miRNA-432-5p在脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制研究

目的探讨miRNA-432-5p在脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法人肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、LPS组、miRNA-432-5p mimics组及miRNA-432-5p siRNA组。利用CCK-8实验检测细胞的活性;利用ELISA法检测细胞培养液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的含量;利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-432-5p mRNA的表达;利用Hoechst染色检测细胞的凋亡情况;利用Western blot检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase1)、白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果LPS组细胞的活性OD值(6 h:0.809±0.09;12 h:0.601±0.09;24 h:0.485±0.43)明显低于对照组的1.000±0.00,差异均具有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞中miRNA-432-5p mRNA表达水平为1.563±0.10,明显高于对照组的1.000±0.00,细胞凋亡率为(41.52±1.83)%,明显高于对照组的(0.000±0.00)%,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,明显高于对照组的(5.27±0.84)pg/mL、(5.57±0.65)pg/mL、(3.26±0.85)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05),LPS组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,明显高于对照组的0.163±0.03、0.025±0.01、0.032±0.01,差异均具有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p mimics组细胞凋亡率为(24.23±3.09)%,明显低于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.639±0.09,明显高于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(22.85±4.01)pg/mL、(29.15±5.22)pg/mL、(20.63±3.89)pg/mL,明显低于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p mimics组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.473±0.04、0.121±0.02、0.279±0.04,明显低于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-432-5p siRNA组细胞凋亡率为(56.44±3.25)%,明显高于LPS组的(41.52±1.83)%,细胞活性为0.348±0.06,明显低于LPS组的0.468±0.07,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组培养液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量分别为(51.08±4.12)pg/mL、(53.61±4.83)pg/mL、(59.97±3.62)pg/mL,明显高于LPS组的(36.32±6.07)pg/mL、(45.08±3.75)pg/mL、(40.87±6.65)pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-432-5p siRNA组细胞中的NLRP3、Caspase1和IL-1β蛋白表达水平分别为0.969±0.12、0.430±0.09、0.575±0.07,明显高于LPS组的0.734±0.08、0.305±0.06、0.430±0.05,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miRNA-432-5p可通过抑制NLRP3炎性小体通路的激活,对受损细胞发挥保护作用。

糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制研究

目的 探究糖肾地黄汤通过调控lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴延缓糖尿病肾病进展的机制。方法 用小鼠单侧肾切除+腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)诱导糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)模型,选择糖尿病肾病小鼠模型组共45只小鼠,雌性CBA/J 30只,雄性DBA/2 15只,另选正常健康小鼠10只作为正常对照组。将造模的糖尿病肾病小鼠分为模型组、糖肾地黄汤高剂量组(TSDHDHD组)、糖肾地黄汤中剂量组(TSDHDMD组)、糖肾地黄汤低剂量组(TSDHDLD组),每组10只。HE染色检测小鼠的病理学变化,应用全自动生化分析仪对所获得小鼠血清空腹血糖(Fasting blood glucose, FBG),甘油三酯(Triglyceride, TG),胆固醇(Cholesterol, TC)水平,RT-PCR法分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2mRNA的表达,免疫印迹法(Westernblot, Wb)分析ARAP1、miR-25-3p、SGLT2、Bax/Bcl-2的蛋白表达。采用SPSS 23.0统计软件。结果 对照组中细胞排列致密整齐、完整,存在少量脂肪细胞(P>0.05);与对照组比较,模型组细胞结构较为散乱,且由稀疏变细,近端脂肪细胞数目增多,差异存在统计学意义(P<0.05);相比模型组,各剂量组糖肾地黄汤脂肪细胞数目下降,比较存在统计学差异(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组油红O染色镜下IOD表达降低(P<0.05)。治疗前与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平升高(P<0.05),模型组与不同剂量糖肾地黄汤组相比无统计学差异(P>0.05);与治疗前相比,治疗12周后不同剂量糖肾地黄汤组模型组FBG水平均降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组TG、TC水平降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平明显升高,Bax/Bcl-2mRNA水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2mRNA水平降低,Bax/Bcl-2mRNA水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组、不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达明显升高,Bax/Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2水平降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05);与中、低剂量糖肾地黄汤组相比,高剂量糖肾地黄汤组ARAP1、miR-25-3p、SGLT2蛋白表达降低,Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 糖肾地黄汤可能通过调节lncRNA-ARAP1/miR-25-3p/SGLT2轴,从而达到延缓糖尿病肾病进展的目的。

