视网膜母细胞瘤miRNA-215和Rb1蛋白表达及意义

目的 探讨视网膜母细胞瘤组织microRNA-215(miRNA-215)、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb1蛋白)表达及其与临床病理学特征的相关性。方法 选取视网膜母细胞瘤病人65例(73眼)手术切除的癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用RT-PCR法检测两者miRNA-215表达、Westernblot方法检测两者Rb1蛋白水平,并分析miRNA-215与Rb1蛋白相关性及二者与病人临床病理特征的相关性及预后的关系;进行细胞转染实验,采用噻唑蓝比色法(MTT)、Caspase-3活性检测、流式细胞术分析miRNA-215类似物及miRNA-215抑制物对人视网膜母细胞瘤细胞(Y79细胞)活力、增殖及凋亡的影响。结果 视网膜母细胞瘤肿瘤组织中miRNA-215的表达水平显著高于癌旁组织,Rb1蛋白表达水平显著低于癌旁组织,差异有显著性(t=-14.14、92.80,P<0.01)。分化型肿瘤组织中miRNA-215表达低于未分化型,Rb1蛋白表达高于未分化型;伴随神经浸润和淋巴结转移病人肿瘤组织中miRNA-215表达高于未出现神经浸润和淋巴结转移病人,Rb1蛋白表达低于未出现神经浸润和淋巴结转移病人(t=-55.30~344.30,P<0.05)。细胞转染结果显示,miRNA-215类似物能显著升高Y79细胞中miRNA-215的表达水平并导致细胞活力升高、增殖能力增强及凋亡细胞百分比降低,同时显著降低细胞内Rb1蛋白表达水平;miRNA-215抑制物则显著降低Y79细胞中miRNA-215的表达水平并导致细胞活力降低、增殖能力下降、胞内Caspase-3活性增加及凋亡细胞百分比增加,同时升高细胞内Rb1蛋白表达水平,差异有显著性(F=148.5~3938.0,P<0.01)。结论 视网膜母细胞瘤组织中miRNA-215和Rb1蛋白表达与临床病理学特征相关,可作为视网膜母细胞瘤预后的监测指标。

miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及临床意义。方法:提取100例MM患者(病例组)和100名健康人群(对照组)血清RNA。实时荧光定量PCR测定血清miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p表达水平,分析其表达量与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法分析三种不同基因相对表达量与患者预后的关系。结果:病例组血清miRNA-720、miR-17-3p相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-215-5p相对表达量低于对照组(P<0.05);血清miR-17-3p相对表达量与ISS分期有统计学差异(P<0.05),血清miR-215-5p相对表达量与血红蛋白水平有统计学差异(P<0.05);血清miRNA-720高表达患者初次化疗有效率低于低表达患者(P<0.05),血清miR-215-5p低表达患者初次化疗有效率低于高表达患者(P<0.05);miRNA-720及miR-17-3p低表达和miR-215-5p高表达患者生存情况较好(P<0.05)。结论:miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p可能与MM密切相关,可作为MM诊断、治疗及预后的评估指标。

miRNA 452-5P及miRNA 215-5P在结直肠癌中的表达及意义

目的研究miRNA 452-5P及miRNA 215-5P在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并分析其诊断价值。方法收集30组结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织,采用实时荧光定量PCR技术检测全部患者结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织中miRNA 452-5p、miRNA 215-5p的表达,分析其与临床病理资料之间的关系,并进行ROC分析。结果 miRNA 452-5P在结肠癌组织中表达显著下调(P<0.001),miRNA 215-5p在结肠癌组织中表达显著上调(P<0.001),两种miRNA与结直肠癌患者年龄、性别、分化程度、肿瘤位置、浸润深度、淋巴转移、Dukes分期等均不相关。miRNA 452-5p曲线下面积AUC=0.859(95%CI:0.719～0.999),miRNA 215-5p曲线下面积为AUC=0.879(95%CI:0.757～1.0)。2-miRNAs panel曲线下面积为AUC=0.930(95%CI:0.833～1.0)。结论 miRNA 452-5p在结肠癌组织中表达显著下调,miRNA 215-5p在结直肠癌组织中表达显著上调。2-miRNAs panel对结直肠癌诊断价值较高,可作为潜在的结直肠癌诊断价值的分子标志物和治疗靶点。

