降低Smad2/3、TGF-β1的蛋白表达,从而抑制了TGF-β1信号向细胞核内转导的通路,这可能是其延缓肾间质纤维化进展的机制之一。

TGF-β1及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义

目的观察转化生长因子β1(TGFβ1)及其信号转导蛋白Smad23在去卵巢大鼠骨组织中的表达及意义。方法手术切除大鼠双侧卵巢。术后13周,取离体胫骨测量组织学参数髓腔面积百分率(%Ma.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th),用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测大鼠骨组织TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化法检测Smad23蛋白在骨组织中的定位,用Westernblot杂交法检测骨组织TGFβ1、Smad23蛋白表达。结果与对照组(Sham组)比较,模型大鼠(OVX组)骨组织Tb.Th缩小,%Ma.Ar明显增大,差异有显著性(P<0.01);OVX组TGFβ1的mRNA、蛋白及Smad23蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Smad23蛋白广泛表达于骨组织干骺端,主要表达于骨基质表面及骨小梁周围的成骨细胞。结论TGFβ1及其信号转导蛋白Smad23可能在绝经后骨质疏松症中起重要调节作用。

氧化苦参碱对转化生长因子-β_1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的 观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞 (HSC)培养活化和转化生长因子 - β1 ,(TGF - β1 )促活化作用影响 ,并探讨该作用与TGF - β1 受体后信号通路的关系。方法 原代分离培养 2dHSC ,MTT法检测低浓度氧化苦参碱 (0 .2 5～ 8mg/L)对HSC细胞毒作用 (作用 12h)和增殖影响 (作用 48h) ,或给予TGF- β1 (5ng/ml)和 /(或 )氧化苦参碱 (2mg/L)干预 ,相差显微镜观察HSC形态变化 ,分别以RT PCR或Westernblot法检测TGF - β1 及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2 /3、Smad 7以及α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)mRNA和 /(或 )蛋白表达。结果 氧化苦参碱 (0 .2 5～ 8mg/L)对HSC无明显细胞毒作用 ,大于 8mg/L能抑制HSC增殖。氧化苦参碱 (2mg/L)抑制TGF β1 诱导HSC激活时的α SMA表达和形态转化 ,伴随TGF β1 受体mRNA表达升高 ,Smad 7mRNA表达上调及TGF - β1 mRNA表达下降 (与单纯TGF - β1 处理组相比 ,分别上升 1.2 5、0 .87倍或下降 1.92倍 ,P均 <0 .0 5 ) ,但不影响TGF β1 Ⅱ型受体和Smad 3mR NA表达。Westernblot检测Smad 2 /3、Smad 7蛋白表达 ,与RT PCR结果相似。氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用。结论 低浓度氧化苦参碱 (2mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF β1 表达、上调TGF β1 Ⅰ型受体。

miR-218靶向LASP1调控TGF-β/Smad信号通路调节肺癌细胞的侵袭和转移

目的:观察miR-218对肺癌细胞生物学行为的影响并探讨其可能的作用机制。方法:收集62例肺癌患者癌组织及癌旁正常组织,qRT-PCR和免疫组化方法检测miRNA-218、LASP1和TGF-β的表达情况;通过脂质体转染法转染肺癌细胞系A549,从而构建miRNA-218过表达细胞模型及空载体组,并以A549细胞作为空白对照组;观察过表达miRNA-218对A549细胞生物学行为的影响,采用CCK-8法检测过表达miRNA-218对A549细胞增殖的影响;通过划痕实验及Transwell侵袭实验检测过表达miRNA-218对A549细胞侵袭和迁移能力的影响;StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验检测miRNA-218与LASP1的靶向关系;Western blot法检测细胞转染前后LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达。结果:qRT-PCR结果显示,肺癌组织中miRNA-218的表达水平低于正常组织,且与患者肿瘤浸润深度(P=0.004)、肿瘤大小(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.014)以及TNM分期(P=0.021)密切相关,肺癌组织LASP1和TGF-β阳性表达率高于正常组织(P<0.05);相比于未转染的空白对照组,转染miRNA-218的细胞增殖、侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05),空载体组与空白对照组比较无显著差异。StarBase数据库及荧光素酶报告基因实验结果显示miRNA-218与LASP1存在靶向关系。与空白对照组相比,转染miRNA-218的A549肺癌细胞LASP1、TGF-β及Smad蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),空载体组的表达水平无明显变化。结论:miRNA-218可能通过靶向抑制LASP1蛋白的表达,进而调控TGF-β/Smad信号通路,从而抑制肺癌细胞的侵袭和迁移。