过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

椎间盘退变程度与髓核中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3及白细胞介素1β的相关性

背景:研究表明,miRNA水平与椎间盘细胞的凋亡和增殖、细胞外基质代谢和炎症反应密切相关,而miR-142-3p在椎间盘退变中的具体作用尚不清楚。目的:探讨人腰椎间盘髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达与椎间盘退变程度的相关性。方法:选择2020年1月至2022年3月在苏州市第九人民医院因腰椎间盘退行性疾病而行手术的患者82例,术前均行MRI检查,根据Videman分级标准将患者分为轻度退变组(n=36)、中度退变组(n=26)和重度退变组(n=20),获取82份髓核组织标本,检测各组髓核组织中miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的基因表达,以及混合谱系激酶3、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白表达,采用Spearman相关系数法评估miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素β表达与腰椎间盘退变程度的相关性。采用随机数字表法将30只成年SD大鼠分为假手术组(仅穿刺皮肤与肌肉后处死)、轻度退变组(穿刺Co7/8椎间盘1周后处死)与重度退变组(穿刺Co7/8椎间盘2周后处死),每组10只,检测各组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β的蛋白表达,以及miRNA-142-3p、混合谱系激酶3、白细胞介素1β的基因表达。结果与结论:①人髓核组织:miRNA-142-3p的表达由高到低的顺序为轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05),混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅰ型胶原基因与蛋白表达由低到高的顺序为:轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05),Ⅱ型胶原基因与蛋白表达由高到低的顺序为:轻度退变组>中度退变组>重度退变组的趋势(P<0.05);Spearman相关分析显示,椎间盘退变程度与miRNA-142-3p表达呈负相关(P<0.05),与混合谱系激酶3、白细胞介素1β表达呈正相关(P<0.05);②大鼠髓核组织:与假手术组比较,轻度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);与轻度退变组比较,重度退变组髓核组织中混合谱系激酶3、白细胞介素1β基因与蛋白表达升高(P<0.05),miRNA-142-3p表达降低(P<0.05);③结果表明,人腰椎间盘退变程度与髓核组织中miRNA-142-3p表达呈负相关,与混合谱系激酶3和白细胞介素1β表达呈正相关。

内皮祖细胞外泌体中miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响

目的了解内皮祖细胞外泌体(EPCs-Exo)中的miRNA-222-3p对糖尿病小鼠皮肤伤口愈合的影响。方法采用荧光染色法对C57BL/6小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)进行鉴定。对从EPCs培养基中分离出的EPCs-Exo进行鉴定以及miRNA高通量测序。建立糖尿病小鼠皮肤损伤模型,随机分为5组:PBS组、EPCs-Exo组、空白组、agomiR-222-3p组、antagomiR-222-3p组。根据不同分组,连续处理14 d,观察创面愈合率,免疫荧光方法了解治疗前后创缘组织中活性氧(ROS)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31表达水平变化。结果EPCs-Exo促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。高通量测序提示miRNA-222-3p在EPCs-Exo中高度表达。创缘组织局部皮下注射miRNA-222-3p可显著促进糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,降低创缘组织中ROS表达水平,增加VEGF、CD31表达水平(P<0.05)。结论miRNA-222-3p促进糖尿病小鼠伤口愈合,在EPCs-Exo促进创面愈合过程中发挥重要作用。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

