ABCG2、VEGF及miRNA-23a与乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的关系

目的研究ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)、血管内皮生长因子(VEGF)及微小RNA-23a(miRNA-23a)与乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的关系。方法选取本院2018年6月至2020年10月收治的79例乳腺癌行根治术患者设为研究组,其中伴同侧锁骨上淋巴结转移者43例(转移组),未伴同侧锁骨上淋巴结转移者36例(未转移组),另选取同期进行健康体检的49例健康人员作为对照组。分析各组ABCG2、VEGF及miRNA-23a表达情况及上述因子与乳腺癌组织临床病理参数的关系,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析ABCG2、VEGF及miRNA-23a对乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的预测价值。结果研究组ABCG2、VEGF阳性表达率明显高于对照组,miRNA-23a水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。转移组ABCG2、VEGF阳性表达率明显高于未转移组,miRNA-23a水平明显低于未转移组,差异均有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅰ~Ⅱ期者ABCG2阳性表达率显著低于Ⅲ期者,miRNA-23a水平高于Ⅲ期者,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,ABCG2、VEGF及miRNA-23a三者联合预测乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的ROC下曲线面积(AUC)为0.737,明显高于各项单独检测(P<0.05)。结论 ABCG2、VEGF表达增高,miRNA-23a表达下降对乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移有促进作用,推测上述因子可能是防止乳腺癌术后淋巴结转移的靶点。

股骨头坏死患者血清miRNA-210,miRNA-23b检测的应用价值

目的探讨血清微小RNA(microRNA,miRNA)-210,-23b检测在股骨头坏死患者中的临床应用价值。方法收集2015年1月~2017年1月于陕西中医药大学第一附属医院骨三科住院行股骨颈骨折内固定手术治疗的135例患者的血清及临床资料,依据是否发生股骨头坏死分为坏死组和非坏死组,其中坏死组27例,非坏死组108例。采用实时荧光定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)技术检测血清miRNA-210,miRNA-23b的表达。比较分析血清miRNA-210,miRNA-23b的变化与股骨头坏死之间的关系。结果坏死组血清miRNA-210,miRNA-23b表达分别为(0.19±0.03,0.21±0.05);非坏死组血清miRNA-210,miRNA-23b表达分别为(0.92±0.18,0.87±0.17)。坏死组血清miRNA-210,miRNA-23b表达分别与非坏死组比较显著下调,其差异均有统计学意义(t=35.29,31.20,P<0.01)。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-23b,miRNA-210的AUC分别为0.790(95%CI:0.687~0.89.2,P=0.000)和0.743(95%CI:0.633~0.854,P=0.000)。miRNA-23b,miRNA-210在最佳临界值处诊断股骨头坏死的敏感度和特异度分别为95.7%和93.9%,91.5%和92.3%。结果显示血清miRNA-23b,miRNA-210的表达对诊断股骨头坏死的发生有临床意义。结论检测血清miRNA-210,miRNA-23b表达可预测股骨头坏死的发生,估计病情的发展状况。

乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系

目的探讨乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系。结果选取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治术患者160例,依据2年内复发转移情况分为复发组(n=50例)和未发组(n=110例),采用实时荧光定量聚合酶联反应法(RT-PCR)检测miRNA-23a表达水平,分析miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系。结果单因素分析结果显示,复发组和未发组肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)、miRNA-23a表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归性分析显示,在校正肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR等因素后,miRNA-23a表达水平是患者术后复发转移的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线显示,miRNA-23a表达水平以<1.0评估患者术后复发转移的敏感度、特异度、准确度、曲线下面积为92.00%、96.36%、95.00%、0.882,一致性良好(P<0.05)。结论乳腺癌根治术患者miRNA-23a表达水平与术后复发转移的关系密切,其低表达水平可能提示患者术后复发转移,检测其表达水平可作为评估患者术后复发转移的重要指标。