下调miR-215-5p对TGF-β诱导的人肺成纤维细胞IMR-90增殖抑制作用观察

目的探讨下调miR-215-5p对TGF-β诱导的人肺成纤维细胞IMR-90增殖的影响及其机制。方法将体外培养的IMR-90细胞分为对照组、TGF-β组、TGF-β+NC inhibitor组、TGF-β+miR-215-5p inhibitor组。对照组细胞正常培养; TGF-β组给予10 ng/m L的TGF-β处理细胞; TGF-β+NC inhibitor组和TGF-β+miR-215-5p inhibitor组细胞先采用NC inhibitor或者miR-215-5p inhibitor转染细胞,24 h后加入10 ng/m L的TGF-β处理细胞。采用MTT法检测各组在转染后24、48、72、96 h的细胞增殖能力;流式细胞术检测转染48 h后细胞周期变化情况;荧光定量PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组细胞cyclin D1、RB1和α-SMA的表达。结果转染后48、72、96 h,TGF-β组细胞增殖能力高于对照组(P均<0. 05),TGF-β+miR-215-5p inhibitor组细胞增殖能力低于TGF-β+NC inhibitor组(P均<0. 05)。与对照组相比,TGF-β组G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P均<0. 05);与TGF-β+NC inhibitor组相比,TGF-β+miR-215-5p inhibitor组G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低(P均<0. 05)。与对照组相比,TGF-β组cyclin D1、α-SMA的表达升高,RB1的表达降低(P均<0. 05);与TGF-β+NC inhibitor组相比,TGF-β+miR-215-5p inhibitor组cyclin D1、α-SMA的表达降低,RB1的表达升高(P均<0. 05)。结论下调miR-215-5p对TGF-β诱导的人肺成纤维细胞IMR-90增殖具有抑制作用。该作用可能原因为下调miR-215-5p能够抑制RB1表达进而下调cyclin D1,阻碍TGF-β诱导的肺成纤维细胞的周期转换进而抑制肺成纤维细胞的增殖;同时,下调miR-215-5p也能够抑制α-SMA的表达阻碍TGF-β诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。

FEN1、miR-215-5p在宫颈脱落细胞中的表达及其临床诊断价值

目的探讨瓣状核酸内切酶1(FEN1)、微小RNA-215-5p(miR-215-5p)在宫颈脱落细胞中的表达水平,并对其临床诊断进行分析。方法前瞻性选取2017年5月至2019年5月在辽宁电力中心医院进行液基薄层细胞学检查(TCT)的236例患者作为研究对象,并根据TCT结果进行分组:正常宫颈或慢性宫颈炎56例(对照组),宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ级组73例,CINⅡ级组57例,CINⅢ级组28例,宫颈癌组22例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达水平;免疫印迹(WB)法检测宫颈脱落细胞中FEN1蛋白水平;Pearson法分析宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达的相关性;ROC曲线分析宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p表达水平对宫颈癌的诊断价值。结果对照组、CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级组宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA和FEN1蛋白表达水平依次升高,miR-215-5p表达水平依次降低(均P<0.05);CINⅢ级组与宫颈癌组宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、FEN1蛋白和miR-215-5p表达水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。miR-215-5p与FEN1 mRNA水平呈负相关(r=-0.696,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,以宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA、miR-215-5p水平诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)分别为0.850(95%CI:0.785~0.914)、0.845(95%CI:0.778~0.912);二者联合检测诊断宫颈癌的AUC为0.861(95%CI:0.798~0.923)。结论CIN及宫颈癌患者宫颈脱落细胞中FEN1 mRNA和FEN1蛋白表达水平升高,miR-215-5p表达水平降低,与CIN及宫颈癌的发生密切相关,可能作为潜在的诊断标志物。