血清miR-25-3p和IBSP表达在乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的应用价值

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者病情分期及肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清微小RNA(miR)-25-3p和整合素结合唾液酸蛋白(IBSP)表达的应用价值。方法回顾性选取2021年11月至2023年12月大庆龙南医院收治的乙型肝炎肝硬化患者150例、慢性乙型肝炎患者50例、健康体检人员50名分别作为肝硬化组、肝炎组、健康组。统计分析3组研究对象的血清miR-25-3p和IBSP表达水平;分析不同临床参数与血清miR-25-3p和IBSP表达水平关系;分析肝硬化患者肝功能评分与血清miR-25-3p和IBSP表达水平的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响肝硬化失代偿并发腹腔积液的因素;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miR-25-3p和IBSP表达水平单独与联合检测在肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中的价值。结果肝硬化组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平分别为5.21±0.40、(9.33±1.27)ng/mL,均明显高于肝炎组[1.15±0.33、(3.14±0.36)ng/mL]、健康组[0.91±0.11、(1.01±0.30)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);肝炎组患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均明显高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。中、重度肝纤维化、有消化道出血、有腹腔积液患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平均分别高于轻度肝纤维化、无消化道出血、无腹腔积液患者,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄患者的血清miR-25-3p和IBSP表达水平之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组患者的Child-Pugh评分、血清蛋白胆红素评分(ALBI)、终末期肝病模型评分(MELD)与血清miR-25-3p和IBSP表达水平均呈显著正相关(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液影响因素包括miR-25-3p、IBSP(P<0.05)。肝硬化失代偿并发腹腔积液诊断中血清miR-25-3p和IBSP表达水平联合检测的曲线下面积、敏感度、特异度和约登指数均明显高于单独检测(P<0.05)。结论乙型肝炎肝硬化患者病情越重,血清miR-25-3p和IBSP表达水平越高。检测血清miR-25-3p和IBSP表达水平能够为乙型肝炎肝硬化病情的判断及肝硬化失代偿并发腹腔积液的诊断提供有效依据。

血清circCOL1A2和miR-25-3p水平与T2DM合并DR的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清环状Ⅰ型胶原α2(circCOL1A2)和微小RNA-25-3p(miR-25-3p)水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法纳入2020年5月—2022年6月在沧州市中心医院进行治疗的T2DM患者108例(216只眼),根据是否发生DR分为DR组56例(112只眼),非DR(NDR)组52例(104只眼),同时选取同期到本院进行体检的健康者45例(90只眼)作为对照组。分别采集对照组体检时、DR组和NDR组入院后的静脉血4~6 mL。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测3组circCOL1A2、miR-25-3p相对表达量,并检测血清生化指标。分析血清circCOL1A2、miR-25-3p水平的相关性,及二者与DR发生的相关性,并评估对DR发生的影响价值。结果(1)circCOL1A2、miR-25-3p水平:3组间血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=685.891,P=0.000)。NDR、DR组血清circCOL1A2水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=15.969、qDR=50.526,均P=0.000),DR组血清circCOL1A2水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=35.641,P=0.000)。3组间血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=583.834,P=0.000)。NDR、DR组血清miR-25-3p水平均高于对照组,差异均有统计学意义(qNDR=10.101、qDR=45.157,均P=0.000)。DR组血清miR-25-3p水平高于NDR组,差异有统计学意义(q=36.169,P=0.000)。(2)生化指标:DR组和NDR组生化指标比较,DR组患者血清C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)水平均高于NDR组,差异均有统计学意义(tUA=3.320,P=0.001;tCRP=8.705,P=0.000)。2组患者其余血清生化指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)不同分期DR患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平比较:Ⅰ期到Ⅴ期患者血清circCOL1A2水平比较,差异有统计学意义(F=32.900,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者circCOL1A2水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=4.102,P=0.042;qⅡ-Ⅲ=4.674,P=0.014;qⅢ-Ⅳ=4.359,P=0.026;qⅣ-Ⅴ=4.347,P=0.027)。Ⅰ期到Ⅴ期患者血清miR-25-3p水平比较,差异有统计学意义(F=32.407,P=0.000)。且Ⅰ期到Ⅴ期患者miR-25-3p水平依次升高,差异均有统计学意义(qⅠ-Ⅱ=5.206,P=0.005;qⅡ-Ⅲ=4.187,P=0.036;qⅢ-Ⅳ=4.165,P=0.037;qⅣ-Ⅴ=4.064,P=0.045)。(4)circCOL1A2、miR-25-3p水平与DR的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2、miR-25-3p水平均与DR发生呈正相关(rcircCOL1A2=0.382、rmiR-25-3p=0.479,均P=0.000)。(5)血清circCOL1A2与miR-25-3p的相关性分析:T2DM患者血清circCOL1A2与miR-25-3p呈正相关(r=0.564,P=0.000)。(6)T2DM患者DR发生的相关因素分析:CRP、UA、circCOL1A2、miR-25-3p水平为T2DM患者发生DR的危险因素。结论T2DM患者发生DR时血清circCOL1A2、miR-25-3p表达上调,二者与DR发生呈正相关,联合检测对T2DM患者发生DR具有一定的预测价值。