非小细胞肺癌早期诊断的潜在生物标志物:血浆miRNA-23a和miRNA-451

目的研究血浆中miRNA23-a及miRNA-451作为潜在生物标志物在非小细胞肺癌(NSCLC)中早期诊断的价值。方法选取本院50例NSCLC病例和50例健康对照,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定组织和血浆中miRNA23-a及miRNA-451的表达水平,分析miRNA23-a及miRNA-451在组织和血浆中的表达差异及相关性。同时使用受试者工作特征曲线(ROC曲线)和线下面积(AUC)评估miRNA23-a、miRNA-451及CEA在NSCLC中的诊断能力。通过瞬时转染技术,在NSCLC细胞系A549中分别抑制miRNA-23a和miRNA-451的表达,使用qRT-PCR检测SPRY2 mRNA及MIFmRNA的表达水平。结果miRNA-23a及miRNA-451在NSCLC组织中的表达与吸烟状态、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期显著相关(P<0.05)。与对照组相比,miRNA-23a在NSCLC患者的肿瘤组织和血浆中显著升高,而miRNA-451明显低于对照组。这2种miRNA的水平在肿瘤组织与血浆中表现出相同的表达趋势,呈高度相关。ROC分析显示,miRNA-23a和miRNA-451较之传统的肿瘤标志物CEA,AUCROC、灵敏度和特异度均显著高于后者(P<0.05)。当miRNA23-a及miRNA-451联合检测时,AUCROC/灵敏度/特异度均得到改善,分别为0.900/78%/86%。在NSCLC细胞系A549中分别抑制miRNA-23a和miRNA-451的表达后,SPRY2 mRNA及MIFmRNA表达水平显著升高。结论miRNA-23a和miRNA-451可用作NSCLC早期诊断的候选标志物,这2种标志物联合检测对NSCLC诊断更有效。

结直肠癌患者血浆外泌体中miRNA-23b的表达及其临床意义

目的探究结直肠癌患者血浆外泌体中miRNA-23b(miR-23b)表达水平与临床病理学特征及预后的关系。方法利用外泌体试剂盒提取65例结直肠癌患者和25例健康人血浆中的外泌体,分别使用透射电镜、Western Blot和纳米颗粒示踪法进行鉴定。采用RT-qPCR法检测外泌体中miR-23b的表达水平,并分析其与患者临床病理学特征及预后的关系。结果结直肠癌患者血浆外泌体中miR-23b的表达水平较正常健康人明显降低(P <0.001),其低表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、脉管浸润、神经侵犯显著相关(均P <0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,外泌体miR-23b低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短(P=0.003)。单因素和多因素分析表明,血浆外泌体中miR-23b低表达是影响结直肠癌患者总生存期的独立危险因素(HR=2.243,95%CI:1.093~5.024,P=0.029)。结论结直肠癌患者血浆外泌体中miR-23b的表达下调与多个不良临床病理学因素及较短的总生存期密切相关,具有成为评估结直肠癌预后生物标志物的潜力。

miRNA-23b调节G3BP2-p38在糖尿病肾病纤维化的调控机制研究

目的探讨在糖尿病肾病纤维化中,miRNA-23b对G3BP2-p38通路所起的调控作用。方法选取50只6周龄C57BL/6雄性小鼠,构建糖尿病肾病模型小鼠,随机分为五组,A组:Control;B组:miRNA-23b mimic;C组:mi RNA-23b negative controls;D组:G3BP2-si RNA;E组:p38抑制剂,每组10只。Real-time PCR检测各组G3BP2、p38-MAPK基因表达情况。结果与A组相比,B组p38-MAPK的m RNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);C组与A组结果一致,差异无统计学意义(P>0.05),D组与A组相比,p38-MAPK mRNA水平降低,但mi RNA-23b显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与A组相比B、D组ACR比值均明显下降。结论mi R-23b在糖尿病肾病中的作用是通过mi R-23b-G3BP2-p38信号通路调节实现,表明了新的潜在治疗靶标。

miRNA-23靶向gremlin1调节肝癌细胞的生物学功能分析

目的探讨miRNA-23靶向gremlin1调节肝癌细胞的生物学功能。方法将人肝癌细胞株HSMMC-7721分为高表达组、抑制组和对照组,高表达组转染miRNA-23mimics,抑制组转染miRNA-23inhibitor,对照组不进行转染。MTT实验检测细胞增殖,流式细胞仪实验检测细胞周期,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测gremlin1表达。结果高表达组的miRNA-23相对表达量显著高于抑制组和对照组(P<0.05),抑制组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与抑制组和对照组相比,高表达组的细胞增殖率显著降低,S期与G2/M期比例显著增加,GO/G1期比例显著减少,细胞侵袭数显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与抑制组和对照组相比,高表达组的gremlin1蛋白相对表达量显著下降(P<0.05)。结论 miRNA-23高表达能抑制gremlin1的表达,调节肝癌细胞周期,抑制肝癌细胞增殖与侵袭,可为防治肝癌提供新的思路和治疗靶点。