过表达mi RNA-21对肾小管上皮细胞TGF-β/Smad信号通路Smad 7蛋白的影响

目的:探究mi RNA-21过表达对TGF-β/Smad信号通路Smad7蛋白的影响。方法:采用mi RNA-21过表达慢病毒载体和慢病毒空载体分别感染高糖和低糖培养的人肾近端小管上皮细胞HK-2细胞,根据培养基类型和是否感染病毒将细胞分组为高糖mi RNA-21过表达慢病毒组、低糖mi RNA-21过表达慢病毒组、高糖空载组、低糖空载组、高糖细胞组和低糖细胞组,用荧光倒置显微镜观察感染后表达绿色荧光蛋白(GFP)细胞数,通过流式细胞术检测转染率;采用实时荧光定量PCR检测感染后细胞mi RNA-21的表达量,采用Western blot检测Smad7蛋白的表达。结果:感染mi RNA-21过表达慢病毒后,荧光显微镜下HK-2细胞有明显绿色荧光(约为60%),感染率结果显示转染率>60%,实时荧光定量PCR结果显示感染mi RNA-21过表达慢病毒后,高糖转染组细胞mi RNA-21表达量高于高糖细胞组和高糖空载组(P<0.05);Weston blot结果显示高糖转染组Smad 7蛋白的表达低于高糖转染空载病毒组、低糖细胞组、高糖细胞组(P<0.05)。结论:mi RNA-21可以通过抑制Smad7蛋白的表达来调控TGF-β/Smad信号通路。

十子代平方对糖尿病大鼠肾脏TGF-β_1、PTEN及血浆miRNA-21表达的影响

目的:观察十子代平方对糖尿病大鼠肾功能、肾脏组织中转化生长因子(TGF-β_1)及磷酸张力蛋白同系物(PTEN)、血浆miRNA-21的影响,探究十子代平方对糖尿病模型大鼠肾脏病变的影响和潜在作用位点。方法:SD大鼠高脂高糖喂养4 w,联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病动物模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、二甲双胍阳性对照组及十子代平方高、中、低剂量组,另设正常对照组。灌胃给药干预8 w后收集大鼠24 h尿液记录尿量并用于测定大鼠肌酐清除率(CCR),大鼠麻醉后腹主动脉取血,分离血清用于测定血肌酐(CRE)浓度及血清尿素(UARE)水平,分离红细胞用于测定糖化血红蛋白(GHB)含量,RT-PCR法定量分析血浆miRNA-21表达水平;摘取左侧肾脏并称量质量用于计算肾脏指数,切块后于10%甲醛溶液中固定,用于HE、Masson等染色,免疫组化法检测肾组织TGF-β_1、PTEN蛋白的表达。结果:模型组大鼠糖化血红蛋白GHB、UREA、CRE、CCR及肾脏指数均显著升高(P<0.05),肾脏组织的病理变化及纤维化明显,肾组织TGF-β_1蛋白及血浆miRNA-21表达显著增加、肾组织PTEN蛋白表达显著减少(P<0.05)。各给药组大鼠糖化血红蛋白、肾脏指数及血浆miRNA-21表达均显著降低(P<0.05),肾组织病理变化及纤维化明显改善,肾组织TGF-β_1蛋白表达显著减少、PTEN表达显著增加。结论:十子代平方能有效改善糖尿病所致的肾脏损害,减轻肾脏病理改变及纤维化,其作用机制可能与改变TGF-β_1、PTEN蛋白及miRNA-21表达有关。

玉屏风散加味方中“涤痰”“逐瘀”作用药对对COPD大鼠肺组织TGF-β_1/Smad通路的影响

目的:探讨玉屏风散加味方中"涤痰"和"逐瘀"作用药对对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TGF-β_1/Smad信号转导通路的影响。方法:将雄性SPF级Wistar大鼠90只随机分为正常组、模型组、罗红霉素组及"涤痰"作用药对高、中、低剂量组和"逐瘀"作用药对高、中、低剂量组。采用酶联免疫吸附试验(ELI SA)检测大鼠转化生长因子β_1(TGF-β_1),采用蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠肺组织Smad2/3、Smad7表达水平。结果:"涤痰"作用药对和"逐瘀"作用药对低、中剂量组及罗红霉素组TGF-β_1表达水平较模型组降低;"涤痰"作用药对低剂量组Smad2/3水平低于模型组;"涤痰"作用药对高剂量组和"逐瘀"作用药对各剂量组Smad7水平高于模型组。结论:玉屏风散加味方中"涤痰"和"逐瘀"作用药对对COPD大鼠TGF-β_1/Smad信号转导通路有调节作用。