在抑郁症大鼠模型中MiRNA-103-3p调控Rab10促进神经细胞自噬

目的探讨与神经保护相关的基因Rab10在抑郁症体内外模型中发挥的功能和作用机制。方法选取36只大鼠作为慢性应激模型组(CUMS组),每只大鼠单笼饲养,进行6周慢性不可预测温和应激,另选取12只作为对照组。CUMS组大鼠完成6周CUMS刺激后,根据旷场实验数据和体质量分成3组(12只/组):CUMS+生理盐水组、CUMS+AAV载体组和CUMS+AAV过表达Rab10组,CUMS+saline组大鼠侧脑室注射生理盐水;CUMS+AAV组大鼠侧脑室注射AAV空病毒载体;CUMS+AAV-oe-Rab10组大鼠侧脑室注射AAV过表达Rab10载体实现Rab10基因过表达,CUMS刺激在整个实验期间持续进行。对照组大鼠始终不进行任何刺激。利用大鼠行为学指标的变化评价大鼠抑郁状态。构建CORT诱导的PC12细胞模型,CCK-8法检测细胞活力。通过TargetScan数据库预测与Rab10相互作用的miRNA及miRNA结合位点,并结合双荧光素酶和RIP实验探究miRNA-103-3p与Rab10的相互作用。在CORT刺激的PC12细胞中过表达Rab10,或在转染miRNA-103-3p inhibitor基础上沉默Rab10,qRT-PCR法检测miRNA-103-3p和Rab10的表达水平;Western blotting检测细胞中Rab10、BDNF、CREB、p62、Beclin-1、Wnt3a、Gsk3β、磷酸化(p)-Gsk3β和β-catenin的蛋白含量。结果病毒过表达Rab10后明显改善CUMS大鼠行为学指标(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting证实Rab10基因在CUMS大鼠海马与CORT诱导的PC12细胞中表达下调(P<0.05)。生物信息学结合双荧光素酶和RIP实验证实miRNA-103-3p靶向Rab10(P<0.05)。过表达Rab10或沉默miRNA-103-3p激活了Wnt/β-catenin信号通路,上调BDNF、CREB和Beclin-1的含量,下调p62蛋白的表达(P<0.05);下调miRNA-103-3p的基础上沉默Rab10逆转了miRNA-103-3p的作用(P<0.05)。结论miRNA103-3p靶向Rab10激活Wnt/β-catenin信号通路,改善神经细胞的可塑性,促进细胞自噬,从而对抗CORT诱导的PC12细胞损伤。