miRNA-23在多发性子宫肌瘤中的表达及与临床病理特征的关系

目的比较多发、单发性子宫肌瘤患者及健康体检者间的miRNA-23表达水平,分析不同miRNA-23表达水平的多发性子宫肌瘤患者间临床病理特征差异。方法采用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测多发性(多发组,93例)和单发性(单发组,68例)子宫肌瘤手术患者血清、组织中miRNA-23的表达水平,定量PCR检测30名健康体检女性(对照组)血清中miRNA-23的表达水平,比较三者间的差异性,并分析血清及组织中miRNA-23表达与多发性子宫肌瘤患者临床病理特征的关系。结果血清中miRNA-23的相对表达量:多发组低于其他2组,单发组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多发组患者组织中miRNA-23的相对表达量低于单发组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄及是否绝经的多发性子宫肌瘤患者血清及组织中miRNA-23表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但不同肌瘤数量、肌瘤体积、最大肌瘤直径的患者血清及组织中miRNA-23表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-23在子宫肌瘤患者血清中的表达低于健康者,且不同肌瘤数量、肌瘤体积、最大肌瘤直径的患者血清及组织中miRNA-23表达水平存在显著性差异。

miRNA-23a表达与晚期乳腺癌全切除术后的预后关系分析

目的分析miRNA-23a表达与晚期乳腺癌全切除术后的预后关系。方法选取晚期乳腺癌全切除术后患者160例,同期选取健康人员160例,检测所有人员血清miRNA-23a表达量。结果术后患者血清miRNA-23a表达量明显低于健康人员,患者术后血清miRNA-23a表达量明显高于术前,差异有统计学意义(P <0. 05);在术后3、6、9、12个月血清miRNA-23a表达量及变化量方面,复发转移者明显低于无复发转移者,复发转移者术后呈持续下降的趋势,无复发转移者术后呈持续升高的趋势,差异有统计学意义(P <0. 05)。Logistic回归性分析结果显示,血清miRNA-23a表达变化量<20%是患者复发转移的独立影响因素(P <0. 05)。结论 miRNA-23a与晚期乳腺癌的发生及其全切除术后预后转归有关,术后监测血清miRNA-23a表达量可作为评估患者预后的重要指标,值得临床作进一步推广。

microRNA-23a调控斑马鱼颅神经嵴细胞迁移和分化

目的探讨miRNA-23a对斑马鱼颅面软骨,尤其是咽区软骨发育过程中神经嵴细胞诱导、迁移和分化的影响。方法通过在胚胎中注射吗啉环修饰的反义核苷酸(antisense morpholino oligonucleotide,MO),抑制胚胎内源性miRNA-23a的活性。阿尔新蓝染色观察敲低mi RNA-23a对斑马鱼颅部软骨发育的影响。整胚原位杂交检测不同发育时期神经嵴细胞特异基因的表达情况。分别在Tg(sox10:EGFP)和Tg(col2a1:h2a-mCherry)转基因胚胎中敲低mi RNA-23a,激光共聚焦显微镜活体检测咽区软骨形成和神经嵴细胞向软骨分化过程中存在的缺陷。结果受精后96小时的敲低miRNA-23a胚胎头部背侧颅骨部分的索旁软骨后段缺失,且头部腹侧咽区软骨中的麦氏软骨、腭方软骨和角舌骨明显变短,基舌骨和角鳃骨缺失。后续的原位杂交实验及共聚焦显微镜拍摄结果表明,敲低miRNA-23a没有影响神经嵴细胞的形成及向头部迁移,但从后脑迁移到咽区的神经嵴细胞明显减少,而且不能分化为成熟的软骨细胞,致使角鳃骨缺失。结论 miRNA-23a对颅神经嵴细胞向咽区迁移并分化为软骨细胞具有重要作用。