miRNA-21在糖尿病肾脏病的作用机制及中药干预新进展

糖尿病肾脏病是糖尿病的并发症之一,可进展至终末期肾脏病。近年研究发现,miRNA-21可通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)、Wnt/β-连环蛋白等信号通路影响糖尿病肾脏病的进展。中药对miRNA-21表达具有调节作用,可以靶向miRNA-21调控TGF-β1/Smads、磷酸酶张力蛋白同源物/PI3K/AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体等信号转导,引发信号级联反应,干预纤维化、炎症、氧化应激、自噬等病理过程。就miRNA-21在糖尿病肾脏病中的作用机制及中药对其的干预作用进行综述。

血清miRNA-21、Smad1联合尿NGAL检测对早期糖尿病肾病的诊断价值

目的探讨血清miRNA-21、人信号转导分子1(Smad1)联合尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测对早期糖尿病肾病的诊断价值,为早期糖尿病肾病诊断提供依据。方法选择130例糖尿病患者(糖尿病组),210例早期糖尿病肾病患者(早期糖尿病肾病组),比较两组血清miRNA-21、Smad1和尿液中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)的差异,及其联合诊断早期糖尿病肾病的诊断效能。结果早期糖尿病肾病组血清miRNA-21含量显著低于糖尿病组,血清Smad1和尿NGAL水平显著高于糖尿病组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。血清miRNA-21和Smad1、尿NGAL呈负相关(r=-0.683,r=-0.714,均P<0.05);血清Smad1和尿NGAL呈正相关(r=0.806,P<0.05)。ROC曲线显示,血清miRNA-21、Smad1、尿NGAL曲线下面积分别为0.704、0.759和0.812,诊断值分别为70%、1.05ng/mL和60μg/L,联合诊断的AUC为0.917。血清miRNA-21、Smad1、尿NGAL的灵敏度、特异度、阳性似然比、尤登指数显著低于三者联合,阴性似然比显著高于三者联合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miRNA-21、Smad1和尿NGAL可诊断早期糖尿病肾病,联合检测可提高诊断效能。

纤维化肾小管上皮细胞miRNA-21表达情况研究

目的 探究miRNA-21与肾纤维化之间的关系。方法 体外培养肾小管上皮细胞（NRK-52E）,采用转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）制作细胞纤维化模型,采用慢病毒转染miRNA-21;加骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7,BMP-7）干预TGF-β1处理后的NRK-52E细胞,与阴性对照组相比,检测纤维连接蛋白1（fibronectin 1,FN1）,信号转导分子1（SMAD1）,SMAD6,rno-miR-21-5p的基因表达情况。结果 TGF-β1处理后,NRK-52E细胞BMP-7 mRNA及蛋白表达显著降低,FN1mRNA及蛋白表达显著增加（P〈0.05）。BMP-7基因慢病毒载体转染NRK-52E细胞后,BMP-7 mRNA表达显著增加（P〈0.05）,FN1、SMAD6、rno-miRNA-21-5p mRNA明显下降,SMAD1表达增加（P〈0.05）。结论 miRNA21与TGF-β1所诱导的肾小管上皮细胞表型转化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）进程呈正相关,可能与BMP-7、SMAD1及SMAD6的改变有关。

转化生长因子-β_1对大鼠肌成纤维细胞增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响

目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肌成纤维细胞（MFB）增殖及胞内Smad蛋白磷酸化的影响。方法 TGF-β1（0．33～81pmol／L）在不同作用时间（5～120min）的条件下诱导MFB细胞活化，采用免疫吸附和Westernblot方法观察TGF-β1对MFB细胞内pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L及Smad2／3蛋白表达的影响；采用M1Tr方法观察TGF-β1对MFB细胞增殖的影响。结果 在0．33—9pmol／L浓度范围内，TGF-β1均呈浓度依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化，以9pmol／L最明显，TGF-β1在27、81pmol／L浓度时，Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态，而各组Smad2／3蛋白表达无明显变化。在TGF-β1为9pmol／L浓度条件下，30—60min孵育时间对MFB细胞增殖无明显影响，但可呈时间依赖性刺激MFB细胞内Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化，以30min最明显，TGF-β1在60、120min时间时，Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化仍处于高水平状态，而各组Smad2／3蛋白表达量无明显变化。结论 TGF-β1诱导MFB细胞内Smads磷酸化先于刺激细胞增殖。