中枢性性早熟儿童25-羟基维生素D3、神经肽吻素与血清P1NP和N-MID OC的相关性

目的分析25-羟基维生素D3[25-(OH)D3]水平、神经肽吻素(Kisspeptin)在中枢性性早熟(CPP)儿童中的表达,及其与血清Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(P1NP)、N端中段骨钙素(N-MID OC)的相关性。方法86例CPP患儿作为CPP组,同时选取50例单纯性乳房早发育(PT)及50例体检正常的健康儿童,分别作为PT组和健康组。对比各组血清25-(OH)D3、Kisspeptin、P1NP及N-MID OC水平,采用Pearson相关性分析血清25-(OH)D3、Kisspeptin与P1NP和N-MID OC的相关性。结果CPP组25-(OH)D3水平低于PT组和健康组,PT组25-(OH)D3水平低于健康组(P<0.05);CPP组Kisspeptin、P1NP及N-MID OC水平高于PT组和健康组,PT组Kisspeptin、P1NP及N-MID OC水平高于健康组(P<0.05)。25-(OH)D3与血清P1NP及N-MID OC呈负相关(r=-0.259、-0.323,P<0.05)。Kisspeptin与血清P1NP及N-MID OC呈正相关(r=0.426、0.610,P<0.05)。结论CPP患儿表现为25-(OH)D3低水平和Kisspeptin高水平,且患儿25-(OH)D3和Kisspeptin水平与骨代谢标志物P1NP及N-MID OC呈显著相关性,可作为评估CPP患儿骨代谢情况的参考指标。

血清miR-25-3p、CXCL12水平与非小细胞肺癌患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系分析

目的:分析血清miR-25-3p、脊髓趋化因子CXC配体12(CXCL12)与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者胸腔镜肺叶切除术后预后的关系。方法:选择2017年02月至2020年07月医院收治的175例NSCLC患者,所有患者均接受胸腔镜肺叶切除术治疗。术前检测患者血清miR-25-3p、CXCL12水平,术后随访3年,根据患者预后情况分为预后不良组(复发转移)与预后良好组(非复发转移)。对比预后不良组与预后良好组血清miR-25-3p、CXCL12水平,对比预后不良组与预后良好组的临床资料,分析NSCLC患者术后预后不良的影响因素,分析血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合对NSCLC患者术后预后不良的预测价值。结果:随访3年,175例患者失访6例,随访率为96.57%,其中复发转移31例,复发转移率为18.34%,剩余138例均未发生复发转移,中位复发转移时间为24.75个月(95%CI:18.32~28.47)。预后不良组血清miR-25-3p、CXCL12水平高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组Ⅱ期、低分化例数占比高于预后良好组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,Ⅱ期(HR=3.827,95%CI:1.682~8.705)、低分化(HR=3.466,95%CI:1.524~7.884)、血清miR-25-3p(HR=2.732,95%CI:1.201~6.215)、血清CXCL12(HR=3.152,95%CI:1.386~7.170)为NSCLC患者术后预后不良的影响因素(P<0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线结果显示,血清miR-25-3p、CXCL12水平及二者联合预测NSCLC患者术后预后不良的灵敏度分别为80.65%(95%CI:0.627~0.853)、83.87%(95%CI:0.641~0.869)、93.55%(95%CI:0.782~0.973),特异度分别为78.26%(95%CI:0.602~0.835)、76.09%(95%CI:0.584~0.791)、91.30%(95%CI:0.769~0.934),曲线下面积(area under curve,AUC)值分别为0.767、0.755、0.908(P<0.05),且二者联合的AUC值更高(P<0.05)。结论:术前检测血清miR-25-3p、CXCL12水平可用于预测NSCLC患者胸腔镜肺叶切除术后预后,且二者联合的预测价值更高。

糖类抗原125、人附睾蛋白4、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素分析

目的 探讨糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素。方法 选取60例卵巢癌患者,术后给予化疗,根据化疗效果将其分为有效组和无效组,比较两组患者的CA125、HE4、miRNA-144-3p水平。卵巢癌患者化疗疗效的影响因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CA125、HE4、miRNA-144-3p单独及联合检测对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值。结果 化疗后,治疗有效39例,治疗无效21例,分别作为有效组和无效组。化疗前,有效组患者血清CA125、HE4水平均明显低于无效组,miRNA-144-3p水平明显高于无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,化疗前CA125水平≥35 U/ml、化疗前HE4水平≥140 pmol/L、化疗前miRNA-144-3p水平﹤3、肿瘤直径﹥5 cm均是卵巢癌患者化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,血清化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测预测卵巢癌患者化疗疗效的AUC为0.965(95%CI:0.924~0.999),此时的灵敏度为89.74%,特异度为95.24%,准确度为91.67%。结论化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测卵巢癌患者化疗疗效具有较高的预测价值,较低的化疗前CA125、HE4水平和较高的miRNA-144-3p水平提示卵巢癌患者的化疗疗效较好。