AIH患儿血清miR-148a表达及其与炎症因子的相关性

目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患儿血清miR-148a表达及其与炎症因子的相关性。方法选取2018年1月—2021年3月南阳市第一人民医院AIH患儿45例(AIH组)和体检健康儿童53名(正常对照组)。检测所有研究对象血清miR-148a、IgG、炎症因子[转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素23(IL-23)]、肝功能[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)]和自身抗体[抗核抗体(ANA)、抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)抗体、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体(LKM)抗体]水平。采用Pearson相关分析评估miR-148a水平与各项指标的相关性。采用Logistic回归分析评估发生AIH的危险因素。结果AIH组血清IgG、AST、ALT、GGT、IL-17、IL-23水平和miR-148a相对表达量,以及ANA、抗LC-1抗体、ASMA、抗LKM抗体阳性率均高于正常对照组(P<0.001),TGF-β水平低于正常对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,AIH患儿miR-148a与IL-17、IL-23、IgG均呈正相关(r值分别为0.504、0.533、0.392,P<0.05),与TGF-β呈负相关(r=-0.527,P<0.05)。miR-148a高表达组ANA、抗LC-1抗体、ASMA、抗LKM抗体阳性率均高于低表达组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,IL-17、IL-23、miR-148a水平升高和TGF-β水平降低均是发生AIH的独立危险因素(P<0.05)。结论AIH患儿血清miR-148a表达与炎症因子和自身抗体密切相关,其可能参与了AIH的发生。

赖氨酸对大鼠空肠黏膜损伤及自噬的缓解作用

【目的】本试验旨在研究赖氨酸对热应激后大鼠空肠上皮损伤的缓解作用及其自噬调控机制。【方法】利用人工气候箱以40℃下处理2h高温环境建立大鼠热应激模型,SD大鼠共18只,体重为(200±20)g,适应性饲养3d后随机分为对照组(C),热应激组(HS)和赖氨酸预处理后热应激各试验组(L-Lys+HS)。检测大鼠热应激前后体重变化,HE染色观察肠道上皮细胞的形态学损伤,RT-PCR检测MiRNA-23b以及自噬标志分子LC3B的表达变化。【结果】大鼠热应激预处理组中,赖氨酸饲喂高浓度(1.0%)对热应激后大鼠体重改善效果最佳;赖氨酸预饲喂大鼠后再热应激,大鼠空肠上皮损伤程度减轻;与自噬相关的LC3B的表达显著抑制,同时MiRNA-23b表达显著上升。【结论】预处理组中,1.0%高浓度赖氨酸的饲喂能够显著缓解热应激对大鼠空肠上皮的损伤,其中氨基酸通过MiRNA-23b对热应激引起的空肠上皮细胞的自噬有一定的缓解作用。

氟化钠染毒致大鼠骨组织形态计量学及微小RNA-23a表达的变化

[目的]探讨氟化钠染毒致大鼠骨组织形态计量学变化及对微小RNA(miR NA)-23a表达的影响。[方法 ]将96只SD大鼠按体重随机分为对照组(0 mg/L)、低氟组(50 mg/L)、中氟组(150 mg/L)、高氟组(250 mg/L)。采取饮水染毒方式,染氟至2、4、6个月时分别处死每组8只SD大鼠,收集大鼠左下肢及牙齿,采用灰化-氟离子电极法测定大鼠骨氟、牙氟含量;取大鼠股骨干骺端固定后脱钙,进行苏木精-伊红染色,光镜观察骨组织骨小梁、骺板、成骨细胞的形态学改变;取左前肢,剔除多余结缔组织,用液氮反复研磨成骨粉,使用RNAiso Plus提取骨粉总RNA,采用实时荧光定量PCR法测定miRNA-23a基因表达水平。[结果 ]除2个月时的低氟组外,不同时间各染毒组大鼠氟斑牙检出率均高于对照组(P <0.05)。随染毒时间的延长,各染氟组大鼠骨氟、牙氟含量呈上升的趋势。不同时期中氟组、高氟组大鼠骨小梁和各剂量组骺板面积均大于对照组(P <0.05),低氟组骨小梁面积均低于对照组(P <0.05)。随着染氟剂量的增加,骨小梁和骺板面积呈上升趋势;在2、4、6个月时各剂量组间差异有统计学意义(P <0.01)。各时期染氟大鼠成骨细胞数量均低于对照组(P <0.05),且随着剂量升高呈下降趋势。随着染毒时间的延长,各染氟组骨小梁、骺板面积以及成骨细胞数量均呈下降趋势。染氟2、4、6个月时,各染氟组大鼠miRNA-23a表达量均高于对照组(P <0.05);染氟6个月时,各染氟组大鼠miRNA-23a表达量均较2个月和4个月时升高,呈上升趋势。[结论 ]过量、长期的氟摄入会影响骨的形成和发育,推测miRNA-23a参与了氟中毒致大鼠体内骨转换异常的过程,提示miRNA-23a与氟致全身性危害具有潜在的关联性,但其参与机制尚未明确,有待进一步研究。