热性惊厥患儿血清miR-148a-3p HMGB125(OH)D水平与癫痫发作的相关性

目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局是否发生癫痫,分为热性惊厥癫痫组36例和热性惊厥非癫痫组86例,同期选择55例未发生惊厥的呼吸道感染仅发热的患儿为对照组,比较3组患儿的血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平。收集3组患儿临床资料进行多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线分析miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D对热性惊厥患儿癫痫发作的预测价值。结果热性惊厥癫痫组的血清miR-148a-3p表达量、HMGB1水平高于热性惊厥非癫痫组、对照组[(2.26±0.57)vs(1.71±0.43)vs(1.50±0.38);(7.45±1.87)μg/L vs(6.70±1.58)μg/L vs(5.33±1.29)μg/L;均P<0.05],血清25(OH)D水平低于热性惊厥非癫痫组、对照组[(26.83±6.79)μg/L vs(34.24±8.56)μg/L vs(42.16±4.15)μg/L;P<0.05]。惊厥类型、惊厥持续时间、退热后脑电图结果、miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D与癫痫发作存在相关关系(P<0.05)。miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D预测热性惊厥患儿癫痫发作的灵敏度为83.33%、77.78%、72.22%,特异度为74.42%、68.60%、63.95%。结论血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平与热性惊厥患儿癫痫发作有一定相关性,可作为临床辅助诊断标志物。

miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇耐药的关系

目的 探讨miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇(PTX)耐药的关系。方法 选取80例乳腺癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-455-3p的相对表达量及PTX耐药和PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p、自噬相关蛋白(ATG12)mRNA的相对表达量。将miRNA-NC、miRNA-455-3p mimics分别转染至乳腺癌耐药MCF-7/PTX细胞,分别作为miRNA-NC组、miRNA-455-3p组,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡情况以及P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白的相对表达量。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于PTX耐药患者,ATG12 m RNA相对表达量明显低于PTX耐药患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-455-3p组细胞凋亡率明显高于miRNA-NC组,P-gp、GST-π蛋白相对表达量均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌组织中miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关(r=-0.697,P﹤0.01)。结论 乳腺癌组织miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关,通过靶向抑制ATG12的表达降低耐药乳腺癌细胞的自噬活性,促进细胞凋亡,有助于改善乳腺癌细胞对PTX药物的敏感性。

miRNA-128-3p通过下调KLHDC8A的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

目的探讨miRNA-128-3p在胶质瘤细胞中的作用,并确定其是否能够调控KLHDC8A介导恶性生物学行为,为寻找胶质瘤患者潜在的分子生物标志物和治疗靶点提供理论支持。方法采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blotting实验验证miRNA-128-3p与KLHDC8A的调控关系。通过Edu实验、流式细胞术、Transwell和划痕实验验证miRNA-128-3p和KLHDC8A对胶质瘤细胞恶性行为的影响。利用挽救实验验证miRNA-128-3p靶向KLHDC8A调控胶质瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果KLHDC8A在高级别胶质瘤组织中的表达水平显著升高,与恶性胶质瘤患者的生存状况密切相关。功能验证实验表明,高表达KLHDC8A可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,而miRNA-128-3p高表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。miRNA-128-3p靶向调节胶质瘤细胞中KLHDC8A的表达,miRNA-128-3p高表达通过靶向KLHDC8A抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。结论miRNA-128-3p负向调控其下游靶基因KLHDC8A的表达,抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为,因此miRNA-128-3p/KLHDC8A是判断胶质瘤预后及治疗的分子靶点。

急性胰腺炎患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系研究

目的 探讨急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系。方法 选取2021年11月~2023年11月于都江堰市人民医院就诊的AP患者133例(AP组)作为研究对象;根据病情程度将AP患者分为重症组(n=43)和轻症组(n=90)。同期选取于该院体检健康者135例作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-q RCR)法检测血清miR-455-3p和miR-141-3p水平。Spearman相关性分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平与急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)、Ranson评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平对重症AP的诊断价值;多因素Logistics回归分析影响重症AP的发生因素。结果 AP组血清miR-455-3p(0.61±0.13)低于对照组(1.12±0.21),miR-141-3p水平(1.37±0.11)高于对照组(1.04±0.15),差异具有统计学意义(t=23.863,20.513,均P<0.05)。重症组患者血清miR-455-3p水平(0.53±0.10)低于轻症组(0.64±0.12),miR-141-3p水平(1.51±0.14)高于轻症组(1.30±0.15),差异具有统计学意义(t=6.056,7.713,均P<0.05)。重症组患者血清淀粉酶(serum amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)水平及APACHEⅡ,Ranson评分高于轻症组,差异具有统计学意义(t=2.227,2.290,18.267,11.259,均P <0.05)。Spearman相关性分析结果表明,AP患者血清miR-455-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈负相关(r=-0.702,-0.783,均P <0.05),miR-141-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈正相关(r=0.787,0.734,均P <0.05)。ROC曲线结果表明血清miR-455-3p,miR-141-3p水平单独及联合诊断重症AP的AUC分别为0.848,0.822和0.919,且二者联合诊断优于单独诊断(Z=3.081,2.524,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示miR-455-3p是影响重症AP的保护因素,miR-141-3p是影响重症AP的危险因素(P<0.05)。结论 AP患者血清miR-455-3p下降和miR-141-3p升高与病情严重程度密切相关。

人单核细胞株巨细胞病毒编码miR-US25-1-3p过表达后蛋白质组学变化分析

目的分析人单核细胞株(THP-1)过表达人巨细胞病毒(HCMV)编码miR-US25-1-3p后蛋白质表达谱变化及价值。方法采用脂质体将hcmv-miR-US25-1-3p模拟物转染THP-1细胞构建hcmv-miR-US25-1-3p过表达细胞株,RT-qPCR验证转染效果;采用串联质谱标签标记联合液相色谱-串联质谱对hcmv-miR-US25-1-3p过表达后THP-1细胞蛋白质组学进行定量分析,生物信息学分析差异表达蛋白质生理病理功能;westernblot验证重要差异蛋白表达变化。结果与对照相比,THP-1细胞过表达hcmV-miR-US25-1-3p后65种蛋白质呈现差异表达,其中17种上调,48种下调。GO、COG和KEGG注释及功能预测结果显示,差异表达蛋白主要参与炎症反应信号通路、代谢过程、细胞及遗传信息功能,与肿瘤、病毒性心肌炎、非酒精性脂肪肝、原发性免疫缺陷病、类风湿关节炎、多种病原体感染、阿尔茨海默病、亨廷顿病等多种疾病相关。48种下调蛋白质中,文献调研和生物信息学分析发现,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)参与抗病毒及炎症反应,上述蛋白质下调表达经western blot验证。结论HCMV编码的hcmv-miR-US25-1-3p能够影响宿主蛋白表达谱,并可能通过抑制TRAIL和RANTES表达,促进病毒潜伏、免于宿主细胞杀伤。

红景天苷通过miRNA-210-3p/E2F3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨红景天苷(salidroside,Sal)通过miRNA-210-3p/E2F3对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:通过生物信息网站分析miR-210-3p及其靶基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达及生存影响。采用免疫组化法检测肺腺癌组织和正常组织中E2F3蛋白的表达;qRT-PCR检测NSCLC细胞中miR-210-3p和E2F3基因表达;Western blot检测NSCLC细胞中E2F3蛋白表达;CCK-8、细胞划痕及克隆形成实验分别检测红景天苷和miR-210-3p对NSCLC细胞增殖、迁移及克隆形成的影响。结果:生物信息网站显示miR-210-3p和E2F3在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关。Sal以时间-浓度依赖抑制NSCLC细胞的增殖活性(P<0.05),并显著降低NSCLC细胞的迁移及克隆形成能力(P<0.05),而低浓度Sal对正常肺上皮细胞的增殖无明显抑制效果。miRNA-210-3p和E2F3表达在NSCLC细胞中上调(P<0.05),Sal可抑制二者表达(P<0.05)。与对照组比较,miR-210-3p inhibitor组E2F3表达上调(P<0.05),miR-210-3p mimics组E2F3表达被抑制(P<0.05),Sal与miR-210-3p mimics联用进一步抑制了miR-210-3p mimics所致的E2F3表达下调和细胞增殖和迁移的增强作用(P<0.05)。结论:miR-210-3p和E2F3在肺腺癌中高表达,Sal可通过时间-浓度依赖负调控miRNA-210-3p/E2F3影响NSCLC细胞的生物学行为,发挥抗癌作用。

miR-502-3p抑制结肠癌细胞生长和迁移的作用及机制研究

目的探讨miR-502-3p抑制结肠癌生长和迁移的相关机制。方法收集2020年11月至2021年12月在嘉兴市第二医院肛肠外科经手术切除且无远处转移的10例结肠癌患者的癌组织及癌旁正常结肠组织,比较miR-502-3p表达水平。取HCT116细胞株构建miR-502-3p模拟物、模拟物对照稳转细胞,观察miR-502-3p对细胞增殖、侵袭、凋亡及生长的影响;取10只裸鼠分别腋下接种所构建的稳转细胞,比较接种miR-502-3p模拟物与模拟物对照裸鼠成瘤情况。采用双荧光素酶报告基因检测miR-502-3p与核转运蛋白α4(KPNA4)的靶向结合关系。观察KPNA4对经miR-502-3p干预后细胞侵袭、凋亡及生长以及KPNA4、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响,进一步分析KPNA4通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路发挥作用的机制。结果结肠癌组织中miR-502-3p表达水平明显低于癌旁正常组织(P=0.028)。相较于模拟物对照组,miR-502-3p模拟物组HCT116细胞株在24、48、72、96 h时增殖能力均明显减弱(均P<0.05),侵袭能力亦明显减弱,细胞凋亡能力增强,且出现细胞周期G1阻滞现象,KPNA4、N-cadherin表达量均明显降低(均P<0.01),E-cadherin表达量明显升高(P<0.01)。相较于模拟物对照,接种miR-502-3p模拟物裸鼠肿瘤生长缓慢,肿瘤体积和重量均有所降低,第23天时比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-502-3p模拟物能明显降低野生型KPNA4的荧光素酶活性(P<0.001),但对突变型KPNA4的荧光素酶活性无明显影响(P=0.158)。联合KPNA4后,miR-502-3p干预后的HCT116细胞株侵袭和生长能力均增强,凋亡能力下降,KPNA4、N-cadherin表达量均明显升高(均P<0.01),E-cadherin表达量无明显变化(P>0.05)。相较于KPNA4过表达组,KPNA4过表达+MAPK抑制剂组在24、48、72、96 h的细胞增殖能力均明显降低(均P<0.05),细胞侵袭和生长能力均明显减弱,细胞凋亡能力增强。结论miR-502-3p可抑制结肠癌细胞增殖、侵袭和生长,可能是通过抑制KPNA4/MAPK信号通路实现的。

未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-338-3p表达变化及临床意义

目的:分析未破裂颅内动脉瘤(UIAs)病人血清微小RNA-338-3p(miR-338-3p)的表达情况及其临床意义。方法:选取住院的UIAs病人105例作为观察组,另选取同期无脑动脉瘤的常规体检者100名作为对照组。UIAs病人入院后1 d、对照组体检当日的清晨空腹肘静脉血,检测血清miR-338-3p、血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平,分析血清miR-338-3p、MMP-2表达与UIAs病人临床病理特征的关系,采用Pearson相关分析UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2的相关性。结果:观察组血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组(P<0.01和P<0.05)。不同动脉瘤直径及动脉瘤数目病人血清miR-338-3p、MMP-2水平差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。Pearson相关分析显示,UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2呈显著正相关关系(P<0.01)。结论:UIAs病人血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组,二者呈正相关,且均与病人动脉瘤直径和数目有关。